胎鼠急性缺血／再灌注损伤肾NO和NOS的改变

研究宫内急性缺血缺氧及再灌注时胎鼠肾NO水平及NOS活性变化，以无创动脉夹钳夹孕鼠供应子宫和卵巢的动静脉血管，制成宫内急性缺血缺氧及再灌注模型，以硝酸还原酶法和免疫组化法测定胎鼠肾NO水平和NOS活性变化。结果：显示随缺血缺氧时间延长NO水平明显降低，与假手术组相比，差异显著P＜0．01。随再灌注时间延长NO水平呈双向改变，尤为缺血缺氧30分钟组，正常时eNOS和iNOS即位于近曲小管，随缺血缺氧及再灌注时间的延长，eNOS光强度逐渐升高，iNOS光强度逐渐显著减弱，尤为缺血缺氧30分钟再灌注组，表明NO的动态变化可能参与缺血缺氧再灌注损伤过程，缺血缺氧及再灌注后肾NO水平的双相改变可能是eNOS和iNOS活性变化的综合结果。     

胎鼠急性缺血/再灌注损伤肾NO及NOS的改变

研究宫内急性缺血缺氧及再灌注时胎鼠肾NO水平及NOS活性变化,以无创动脉夹钳夹孕鼠供应子宫和卵巢的动静脉血管,制成宫内急性缺血缺氧及再灌注模型.以硝酸还原酶法和免疫组化法测定胎鼠肾NO水平和NOS活性变化.结果显示随缺血缺氧时间延长NO水平明显降低,与假手术组相比,差异显著P＜0.01.随再灌注时间延长NO水平呈双向改变,尤为缺血缺氧30分钟组.正常时eNOS和iNOS即位于近曲小管.随缺血缺氧及再灌注时间的延长,eNOS光强度逐渐升高,iN-OS光强度逐渐显著减弱,尤为缺血缺氧30分钟再灌注组.表明NO的动态变化可能参与缺血缺氧再灌注损伤过程.缺血缺氧及再灌注后肾NO水平的双相改变可能是eNOS和iNOS活性变化的综合结果.     

胎鼠急性缺血/再灌注损伤肾NO及NOS的改变

研究宫内急性缺血缺氧及再灌注时胎鼠肾NO水平及NOS活性变化,以无创动脉夹钳夹孕鼠供应子宫和卵巢的动静脉血管,制成宫内急性缺血缺氧及再灌注模型。以硝酸还原酶法和免疫组化法测定胎鼠肾NO水平和NOS活性变化。结果显示随缺血缺氧时间延长NO水平明显降低,与假手术组相比,差异显著P<0.01。随再灌注时间延长NO水平呈双向改变,尤为缺血缺氧30分钟组。正常时eNOS和iNOS即位于近曲小管。随缺血缺氧及再灌注时间的延长,eNOS光强度逐渐升高,iN-OS光强度逐渐显著减弱,尤为缺血缺氧30分钟再灌注组。表明NO的动态变化可能参与缺血缺氧再灌注损伤过程。缺血缺氧及再灌注后肾NO水平的双相改变可能是eNOS和iNOS活性变化的综合结果。     

缺氧缺血再灌注脑损伤新生大鼠早期核因子κB信号通路的变化

目的 探讨缺氧缺血再灌注脑损伤(HIRBD)新生大鼠早期核因子κB(NF-κB)信号通路相关基因的表达变化.方法 24只7口龄新生SD大鼠,雌雄各半,随机分成3组:正常对照组(A组)、缺氧缺血再灌注2 h组(B组)及缺氧缺血再灌注4 h组(C组),每组8只.断头取其脑海马,抽提总RNA.运用基因芯片及生物信息分析技术检测NF-κB信号通路中相关信号分子的表达.结果 与A组比较,B组单核细胞趋化蛋白2、双特异性磷酸酶1、FBJ成骨肉瘤癌基因(Fos)和Toll样受体9(Tlr9)基因表达上调,半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶1、8(Caspase-1、8)、促分裂原活化蛋白激酶激酶6、细胞外信号调节蛋白激酶和Ras基因同源基因家族成员a基因表达下调.C组Fos、IL-1β和Tlr6基因表达均上调,Caspase-1、细胞外基质蛋白1、溶血磷脂酸相关的G蛋白偶联受体、黏膜相关淋巴样组织转运蛋白1、NF-κB抑制因子激酶epsilon和Ras基因同源基因家族成员c基因表达均下调.结论 在新生大鼠HIRBD早期阶段,主要通过Tlrs诱导NF-κB激活,从而调控下游炎性反应、细胞凋亡及细胞增殖相关基因的表达,参与HIRBD的病理生理过程.     

雌激素对大鼠肠缺血再灌注损伤的保护作用及对iNOS表达的影响

目的探讨雌激素对肠缺血再灌注损伤（I／R）的保护作用及对诱导型一氧化氮合酶（i—NOS）表达的影响。方法将60只青春期大鼠随机分为4组（每组各15例），假手术组未切除卵巢，其余3组行双侧卵巢切除术，术后隔天分别皮下注射蓖麻油（对照组）、雌二醇（E2，100ug／kg，E2组）、高剂量的E2（500ug／kg，5E2组）4周。将各组大鼠肠系膜上动脉夹闭30min，再灌注时间分别为1h（n=5）、6h（n=5）和24h（n=5）。测血清E：浓度，小肠粘膜行粘膜病理评分、iNOSmRNA表达及iNOS活性测定。结果对照组、假手术组、E2组和5E2组小肠粘膜病理评分分别为3．31±0.12、3.00±0．09、2.57±0．12和2．98±0．08，iNOSmRNA表达水平的拷贝数对数值分别为3.85±0.42、4.86±0.76、5．17±0．34和4．25±0．41。E2组的病理评分低于其它3组（P〈0．01），而iNOSmRNA表达水平高于其它3组（P〈0.01）。各组iNOS活性水平与iNOSmRNA表达水平一致，E2组iNOS活性高于对照组（P〈0．05），亦高于假手术组和5E2组（P值均〈0．05）。线性回归分析示血清E2浓度的对数值与病理评分呈负相关（P〈0.01）、与iNOSmRNA和iNOS活性呈正相关俨值均〈0.01）。结论雌激素对大鼠肠I／R损伤有保护作用，该保护作用与iNOS表达增强有关。     

脑白质损伤新生大鼠核转录因子-κB和诱导型一氧化氮合酶表达的变化

目的研究缺氧缺血(HI)对新生大鼠脑白质胶质细胞核转录因子κB(NF-κB)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探讨NF-κB及iNOS在新生大鼠脑白质损伤(WMD)发病机制中的作用。方法将2日龄大鼠随机分为实验组和假手术组,建立新生大鼠WMD模型,分别于HI后1 h、3 h、6 h、12 h、1 d、3 d及7 d处死,对其脑组织取材后行HE染色观察其病理改变,并应用免疫组织化学法检测其NF-κB及iNOS的表达水平。结果在新生大鼠脑白质中,实验组NF-κB表达水平于HI后1 h开始明显上升,12 h达到高峰,至7 d仍明显升高,与对照组比较差异均有统计学意义[(45.2±2.5)vs(35.7±2.1);(62.3±2.9)vs(34.1±2.0);(75.0±3.7)vs(33.6±2.1);(126.2±4.3)vs(14.3±2.4);(81.1±2.6)vs(33.7±2.0);(40.2±2.5)vs(32.5±2.3);(34.6±2.6)vs(31.9±2.8),Pa<0.001]。实验组iNOS于HI后1 h表达开始显著增多,1 d达到高峰,至7 d仍明显升高,与对照组比较差异均有统计学意义[(25.4±1.7)vs(22.7±1.9);(37.9±1.9)vs(21.7±1.2);(53.3±2.1)vs(21.9±1.0);(61.9±1.7)vs(21.7±1.3);(74.0±2.2)vs(22.7±1.5);(57.3±2.2)vs(21.1±1.1);(26.3±2.5)vs(20.8±1.6),Pa<0.001]。实验组脑室周围白质区NF-κB表达与iNOS呈正相关(r=0.977,P<0.001)。结论 HI可导致新生大鼠脑白质NF-κB表达及iNOS水平显著增高,参与新生大鼠WMD的病理生理过程。     

缺血再灌注损伤对新生鼠肾小管上皮细胞calpain的影响

calpain是一种钙依赖性半胱氨酸蛋白酶,钙离子浓度升高使其激活。细胞骨架蛋白和膜蛋白都是calpain的水解底物。过去calpain被认为介导了缺氧对心脏、肝脏和大脑所致的损伤。现在的研究发现其在缺血再灌注导致肾小管上皮细胞损伤过程中也起了重要的作用。2002年1月-2003年3月,我们进行实验研究,探讨新生大鼠肾小管上皮细胞在缺血再灌注不同时段calpain变化的特点,calpain对细胞骨架蛋白α-辅肌动蛋白（α-actinin）、F-肌动蛋白（F-actin）和细胞膜黏合分子β1-整合素（β1-integrin）的水解作用以及探讨calpain抑制剂对上述蛋白的保护作用。     

一氧化氮合酶基因表达在新生鼠缺氧性脑损伤中的作用

新生儿缺氧性脑损伤可导致永久性神经功能损害。我们测定新生鼠缺氧性脑损伤模型服组织内诱生型一氧化氮合酶（ｉｎＯＳ）ｍＲＮＡ表达变化,以阐明它在发病中的作用。取新生ＳＤ鼠随机分组制作模型并行病理鉴定;采用ＲＴ－ＰＣＲ测定脑缺氧时脑组织细胞内ｉＮＯＳｍＲＡＮ表达的变化,深度度扫描获取数值。实验显示,缺氧２小时后损伤脑组织的ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达显著升高（Ｐ〈０．００１）。结果表明,新生鼠缺氧后神经系统诱生     

供肝缺血再灌注损伤的实验研究

目的 探讨一氧化氮(NO)、细胞内游离钙离子等在肝移植缺血再灌注损伤中的变化和作用机制。方法 实验选用18只狗,分为二组,供体组(n=9),受体组(n=9)。肝移植的方法采用经典的背驮式。观测指标包括①肝脏功能指标:胆汁生成量、血ALT(肝组织的获取分别于开腹后、门静脉冉灌注前、冉灌注开始后半h时、再灌注后2h、6h、12h切取肝脏组织病同时检验血中ALT含量及胆汁流量;②肝细胞活性及功能:肝细胞含水量、肝细胞内游离钙含量、肝细胞的凋亡、肝组织的NO测定,以上各项测定在不同时期有不同的变化,但再灌注6h时均达到最高峰。结果 ①细胞含水量:肝脏含水量在低温灌注时仅略有升高,与术前无显著性差异;再灌注各时间段与术前、低温灌注比较具有显著性差异(P≤0.01)。而再灌注各时间段之间无显著性差异(P>0.05),再灌注6h时,肝脏含水量达到最高峰。②肝细胞内游离钙[Ca~(2+)]i含量:缺血再灌注时均发生显著性升高(P≤0.01)。在再灌注6h时[Ca~(2+)]i荧光强度达到最高峰,且与其他再灌注时间段有显著性差异(P<0.01)。[Ca~(2+)]i在缺血再灌注2h和6h与其他时间段有显著性差异(P<0.05)。③肝细胞凋亡:缺血再灌注时均发生显著性升高(P≤0.01)。在再灌注6h时细胞凋亡率达到最高峰,且与其他再灌注时间段有显著性差异(P≤0.01)     

胰岛素注射液对大鼠急性全脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨胰岛素对脑缺血再灌注损伤的治疗作用及其机制。方法选取成年雄性Wistar大鼠66只,将大鼠随机分为胰岛素治疗组(A组A1~A5)、生理盐水对照组(B组B1~B5)、假手术组(C组)。采用四条血管阻断方法制备大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。A组于再灌注后不同时间分别开始予腹腔注射胰岛素2 IU/(kg.d),加50%葡萄糖注射液2 g/(kg.d);B组在相同时间点分别腹腔注射生理盐水2 mL/(kg.d)。同时监测术前及术后3、6、12、24 h血糖,使之保持在3.5~6.5 mmol/L。动物均于再灌注d7处死。各组大鼠断头后取脑组织匀浆上清液,测定神经元特异性烯醇化酶(NSE)和一氧化氮(NO)水平,取海马组织制作电镜标本。结果大鼠脑组织NSE水平比较,假手术组NSE水平明显高于治疗组和对照组,治疗组明显高于对照组;脑组织NO比较:假手术组明显低于治疗组和对照组,治疗组明显低于对照组。电镜结果:治疗组(A1、A2)神经元、神经胶质细胞及毛细血管损伤程度明显轻于对照组(B1,B2)。结论胰岛素能促进缺血再灌注后脑组织神经元、神经胶质细胞和毛细血管的修复,且愈早应用损伤愈轻。     

钙敏感受体在大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用

目的观察钙敏感受体在大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用及其机制。方法30只Wistar大鼠随机分为3组(每组10只):假手术组(sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)和钙敏感受体激动剂组(Gdcl3组),采用冠状动脉结扎和松结的方法,制备大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤模型。分别测定血清一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,光镜及透射电镜下观察心肌结构病理变化。结果I/R组血清LDH、MDA水平明显高于sham组(P<0.01),NO、SOD低于sham组(P<0..01);Gdcl3组血清LDH、MDA水平明显高于I/R组(P<0.01),而NO、SOD低于I/R组(P<0.01)。光镜及透射电镜下可观察到Gdcl3组心肌结构破坏,心肌细胞呈灶状或片状坏死;线粒体损伤,核皱缩,核染色质边集,其病理学改变程度较I/R组严重。结论钙敏感受体激活可使氧自由基产生增加,减少NO含量,降低SOD活性,加重心肌缺血/再灌注损伤。     

氨力农对大鼠在体肺缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨氨力农对在体肺缺血再灌注（I/R）损伤的保护作用。方法：夹闭大鼠左肺门1.5 h,再灌注2 h,建立在体缺血再灌注模型。将24只SD大鼠随机分成假手术组,缺血再灌注组（I/R组）和氨力农组（AMR组）,AMR组缺血前30 min给予颈静脉注射氨力农10 mg/kg,再灌注前5 min颈静脉注射氨力农10 mg/kg。再灌注2 h后采颈动脉血检测血气、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）;摘取左肺测湿干比、超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量并行病理学检查。结果：再灌注2 h后,动脉血氧分压和二氧化碳分压3组间差异无显著性;I/R组肺湿干比和MDA（nmol/mg prot）含量分别为5.3±0.5和0.66±0.16,显著高于假手术组,AMR组上述指标降低至4.8±0.2和0.51±0.09;SOD（U/mg prot）在I/R组为39.3±3.0 ,AMR组为54.7±6.8,较I/R组升高;I/R组血清IL-1β（pg/mL）、IL-8 （pg/mL）、TNF-α(pg/mL)含量分别为22.08±3.85,21.92±5.56,30.50±3.77较假手术组显著升高, AMR组上述指标为16.66±3.02,14.73±2.75和 22.48±3.82,较I/R组低。病理学结果显示：三组动物肺组织结构基本正常,假手术组和AMR组无充血,I/R组充血明显且较其他两组炎症细胞明显增多。结论： 氨力农对肺缺血再灌注损伤具有保护作用,可能与其抗氧化和抑制炎症因子分泌有关。［中国当代儿科杂志,2007,9（3）：233-236］     

银杏叶提取物对宫内缺氧新生大鼠神经细胞凋亡的保护效应

目的探讨银杏叶提取物(EGb)对宫内缺氧新生大鼠急性脑缺血损伤的保护作用.方法夹闭妊娠大鼠子宫血管,制成急性脑缺血损伤新生鼠模型,治疗组给予腹腔注射EGb,在生后不同时间比较两组仔鼠脑组织含水量、NO的变化,神经型一氧化氮合酶(nNOS)的表达及神经细胞凋亡情况变化.结果急性脑缺血后,脑组织含水量明显增加,NO的含量迅速上升,同时凋亡细胞数增加,两者成直线正相关.EGb治疗后NO含量显著低于未治疗组,同时观察到治疗组的nNOS表达明显降低,凋亡细胞数量减少.结论EGb对急性缺血引起的脑损伤有保护作用.     

The protective effects of trimetazidine on testicular ischemia and reperfusion injury in rats

This study was designed to investigate the protective effect of trimetazidine [TMZ; 1-(2, 3, 4-trimethhoxibenzyl)-piperazine dihydrochloride], as an antioxidant agent, on torsion–detorsion-induced biochemical and histopathological changes in experimental testicular ischemia/reperfusion injury in rats. Twenty-seven male Wistar rats weighing 180–220 g were divided into five groups: control (C, n = 4), sham-operated (S, n = 4), ischemia (I, n = 6), ischemia–reperfusion (I/R, n = 6) and ischemia–reperfusion + trimetazidine (I/R + TMZ; n = 7). Control rats were used for basal normal values. In group I, 2 h torsion of the left testis was performed. In I/R and I/R + TMZ groups, following 2 h of torsion, 4 h detorsion of the testis was performed. In ischemia and I/R groups, physiologic saline was administered orally for 7 days, and the rats in I/R + TMZ group were pretreated orally with 5 mg/kg day TMZ for 7 days before inducing ischemia. At the end of each experiment, ipsilateral orchiectomies were performed for the tissue levels of malondialdehyde (MDA), glutathione peroxidase (GPx) enzyme activities and histopathological examinations in all groups. MDA levels were significantly reduced and GPx enzyme activities were significantly increased in testes in I/R+TMZ pretreated group compared to group I and I/R. The mean seminiferous tubular diameter (MSTD) and Johnsen’s score were significantly better in I/R+TMZ group than groups I and I/R. Pretreatment with TMZ decreased germ cell apoptosis and caspase-3 expression in the ischemic testis. The present results show that TMZ has a protective activity in the testicular injury caused by I/R, and provide the first evidence of the role of TMZ for the prevention of I/R-induced testicular injury.     

Hypoxic/ischaemic cerebral injury in the neonatal brain

Ultrasound has been used in 11 neonates whose history or clinical features suggested the possibility of hypoxic/ischaemic lesions. The ultrasound findings were correlated with computed tomographic findings in nine infants and with pathological findings in two. On ultrasound scan, areas of increased echoes represented both hypoxic/ischaemic and haemorrhagic lesions. However, the distinction between them could not be made with certainty. Cystic changes were shown clearly by ultrasound as were cerebral vascular pulsations in and adjacent to the areas of increased echoes. With computed tomography, hypoxic/ischaemic lesions were represented by areas of decreased density and haemorrhagic lesions by areas of increased density. Computed tomography failed to clearly demonstrate the cystic changes. Three types of lesions, viz. diffuse, focal and periventricular were based on the location of brain injury, the former two occurring in term infants and the latter in premature infants. Ultrasound has been shown to be of value for definition of the site and extent of hypoxic/ischaemic cerebral lesions in the newborn and for observation of their evolution.     

缺氧缺血新生鼠脑内乙酰胆碱水平的变化

目的 探讨缺氧缺血对新生鼠中枢胆碱能系统的远期影响及治疗措施。方法 采用碱性羟胺比色法对缺氧缺血新生鼠（7日龄）损伤后即刻及其14d后左、右脑乙酰胆碱（Ach）含量进行测定,并观察了损伤后即刻及3d后腹腔内连续7d注射4µg碱性成纤维生长因子（bFGF）对脑内Ach含量的影响。结果 缺氧缺血损伤后即刻,在脑Ach含量显著降低,（P﹤0.05）,于14d后仍未恢复;bFGF治疗对损伤后脑内Ach含量无显著影响。结论 缺氧缺血可损伤新生鼠中枢胆碱系统功能,此影响可持续至21日龄。bFGF对胆碱能损伤无明显保护作用。     

血糖对缺氧缺血新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白1基因表达影响的研究

目的 探讨血糖对缺氧缺血(HI)新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)基因表达的影响.方法 对7日龄SD新生大鼠通过调节25%葡萄糖的注射次数、时间或禁食12 h,分别建立单纯低血糖组、HI组、HI前低血糖组、HI后低血糖组、HI前轻度高血糖组、HI后轻度高血糖组、HI前重度高血糖组以及HI后重度高血糖组:另设正常组和假手术组.应用逆转录PCR(RT-PCR)方法,分别在HI后2、24、48、72 h及7 d对各组新生大鼠脑内GLUT1基因进行测定.结果 正常组GLUT1基因表达量随日龄增加而增高.HJ可引起GLUT1基因表达量的短期上调,至HI后72 h及7 d则非常显著地低于正常组(P＜0.01).HI前低血糖组GLUT1基因在HI后各时段均低于曾经HI各组,其中HI后48 h及HI后7 d显著低于HI组(P均＜0.05).HI前重度高血糖可明显上调GLUT1基因表达量,在HI后多数时段的表达量均显著高于曾经HI各组(P＜0.05或0.01).HI前轻度高血糖对GLUT1基因表达的影响不如HI前重度高血糖组.在HI后无论轻或重度高血糖组以及HI后低血糖组,其GLUT1基因表达时相均与HI前低血糖组类似.结论 结合过去系列研究结果提示,HI前低血糖可使GLUT1基因表达和产物合成明显下调、脑病理改变加重;HI前重度高血糖则使GLUT1基因表达和产物合成明显上调、脑病理改变显著改善.提示在HI前预先补充足量葡萄糖,有可能在一定程度上提高脑内应对HI的侵袭、改善缺氧缺血程度的能力.