中药狼疮方对狼疮样BXSB小鼠肺组织CD134/CD134L和RANTES表达的影响

目的探讨中药狼疮方对狼疮样BXSB小鼠肺组织CD134／CD134L和RANTES表达的影响。方法采用BXSB小鼠模型,随机分为3组：狼疮方治疗组、强的松治疗组、未治疗组,每组6只,疗程10周。另设与BXSB小鼠同基因的正常C57BL／6小鼠6只为正常对照组。分别取小鼠肺组织,应用逆转录-荧光定量-聚合酶链反应（RT-FQ-PCR）技术定量测定小鼠肺组织CD134、CD134L和趋化因子RANTES的mRNA表达水平。结果①未治疗组小鼠肺组织CD134、CD134L mRNA和RANTKS mRNA的表达水平都显著高于正常对照组（P〈0．01,P〈0．05）;经强的松或中药狼疮方治疗后,BXSB小鼠肺组织CD134、CD134L及RANTES的mRNA表达都受到明显抑制,显著低于未治疗组（P〈0．01,P〈0．05）;且接近正常水平,与正常对照组无显著性差异（P〉0．05）。②BXSB小鼠肺组织RANTES的mRNA表达水平与CD134L的mRNA表达水平呈显著的正相关关系（r=0．793,P〈0．05）,而与CD134的mRNA表达水平无显著的相关关系（r=0．412,P〉0．05）。结论中药狼疮方具有与强的松类似的免疫抑制作用,可显著抑制狼疮样小鼠肺组织CD134／CD134L共刺激信号表达;并下调肺组织RANTKS mRNA表达水平,具有一定的肺脏保护作用。     

朗格汉斯细胞相关趋化因子基因在尖锐湿疣表皮中的表达

目的了解朗格汉斯细胞(LC)相关趋化因子基因在尖锐湿疣(CA)以及正常表皮中的表达。方法采用Affy-metrixHG-U133A2.0寡核苷酸芯片,对3例CA表皮和3例正常表皮LC相关趋化因子基因的表达进行了检测,并应用半定量RT-PCR验证其中部分基因的差异表达。结果基因芯片检测到CXCL2、CXCL8、CXCR4、CCL3/CCL3L1、CCL5、CCL20及CCL27共7个LC相关趋化因子基因在CA表皮中的表达普遍下调;半定量RT-PCR验证表明,CCL20和CXCR4基因在CA表皮中的表达显著下调。结论LC相关趋化因子基因在CA表皮中的表达普遍下调,这些基因表达的下调可能与CA表皮中LC数目减少和归巢障碍有关。     

下调TSPO表达不影响脂多糖诱导的小胶质细胞TNF-α和IL-1β以及IL-6的分泌

目的研究相对分子质量(Mr)18 000转运蛋白(TSPO)基因表达下调对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞分泌TNF-α,IL-1β和IL-6的影响。方法以RNA干扰技术建立TSPO基因表达下调的细胞模型,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测转染TSPO siRNA BV-2细胞TSPO mRNA及蛋白水平表达的效果;用qRT-PCR法检测TSPO基因下调后小胶质细胞BV-2在LPS作用下分泌TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA水平表达的情况;ELISA检测TSPO基因下调小胶质细胞BV-2在LPS作用下分泌TNF-α、IL-1β和IL-6的蛋白水平表达的变化。结果成功建立了TSPO基因下调的细胞模型,稳定表达TSPO siRNA细胞的TSPO mRNA和蛋白水平表达均明显下降,TSPO基因下调后BV-2细胞在LPS作用下分泌TNF-α、IL-1β和IL-6的量无变化。结论下调TSPO的表达对LPS刺激引起的小胶质细胞TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌无明显影响。     

犀角地黄汤合银翘散对流感病毒感染的小鼠肺组织及大鼠肺微血管内皮细胞ICAM-1和VCAM-1表达的影响

 目的：研究中医经典合方犀角地黄汤合银翘散(XDY)对流感病毒性肺炎小鼠肺组织及对流感病毒感染的大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVECs)中细胞间黏附分子1（ICAM-1）和血管细胞黏附分子1（VCAM-1）表达的影响,探讨其治疗病毒性肺炎的机制。方法：54只雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组和XDY组,每组18只,后2组以流感病毒滴鼻感染,XDY组灌胃给予XDY;在感染后的2、4和6 d分别取材,免疫组化法观察肺组织中ICAM-1和VCAM-1表达。从雄性Wistar大鼠中分离并原代培养RPMVECs,设置正常组、病毒组、病毒+XDY含药血清组、肿瘤坏死因子α（TNF-α）组和TNF-α+XDY含药血清组;刺激因素作用24 h后,real-time PCR检测ICAM-1和VCAM-1 mRNA水平,流式细胞术检测ICAM-1和VCAM-1蛋白表达。结果：与正常组比较,模型组肺组织中ICAM-1和VCAM-1表达持续增多(P<0.01),而XDY组的表达均低于模型组 (P<0.01);与正常组比较,流感病毒和TNF-α作用的RPMVECs中 ICAM-1和VCAM-1 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01),XDY能下调ICAM-1和VCAM-1 mRNA及蛋白表达 (P<0.01)。结论：抑制流感病毒感染导致的RPMVECs黏附分子的表达从而抑制机体的炎症级联反应可能是XDY治疗流感病毒性肺炎的作用机制之一。     

平喘方干预哮喘模型观察“IL-33-ST2”肺肠免疫变化的研究北大核心CSCD

目的:采用平喘方干预哮喘模型观察IL-33-ST2通路在肺肠组织的变化研究。方法:40只BALB/c小鼠分空白对照组、模型组、地塞米松组(DEX)和平喘方组(PCF)。用OVA联合Al(OH)3建造哮喘模型。通过HE染色观察肺和肠道组织形态学变化。ELISA检测BALF中IL-5和IL-13的变化。通过RT-PCR和Western blot检测肺和肠道组织中IL-33-ST2通路上相关因子的mRNA和蛋白的表达。结果:平喘方能够有效下调哮喘小鼠肺部IL-5和IL-13(P<0.05)的表达,其中IL-13的表达差异最为显著。同时能够下调肺肠组织中IL-33-ST2通路上相关因子,其中IL-33等表达差异显著(P<0.05)。结论:平喘方下调哮喘模型肺肠组织IL-33-ST2通路中相关因子的表达。     

养血方与养血解毒方对咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠的作用

目的:探讨并比较养血方与养血解毒方对银屑病样小鼠模型皮损的干预作用。方法:将50只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型组、甲氨蝶呤组、养血方组和养血解毒方组,每组10只,采用背部涂抹咪喹莫特的方式诱导银屑病样模型。动态观察皮损变化并进行银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)评分;通过皮肤水/油测试笔检测小鼠背部皮肤水/油含量;HE染色观察皮损病理改变并检测表皮厚度;免疫组化法检测皮损表皮中增殖细胞核抗原(PCNA)和真皮中CD3+T淋巴细胞表达;real-time PCR法检测皮损中白细胞介素(IL)-17、IL-23和IL-1β的mRNA相对含量。结果:养血方组、养血解毒方组和甲氨蝶呤组背部皮损表现均优于模型组,PASI评分和表皮厚度均低于模型组,皮肤水分/油分含量高于模型组(P0.05),养血解毒方组背部皮损表现和皮肤水分/油分含量优于养血方组,PASI评分和表皮厚度低于养血方组;养血方组、养血解毒方组和甲氨蝶呤组皮损表皮PCNA表达与真皮CD3+T细胞表达均低于模型组(P0.05),养血解毒方组表皮PCNA表达与真皮CD3+T细胞表达均低于养血方组;real-time PCR显示养血方组与养血解毒方组IL-17、IL-23和IL-1β的mRNA相对表达量低于模型组(P0.05),养血解毒方组IL-1β的mRNA相对表达低于养血方组。养血解毒方组与甲氨蝶呤组比较,皮损表现无明显差异,皮肤水/油分含量和对炎症因子的抑制作用优于甲氨蝶呤组。结论:养血方与养血解毒方可通过降低T细胞活化相关因子含量,减轻免疫反应,改善咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠皮损;同时养血解毒方效果优于养血方。     

疏肝健脾方对NASH大鼠肝组织IKKβmRNA和蛋白表达的影响

目的:探讨疏肝健脾方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织核因子κB(NF-κB)抑制蛋白激酶β(IKKβ)mRNA和蛋白表达的影响。方法:采用高脂饲料喂养建立NASH大鼠实验模型,在施以造模因素的同时各药物干预组大鼠分别灌服疏肝方(柴胡疏肝散)、健脾方(参苓白术散)和综合方(柴胡疏肝散和参苓白术散的合方)的高、低剂量进行干预,16周后各组大鼠腹主动脉采血,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及肝组织TC、TG的含量;ELISA检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及白细胞介素1(IL-1)的水平;HE染色观察肝组织病理变化;实时荧光定量RT-PCR检测肝组织IKKβmRNA的表达水平;Westernblotting检测肝组织IKKβ蛋白磷酸化水平的变化。结果:肝组织病理染色提示大鼠NASH造模成功,与正常组比较,模型组大鼠血清TC、LDL-C、肝组织TC、TG及炎症细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6水平均显著升高(P<0.01,P<0.05),肝组织IKKβmRNA及其磷酸化蛋白的表达水平均明显升高(P<0.01)。与模型组相比,肝组织TC、TG含量及血清TNF-α的含量以综合方高、低剂量组、健脾方高剂量组及疏肝方高剂量组下降显著(P<0.01,P<0.05);IL-1和IL-6含量均以综合方高剂量组降低显著(P<0.05),IKKβmRNA的表达水平以综合方高组及健脾方高组下调明显(P<0.05),磷酸化IKKβ蛋白的表达水平以健脾方高剂量组及综合方高、低剂量组下降最为显著(P<0.01,P<0.05)。结论:血清炎症细胞因子TNF-α、IL-1和IL-6水平的显著升高、肝组织IKKβmRNA及其磷酸化蛋白的高表达可能参与NASH的发病。降低相关炎症细胞因子的含量、抑制IKKβmRNA及蛋白磷酸化可能是疏肝健脾方抗NASH的重要机制之一。     

人巨细胞病毒感染与宿主细胞趋化因子分泌的相关性研究

目的 研究人巨细胞病毒(HCMV)对人胚肺成纤维细胞(HEL)分泌趋化因子白细胞介素-8(IL-8)及正常T细胞表达和分泌受活化调节的蛋白(RANTES)的影响,以探讨HCMV感染所致免疫病理改变的具体机制.方法 用RT-PCR法检测IL-8 mRNA和RANTES mRNA的表达,用双抗体夹心法(ELISA)测定IL-8和RANTES蛋白的分泌.结果 HEL细胞感染HCMV后,IL-8无论从mRNA水平还是蛋白水平,均随着感染时间的延长,表达逐渐增加,至感染72 h,IL-8 mRNA约为对照组的12倍,蛋白约为对照组的9倍.RANTES mRNA在感染后8 h可测出,24 h达到高峰,其后虽有下降,但仍维持较高水平;RANTES蛋白分泌在感染后24 h达到高峰,随后急剧下降,至72 h基本无表达.结论 HCMV感染HEL细胞诱导IL-8基因转录及IL-8蛋白分泌增加.HCMV感染HEL细胞可下调RANTES的分泌.     

LY294002对糖尿病肾病大鼠肾组织IL-1β与IL-6表达的影响

目的研究经静脉注射PI3K抑制剂LY294002对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾组织白介素-1β(IL-1β)与白介素-6(IL-6)表达的影响。方法成年健康清洁级SD雄性大鼠30只,随机分为假手术组(10)、模型组组(10)和PI3K抑制剂(LY294002)处理组。参照Anderson's方法制作糖尿病肾病大鼠模型。采用Western blot方法检测三组大鼠肾组织IL-1β与IL-6蛋白的表达;RT-PCR方法检测三组大鼠肾组织IL-1βmRNA与IL-6mRNA的表达。结果 Western blot结果显示,模型组与LY294002处理组肾组织IL-1β与IL-6蛋白的表达量均显著高于假手术组(0.05),而LY294002处理组比模型组肾组织IL-1β与IL-6蛋白的表达量明显降低(0.05)。RT-PCR结果显示,与假手术组比较,模型组与LY294002处理组肾组织IL-1βmRNA与IL-6mRNA的表达量均显著升高(0.05),而LY294002处理组肾组织IL-1βmRNA与IL-6 mRNA的表达则明显低于模型组(0.05)。结论 PI3K抑制剂LY294002能够下调DN大鼠肾组织IL-1β与IL-6的表达。     

Wortmannin对急性肺损伤小鼠肺组织IL-1β和TNF-α表达的影响

目的研究Wortmannin对急性肺损伤模型小鼠肺组织白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法 30只昆明小鼠随机分为正常对照组、急性肺损伤组和Wortmannin处理组。采用腹腔注射LPS(10 mg/kg)建立小鼠急性肺损伤模型,对照组腹腔注射同体积的生理盐水,Wortmannin处理组则于造模前2 h腹腔注射Wortmannin(1.4 mg/kg)。LPS注射后6 h处死大鼠,计算肺组织湿/干重(W/D)比值,Western blot方法检测三组小鼠肺组织内IL-1β和TNF-α蛋白的表达变化,RT-PCR方法检测三组小鼠肺组织内IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的表达变化。结果急性肺损伤组小鼠肺组织IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达水平显著上升,显著高于正常对照组(0.05);相比于急性肺损伤组小鼠,Wortmannin处理组小鼠肺组织IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达水平显著降低(0.05)。结论 Wortmannin能抑制急性肺损伤小鼠肺组织IL-1β和TNF-α表达。     

益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠Notch3和Frizzled2 mRNA及蛋白表达的影响

 目的： 探讨益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Notch3和Frizzled2 mRNA表达及这2种蛋白在海马CA1区表达的影响。方法：线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,脑缺血2 h,再灌注1周,随机分为假手术组、缺血再灌注组、益气活血方组和补肾生髓方组。采用Notch信号通路基因芯片PCR Assay检测额顶叶皮质Notch3和Frizzled2 mRNA表达,免疫组化EnVision两步法检测海马CA1区Notch3和Frizzled2蛋白表达。结果：缺血再灌注组Frizzled2 mRNA表达显著高于假手术组（P<0.05）,益气活血方组Notch3 mRNA表达显著高于缺血再灌注组（P<0.05）,补肾生髓方组Frizzled2 mRNA表达显著低于模型组（P<0.05）,益气活血方组Frizzled2 mRNA表达显著高于补肾生髓方组（P<0.05）。缺血再灌注组Notch3 和Frizzled2蛋白表达均高于假手术组（P<0.05）,2种中药复方组Notch3和 Frizzled2蛋白表达均高于缺血再灌注组（P<0.05）,补肾生髓方组Notch3蛋白表达高于益气活血方组（P<0.05）。结论：益气活血方和补肾生髓方能通过增强额顶叶或海马CA1区Notch3 mRNA及蛋白表达,降低Frizzled2 mRNA及蛋白表达,调节Notch信号转导通路,促进脑损伤修复。     

慢性乙肝患者外周血单个核细胞中CXCR1、CXCR2及IL-8 mRNA表达与干扰素治疗关系

目的:了解乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染患者外周血单个核细胞(PBMC)中CXCR1、CXCR2及IL-8 mRNA表达水平及与α干扰素(IFN-α)治疗的关系。方法:采用实时定量PCR法动态观察30例慢性乙型肝炎患者接受IFN-α治疗前、治疗3个月、6个月后其外周血单个核细胞CXCR1、CXCR2及IL-8 mRNA表达水平。结果:治疗前慢性乙肝患者CXCR1、CXCR2及IL-8 mRNA表达水平分别为(0.44740.0386)、(0.4720 0.0458)、(1.1897 0.1028),均高于正常对照组(n=36),其中CXCR1及IL-8 mRNA水平升高显著,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗过程中CXCR1、CXCR2及IL-8表达水平均显著下降。IFN-α治疗6个月后CXCR1、CXCR2及IL-8 mRNA表达水平分别为(0.41290.0395)、(0.4461 0.0477)、(0.8660 0.1307),与治疗前相比,差异有显著性(P<0.01或P<0.05)。治疗前的CX-CR1、CXCR2及IL-8的表达水平在HBV高复制组(HBV-DNA>106,n=22)明显高于HBV低复制组(HBV-DNA<106,n=8),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:慢性乙肝患者外周血单个核细胞中CXCR1和IL-8表达水平显著升高,在干扰素治疗后,其表达水平下调,证明其可能与慢性乙肝炎症的发生机制相关。     

新风胶囊含药血清通过抑制VEGFA/SDF-1/CXCR4通路缓解强直性脊柱炎患者血小板活化的机制

目的通过体外实验研究新风胶囊(XFC)对VEGFA/SDF-1/CXCR4通路的影响,探讨其改善强直性脊柱炎(AS)患者血小板活化的的机制。方法分离外周血单核细胞(PBMC),分为正常组(NC)、模型组(MC)、新风胶囊组(XFC)、AMD3100组,MTT法检测XFC最佳浓度,免疫荧光法检测CD62p、CD40L、PDGFA的表达,ELISA法检测TNF-ɑ、IL-1β、IL-4、IL-10、VEGFA及VEGFR的表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测SDF-1、CXCR4、VEGFA mRNA的表达,Western blot法检测SDF-1、CXCR4、VEGFA、VEGFR蛋白的表达。结果中剂量XFC在24 h时对细胞抑制作用最强。与正常组相比,模型组CD62p、CD40L、PDGFA、IL-1β、TNF-α、VEGFA、VEGFR、SDF-1、CXCR4表达均升高,IL-4、IL-10降低(P0.05,P0.01)。与模型组相比,XFC组CD62p、CD40L、PDGFA、IL-1β、TNF-α、VEGFA、VEGFR、SDF-1、CXCR4表达均降低,IL-4、IL-10升高(P0.05,P0.01)。结论 XFC具有类AMD3100样作用,通过抑制VEGFA/SDF-1/CXCR4通路的表达,下调IL-1β、TNF-α,上调IL-4、IL-10,调节免疫炎症反应,从而降低AS患者血小板活化。     

维生素D3对肺炎支原体感染小鼠肺组织ICAM-1及IL-4表达的影响

目的探讨维生素D3(VD3)对肺炎支原体感染(MP)小鼠肺组织ICAM-1及IL-4表达的影响。方法 45只BALB/c小鼠随机分成对照组、MP感染组与维生素D3组。模型组与维生素D3组小鼠采用滴鼻法进行MP感染。取肺组织制作病理切片,HE染色观察组织病理学变化,Western blot方法与real time PCR方法分别检测各组小鼠肺组织ICAM-1及IL-4蛋白与mRNA的表达水平。结果 MP感染BALB/c小鼠7天后,肺组织有大量炎性细胞浸润,给予维生素D3处理后,炎性明显减轻。MP感染组BALB/c小鼠肺组织ICAM-1及IL-4蛋白与mRNA的表达水平显著高于对照组,给予维生素D3处理后,感染MP的BALB/c小鼠肺组织ICAM-1及IL-4蛋白与mRNA的表达水平显著降低,P0.01。结论维生素D3能够降低感染肺炎支原体感染小鼠的肺内炎性反应,可能与降低ICAM-1及IL-4表达相关。     

壮药龙盘止咳方治疗小鼠甲型流感病毒H1N1肺炎的作用及机制

目的：探究壮药龙盘止咳方的抗流感病毒性肺炎作用及其相关机制。方法：BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、高剂量（10.4 g/kg）龙盘止咳方组、低剂量（5.2 g/kg）龙盘止咳方组和龙盘止咳方（10.4 g/kg）+Toll样受体3(TLR3)激动剂聚肌胞苷酸[Poly(I:C),20 mg/kg]组,每组20只。采用甲型流感病毒（IAV）H1N1滴鼻法建立病毒性肺炎模型,观察小鼠一般状态,并每组取10只小鼠,记录15 d的存活率和存活时间;计算肺、脾和胸腺指数;HE染色观察肺组织病理变化;实时荧光定量PCR检测肺病毒载量;ELISA法检测肺匀浆中白细胞介素6(IL-6)、IL-4、干扰素α(IFN-α)、IFN-β和IFN-γ水平;Western blot检测肺组织TLR3/视黄酸诱导基因I(RIG-I)/核因子κB(NF-κB)通路相关蛋白的表达。结果：对照组小鼠精神状态良好,在实验期间未出现死亡;与对照组相比,模型组小鼠在感染后出现典型的流感症状,小鼠存活率、存活时间、脾指数和胸腺指数显著降低（P<0.05）,肺指数,肺组织病理学评分,病毒载量,肺匀浆中IL-6、IL...     

NLRP3炎症小体在小鼠甲型流感病毒感染继发MRSA肺炎中的表达变化

目的:探索NLRP3炎症小体在小鼠甲型流感病毒(甲流病毒)HIN1感染继发耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)肺炎中的表达变化。方法:选取C57BL/6小鼠15只,分为空白对照组、MRSA组(MRSA滴鼻感染24 h)和H1N1+MRSA组(甲流病毒H1N1滴鼻预感染6 d后联合MRSA滴鼻感染24 h)。检测小鼠肺组织NLRP3和caspase-1的mRNA及蛋白表达水平,并检测白细胞介素1β(IL-1β)在肺组织中的mRNA水平及在血清中的浓度。观察小鼠肺组织病理并分析小鼠IL-1β血清浓度与体重下降率的相关性。结果:MRSA组NLRP3和caspase-1的mRNA及蛋白表达水平与空白对照组比均无明显差异(P0.05),但IL-1β的mRNA表达水平及血清浓度均明显高于空白对照组(P 0.01)。H1N1+MRSA组NLRP3、caspase-1的mRNA及蛋白表达水平,及IL-1β的mRNA表达水平和血清浓度均明显高于空白对照组(P 0.01)。H1N1+MRSA组NLRP3和caspase-1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于MRSA组(P 0.01),但IL-1β的mRNA表达水平及血清浓度均明显低于MRSA组(P 0.01)。MRSA组肺组织病理呈炎症改变,H1N1+MRSA组肺组织病理改变较MASA组更严重。MRSA组及H1N1+MRSA组小鼠体重下降率与IL-1β血清浓度均成负相关(P 0.05)。结论:MRSA感染引起IL-1β的产生和释放不依赖NLRP3炎症小体,而甲流病毒预感染虽然激活了NLRP3炎症小体,但总体降低了机体抗MRSA免疫的IL-1β的表达及分泌,该效应可能是继发于甲流病毒感染的MRSA肺炎更为严重的机制之一。     

幽门螺杆菌空泡毒素VacA促进胃上皮细胞NLRP3炎性小体激活

目的探究H. pylori空泡毒素VacA对胃上皮细胞NLRP3炎性小体激活的影响。方法采用WT H. pylori26695和△VacA H. pylori26695感染AGS细胞,Western blotting、q RT-PCR、ELISA检测NLRP3、Pro-Caspase-1、Caspase-1、pro-IL-1β和IL-1β的表达。siRNA-NC、siRNA-NLRP3转染AGS后,分别用PBS、WT H. pylori26695和△VacA H. pylori26695刺激,qRT-PCR和细胞因子ELISA检测试剂盒分别检测pro-IL-1β的mRNA表达水平和IL-1β的蛋白表达水平。收集慢性胃炎患者标本,鉴别出H. pylori阳性患者的VacA基因型(s1m1型和s1m2型),通过q RT-PCR检测NLRP3、caspase-1、pro-IL-1β的mRNA表达水平及采用细胞因子ELISA试剂盒检测IL-1β蛋白表达水平。C57BL/6小鼠腹腔注射DMSO或者DMSO+Mcc950,H. pylori菌液灌胃,qRT-PCR和ELISA检测胃组织IL-1β的表达。结果 H.pylori感染AGS细胞,与对照组相比,WT H. pylori26695组IL-1β的mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P0.01);△VacA H. pylori26695组与WT H. pylori26695组相比,IL-1β的m RNA和蛋白表达水平均明显下降(P0.01)。与siRNA-NC组相比,采用WT H. pylori26695和△VacA H. pylori 26695刺激转染siRNA-NLRP3的AGS细胞pro-IL-1β的m RNA水平和IL-1β蛋白表达水平均明显下调(P0.01)。H. pylori阳性患者较阴性患者NLRP3、Caspase-1和IL-1β的mRNA表达水平明显升高(P0.01);与VacA s1m2型患者相比,VacA s1m1型患者NLRP3、Caspase-1和IL-1β的mRNA表达水平显著升高(P0.01),同时IL-1β成熟分泌增加。H. pylori慢性胃炎小鼠动物模型中,与对照组相比,Mcc950组中在WT H. pylori26695和△VacA H. pylori26695灌胃后,pro-IL-1β的mRNA水平和IL-1β蛋白水平表达均明显下调(P0.01)。结论H. pylori空泡毒素VacA能够激活胃上皮细胞NLRP3炎性小体,促进IL-1β的成熟分泌。     

β葡聚糖促进小鼠骨髓来源的树突状细胞成熟并增强其迁移能力

目的研究β葡聚糖对体外培养小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC)成熟及迁移能力的影响。方法β葡聚糖体外处理小鼠BMDC,应用流式细胞术检测BMDC表面分子的表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测对照组和β葡聚糖组BMDC中CC趋化因子受体1(CCR1)、CCR2、CCR5、CCR7 mRNA的表达;ELISA检测BMDC上清中白细胞介素6(IL-6)、IL-12p40、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-10的水平;TranswellTM迁移实验检测BMDC对CC趋化因子配体19(CCL19)和CCL21的趋化反应性;体内迁移实验检测从皮下迁移至引流淋巴结的DC数目。结果与对照组相比,β葡聚糖能上调BMDC表面分子MHC-Ⅱ类分子、CD80、CD86、CD80、CD40的表达,同时促进BMDC分泌IL-6、TNF-α和IL-12p40,CCR7 mRNA水平增加,增强BMDC对CCL19/CCL21的趋化反应性,并且显著增加从皮下注射部位迁移至引流淋巴结中BMDC数目。结论β葡聚糖不仅能促进BMDC分化成熟,还能增强其体内外迁移能力。     

过表达Sirt1调节胶原蛋白诱导的关节炎细胞因子平衡

目的研究过表达去乙酰化酶1(Sirtl)对2型胶原蛋白诱导的关节炎(CIA)小鼠细胞因子的影响。方法构建CIA模型,用携带Sirt1基因的重组腺病毒感染CIA小鼠,观察关节炎指数的变化。ELISA测定促炎因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-17以及抑炎因子IL-4和IL-10的含量。实时定量PCR(qRT-PCR)测定基质金属蛋白酶13(MMP-13)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的表达。Western blot法检测p65和乙酰化p65蛋白的表达。结果与对照组相比,Ad-Sirt1感染组降低了小鼠关节炎指数,同时显著降低了IL-1β、TNF-α和IL-17的含量,增加了IL-4和IL-10的含量。Ad-Sirt1感染组下调了MMP-13的mRNA表达,上调了TIMP-1的mRNA表达。Ad-Sirt1感染组使p65蛋白乙酰化水平下降。结论过表达的Sirt1有调节CIA小鼠关节炎细胞因子平衡的作用。     

γ-促分泌酶抑制剂对支气管哮喘模型小鼠肺组织IL-1β和TNF-α表达的影响

目的研究γ-促分泌酶抑制剂阻断Notch信号对支气管哮喘(简称哮喘)模型小鼠肺组织白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化。方法 30只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组和γ-促分泌酶抑制剂阻断组。制作小鼠哮喘模型,在小鼠激发阶段尾静脉注射γ-促分泌酶抑制剂MWl67。Westernblot和RT-PCR方法检测三组小鼠肺组织内IL-1β和TNF-α蛋白和mRNA的表达变化。结果正常对照组IL-1β和TNF-α蛋白表达的平均光密度值分别为(0.22±0.02)与(0.17±0.01),显著低于哮喘组的小鼠肺组织IL-1β(0.54±0.04)和TNF-α(0.32±0.03)蛋白的表达(P<0.05),而MWl67阻断Notch信号后,MWl67注射组小鼠肺组织IL-1β和TNF-α蛋白表达的平均光密度值分别为(0.38±0.03)与(0.21±0.02),显著低于哮喘组(P<0.05);正常对照组IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表达平均光密度值分别为(0.36±0.03)与(0.26±0.02),显著低于哮喘小鼠肺组织IL-1βmRNA(0.82±0.06)和TNF-αmRNA(0.49±0.04)的表达而MWl67注射组分别为(0.58±0.04)与(0.30±0.03),显著低于哮喘组。结论静脉注射γ-促分泌酶抑制剂能抑制哮喘模型小鼠气道炎症反应。