隐球菌抗原MP98的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位的预测及鉴定

目的鉴定隐球菌抗原MP98中的HLA-A＊0201限制性CD8＋CTL表住。方法应用数据库SYFPEITHI预测隐球菌MP98中可能存在的HLA-A＊0201限制性CD8＋CTL表位，经流式细胞术分析各抗原肽与HLA-A＊0201的亲合力，经时间分辨荧光法检测外周血单个核细胞（PBMCs）对各抗原肽产生的增殖反应，经细胞毒性实验研究各抗原肽诱导的特异性T细胞的细胞毒杀伤活性，逐步鉴定MP98的HLA-A＊0201限制性CD8＋CTL表位。结果位于MP98氨基酸序列肽5（436-444aa）与HLA-A＊0201分子具有较高的亲合力，并都能刺激HLA-A＊0201阳性个体者PBMC增殖，并诱导产生具有特异性杀伤活性的CTL。结论肽5GMFDGLSGV（436-444aa）是MP98上HLA-A＊0201限制性CD8＋CTL的优势表位，可作为隐球菌疫苗设计的候选表位。     

SARS冠状病毒多聚酶表位区的原核表达及应用

目的原核表达SARS冠状病毒非结构蛋白RNA多聚酶表位区,了解其在SARS病毒感染诊断及作为病毒复制指标的意义。方法通过PCR扩增获得RNA多聚酶表位区基因,与原核表达载体Pet32a 连接,转化E.coliBL-21表达获得重组融合蛋白。经切胶透析纯化后,应用ELISA检测SARS患者及动物模型血清标本的IgG抗体。结果获得原核表达的RNA多聚酶表位区。ELISA检测正常人血清均阴性,SARS患者血清阳性率为95%;检测SARS病毒感染实验动物血清阳性率100%,灭活纯化病毒接种恒河猴均为阴性。结论RNA多聚酶表位区具有很好的抗原性,可用于感染诊断的检测及作为病毒复制性指标。     

新型MUC1黏蛋白模拟表位原核表达、纯化和鉴定

目的对新筛选的MUC1模拟表位进行克隆表达、纯化和鉴定。方法从噬菌体随机12肽库中筛选出新的MUC1的模拟表位，目的基因片段克隆人表达质粒PET-31b（＋），转化大肠杆菌BL21（DE3）plysS，IPTG诱导表达，亲和层析纯化，Western blot鉴定。结果成功构建了重组表达质粒，诱导表达出新的MUC1模拟表位重组蛋白，纯化的目的蛋白在SDS-PAGE上呈现特异的单一条带，Western印迹也检测到目的蛋白特异条带。结论成功获得了新的MUC1模拟表位表达产物，为其在肿瘤疫苗方面的应用研究创造条件。     

新型MUC1黏蛋白模拟表位原核表达、纯化和鉴定

目的对新筛选的MUC1模拟表位进行克隆表达、纯化和鉴定。方法从噬菌体随机12肽库中筛选出新的MUC1的模拟表位,目的基因片段克隆入表达质粒PET-31b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导表达,亲和层析纯化,Western blot鉴定。结果成功构建了重组表达质粒,诱导表达出新的MUC1模拟表位重组蛋白,纯化的目的蛋白在SDS-PAGE上呈现特异的单一条带,Western印迹也检测到目的蛋白特异条带。结论成功获得了新的MUC1模拟表位表达产物,为其在肿瘤疫苗方面的应用研究创造条件。     

1例艾滋病合并隐球菌性脑膜炎及隐球菌性败血症的护理

报告1例艾滋病合并隐球菌性脑膜炎、隐球菌性败血症的护理。护理要点包括：生命体征的观察;护理安全措施的落实;药物不良反应观察;基础护理与营养支持;心理护理;执行消毒隔离制度,防止病原体的传播和医护人员的职业暴露。经过43d的精心治疗与护理,患者病情好转出院。     

HCV包膜蛋白E2的B细胞抗原模拟表位的筛选、重组表达与抗原性鉴定

目的　采用蛋白质 /多肽递呈技术对HCV包膜蛋白E2进行模拟表位研究。方法　通过使用E2蛋白结合血清中的抗 E2 ,筛选M1 3噬菌体构建的随机肽库 ,寻找E2区蛋白的模拟表位 ;用大肠杆菌硫氧还蛋白作为骨架 ,在其活性部位以“内融合”形式重组表达该模拟表位 ,用HCV感染者血清验证重组蛋白的抗原性。结果　寻找到一个E2区蛋白的模拟表位 ,可能为E2蛋白的构象性表位。结论　本实验为研究HCV外膜蛋白E2抗原表位水平的特异诊断试剂的研制、疫苗的设计提供依据     

四种TRAIL受体在隐球菌性脑膜炎中的表达及临床意义

目的 研究建立实时荧光定量(RFQ)-PCR法测定四种TRAIL受体DcR1,DcR2,DR4,DR5 mRNA含量的方法 ,探讨其在隐球菌性脑膜炎患者外周血单个核细胞中表达的检测价值,并分析隐球菌性脑膜炎患者免疫指标与四种TRAIL受体的相关性.方法 设计特异性的引物和探针,以人基因GAPDH为内参照,用实时定量PCR的方法 检测35例健康人和35例隐球菌性脑膜炎患者外周血单个核细胞中TRAIL受体mRNA的表达水平,采用全自动特定蛋白分析仪检测IgG,IgA,IgM,C3,C4.结果 与健康人比较,隐球菌性脑膜炎患者外周血单个核细胞中TRAIL受体DcR1 mRNA的表达显著升高(P<0.01),受体DcR2,DR4,DR5 mRNA的变化无统计学意义.隐球菌性脑膜炎患者血清中的C3和IgG显著下降(P<0.01),且与DcR1的变化成负相关,结论 隐球菌性脑膜炎患者TRAIL受体DcR1 mRNA的表达明显升高,提示TRAIL受体DcR1可能参与隐球菌性脑膜炎的疾病进程,这为有效治疗隐球菌性脑膜炎提供了新的线索.     

特殊隐球菌病一例诊治分析及文献复习

【目的】探讨隐球菌病的临床诊治方法。【方法】回顾性分析1例隐球菌病诊治经过并结合文献复习。【结果】患者既往健康,无免疫力缺陷。因右侧胸背部疼痛1年,头痛、发热、呕吐2个月入院。采用抗结核及支持疗法后,病情无缓解。行右侧肩胛骨脓肿穿刺术及腰椎穿刺术,脓液及脑脊液真菌培养证实为新型隐球菌。抗真菌治疗3个月出院,临床随访半年无复发。【结论】对骨关节疼痛、发热、头痛的患者,诊断考虑结核感染的同时,要高度警惕新型隐球菌感染的可能,而反复脑脊液真菌培养及微创针刺取材细菌学检查是明确诊断的主要方法。     

艾滋病并发皮肤隐球菌病及隐球菌性脑炎一例误诊分析

1 病例资料 男,38岁,未婚.因头痛2个月,加重伴视力下降1周入院.2个月前无明显诱囚出现左颞部间歇性隐痛,时轻时重,发作逐渐频繁.1周前病情明显加重,出现持续性头胀痛,以前额及双眼球后为甚,伴视力下降.患者到某眼科医院就诊,眼底检查示:双视盘水肿,边界不清,表面及边缘有出血灶,视网膜周闱水肿,呈放射条纹状,静脉迂曲.     

新型隐球菌脑膜炎35例诊治及误诊分析

新型隐球菌脑膜炎是由新型隐球菌感染引起的脑膜炎,是中枢神经系统最常见的真菌感染,其病情重,病死率高,起病隐匿,临床症状、体征和脑脊液检查缺乏特异性,极易误诊。本文将1995-01/2008-12住我院经明确诊断为新型隐球菌脑膜炎的35例作回顾性分析,汲取误诊教训,为临床早期确诊提供帮助。     

心房利钠肽的抗肿瘤作用及其基因工程表达

自心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)被发现以来,其扩张血管、降压、增加血管通透性、利钠利尿等心血管系统方面的作用已得到认可,近年来发现ANP在抗肿瘤方面具有潜在的巨大价值。     

血管基膜衍生多功能肽抗人结肠癌作用研究

目的 研究重组血管基膜衍生多功能肽（vascular basementme mbranederived muldfunction pepude，VBMDMP）的抗人结肠癌作用。方法 体外培养人结肠癌细胞系（SW480）细胞和中国仓鼠卵巢细胞系（CHO-K1）细胞。采用MTT比色法检测重组VBMDMP对SW480细胞选择性抑制增殖作用；胎盼蓝染色细胞计数法检测重组VBMDMP对SW480细胞和CHO-K1细胞生长曲线的影响；人结肠癌（SW480）细胞裸鼠异种移植瘤模型治疗实验观测重组VBMDMP体内抗人结肠癌作用。结果 重组血管基膜衍生多功能肽具有选择性抑制体外培养人结肠癌细胞系SW480细胞增殖和生长作用，呈剂量依赖性。而对CHO-K1细胞的增殖活性影响小。重组血管基膜衍生多功能肽对SW480细胞裸鼠异种移植瘤生长具有显著抑制作用．呈剂量依赖性。1、5、10mg／kg重组VBMDMP的肿瘤生长抑制率分别为：63％，79％和83％；瘤重抑制率分别为：62％、66％和75％。10mg/4kg重组VBMDMP的肿瘤生长抑制率和瘤重抑制率均接近100mg／kg环磷酰胺（CTX），高于20ms／kg 血管生成抑制剂烟曲霉素衍生物TNP-470。结论 重组血管基膜衍生多功能肽对人结肠癌细胞增殖和生长具有显著抑制作用。     

不同培养基中重组人色素上皮衍生因子融合蛋白的表达

目的观察不同种培养基中重组人色素上皮衍生因子（rPEDF）融合蛋白的表达。方法将前期研究已构建的pET28a-PEDF原核表达重组体转化E.coli BL21大肠杆菌表达宿主菌,酶切鉴定阳性菌落后,分别在M9和LB培养基中用异丙基β-D硫代半乳糖（IPTG,Isopropyl-beta-D-thiogalactoside）诱导表达,SDS-PAGE电泳检测表达的PEDF蛋白,美国I mage-Pro Plus分析系统进行蛋白定量分析。结果 LB和M9培养基中均获得相对分子质量约54×10^3的rPEDF融合蛋白。但LB培养基获得的是rPEDF融合蛋白的包涵体,目的蛋白占总蛋白含量为21.046%,M9培养基获得的是可溶性的rPEDF的融合蛋白,目的蛋白占总蛋白含量的12.31%。结论不同种培养基中均有rPEDF融合蛋白的表达。     

重组空肠弯曲菌PEB1蛋白的大量表达及其鉴定分析

目的 探讨基因工程菌PEB1 E.coli BL21(DE3)大量表达重组空肠弯曲菌PEB1蛋白的稳定性及其纯化方法并鉴定.方法 诱导培养工程菌E.coli BL21(DE3)表达重组空肠弯曲菌PEB1蛋白,经镍琼脂糖凝胶层析柱纯化,透析后通过SDS-PAGE分析纯化后的重组空肠弯曲菌PEB1蛋白分子量大小.结果 挑取的PEB1 E.coli BL21(DE3)单个菌落,经总共17 h的扩增,细菌总数可达1×1010以上.在咪唑浓度为100,200,300 mmol/L时,洗脱液中重组蛋白的含量较高,分子量在31KD左右.结论 基因工程菌PEB1 E.coli BL21(DE3)可大量稳定表达重组空肠弯曲菌PEB1蛋白,经鉴定与空肠弯曲菌外膜蛋白-PEB1蛋白分子量相同.     

重组HIV抗原和多表位抗原的研究

目的研究重组HIV病毒系列抗原,以满足HIV各种抗体检测试荆研究的需要。方法从HIV-1／2不同抗原中精选出优势抗原片段,分别用PCR方法从编码全长HIV-1基因的pBHIOR2／HIV质粒中扩增出HIV-1／gpl20、HIV-1／GP41及HIV-1／“M”优势抗原表位,用基因合成法,合成HIV-1／“0”和HIV-2／gp36基因,将获得的各基因片段插入到pBVIL1载体,使其在HB101中表达。利用载体pBVILl具有使小分子肽基因间可方便连接的特点,选择优势抗原表位进行连接和嵌合表达。结果与结论所克隆的单片段及嵌合抗原均在大肠杆菌中获得了高效的表达,纯化的单片段及多表位嵌合抗原经用间接EIA法对HIV阴性和阳性血清测定,表明抗原已满足抗体检测试剂盒的要求。得到的单片段抗原可用于LIA测定,而多表位嵌合抗原,可用于EIA筛检试剂。     

pEGFP-BMI-1真核表达载体的构建、鉴定及其表达

本研究构建真核表达载体pEGFP-BMI-1并观察其在HeLa细胞中的表达。将BMI-1逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)产物克隆入pEGFP-N1,经酶切、PCR鉴定及测序分析,构建pEGFP-BMI-1真核表达载体;采用脂质体转染法,将融合基因pEGFP-BMI-1转入HeLa细胞,用荧光显微镜和Western blot检测其表达,SYBR Green I实时定量RT-PCR方法检测转染前后HeLa细胞中P16INK4a mRNA的表达变化。结果表明:重组后的pEGFP-N1质粒已成功载入BMI-1的全长编码基因,序列测定的结果与预期设计完全一致。荧光显微镜下可见在转染pEGFP-BMI-1的HeLa细胞中存在荧光分布;Western blot检测发现存在外源性融合蛋白BMI-1-EGFP的表达。在HeLa细胞中过表达BMI-1显著下调P16INK4a mRNA的表达为对照组的9.2%(P<0.01)。结论:成功构建了真核表达质粒pEGFPBMI-1,转染HeLa细胞后可表达融合蛋白BMI-1-EGFP。这为今后研究BMI-1在肿瘤发生发展中的机制奠定了基础。     

SARS病毒不同基因区抗原与SARS患者血清反应性的研究

目的研制非典型肺炎病毒(SARS病毒)不同基因区抗原,探讨SARS病毒感染机体不同基因区抗体免疫应答。方法根据目前已知SARS病毒的基因组序列及其编码的蛋白质,运用计算机抗原表位预测技术,筛选4种SARS病毒主要抗原表位。合成抗原表位基因,克隆到表达载体pBVILl,在E．coli中表达S蛋白和N-蛋白,E-蛋白和M-蛋白为合成肽。结果用SARS病毒编码的S(Spike)蛋白、M-蛋白、N-蛋白和E-蛋白分别与46份SARS患者恢复血清反应,检测血清中IgG抗体,结果S蛋白、N-蛋白、E-蛋白和M-蛋白检出率分别为71．7％(33／46),89．13％(41／46),30．43％(14／46),52．17％(24／46)。结论感染SARS病毒病人血清中S蛋白、M-蛋白、N-蛋白和E-蛋白的免疫应答有显著差异。     

Specific Activities of Dolastatin 10 and Peptide Derivatives against Cryptococcus neoformans

The biosynthetic peptide dolastatin 10 is currently in phase I and II cancer clinical trials. We evaluated the antifungal spectrum of dolastatin 10 and four structural modifications. In broth macrodilution assays, the peptides were fungicidal for American Type Culture Collection strains and clinical isolates (including fluconazole-resistant strains) of Cryptococcus neoformans but no other yeasts or filamentous fungi examined. Specificity for C. neoformans was also demonstrated in the solid-phase disk diffusion assay, and fungicidal activity was confirmed in time-kill experiments. For a methyl ester modification, the MICs at which 50 and 90% of 19 clinical isolates were inhibited (MIC₅₀ and MIC₉₀, respectively) were 0.195 and 0.39 μg/ml, respectively. The MFC₅₀ (50% minimum fungicidal concentration) for this peptide was 0.39 μg/ml, and the MFC₉₀ was 0.78 μg/ml. MICs and MFCs were identical or lower in the presence of human serum but increased with lowered pH. These peptides should be pursued as potential chemotherapeutics for C. neoformans, a leading cause of infection and mortality in immunocompromised patients.     

Structure-Activity Relations of Myxinidin,an Antibacterial Peptide Derived from the Epidermal Mucus of Hagfish

The structure-activity relations of myxinidin, a peptide derived from epidermal mucus of hagfish, Myxine glutinosa L., were investigated. Analysis of key residues allowed us to design new peptides with increased efficiency. Antimicrobial activity of native and modified peptides demonstrated the key role of uncharged residues in the sequence; the loss of these residues reduces almost entirely myxinidin antimicrobial activity, while insertion of arginine at charged and uncharged position increases antimicrobial activity compared with that of native myxinidin. Particularly, we designed a peptide capable of achieving a high inhibitory effect on bacterial growth. Experiments were conducted using both Gram-negative and Gram-positive bacteria. Nuclear magnetic resonance (NMR) studies showed that myxinidin is able to form an amphipathic α-helical structure at the N terminus and a random coil region at the C terminus.     

Dissecting the Structure-Function Relationship of a Fungicidal Peptide Derived from the Constant Region of Human Immunoglobulins

Synthetic peptides encompassing sequences related to the complementarity-determining regions of antibodies or derived from their constant region (Fc peptides) were proven to exert differential antimicrobial, antiviral, antitumor, and/or immunomodulatory activities in vitro and/or in vivo, regardless of the specificity and isotype of the parental antibody. Alanine substitution derivatives of these peptides exhibited unaltered, increased, or decreased candidacidal activities in vitro. The bioactive IgG-derived Fc N10K peptide (NQVSLTCLVK) spontaneously self-assembles, a feature previously recognized as relevant for the therapeutic activity of another antibody-derived peptide. We evaluated the contribution of each residue to the peptide self-assembling capability by circular-dichroism spectroscopy. The interaction of the N10K peptide and its derivatives with Candida albicans cells was studied by confocal, transmission, and scanning electron microscopy. The apoptosis and autophagy induction profiles in yeast cells treated with the peptides were evaluated by flow cytometry, and the therapeutic efficacy against candidal infection was studied in a Galleria mellonella model. Overall, the results indicate a critical role for some residues in the self-assembly process and a correlation of that capability with the candidacidal activities of the peptides in vitro and their therapeutic effects in vivo.