镉对大鼠肝细胞DNA损伤作用的研究

应用单细胞凝胶电泳研究氯化镉对大鼠肝细胞ＤＮＡ的损伤作用。结果表明，８．７５μｍｏｌ／Ｌ、１７．５μｍｏｌ／Ｌ、３５μｍｏｌ／Ｌ氯化镉可以引起肝细胞ＤＮＡ单链断裂，拖尾的慧星细胞分别达到７８％、９０％、９８％，并存在着明显的剂量效应关系，相关系数０．９９３３。本研究提示，氯化镉可以引起离体肝细胞ＤＮＡ损伤。     

甲基丙烯酸环氧丙酯对细胞间隙连接通讯的影响

为探讨甲基丙烯酸环氧丙酯（ＧＭＡ）诱导细胞转化的机理,选用划痕染料示踪技术（ＳＬＤＴ０初步研究了ＧＭＡ对人胚肺成纤维细胞间隙连接通讯（ＧＪＩＣ）的影响。用０．;５,２．５和５．０ｍｇ／Ｌ的ＧＭＡ给细胞染毒１２ｈ,经划痕导入荧光黄染料并测定各组细胞中该荧光染料向其相邻细胞扩散的程度。结果表明,在染毒剂量及时间范围内,ＧＭＡ对人胚肺成纤维细胞ＧＪＩＣ产生较强的抑制作用,呈良好的剂量－效应关系。     

氯化镍诱发BALB／c—3T3细胞转化

为探讨氯化镍对不同靶细胞转化作用的差异，采用细胞灶法测定氯化镍对ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞诱发转化的活性，结果表明当氯化镍浓度在〉５０μｍｏｌ／Ｌ时转化率增高（Ｐ〈０．０５），且有剂量反应关系。本文报道氯化镍诱发ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞转化的实验结果。     

氯化镉致癌机理的研究

应用氯化镉致人胚肺成纤维细胞恶性转化实验、染色体分析、流式细胞术对氯化镉的致癌机理进行研究。结果表明,氯化镉诱导的染色体畸变可能是其致癌机理之一;用流式细胞仪检测转化细胞突变型Ｐ５３蛋白和细胞周期素Ｄ１的表达,发现转化细胞中突变型Ｐ５３蛋白和细胞周期素Ｄ１的表达量均明显高于阴性对照组（Ｐ＜００１）,初步证实了突变型Ｐ５３蛋白的表达及细胞周期素Ｄ１的过表达在镉致癌机理中起协同作用     

噻唑兰比色法判断六价铬细胞毒性及增殖毒性

采用噻唑兰（ＭＴＴ）比色法判断重铬酸钾对人胚肺（ＨＥＬ）细胞的毒性及对其增殖抑制的影响，以０～８０μｍｏｌ／Ｌ重铬酸钾分别染毒３，６，２４小时，及终止染毒后继续培养２４小时，结果表明重铬酸钾的细胞毒性及增殖毒性，均有良好的剂量效应和时间效应关系，比较重铬酸钾细胞生物学效应时，在低剂量（≤１０μｍｏｌ／Ｌ）范围，采用细胞增殖抑制率为方法较好；在中高剂量（〉１０μｍｏｌ／Ｌ）时，只能用存活率观察，但染     

应用单细胞凝胶电泳研究镉对大鼠肝细胞DNA损伤的影响

目的 研究一定剂量的氯化镉对离体和在体大鼠肝细胞ＤＮＡ损伤的作用。方法 应用单细胞凝胶电泳或慧星试验。结果 在２．１８５μｍｏｌ／Ｌ、４．３７５μｍｏｌ／Ｌ、８．７５μｍｏｌ／Ｌ、１７．５０μｍｏｌ／Ｌ、３５．００μｍｏｌ／Ｌ的剂量条件下,氯化镉均可引起离体大鼠肝细胞ＤＮＡ损伤。５μｍｏｌ／ｋｇ、１０μｍｏｌ／ｋｇ、２０μｍｏｌ／ｋｇ的氯化也可引起在体大鼠肝细胞ＤＮＡ损伤。氯化镉引起的离体和在体在     

镉化物对人胚肺成纤维细胞转化作用的研究

本文应用人胚肺成纤维细胞转化试验,对氯化镉的致癌性进行研究。结果表明:氯化镉在浓度0.004～0.04μM/ml范围之内,可使人胚肺细胞形态发生改变,出现明显的转化灶,细胞与刀豆蛋白A的凝集作用加强,细胞失去接触抑制特性,获得在软琼脂培养基中生长能力及细胞在软琼脂中集落形成率增高,细胞的染色体数目出现变化,增多或减少,及结构的畸变、断裂、断片等。细胞的寿命明显延长。本文通过分析各种指标,较完整的反映了氯化镉使细胞恶性转化的多阶段的转化过程,证实了体外培养的细胞转化和肿瘤的演化,与它在体内的类似物的作用一样,是一个具有多步骤的变化过程。通过实验,初步建立了氯化镉致恶性转化体外培养的实验模型、为进一步研究癌变的分子基础提供条件。     

β—胡萝卜素和维生素C对Ni2O3诱导人肺成纤维细胞转化的保护作用

为了探讨三氧化二镍（Ｎｉ２Ｏ３）诱导人肺成纤维（ＨＬＦ）细胞恶性转化作用以及β－胡萝卜素和维生素Ｃ的保护作用,用不同浓度的Ｎｉ２Ｏ３在体外多次处理ＨＬＦ细胞,利用刀豆凝集素Ａ（ＣｏｎＡ）凝集实验和软琼脂集落形成实验进行转化细胞的恶性鉴定;同时添加β－胡萝卜素（５．４ｍｇ／Ｌ）和维生素Ｃ的食物（１．８ｍｇ／Ｌ）,观察对Ｎｉ２Ｏ３转化作用的影响。结果表明Ｎｉ２Ｏ３（０．５￣２．０ｍｇ／Ｌ）可诱导ＨＬＦ     

职业性锰接触与尿锰、发锰关系的探讨

对锰矿及其加工厂接触锰工人５３６人、同厂矿其他工种工人５２人和行政对照组５３人进行体检及发锰、尿锰测定，同时进行环境检测。作业环境空气中ＭｎＯ２平均浓度波动范围０．１～１．８５ｍｇ／ｍ３；粉尘平均浓度在０．２２～８．０７ｍｇ／ｍ３。尿锰及发锰均值接触组、其他工种、对照组分别为０．２７９４μｍｏｌ／Ｌ及０．３２７６μｍｏｌ／ｇ，０．１６４９μｍｏｌ／Ｌ及０．２５１９μｍｏｌ／ｇ，０．１１８７μｍｏｌ／Ｌ及０．０７６６μｍｏｌ／ｇ。尿锰、发锰与空气锰及粉尘浓度间、与症状体征间未发现相关关系，认为尿锰、发锰目前只能作为锰接触指标，还不能作为锰接触工人的生物监测指标或早期锰中毒的诊断指标。     

β-胡萝卜素和亚硒酸钠体外抗肿瘤作用的实验研究

方法：采用细胞株体外培养技术，研究β－胡萝卜素和亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）单独／联合对人肝癌细胞株（Ｑ３）和人膀胱癌细胞株（Ｔ２４）生长的影响。以小鼠成纤维母细胞（３Ｔ３）为正常对照细胞株。实验分为：１．β－胡萝卜素组：剂量为３、３０、１００μｍｏｌ／Ｌ，溶剂对照为ＤＭＳＯ；２．亚硒酸钠组：剂量为０．１５、１．５、５．０μｍｏｌ／Ｌ，溶剂对照为生理盐水；３．β－胡萝卜素和亚硒酸钠联合组：剂量为１．５＋０．１５、１５＋１．５、５０＋５．０μｍｏｌ／Ｌ，溶剂对照为ＤＭＳＯ和生理盐水。各实验组均设空白组。分别在实验后２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ观察细胞成活率和活细胞蛋白质含量的变化。结果：１．β－胡萝卜素各剂量组对两株肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用；２．亚硒酸钠对两株肿瘤细胞的抑制作用较弱，但随作用时间延长和剂量的增加其抑制作用明显增强；３．β－胡萝卜素和亚硒酸钠对Ｑ３细胞株的抑制作用比Ｔ２４细胞株强；４．β－胡萝卜素和亚硒酸钠联合对Ｑ３和Ｔ２４细胞的抑制作用结果提示两者有相加效应。     

氯化镉诱发16HBE细胞系恶性转化过程中TIF3 p36的变化

目的 探讨氯化镉诱发人支气管上皮细胞（16HBE）恶性转化过程中不同阶段蛋白翻译起始因子（TIF3）p36 mRNA表达水平的变化,为进一步阐明氯化镉的分子致癌机制提供线索.方法 应用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术,以及敏感先进的Taqman荧光定量PCR方法,检测并分析氯化镉诱发16HBE恶性转化不同阶段即转化期间细胞、转化细胞和成瘤细胞的TIF3 p36 mRNA表达量的变化.结果 相对于非转化对照细胞（16HBE）,氯化镉诱发恶性转化不同阶段细胞（转化期间细胞、转化细胞和成瘤细胞）的TIF3 p36 mRNA基因表达水平均明显升高（P＜0.01或P＜0.05）,其中低剂量组（5 μmol/L）所转化的各阶段细胞的eIF3 p36 mRNA平均表达量分别是对照细胞的3.1、5.9和9.9倍,中剂量组（10 μmol/L）的各阶段转化细胞的TIF3平均表达量分别是对照细胞的7.1、6.8和14.8倍,高剂量组（15 μmol/L）的各阶段转化细胞的TIF3 p36平均表达量分别是对照细胞的3.6、3.0和9.1倍.这些不同剂量组的研究结果提示,eIF3 p36的异常表达量与氯化镉诱发16HBE细胞恶变程度之间有正相关关系,但与镉的剂量无关.结论 氯化镉在诱发16HBE细胞恶变过程中,存在明显的蛋白翻译启动因子eIF3 p36异常表达现象,其表达水平与细胞的恶变程度密切相关,这可能是氯化镉诱发人细胞肿瘤的重要分子致癌机制之一.     

细胞周期蛋白D1在石英致人细胞恶性转化中的作用

目的探讨细胞周期蛋白D1在石英致人胚肺成纤维细胞(HELF)恶性转化过程中所起的作用。方法采用基因重组与基因导入的方法将表达正义和反义细胞周期蛋白D1 RNA的pXJ41-细胞周期蛋白D1导入石英恶性转化HELF细胞中。采用原位杂交和免疫组化的方法检测细胞中细胞周期蛋白D1基因表达情况,分析细胞周期蛋白D1导入前后细胞生长速度、倍增时间、细胞周期分布、软琼脂克隆形成能力的改变。结果石英诱导HELF细胞恶性转化过程中细胞周期蛋白D1基因过表达,反义细胞周期蛋白D1 RNA可抑制石英恶性转化细胞的生长增殖。与石英恶性转化细胞相比,反义pXJ41-细胞周期蛋白D1转染细胞培养至第8天时,生长速率下降58．69％,倍增时间从21．0h延长到31．4h,G1期细胞比例从45．1％增加到52．7％,S期细胞比例由40．3％下降到33．1％,克隆形成率显著下降,克隆明显变小。结论细胞周期蛋白D1的异常表达与石英恶性转化细胞有密切的关系,高水平表达的细胞周期蛋白D1对维持恶性转化细胞的恶性性状起重要的作用。     

温石棉诱发人胚肺细胞恶性转化中端粒酶的作用

目的　研究端粒酶在石棉诱发人胚肺成纤维细胞恶性转化中的作用。方法　将端粒酶基因功能片段 (hTERT)导入人胚肺成纤维细胞 (HELF)中。选用 2 5 μg/cm2 温石棉粉尘分别对导入和未导入hTERT的HELF进行染毒 ,分离转化灶 ,观察细胞生物性状 ,测定细胞生长曲线、端粒酶活性和端粒长度 ,进行软琼脂集落形成实验 ,判定转化性质。结果　将hTERT成功导入HELF ,建立了导入端粒酶功能片段的人胚肺成纤维细胞系 (HELF T )。HELF和HELF T 被石棉刺激后均发生了恶性转化 ,HELF T 恶性转化率为 (2 0 8± 1 0 8)转化灶 /皿 ,显著高于HELF染毒组的恶性转化率 [(1 0 8±0 10 )转化灶 /皿 ]。恶性转化的细胞和HELF T 均具有较高的端粒酶活性和较长的端粒长度。结论　端粒酶活性较高、端粒长度较长的细胞 ,经石棉刺激后恶性转化率也较高 ,表明端粒酶在石棉诱导细胞发生恶性转化的过程中发挥了重要作用     

cyclinD1/E2F通路在苯并(a)芘引起人胚肺成纤维细胞周期改变中的作用

目的探讨细胞周期蛋白D1（cyclinD1）／细胞周期蛋白依赖激酶4（CDK4），E2F-1／4通路在苯并（a）芘[B（a）P]引起的人胚肺成纤维细胞（HELF）周期改变中的作用。方法分别用2μmol／L的B（a）P作用HELF24h和100μmol／LB（a）P作用3次，每次24h，细胞具有转化细胞的部分特征（THELF）。用转染反义cyclinD1和CDK4质粒的HELF（A-D1，A-K4）和T-HELF（T-A-D1，T-A-K4）研究cyclinD1／CDK4与E2F-1／4的上下游关系。用流式细胞仪和Western blot法检测细胞周期、cyclin D1、CDK4和E2F-1／4蛋白表达的改变。结果2μmol／LB（a）P作用24h HELF中G1期细胞数明显减少。在A-D1和A-K4的HELF中，cyclinD1和CDK4表达的抑制阻断了由B（a）P引起的细胞周期从G1期进入S期的变化。B（a）P刺激后HEIF中cyclinD1和E2F-1的表达明显增加。在A-D1中，E2F-1的高表达被抑制。B（a）P作用A-K4细胞后，CDK4表达明显升高，E2F-4表达明显降低。T-A-D1和T-A-K4的T-HELF多数停留在G1期。与HELF相比，T-HELF中cyclin D1的表达明显增加；与T-HELF相比，T-A．D1和T-A-K4中E2F-4表达明显增加。结论在2μmol／L B（a）P作用的HELF中，B（a）P通过cyclinD1／CDK4-E2F-1／4信号转导通路引起细胞周期的改变。在T-HELF中，B（a）P通过cyclinD1／CDK4-E2F-4信号转导通路引起细胞周期的改变。     

苯并(a)芘引起静止期二倍体人胚肺成纤维细胞可逆的G1期阻滞

目的研究苯并（a）芘[B（a）P]对静止期的二倍体人胚肺成纤维细胞（HELF）细胞周期的影响。方法血清饥饿法使细胞同步化于G0期;20μmol／LB（a）P作用细胞4h后,采用流式细胞术分别检测遗传损伤发生后0、24、48h细胞周期分布的改变,并采用Western blotting分析0、5、10、20μmol／LB（a）P作用24h后及20μmol／LB（a）P作用4h后24h内细胞周期主要调节基因p53、p21和p16表达的改变。结果0．5％低血清培养48h能够较好的达到G0同步化效果,处于G0期细胞占78％;正常培养细胞持续进入细胞周期进行DNA合成,24h时S期细胞达43．9％,而20μmol／LB（a）P处理组细胞发生G1期阻滞;48h后对照组细胞完成一个细胞周期回到以G1期为主的状态,B（a）P处理组细胞则从G1期阻滞中恢复,继续进入细胞周期,S期细胞达到了26．5％,延迟约24h。不同浓度B（a）P作用后引起P53、P21蛋白表达明显增加,20μmol／LB（a）P处理后4h即可诱导蛋白表达增加。P53在12h后逐渐恢复,P21直至24h仍未下降。P16初始略有下降,24h恢复。结论B（a）P引起同步化于G0期的细胞发生可逆转的G。期阻滞,该阻滞和p53-p21途径相关。     

苯并芘诱导人胚肺成纤维细胞cyclinD1、CDK4和E2F-1/4的表达改变

目的建立苯并芘诱导的具有转化细胞部分特征的人胚肺成纤维细胞(T-HELF)模型,并观察T-HELF细胞中cyclin D1、CDK4和E2F-1/4蛋白表达的改变。方法以200、100、50、25、5、1μmol/L的苯并芘处理人胚肺成纤维细胞(HELF)24小时,用噻唑蓝(MTT)比色法测定苯并芘的细胞毒性。根据MTT结果确定以100和200μmol/L苯并芘给HELF细胞染毒3次,染毒结束后培养6周观察细胞的形态变化,培养12周后观察其形态变化及软琼脂中细胞克隆的生长。用流式细胞仪检测T-HELF细胞周期的变化,用Western blot检测T-HELF细胞中cyclin D1、CDK4和E2F-1/4蛋白表达的改变。结果MTT结果显示苯并芘浓度在25~200μmol/L之间时,细胞存活率为78%~80%。苯并芘200μmol/L组染毒4周后细胞死亡。100μmol/L组染毒结束后培养6周,观察到细胞变大,核增大或多核;12周后,在软琼脂中可以生长为细胞克隆,说明HELF细胞具有了转化细胞的部分特征。T-HELF细胞在无血清培养时,细胞周期没有停滞。用Western blot检测发现和正常HELF细胞相比T-HELF细胞的cyclin D1表达明显增加,CDK4、E2F-1和E2F-4的表达没有明显变化。结论建立了苯并芘诱导的具有转化细胞部分特征的人胚肺成纤维细胞模型,可用于苯并芘致癌的分子机制研究。无血清培养时,T-HELF细胞周期没有停滞,和正常HELF细胞相比T-HELF细胞cyclin D1表达明显增加,cyclin D1可能与T-HELF细胞的快速增殖有关。     

p53表达在石英诱导的细胞周期改变及DNA损伤修复中的作用

目的 探讨p53表达在石英致人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞周期改变及DNA双链断裂(DNA double strand breaks,DSBs)修复中的作用.方法 3种方式分组处理细胞:(1)不同浓度(0、25、50、100、200、300、400μg/ml)的石英刺激HELF细胞12 h;(2)200 μg/ml石英刺激HELF细胞O、1、2,6、12、24 h;(3)200μg/ml石英刺激H-CMV和H-p53细胞O、12、24 h.用中性彗星试验检测石英所致的DSBs损伤强度,并计算DNA修复能力(DNA repair compentence,DRC),用免疫印迹法检测蛋白表达和磷酸化水平,用流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果 (1)200μg/ml的石英作用HELF细胞不同时间,p53表达及p53-Ser15磷酸化水平随着作用时间的延长逐渐升高,12 h达峰值,24 h较12 h略有降低;不同浓度的石英作用HELF细胞12 h,随着石英浓度的增加,p53表达及p53-Ser15磷酸化水平逐渐增强,呈现剂量-反应关系.(2)石英作用于p53 siRNA的阴性对照细胞H-CMV,DRC为57.19%:石英作用沉默p53表达的H-p53细胞后,DSBs的修复能力增强,DRC为87.68%.(3)石英作用p53siRNA的阴性对照细胞24 h后,S期细胞比例由(24.3±3.8)%增加到(31.8±1.1)%,差异有统计学意义(P<0.05);沉默p53表达后,石英诱导的HELF细胞S期细胞比例[(41.4±0.6)%]与同期对照组[(25.4±1.9)%]相比有明显增加.差异有统计学意义(P<0.05).结论 石英可诱导p53表达及磷酸化水平的增加,p53表达上调可抑制石英所致S期细胞百分比的增加及石英所致DNA双链断裂的修复.     

端粒酶在石英致细胞恶性转化中的作用

目的　观察在石英诱发人胚肺成纤维细胞恶性转化中端粒酶的作用。方法　将端粒酶功能片段(hTERT)导入人胚肺成纤维细胞 (HELF)中。经细胞毒性实验确定染毒剂量后 ,用石英粉尘 (1 6 0 μg cm2 )对导入 未导入hTERT的HELF进行染毒 ,分离转化灶 ,观察细胞生物性状 ,测定细胞生长曲线、端粒酶活性和端粒长度 ,进行软琼脂集落形成实验 ,判定转化性质。结果　将hTERT成功地导入了人胚肺成纤维细胞系(HELF T+ ) ,发现石英刺激后 ,导入端粒酶功能片段的人胚肺成纤维细胞的恶性转化率高于未导入端粒酶功能片段的人胚肺成纤维细胞 (P <0 0 5 )且有较高的端粒酶活性和端粒长度。结论　端粒酶在石英诱导细胞发生恶性转化的过程中发挥了重要作用。建立的端粒酶基因导入的细胞系可用于其它环境与职业危害因素相关疾病发病过程中的端粒酶作用的研究     

降钙素对人成骨样细胞增殖与细胞膜流动性的影响

为了解降钙素（ＣＴ）对体外培养的人成骨样细胞ＯＳ－７３２增殖与细胞膜流动性的影响,并与１,２５（ＯＨ）２Ｄ３的作用进行比较,在培养液中添加１ＩＵ／ｍｌ ＣＴ前后观察ＤＮＡ合成速率、细胞增殖、细胞周期和细胞膜流动性的变化,结果表明ＣＴ有明显促进ＯＳ－７３２细胞增殖和ＤＮＡ合成的作用,使Ｇ２＋Ｍ细胞所占的百分比增加,而Ｓ期细胞的百分比下降。１,２５（ＯＨ２）Ｏ３可使细胞膜流动性增加,而１ＩＵ／ｍｌ Ｃ