用B7~ 瘤细胞诱导抗肿瘤CTL及其杀伤活性的测定

研究利用脂质体转染的方法,将小鼠B7基因导入C57BL小鼠大肠癌细胞株CMT93细胞(弱免疫原性),用800μg/ml的C418筛选得到阳性克隆,免疫组织化学检测发现B7分子得到充分表达,主要以细胞膜染色为主,也有部分细胞浆着色.将5×10~6B7~ CMT93细胞接种于C57BL小鼠背部皮下,以相同细胞数的野生型瘤细胞接种为阴性对照.结果发现实验组小鼠(n=4)第2周开始肿瘤的体积逐渐缩小,至第4周未肿瘤全部消失,而对照组肿瘤呈进行性生长(n=3),至第4周未肿瘤大小为(1.7654±0.4963)cm~2(长径×短径).实验组与对照组相比,有显著性差异(P<0.001).用B7~ CMT93瘤细胞致敏小鼠后再接种野生型的CMT93瘤细胞,小鼠全部不成瘤(n=4),未致敏小鼠除1只未成瘤外,余     

大肠癌患者手术前后淋巴细胞杀伤活性及诱导细胞因子能力？…

目的：探讨大肠癌患手术前后外周血淋巴细胞杀伤活性及诱导细胞因子能力的变化。方法：选择２５例在本科进行大肠癌手术的病例,研究大肠癌患手术前后ＮＫ、ＡＤＣＣ活性、Ｔ细胞亚群以及外周血淋巴细胞诱导ＩＬ－２水平的改变。结果：大肠癌患手术后,ＮＫ、ＡＤＣＣ活性、ＣＤ４＾＋Ｔ细胞的比例及诱导ＩＬ－２的水平明显高于手术前（Ｐ＜０．０５）,但与对照组相比,仍相差非常显（Ｐ＜０．０１）;按病期、病理分类比较     

大肠癌患者手术前后淋巴细胞杀伤活性及诱导细胞因子能力的变化

目的:探讨大肠癌患者手术前后外周血淋巴细胞杀伤活性及诱导细胞因子能力的变化。方法:选择25例在本科进行大肠癌手术的病例,研究大肠癌患者手术前后NK、ADCC活性、T细胞亚群以及外周血淋巴细胞诱导IL—2水平的改变。结果:大肠癌患者手术后,NK、ADCE活性、CD4~ T细胞的比例及诱导IL—2的水平明显高于手术前(P<0.05),但与对照组相比,仍相差非常显著(P<0.01);按病期、病理分类比较发现,Dukes’AB期及高、中分化组淋巴细胞的功能抑制较CD组及低分化组轻(P<0.05)结论:大肠癌患者淋巴细胞活性的抑制与肿瘤的分期有关;大肠癌细胞可能分泌某些因子抑制免疫细胞的活性。     

K-ras 抗原致敏的DC诱导CTL 对胰腺癌体内杀伤活性的研究*

目的:研究K-ras多肽的致敏树突状细胞（DC）活化的特异性细胞毒性T 淋巴细胞（CTL）对胰腺癌的体内外杀伤作用。方法:联合应用粒细胞- 巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素-4 诱导培养外周血DC。表达K-ras突变体的胰腺癌细胞株全瘤、单纯K-ras突变体多肽和K-ras突变体表位肽阳离子纳米颗粒分别致敏DC。致敏DC刺激T 淋巴细胞得到肿瘤抗原特异的细胞毒性T 淋巴细胞（CTL）。 Patu 8988、SW1990细胞系制备荷瘤裸鼠模型评价CTL 体内抗肿瘤活性。结果:负载全瘤抗原的DC其诱导产生的CTL 对胰腺癌有较好的抑制,负载单纯K-ras（12-Val ）突变体多肽、K-ras（12-Val ）突变体表位肽阳离子纳米颗粒的DC其诱导产生的CTL 对表达K-ras（12-Val ）突变体阳性（Patu 8988）的胰腺癌有较特异的抑制作用,而对K-ras（12-Val ）突变体阴性（SW1990）的胰腺癌的抑制作用与对照组比较无显著性差异。结论:负载肿瘤抗原的DC诱导的CTL 可显著提高对荷瘤裸鼠的生存时间,抑制肿瘤的生长速度,并显示其可增加抗肿瘤特异性。      

DC和NK细胞诱导的抗肿瘤CTL反应

细胞毒性T淋巴细胞（CTL）介导的细胞毒效应能够高效、特异性杀伤肿瘤细胞而不损伤周围组织。树突细胞（DC）是已知体内抗原提呈功能最强的抗原提呈细胞,能摄取各种抗原,体内外能激发T细胞增殖,诱导特异性CTL生成。自然杀伤（NK）细胞在由DC引起的抗肿瘤免疫中发挥重要作用。近年来NK-DC细胞的相互作用在CTL反应中的作用引起关注。现综述DC、NK细胞在诱导抗肿瘤CTL反应中作用的研究进展。     

DC和NK细胞诱导的抗肿瘤CTL反应

细胞毒性T淋巴细胞(CTL)介导的细胞毒效应能够高效、特异性杀伤肿瘤细胞而不损伤周围组织。树突细胞(DC)是已知体内抗原提呈功能最强的抗原提呈细胞,能摄取各种抗原,体内外能激发T细胞增殖,诱导特异性CTL生成。自然杀伤(NK)细胞在由DC引起的抗肿瘤免疫中发挥重要作用。近年来NK-DC细胞的相互作用在CTL反应中的作用引起关注。现综述DC、NK 细胞在诱导抗肿瘤CTL反应中作用的研究进展。     

可溶性抗原联合超抗原诱导的CTL抗瘤作用的实验研究

目的：探讨肿瘤可溶性抗原联合超抗原SEC诱导的细胞毒性T细胞（CTLs）对肿瘤细胞杀伤机理。方法：外周血淋巴细胞经肿瘤可溶性抗原、超抗原SEC联合作用,进行体外培养。对其增殖、细胞因子分泌、杀瘤活性和形态学变化进行观察和测定。结果：经肿瘤可溶性抗原、超抗原SEC联合刺激的淋巴细胞组增殖活性最强,诱导的CTLs对靶细胞杀伤活性显著高于单纯淋巴细胞组（P〈0．05）,对TSA来源的肺癌细胞具有选择性杀伤作用,能够诱导肿瘤细胞出现凋亡的形态学变化。结论：肿瘤可溶性抗原与超抗原SEC联合应用能诱导效应细胞明显增殖、活化、并产生高效特异性的抗肿瘤效果。     

可溶性抗原联合超抗原诱导的 CTL 抗瘤作用的实验研究

目的:探讨肿瘤可溶性抗原联合超抗原SEC诱导的细胞毒性T细胞(CTLs)对肿瘤细胞杀伤机理.方法:外周血淋巴细胞经肿瘤可溶性抗原、超抗原SEC联合作用,进行体外培养.对其增殖、细胞因子分泌、杀瘤活性和形态学变化进行观察和测定.结果:经肿瘤可溶性抗原、超抗原SEC联合刺激的淋巴细胞组增殖活性最强,诱导的CTLs对靶细胞杀伤活性显著高于单纯淋巴细胞组(P＜0.05),对TSA来源的肺癌细胞具有选择性杀伤作用,能够诱导肿瘤细胞出现凋亡的形态学变化.结论:肿瘤可溶性抗原与超抗原SEC联合应用能诱导效应细胞明显增殖、活化、并产生高效特异性的抗肿瘤效果.     

肿瘤抗原肽及CTL杀伤机理的研究进展

目前,对肿瘤抗原及其特异性T细胞介导的抗肿瘤免疫机理的研究,已成为抗肿瘤免疫治疗的一个热点［1］。本文对此领域的研究进展作简要综述如下：1肿瘤抗原肽肿瘤的抗原性是细胞毒T淋巴细胞（CTL）介导特异性抗肿瘤免疫治疗的关键。现已发现肿瘤细胞表面抗原分子是由MHC分子提呈的,这种肿瘤源性的多肽是通过分析MHCI类分子抗原结合沟槽的结构,以及与之相结合的抗原肽的序列所发现的。研究表明,与MHCI类分子结合的抗原肽来源于细胞内抗原,这些蛋白抗原被酶解成短肽后即转运至粗面内质网,在此与MHCI类分子结合的抗原肽片段一般为…     

TIL细胞与LAK细胞体外杀伤活力的比较

应用改良ＬＤＨ释放法，对ＴＩＬ细胞与ＬＡＫ细胞的前体及培养激活的细胞进行杀伤活力的检测，结果显示无论前体细胞或培养激活的细胞，对自体瘤细胞及Ｋ５６２细胞的杀伤活性均以ＴＩＬ细胞为高，表明ＴＩＬ细胞对肿瘤的特异识别及杀伤力均较ＬＡＫ细胞为强。     

Direct effect of dasatinib on proliferation and cytotoxicity of natural killer cells in in vitro study

Lymphocytosis predominantly due to natural killer (NK) cells has been reported in nearly a half of chronic myelogenous leukemia (CML) patients who were being treated with dasatinib. Besides, dasatinib‐treated patients with lymphocytosis have a better prognosis than patients without lymphocytosis. In order to elucidate the effects of dasatinib on the proliferation of lymphocyte subset, dasatinib was added to the culture of peripheral blood mononuclear cells with IL‐2 (lymphokine‐activated killer culture) or a low dose of IL‐2 with zoledronate (γδ T‐cell culture). In both culture conditions, NK cells were increased in both percentage and absolute number in the culture with dasatinib compared with control culture without dasatinib. The increase of NK cells was dose dependent of dasatinib in the range of 2–25 nM. NK cell cytotoxicity of cultured cells with dasatinib was demonstrated to be superior to control cells without dasatinib in cytotoxicity assay using EGFP‐transfected K562 cells as target cells. The present study suggested that lymphocytosis in dasatinib‐treated CML patients is at least partly associated with a direct effect of dasatinib to stimulate the proliferation of NK cells. Favourable prognosis in patients with dasatinib‐induced lymphocytosis might be associated with the effects of dasatinib to potentiate NK cytotoxicity in vivo. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd.     

SPOP促进SETD2蛋白的降解并增强肾癌细胞的体外成瘤与增殖能力

目的:新近发现E3泛素化连接酶的成员之一SPOP在肾癌中作用关键,我们前期的研究表明SPOP在肾癌中表达上调且通过活化B-Catenin的活性来促进肾癌细胞的侵袭与转移.本研究继续研究SPOP在肾癌成瘤与增殖中的作用,并探索其潜在的分子机制.方法:siRNA靶向沉默肾癌细胞内SPOP的表达后,采用克隆形成实验及MTT实验检测细胞的体外成瘤与增殖能力的变化;运用realtime-PCR及western blot技术探索SPOP在肾癌细胞内发挥生物学功能的潜在靶分子;采用免疫组织化学方法检测SPOP与其靶分子SETD2在人肾癌组织中的表达情况,并行相关性分析.结果:SPOP siRNA显著减低肾癌细胞的体外成瘤及增殖能力;SPOP的变化不影响肾癌细胞内SETD2 mRNA的表达,但当采用蛋白合成抑制剂cycloheximide预先阻断细胞内SETD2蛋白的合成后,SPOP siRNA能明显延缓SETD2蛋白的降解.进一步检测人肾癌组织标本中SPOP与SETD2的表达结果证实,SPOP与SETD2蛋白的表达呈显著的负相关(r=-0.41,P＜0.05).结论:SPOP能增强肾癌细胞的体外成瘤与增殖能力,其潜在的机制可能为促进抑癌蛋白SETD2的降解.     

胃癌相关抗原与自身CTL细胞增殖及体外杀瘤活性关系

目的：探讨胃癌相关抗原与胃癌患者自身细胞毒Ｔ细胞（ＣＴＬ）细胞增殖及体外杀瘤活性的关系。方法：用生化方法提取胃癌相关抗原,体外协同ＩＬ－２培养淋巴细胞,ＭＴＴ法测定细胞增殖及瘤活性,流式细胞仪（ＦＣＭ）检测细胞表型变化。结果：１２例胃癌相关抗原阳性患者ＣＴＬ细胞增殖快于９例阴性患者,统计比较,差异有极显著意义（Ｐ〈０．００１）。Ｅ／Ｔ为８０：１时,前者体外杀瘤活性均值也大于后者（Ｐ〈０．０１）,Ｆ     

LBH589对人上皮性卵巢癌OVCAR-3细胞增殖的抑制作用及机制探讨

  目的  探讨新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对人上皮性卵巢癌OVCAR-3细胞增殖抑制和促进凋亡作用及其机制。  方法  不同浓度LBH589处理细胞后, 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测对细胞增殖的影响; AO/EB(台盼蓝、吖啶橙溴化乙啶双染色法)检测细胞凋亡; Western blot检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白水平。  结果  LBH589明显抑制OVCAR-3细胞增殖, 48 h半数抑制浓度(IC50)为0.12μM。Western blot检测发现Caspsae-3、PARP-85kD剪切蛋白增加, Bax表达增加, Bcl-2表达减少。  结论  LBH589在体外条件下能明显抑制卵巢癌细胞OVCAR-3细胞增殖, 诱导细胞凋亡。      

miR-421在胃癌中的表达及对BGC-823细胞增殖的作用

目的探讨miR-421在胃癌细胞中的表达水平及对BGC-823胃癌细胞增殖的作用。方法利用PCR方法分析miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中的表达水平,并通过RNA转染技术将miR-421 mimics与miR-421 inhibitors转染BGC-823胃癌细胞;通过CKK-8试剂盒检测转染后BGC-823细胞的增殖情况。结果 miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中均表达增强（P〈0.05）;miR-421 mimics转染BGC-823后,癌细胞增殖能力增强（P〈0.05）,而miR-421 inhibitors转染的BGC-823细胞则增殖力受到明显抑制（P〈0.05）。结论 miR-421在胃癌组织细胞及多种胃癌细胞株中均过表达,而miR-421可能直接或间接参与调控BGC-823胃癌细胞的增殖。     

粒─-巨细胞集落刺激因子对人胃腺癌TIL增殖及体外杀瘤活性的影响

本研究观察粒-巨细胞集落刺激因子（GM－CSF）对胃腺癌TIL增殖及体外杀瘤活性的影响。结果发现，单独GM－CSF刺激不诱导TIL增殖扩增，而在400U／ml的IL－2培养条件下，各剂量GM－CSF均可促进TIL增殖，其中，100μg／mlGM－CSF协同IL－2促增殖效应显著。体外杀瘤活性试验（MTT法）证实100ug／mlGM－CSF协同IL－2诱导TIL细胞增强了其杀瘤活性，无论是对同种异体细胞，亦或是自体肿瘤细胞。本文探讨了GM－CSF促TIL增殖及增强杀瘤活性的可能机制。     

VEGF-C在宫颈癌细胞中的表达及与细胞增殖的关系

目的:研究VEGF-C在宫颈癌细胞中的表达及其对宫颈癌细胞增殖的影响。方法:采用反义技术,脂质体介导VEGF-C反义寡核苷酸转染人宫颈癌Hela细胞。应用荧光定量RT-PCR法、间接免疫荧光标记法,检测转染后细胞内VEGF-C在mRNA、蛋白水平的变化。MTT比色法检测细胞生长的变化。结果:脂质体介导VEGF-C反义寡核苷酸,转染宫颈癌Hela细胞的转染效率大于90％。转染了反义寡核苷酸的反义组VEGF-C在mRNA和蛋白水平上,较未转染组和正义组均明显下降（P<0.05）。MTT法检测转染了VEGF-C反义寡核苷酸的细胞,明显看到反义组细胞的生长受到明显抑制。结论:VEGF-C可影响人宫颈癌Hela细胞增殖,本实验通过抑制VEGF-C,进而可阻断宫颈癌的淋巴转移,为实现靶向性基因治疗的可行性,提供了实验依据。     

辛伐他汀抑制肿瘤细胞增殖及其可能的机制

目的研究辛伐他汀对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法将U87、Hela、HCT-116（p53＋／＋）和HCT-116（p53-／-）4种肿瘤细胞在不同浓度的辛伐他汀溶液中培养48h，二苯基溴化四氮唑蓝（MTT）法检测肿瘤细胞的增殖情况；将4种肿瘤细胞在100μmol／L的辛伐他汀溶液中培养24、48、72和96h，观察肿瘤细胞的增殖情况；流式细胞仪检测辛伐他汀对4种肿瘤细胞细胞周期的影响；Westernblot法检测p21、ERK1／2、p38、JNK和Akt蛋白的表达以及ERK1／2、p38、JNK和Akt的磷酸化水平。结果与对照组和溶媒组比较，辛伐他汀可明显抑制4种肿瘤细胞的生长，并呈明显的剂量和时间依赖性（P〈0．05）；辛伐他汀使肿瘤细胞停滞于细胞周期的G1期，并且通过p53非依赖性途径上调p21的表达。Westernblot结果显示，辛伐他汀显著上调了p38和JNK的磷酸化水平，但是对信号转导通路中的蛋白激酶ERK1／2和Akt的表达和磷酸化水平并没有明显影响。结论辛伐他汀有显著的抗肿瘤作用，其作用机制可能与促进p21蛋白的表达有关，而p38和JNK也可能在辛伐他汀抑制肿瘤细胞的增殖过程中起着重要作用。     

小鼠红白血病细胞来源的树突状细胞对特异性CTL的体内外诱导作用

目的 探讨白细胞介素-12(IL-12)诱导小鼠红白血病细胞产生的树突状细胞,对白血病特异性CTL细胞的诱导作用,及体内免疫后对抗肿瘤免疫应答的诱导效果.方法:采用4/小时~(51)Cr释放法,检测CTL杀伤活性;观察小鼠红白血病细胞来源的树突状细胞体内免疫冶疗后对肿瘤的抑制作用,采用了HE染色和电镜等技术,分析肿瘤组织的病理学变化.结果:IL-12诱导FBL-3细胞产生的DC,在体外可诱导出FBL-3细胞特异性的CTL.采用IL-12诱导FBL-3细胞产生的DC免疫C57 BL/6小鼠.体内诱导出的CTL杀伤活性明显高于对照组.实验组小鼠能够有效的抵抗野生型FBL-3细胞的再攻击;肿瘤生长受到明显的抑制,组织学观察显示,肿瘤局部有较多炎性细胞浸润和细胞坏死;透射电镜可观察到典型的凋亡征象,结论:IL-12诱导小鼠FBL-3红白血病细胞产生的树突状细胞,在体内外可诱导出FBL-3细胞特异性的CTL,体内免疫后可增强抗肿瘤免疫应答,该结果为白血病的免疫治疗提供了新的途径.     

联合表位肽诱导HLA-A2+人PBMC产生抗原特异性CTL及杀伤活性研究

目的:探讨MAGE-3,MAGE-n抗原表位体外联合诱导的CTL,并研究其特异性杀伤活性。方法:候选抗原表位以固相多肽合成技术合成,并用HPLC进行纯化,质谱法(MS)鉴定,以流式细胞仪筛选HLA-A2 人外周血PBMC,T2细胞负载抗原肽反复刺激活化诱导抗原特异性CTL,LDH检测其杀伤活性。结果:联合表位肽体外刺激人PBMC,能够较强地诱导抗原特异性CTL并产生特异性杀伤。结论:MAGE-3与MAGE-n的HLA-A2限制性CTL表位肽的联合应用能够产生较强的体外抗肿瘤免疫反应。