克山病区粮喂养豚鼠心肌的抗氧化能力、线粒体细胞色素氧化酶活性及园二色性的改变及其发病学意义

克山病区粮喂养豚鼠10周,可见其血浆、红细胞及心肌线粒体中的硒和谷胱甘肽过氧化物酶活性明显降低,红细胞膜过氧化氢酶活性降低,超氧化物歧化酶活性趋向增加,膜脂受氧自由基作用产生的共轭双烯、荧光色脂明显增加,表明存在膜的氧化损伤。实验组心肌线粒体中的心磷脂(CL)减少,细胞色素氧化酶(CCO)活性降低,园二色性(CD)异常,而补充青菜组随 CL 的增加,可见其 CCO 酶活性,CD 谱均恢复到接近正常水平,各实验组心肌线粒体、亚线粒体及纯化 CCO 的 CD 谱异常,峰值(208及224nm)明显低于对照,说明其线粒体 CCO 构象出现了异常。文中讨论了克山病发病的分子病理机制。     

硒谷胱甘肽过氧化物酶保护心肌作用机制

通过人工半合成及天然低成饲料喂养豚鼠，在出现组织硒水平及谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰ）活性明显降低同时，动物红细胞、心肌细胞等的膜结构出现异常，膜脂组成中的磷脂减少．代表细胞膜老化指数的胆固醇／磷脂的分子比增加，作为心肌线粒体内膜必需界面脂的心磷脂明显减少，线粒体能量转换的关键呼吸酶．细胞色素氧化酶（ＣＣＯ）活性明显降低，同时代表其二级结构的园二色谱异常，２０８ｎｍ峰及２２４ｎ峰明显降低．各型脂质过氧化产物，如代表膜磷脂自由基氧化损伤初级产物的脂氢过氧化物、续发产物的丙二醛、呼气烷烃和脂过氧化物聚集产物的荧光色脂均明显增加。这可能正是３０多年前Ｎｅｕｂｅｒｔ等（１９６２）提出ＧＰ对细胞膜的保护作用，尤其所谓线粒体“收缩因子”（“Ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ”）作用的机制所在。     

亚硝酸钠对心肌谷胱甘肽过氧化物酶的影响及维生素E和硒的保护作用

大白鼠喂饲克山病病区粮,并分别向病区粮加维生素 E 和硒,观察在亚硝酸钠急性中毒情况下各组大鼠心肌谷胱甘肽过氧化物酶的变化。结果表明,亚硝酸钠可使病区粮所饲大鼠心肌谷胱甘肽过氧化物酶活性明显下降,补充维生素 E 或硒则可保护此酶活性防止其下降。提出除低硒外,亚硝酸盐过多及维生素 E 缺乏可能参与了克山病发病环节。     

低硒低营养状态下心肌线粒体的氧化损伤——克山病病因发病机理研究

用克山病区粮喂养豚鼠证明其红细胞膜、肝、心等组织及其线粒体、微粒体、上清中的硒及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性明显降低,脂质过氧化物、氢过氧化物、荧光色脂等增加同时心肌     

云南克山病区与非病区粮饲养的大鼠组织中某些化学元素水平以及抗氧化能力的对比分析

用云南楚雄的克山病区粮以及墨江的非病区粮喂养大鼠8周,对比观察两组大鼠血及组织中的化学元素及抗氧化能力水平。研究结果表明,喂病区粮的大鼠肝及心肌中的硒含量及谷胱甘肽过氧化物酶活性下降,血、心肌及肝中的脂质过氧化物升高,提示由于病区粮中硒含量低,导致大鼠体内抗氧化能力下降。     

克山病磷脂代谢障碍、膜损伤的实验研究

为了进一步探讨磷脂代谢障碍和膜损伤在克山病发病中的意义,对低硒低磷脂半合成饲料喂养的动物,作了较系统的实验研究结果表明,动物血硒及组织 GSH-Px 活性降低,组织的荧光色脂质增加,心电及心肌的超微结构出现异常,补硒可以改善上述改变、但对心肌的脂质组成,细胞色素氧化酶活性均不能恢复正常,只有同时补充硒和磷脂(尤其内源性磷脂)时,才能充分达到正常对照的水平。     

亚硝酸钠致大鼠心肌谷胱甘肽过氧化物酶和硒含量的变化及维生素E和硒对其酶活性的影响

大白鼠喂饲低硒富锰基础饲料，并分别向基础饲料中添加维生素E和栖，观察在亚硝酸钠急性中毒情况下各组大鼠心肌谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）、心肌硒元素含量及血清中维生素E（VtE）的变化。结果表明，亚硝酸钠可使低硒富锰所致大鼠心肌谷胱甘肽过氧化物酶活性明显下降，VtE和硒则可保护此酶活性防止其下降，提示除低硒富锰外，亚硝酸盐过多可能参与克山病发病环节。     

微量元素硒预防克山病的分子生物学基础

为研究克山病的发病机制,从细胞分子水平来阐明病因,我们研究了硒对心肌线粒体的细胞色素氧化酶(CCO)活性及构象的影响。结果表明:低硒的病区粮喂养的动物,心肌线粒体的硒水平低,GSH-Px活性低,心磷脂的含量减少,CCO的构     

缺硒病组织早期老化机制的研究与推迟老化（长寿）的可能

发生在我国与俄罗斯低硒地带的克山病与大骨节病的共同发病特点是细胞膜系统的氧化损伤及组织的早期老化。二者虽均属儿童多发，均处在组织低硒，谷胱甘肽过化氧化酶活性低，脂过氧化物增加的抗氧化能力降低，膜脂氧化损伤，磷脂减少的状态，但所侵害的组织器官不同，ＫＤＢ主要侵害骨软骨以磷脂酰蛆碱减少为主，ＫＳＤ则分害心肌，以心磷脂减少为主，细胞色素氧化酶活性降低。     

维生素B1对克山病病区粮所致心肌损伤的预防作用

把维生素 B_1加入克山病病区粮中喂饲大鼠两个月左右,可明显改善大鼠的营养状态;心肌细胞色素 C 氧化酶活性明显升高;使亚硝酸钠所致大鼠死亡率及心肌坏死面积明显降低。而对全血及心肌内的谷胱甘肽过氧化物酶活性,血清 T_3、T_4和皮质酮含量没有影响。提示我们除硒等因素缺乏外,维生素 B_1相对不足可能参与了克山病的发病。     

克山病区低硒粮饲养大鼠的心肌细胞超微结构及膜通透性改变的实验观察

本实验用克山病区低硒粮喂养大鼠,使动物处于低硒状态,同时增设补硒组和常规饲料组作为对照。饲养二个月后,应用电镜和示踪剂分别观察其心肌细胞超微结构及膜通透性的改变。低硒组大鼠心肌细胞膜不完整,镧颗粒进入细胞内,但线粒体内罕见。质膜经钌红染色呈中等电子密度的不均匀窄带,并经质膜破损处进入心肌细胞内。实验结果表明,低硒可引起大鼠早期心肌细胞超微结构及膜通透性的改变。     

克山病的分子心脏病学研究轨迹

目的克山病（Keshan Disease,KD）是在我国16个省区流行的地方性心肌病。几十年来,我国生物化学界对于KD的发病机弹做了大量创新性研究．本文回顾和评述我国克山病心脏代谢为中心的研究发展历程。方法和结果包括：使用综合酶谱早期诊断KD的心肌受损;发现KD有低硒性代谢紊乱;发现KD死亡病人心脏有线粒体氧化磷酸化、呼吸酶功能障碍和心肌收缩蛋白结构和功能异常;发现心肌钙代谢紊乱与心肌收缩障碍之间关系;发现KD心肌细胞膜和线粒体膜受损;发现心肌自由基堆积等障碍;发现红细胞的形态、膜脂组分和功能异常;提出KD是一种“心肌线粒体病”,或者是一种“膜疾病“等等。通过长期的KD生化研究并与病婵、临床所见综合分析,确立了“KD是一种以心肌线粒体损伤为主要特征的原发性代谢性心肌病”的发病机理。提出应用抗氧化药物预防和控制KD策略：应用无机硒、辅酶Q10、含硒模拟物（PZ51）、GPX抗体酶等防治研究KD,取得巨大进展;还汪明GPX抗体酶（世界上第一个含硒抗体酶）、PZ51、无机硒、辅酶Q10等对于心肌线粒体自由基损害都有明显的阻止作用。结论克山病是世界上发病最多、研究得最为深入的人体心肌病。这些创新成果为人类的健康做出了贡献,获得国家科技进步奖等奖励。     

克山病区低硒粮饲养大鼠心肌细胞膜Na~+-K~+ATPase活性的改变

应用酶组织化学、电镜酶细胞化学及酶活性生化定量测定等方法,对用克山病区低硒粮饲养大鼠心肌细胞Na~+-K~+ATPase进行了观察。结果表明,病区粮低硒组动物心肌其酶活性较常规饲料对照组明显减弱,补硒后酶活性有所增加,但尚未恢复至正常对照组水平。     

硒和维生素E对克山病病区粮喂饲大鼠心肌损伤的影响

本实验在克山病病区粮食中补充硒和维生素E(VE)或单独补充硒喂饲大鼠,和单纯喂饲病区粮大鼠比较,联合补充硒和VE可明显减轻亚硝酸钠引起的大鼠心肌损伤;硒加VE组大鼠红细胞高铁血红蛋白还原酶活性明显升高,其可使亚硝酸盐氧化血红蛋白形成的高铁血红蛋白迅速还原,从而减轻机体缺氧状态;硒和VE可使大鼠心肌脂质过氧化产物丙二醛含量明显减少,减轻了病区粮喂饲大鼠心肌损伤;硒加VE使大鼠血清甲状腺激素(T_3、T_4)和心肌呼吸酶(CCO、SDH)活性维持在低水平,表明其纠正了病区粮喂养大鼠心肌能量代谢紊乱,使代偿增加的血清T_3、T_4和心肌CCO、SDH活性降低。和病区粮组大鼠比,单纯加硒组大鼠除心肌谷胱甘肽过氧化物酶活性升高外,其心肌损伤未明显减轻。 上述结果提示,联合补充硒和VE在预防克山病发病上可能会有更好效果。     

克山病心肌超微结构立体学分析及线粒体琥珀酸脱氢酶活性观察

目的 观察亚急型克山病心肌超微结构立体学病理改变及线粒体琥珀酸脱氢酶活性变化.方法 收集亚急型克山病和非心肌病(对照)组病例心肌标本,进行心肌超微结构观察;按点计数方式测量心肌线粒体体积(Vmatr)密度、嵴膜密度、体积密度;利用模型排水法测量Vmatr;用铁-铜法显示线粒体琥珀酸脱氢酶活性.结果 亚急型克山病组心肌线粒体容积(Vmito)与细胞容积(Vcell)比值[(47.79±6.20)%]、线粒体面积(Smito)与肌浆面积(Splas)比值[(55.06±6.50)%]、Smito与肌原纤维面积(Smf)比值[(1.43±0.41)%]、线粒体切面面积(Sm)[(0.78±0.15)μm2]、线粒体嵴膜破坏消失区面积(Smcl)与基质面积(Smatr)、Vmatr比值[(67.14±13.96)%、(44.62±13.44)%],均明显大于对照组[(33.20±7.62)%、(38.07±9.43)%、(0.71±0.33)%、(0.44±0.07)μm2、(14.11±12.51)%、(9.34±11.28)%;t值分别为3.75、7.93、6.61、36.40、52.65、37.51,P均<0.05].亚急型克山病组心肌肌原纤维容积(Vmf)与Vcell比值[(34.52±5.12)%]、线粒体嵴膜面积(Sme)与Smatr比值[(32.43±14.42)%]明显小于对照组[(48.51±4.30)%、(86.04±12.37)%;t值分别为9.85、53.46,P均<0.05].亚急型克山病组线粒体琥珀酸脱氢酶活性多呈阴性反应.结论 亚急型克山病心肌出现Smito和Vmito增大、线粒体嵴膜破坏等为主的超微结构立体学改变及线粒体琥珀酸脱氢酶活性减弱或丧失.     

克山病患者心肌肠道病毒VP1结构蛋白检测

目的 探讨肠道病毒感染与克山病发病的关系。方法 应用抗柯萨奇B5病毒(Coxsackie B5 virus，CVB5)VP1蛋白单克隆抗体，采用免疫组化方法，检测黑龙江、山东、云南省克山病病区急型、亚急型、慢型、潜在型克山病死亡病例心肌标本83例，风心病10例，冠心病10例，心肌炎21例，扩张型心肌病29例，非病区非正常死亡的正常人10例，病区发病季节非克山病死亡病例13例。结果 克山病83例心肌标本中有74例VP1结构蛋白阳性，阳性率89．2％；风心病、冠心病、非正常死亡健康人VP1阳性检出率均为10％；心肌炎、扩张型心肌病VP1阳性检出率分别为66．7％和70％；病区发病季节非克山病死亡病人VP1阳性检出率为38．5％。结论 来自3省份的各型克山病死亡病例心肌标本中均能检出肠道病毒VP1结构蛋白，克山病的发生与肠道病毒感染高度相关。     

脱碘酶活性改变在克山病发病机制中的作用

本文测定了饲克山病病区粮大鼠心、肝、肾、甲状腺Ｔ．５＇－脱单碘酶活性。结果表明病区粮组大鼠心、肝、肾组织中的脱碘酶活性明显降低，并在补硒、维生素Ｅ后可使脱碘酶活力恢复正常。提示脱碘酶活性的改变在克山病发病中可能起着重要的作用。     

2006年全国克山病病情监测汇总分析

目的 掌握2006年全国克山病患病及发病情况.方法 根据2006年克山病监测方案及<克山病诊断标准>(GB 17021-1997),对27个监测点居民进行查体、描记心电图、疑似病例摄X线胸片等临床检查,同时对克山病发病相关因素进行检测.结果 27个监测点潜在型、慢型克山病检出率分别为2.25%(295/13 090)、0.60%(78/13 090).估计全国有3 370 000～4 110 000例克山病病人,其中慢型克山病患者600 000～940 000例.四川省报告发生6例亚急型克山病,另外新检出克山病潜在型5例,慢型1例.发硒平均水平为0.3282mg/kg,粮硒平均水平为0.0148 mg/kg.结论 历史重病区有新的亚急型克山病发生,克山病仍然是一个严重的地方性公共卫生问题;在进行克山病监测的同时,建议加强患者管理、治疗和重病区克山病的预防工作.     

2000-2004年全国克山病病情监测5年汇总分析

目的研究2000—2004年克山病患病及发病趋势。方法根据卫生行业标准《克山病监测》（WS／T78—1996）及《克山病诊断标准》（GB17021—1997）在12个省对监测点区居民进行普查和克山病发病相关因素调查。结果5年问潜在型、慢型克山病年均检出率分别为3．8％和0．8％。各监测点区共新发潜在型克山病113例．新发现慢型克山病29例。人均发硒0．305mg／kg，粮硒0．017mg／kg。结论部分克山病省区病情不清．病区粮硒仍属低硒水平，有新病例检出。克山病仍然是一个严重的地方性公共卫生问题。克山病控制的重点应包括规范监测工作．慢型克山病现患的治疗。     

2005年全国克山病病情监测汇总分析

目的掌握2005年全国克山病患病及发病情况。方法按统一监测方案并根据《克山病诊断标准》(GB 17021-1997)对22个克山病监测点区居民进行查体,描12导联心电图,疑似病人摄2 m后前位X线胸片及居民发硒、粮硒测定。结果22个监测点潜在型、慢型克山病检出率分别为3．5％和0．6％;新检出潜在型克山病7例,慢型克山病1例;人均发硒0．349 mg／kg,粮食硒0．025 mg／kg。结论监测点仍有潜在型和慢型克山病新发病例出现,说明克山病仍然是一个严重的地方性公共卫生问题;工作重点应放在克山病监测、硒预防、患者管理、治疗以及加强防治队伍培训等方面。