重组腺病毒Ad5F35-IL-12感染不同单核-巨噬细胞的研究

目的 确定人IL-12基因重组腺病毒Ad5F35-IL-12在不同人单核-巨噬细胞中的表达.方法 将人IL-12基因重组腺病毒Ad5F35-IL-12分别感染人外周血单个核细胞、胸水巨噬细胞,以及THP-1和U937单核细胞株及其经佛波酯(PMA)诱导后生成的巨噬细胞;感染48 h后荧光显微镜观察对相应细胞的感染效率,RT-PCR检测IL-12双亚基p35和p40的mRNA表达情况,ELISA检测细胞培养上清中IL-12p70的分泌水平.结果 人IL-12基因重组腺病毒Ad5F35-IL-12可成功感染人外周血单个核细胞、胸水巨噬细胞以及THP-1和U937单核细胞株及其PMA诱导后生成的巨噬细胞,并分泌IL-12 p70蛋白,蛋白表达量从高至低依次是胸水巨噬细胞、PMA诱导后U937细胞、PMA诱导后THP-1细胞、U937细胞、外周血单个核细胞、THP-1细胞.结论 人IL-12基因重组腺病毒Ad5F35-IL-12可以感染不同的单核-巨噬细胞,并成功表达分泌IL-12 p70蛋白.     

Ad5F35-LMP2重组腺病毒的构建及鉴定

目的：构建Ad5F35-LMP2重组腺病毒.方法：分别以EcoR Ⅰ单酶切pSH-LMP2和pDC316,将LMP2目的基因片段和线性化的pDC3l6连接,克隆构建pDC3l6-LMP2,以PCR和酶切的方法鉴定插入方向正确.pDC3l6-LMP2与腺病毒骨架pBHG-fiber5/35共转染293细胞构建重组腺病毒Ad5F35-LMP2,PCR及间接免疫荧光进行鉴定.结果：经PCR和酶切鉴定证实pDC3l6-LMP2构建成功.pDC3l6-LMP2与腺病毒骨架共转染293细胞后见明显的毒斑,说明二者在293细胞中同源重组并包装成功.经PCR证实重组腺病毒Ad5F35-LMP2构建完成,间接免疫荧光鉴定LMP2蛋白能在细胞膜上有效表达.结论：本实验成功构建了含EB病毒LMP2全序列的Ad5F35-LMP2重组腺病毒,为下一步进行该重组病毒生物安全性能和生物学功能研究及今后应用Ad5F35-LMP2重组腺病毒对鼻咽癌患者进行基因免疫治疗奠定了基础.     

Ad5F35-LMP2重组腺病毒修饰DC体外诱导特异性T细胞免疫的研究

目的 了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒(AdSF35-LMP2)修饰的DC能否在体外诱导LMP2特异性细胞毒性T淋巴细胞免疫.方法 人外周血单个核细胞在细胞因子诱导下生成树突状细胞,Ad5F35-LMP2感染树突状细胞后激发同源的T细胞,MTT法检测其对T细胞的增殖作用,及激活的特异性CTL对表达LMP2的人CNE-2细胞的特异性杀伤效应.结果Ad5F35-LMP2能有效感染树突状细胞.其激活的特异性CTL对CNE-2细胞有特异性杀伤活性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论 重组腺病毒Ad5F35-LMP2感染的DC可以有效的诱导产生EBV-LMP2特异性细胞毒效应.     

Ad5F35-LMP2重组腺病毒修饰DC体内特异性抗瘤作用的研究

目的 了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒（Ad5F35-LMP2）修饰的DC能否在体内抑制肿瘤细胞生长.方法 人外周血单个核细胞在细胞因子IL-4、GM-CSF和TNF-a诱导下生成树突状细胞.将人的外周血单个核细胞移植入实验组SCID小鼠体内2次,再分别经两次DC与Ad5F35-LMP2-DC免疫SCID小鼠,然后用1×10^6的CNE-2肿瘤细胞接种SCID小鼠皮下,观察肿瘤生长情况.结果 Ad5F35-LMP2-DC组肿瘤的潜伏期明显延长,对照组和DC组小鼠1周左右就出现了肿瘤,而Ad5F35-LMP2-DC组则直到2周左右才出现肿瘤;且肿瘤体积最小,重量最轻,与DC组比Ad5F35-LMP2-DC疫苗组的肿瘤抑制率为64.75%.结论 Ad5F35-LMP2重组腺病毒疫苗修饰的DC在体内可以有效的抑制NPC肿瘤细胞CNE-2生长.     

IL-24基因重组腺病毒载体转染的树突状细胞促进宫颈癌CaSki细胞凋亡

 目的：探讨白细胞介素24(interleukin-24,IL-24) 基因重组腺病毒载体转染的树突状细胞(dendri-tic cells,DCs)是否在体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T-lymphocytes,CTLs)对宫颈癌CaSki细胞的杀伤效应。方法：分离培养小鼠未成熟DCs,将已成功构建的带有IL-24基因的重组腺病毒感染体外培养的小鼠未成熟DCs,提取CaSki细胞裂解物负载DCs,制备DC疫苗,Western blotting检测IL-24蛋白的表达;PE-Annexin V和Western blotting检测细胞凋亡及cleaved caspase-3表达;克隆形成实验检测克隆形成能力;裸鼠荷瘤模型体内研究带有IL-24基因的重组腺病毒载体转染DCs在体外诱导的CTLs对宫颈癌CaSki细胞的杀伤效应。结果：Western blotting检测IL-24蛋白高表达;DCs疫苗诱导产生的CTLs后与CaSki细胞共培养,对CaSki细胞生长具有明显的抑制作用, DCs疫苗诱导产生的CTLs促进CaSki细胞凋亡,增加cleaved caspased-3蛋白表达,克隆形成实验检测该疫苗具有抑制CaSki细胞形成克隆的能力。裸鼠的成瘤实验表明,带有IL-24基因的重组腺病毒载体转染DCs可以抑制体内肿瘤的形成,促进肿瘤细胞凋亡。结论：IL-24基因重组腺病毒感染DCs制备的DCs疫苗可诱导CTLs,从而抑制宫颈癌CaSki细胞增殖,并促进其凋亡。     

腺病毒介导MOMP基因转染对树突状细胞免疫功能的影响

目的 探讨腺病毒(Ad)介导E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)基因转染对树突状细胞(DC)的表型及体内免疫功能的影响.方法 用小鼠重组粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白细胞介素4(IL-4)从小鼠骨髓干细胞中诱导培养DC,并用大肠杆菌脂多糖(LPS)促进DC的成熟,流式细胞仪检测DC表型.用不同感染滴度(MOI)的含增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组Ad转染DC,荧光显微镜下观察EGFP的表达细胞百分率,选择最佳MOI;用最佳MOI的含MOMP基因的重组腺病毒(Ad-MOMP)转染DC,流式细胞术检测转染前后DC表型变化,并用活细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测转染前后DC刺激同种淋巴细胞增殖的能力;ELISA检测转染前后DC分泌细胞因子及DC、T细胞共同培养上清中细胞因子的水平.Ad-MOMP转染DC经尾静脉免疫小鼠,ELISA检测其脾脏淋巴细胞分泌的细胞因子.结果 诱导的DC形态典型,表面高表达CD11c、MHCⅡ类分子,中度表达CD80分子.MOI=1000为重组Ad转染DC最佳滴度,此时90%以上的DC表达荧光,Ad-MOMP转染DC后能检测到MOMP的表达.Ad-MOMP转染对DC表面的特征性表型CD11c无影响,而CD80及MHCⅡ表达上调;转染后的DC分泌大量IL-12,具有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,并刺激T细胞分泌大量IFN-γ.Ad-MOMP转染DC后尾静脉免疫小鼠,其脾细胞产生高水平的IFN-γ.结论 Ad载体能介导外源MOMP基因在DC中的表达,Ad-MOMP转染DC后MOMP基因的表达能增强DC抗原提呈功能,促进DC活化,转染后的DC与T细胞共孵育能诱导T细胞向TH1细胞分化,体内实验表明Ad-MOMP转染DC能诱导衣原体特异性TH1反应.这为Ad-MOMP转染的DC疫苗用于免疫治疗提供了理论依据和技术基础.     

携带人livin α基因腺病毒载体的构建及其在树突状细胞的表达

目的:本研究旨在利用AdMax系统构建携带人抗凋亡基因livinα的重组腺病毒载体(rAd-livinα),并感染树突状细胞(Dendritic cells,DCs),制成DCs疫苗,为下一步用此疫苗抗肿瘤实验奠定基础。方法:以质粒pIRES2-EGFP-livinα为模板,通过PCR扩增出人livinα基因cDNA序列,再将livinα基因cDNA亚克隆于穿梭质粒pDC316-EGFP-cmv,获得重组质粒pDC316-EGFP-cmv-livinα。将鉴定后的重组穿梭质粒pDC316-EGFP-cmv-livinα与腺病毒辅助质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组获得重组腺病毒rAd-livinα。用重组腺病毒rAd-livinα感染人DCs后,Western blot方法分析livinα蛋白表达,流式细胞仪检测DCs的表型变化。结果:在HEK293细胞内能观察到重组腺病毒rAd-livinα绿色荧光蛋白的表达。rAd-livinα经PCR鉴定特异性地扩增出符合预期大小的片段。rAd-livinα感染的DCs中可检测到livinα蛋白的表达,并且感染的DCs与未感染DCs比较,可明显提高了细胞表面分子CD83、CD86和HLA-DR的表达(P<0.05)。结论:通过AdMax系统成功构建了重组腺病毒rAd-livinα,使livinα蛋白有效表达于DCs中,并且重组腺病毒感染的DCs的成熟度得到提高。     

Ad5F35-LMP2重组腺病毒免疫效果的研究

目的了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒(Ad5F35-LMP2),免疫恒河猴的特异性细胞和体液免疫的效果。方法分别使用高剂量(1.5×1010TCID50/只)、中剂量(1.5×109TCID50/只)、低剂量(1.5×108TCID50/只)Ad5F35-LMP2重组腺病毒,同时设对照组(PBS4.0ml/只)。肌内注射免疫恒河猴,每个月一次,共免疫3次,第0、4、8、12周时使用Elispot方法检测猴外周血EBV-LMP2细胞毒性T细胞应答,同时应用免疫酶方法检测血清中LMP2抗体。结果3个剂量Ad5F35-LMP2腺病毒免疫恒河猴均可以诱导出有效的细胞免疫应答及一定的抗体应答,免疫应答水平的高低与病毒剂量的高低有一定的关系,较高剂量产生的细胞及体液免疫应答水平比低剂量的高。结论Ad5F35-LMP2非复制型重组腺病毒疫苗可以有效的诱导恒河猴产生EBV-LMP2特异性细胞和体液免疫反应。     

小鼠淋巴细胞趋化因子重组腺病毒载体的构建及其在骨髓树突状细胞中的表达

经ＲＴ－ＰＣＲ克隆小鼠淋巴细胞趋化因子（Ｌｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎ，Ｌｔｎ）的全长编码ｃＤＮＡ，将其置于ＣＭＶ启动子下游，插入Ｅ１区替代的腺病毒载体ｐＡｘ１ｃｗ。Ｌｔｎ重组腺病毒载体ｐＡｘ１ｃｗ．ＣＩｍＬｔｎ与经ＥｃｏＴ２２Ｉ酶切的Ａｄ５腺病毒ＤＮＡ－末端肽复合物共转染２９３细胞，制备Ｌｔｎ重组腺病毒，扩增到的病毒滴度为３．６×１０９ｐｆｕ／ｍｌ。用重组ＧＭ－ＣＳＦ从小鼠骨髓中扩增到的树突状细胞本身并不表达Ｌｔｎ；体外感染Ｌｔｎ重组腺病毒后４ｈ即可经ＲＴ－ＰＣＲ检测到Ｌｔｎ的表达，其２４ｈ的细胞培养上清体外对ＣＤ４＋Ｔ细胞和ＣＤ８＋细胞具有显著的趋化活性，表明所制备的Ｌｔｎ重组腺病毒能有效介导Ｌｔｎ在树突状细胞中的表达，为研究Ｌｔｎ基因修饰的树突状细胞诱导Ｔ细胞免疫应答奠定基础。     

重组腺病毒pAd/Pri-miR-21可促进HeLa细胞和树突状细胞及Raw264.7细胞增殖

<正>microRNA在肿瘤细胞的发生、发展过程中均发挥着重要作用,包括控制其增殖与凋亡[1-2]。microRNA-21(miR-21)是具有自主转录单位的微小RNA[3],已有研究表明肿瘤组织miR-21的高表达与疾病的预后呈负相关[4]。为深入发掘miR-21其他的靶基因及其生物学作用,前期的研究中我们构建了可高表达miR-21小分子的重组腺病毒载体[5],本研     

MKRN1基因siRNA重组腺病毒载体构建及功能鉴定

目的 构建MKRN1的siRNA重组腺病毒载体,并在表达MKRN1的HeLa细胞中鉴定其干扰作用和对端粒酶活性的影响,为探讨MKRN1功能及其与肿瘤关系提供有效工具.方法 人工合成靶向MKRN1的siRNA干扰序列,用分子克隆的方法克隆到穿梭载体pSES-HUS上得到pSES-HUS-MKRN1 siRNA,并与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组得到pAdeasy-SES-HUS-MKRN1 siRNA;在HEK293细胞中包装成重组腺病毒,感染表达MKRN1的HeLa细胞株,用RT-PCR法及Western 印迹技术检测腺病毒对细胞MKRN1表达的影响,用PCR-TRAP法检测细胞中端粒酶活性的变化.结果 成功构建了MKRN1的siRNA重组腺病毒载体;MKRN1的siRNA重组腺病毒能显著抑制HeLa细胞中MKRN1的表达,并显著上调细胞中端粒酶的活性.结论 构建的Adeasy-MKRN1 siRNA腺病毒能有效地抑制HeLa细胞中MKRN1的表达并上调细胞端粒酶活性,从而为进一步研究MKRN1的功能及其与肿瘤的关系提供了有效的新工具.     

共表达人B7-1和HGF/NK4基因的重组腺病毒的制备及初步鉴定

目的 构建能同时表达B7-1和HGF/NK4基因的重组腺病毒载体,同时制备相应的复制缺陷型重组腺病毒,检测其在喉癌细胞中的表达.方法 构建以串联方式携带人B7.1和HGF/NK4基凶的重组穿梭载体pAdtrack-NK4-B7-1.Pme I线性化后与腺病毒载体pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,通过同源重组得到重组腺病毒载体pAd-NK4-B7-1.将重组腺病毒载体转染HEK293包装细胞制备重组腺病毒,应用病毒悬液感染人喉癌细胞株.用RT-PCR检测感染细胞中B7.1和NK4基因mRNA表达.结果 酶切鉴定证实阳性pAdTrack-NK4-B7-1重组穿梭载体含有目的基因B7-1和HGF/NK4,同源重组后制备的病毒载体DNA经酶切鉴定获得了阳性重组腺病毒载体,该载体能有效转染HEK293细胞并在细胞内成功包装,转染3 d后可以观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达并逐渐增多、增强.制备的Ad-NK4-B7在体外能有效感染Hep-2细胞,感染后可维持6 d高水平的B7-1和NK4基因的表达,整体表达可持续2周.结论 成功构建了同时表达B7-1和NK4基因的重组腺病毒载体并制备出重组腺病毒颗粒,该病毒能有效地感染喉癌细胞并表达高水平的NK4和B7-1基因,为进一步研究B7-1和NK4基凶的功能及应用B7-1和NK4进行喉癌的联合基因治疗提供了依据和素材.     

树突状细胞的抗原基因转导及其抗肿瘤免疫作用的研究

目的制备整合素靶向性腺病毒载体RGD-Adv,向树突状细胞（DCs）转导抗原基因,并研究表达特异性抗原DCs的免疫学特点和抗肿瘤效果。方法使用体外连接法构建RGD-Ad,并以流式细胞技术检测其基因转导效率,通过抗原呈递试验、CTL效应试验和小鼠体内抗肿瘤试验考察表达特异性抗原DCs诱导产生CTL效应和在体抗肿瘤作用情况。结果RGD-Adv可安全高效转导DCs,且为病毒载体剂量依赖性;表达特异性抗原DCs能有效诱导抗原特异性CTL效应,并具有显著抗肿瘤效果。结论RGD-Adv是一种理想的载体系统,通过使DCs表达特异性抗原,诱导机体特异性免疫机制,产生抗肿瘤效果,是一种极具前景的肿瘤免疫治疗方法。     

表达人B7-1的重组腺病毒的制备及初步鉴定

目的构建表达B7-1基因的重组腺病毒载体,制备相应的复制缺陷型重组腺病毒并检测其在喉癌细胞中的表达。方法构建携带人B7-1基因的重组穿梭载体pAdtrack-B7-1,PmeI线性化后与腺病毒载体pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,通过同源重组得到重组腺病毒载体pAd-B7-1。将重组腺病毒载体转染HEK293包装细胞制备重组腺病毒,应用病毒悬液感染人喉癌细胞株,RT-PCR检测感染细胞中B7-1基因mRNA表达。结果酶切鉴定证实阳性pAdTrackB7-1重组穿梭载体含有目的基因B7-1,同源重组后制备的病毒载体DNA经酶切鉴定获得了阳性重组腺病毒载体,该载体能有效转染HEK293细胞并在细胞内成功包装,转染3d后可以观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达并逐渐增多、增强。制备的Ad-B7在体外能有效感染Hep-2细胞,感染后可维持6d高水平的B7-1的表达,整体表达可持续两周。结论成功构建了同时表达B7-1的重组腺病毒载体并制备出重组腺病毒颗粒,该病毒能有效地感染喉癌细胞并表达高水平的B7-1基因,为进一步研究B7-1的功能及应用B7-1进行基因治疗奠定基础。     

1人TLR4胞外区基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

目的 构建并鉴定人TLR4胞外区基因重组腺病毒载体.方法 以pUCm-TLR4质粒为模板,运用PCR技术扩增TLR4胞外区目的 基因片段,片段回收后经酶切连接穿梭质粒pAdTrack-CMV上,获得重组腺病毒质粒pAdTrack-CMV-TLR4.通过Kpn Ⅰ和HindⅢ双酶切,测序鉴定后,将鉴定正确的质粒经PmeⅠ酶切线性化后,转化到含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态细菌BJ5183中,进行同源重组,卡那抗性筛选阳性克隆,提取质粒,用脂质体介导转染293细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR技术,Western blot等方法鉴定重组腺病毒,并进行病毒滴度测定.结果 人TLR4胞外区基因重组腺病毒载体构建正确,病毒滴度为3.2×109pfu/mL.结论 成功构建了人TLR4胞外区基因重组腺病毒载体,为下一步实验奠定基础.     

转染HPV16E6基因人树突状细胞疫苗的制备及生物学特性

目的：制备来源于人外周血并转染HPV16E6基因的树突状细胞（DC）疫苗，检测其细胞形态、分子表型及诱导的免疫效应。方法：细胞因子扩增人外周血DC，Lipofectamine转染HPV16E6制备DC疫苗。动态形态学观察，免疫细胞化学及流式细胞术检测分子表达．体外诱导并测定CTL活性。结果：转染DC呈形态迥异的多突起状，其E6蛋白、CD80、CD86和CD83分子的表达率依次为47．3％、82．5％、79．8％和85．7％，诱导杀伤Caski细胞的活性明显高于对照组（P〈0．01）。结论：转染DC疫苗保持了功能成熟DC的形态特征，且内源性表达E6蛋白，能诱导高效的特异性抗肿瘤免疫应答。     

人Qki-5基因重组腺病毒的制备

目的:构建针对Qki-5人重组腺病毒表达载体,并在能在转染该病毒的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中观察到该基因过表达效果.方法:重组腺病毒穿梭载体pShuttle-Qki-5-IRES-EGFP与骨架载体共转化到大肠杆菌BJ5183中,同源重组得到重组腺病毒载体,后者转染HEK293细胞,包装并扩增出病毒颗粒.用获得的病毒感染Qki-5表达较低的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,收集细胞总RNA和总蛋白,采用RT-PCR和Western blot方法检测细胞中基因表达的变化.结果:经限制性内切酶酶切鉴定,证实针对Qki-5基因的重组腺病毒载体构建成功.RT-PCR和Western blot方法证实,在MDA-MB-231细胞中,Qki-5基因在mRNA和蛋白水平均有上升.结论:Qki-5腺病毒载体够建成功并且可以在乳腺癌细胞MDA-MB-231内表达.     

HCV-NS3重组腺病毒转染树突状细胞体内诱导抗原特异性Th1应答的研究

目的:探讨表达丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白(NS3)基因的重组腺病毒转染树突状细胞体内诱导特异性Th1细胞免疫应答。方法:分离培养小鼠骨髓树突状细胞,制备表达HCV-NS3蛋白的重组腺病毒转染树突状细胞(DC-AdNS3)疫苗,采用流式细胞术和免疫印迹法分析鉴定细胞及抗原蛋白表达。采用腹腔注射途径免疫接种BALB/c小鼠两次,每次间隔10天,3×105细胞/次。末次接种10天后,采用ELISPOT法和ELISA法分别测定脾NS3特异性分泌IFN-γ的T细胞反应以及细胞因子水平。结果:重组腺病毒转染DC可刺激DC成熟,同时可在DC内成功表达NS3蛋白。小鼠两次接种DC-AdNS3产生明显升高的分泌IFN-γ的T细胞反应(P<0·01),脾T细胞悬液内可测得高水平的IL-2和IFN-γ(P<0·01)以及显著降低的IL-10(P<0·05)。结论:DC-AdNS3疫苗可在BALB/c小鼠体内激发产生抗原特异性的Th1细胞免疫应答,为抗HCV感染的疫苗研究提供参考依据。     

共表达人B7—1和HGF／NK4基因的重组腺病毒的制备及初步鉴定

目的构建能同时表达B7—1和HGF／NK4基因的重组腺病毒载体，同时制备相应的复制缺陷型重组腺病毒，检测其在喉癌细胞中的表达。方法构建以串联方式携带人B7-1和HGF／NK4基因的重组穿梭载体pAdtrack-NK4-B7-1。Pme I线性化后与腺病毒载体pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183，通过同源重组得到重组腺病毒载体pAd—NK4-B7—1。将重组腺病毒载体转染HEK293包装细胞制备重组腺病毒，应用病毒悬液感染人喉癌细胞株。用RT-PCR检测感染细胞中B7-1和NK4基因mRNA表达。结果酶切鉴定证实阳性pAdTrack—NK4-B7—1重组穿梭载体含有目的基因B7-1和HGF／NK4，同源重组后制备的病毒载体DNA经酶切鉴定获得了阳性重组腺病毒载体，该载体能有效转染HEK293细胞并在细胞内成功包装，转染3d后可以观察到绿色荧光蛋白（GFP）表达并逐渐增多、增强。制备的Ad—NK4-B7在体外能有效感染Hep-2细胞，感染后可维持6d高水平的B7—1和NK4基因的表达，整体表达可持续2周。结论成功构建了同时表达B7．1和NK4基因的重组腺病毒载体并制备出重组腺病毒颗粒，该病毒能有效地感染喉癌细胞并表达高水平的NK4和B7-1基因，为进一步研究B7—1和NK4基因的功能及应用B7—1和NK4进行喉癌的联合基因治疗提供了依据和素材。     

HBsAg重组腺病毒转染的树突状细胞诱导BALB/c小鼠抗HBV免疫的研究

目的 研究HBsAg重组腺病毒转染的小鼠树突状细胞（DC）体内外免疫刺激活性和诱导小鼠抗HBV免疫的特点。方法 BALB／c小鼠的骨髓细胞体外扩增为DC，转染HBsAg重组腺病毒Ad-S或被HBsAg蛋白冲击后，流式细胞术分析DC的表型，混合淋巴细胞反应（MLR）检测DC的刺激活性；或与pcDNA3．1（＋）-S质粒分别免疫小鼠后，LDH法测定脾细胞CTL活性，放免法检测血清抗．HBs；流式细胞术分析体外自体MLR中及免疫后小鼠脾脏T细胞内细胞因子。结果 DC／Ad-S、DC／HBsAg和各对照组DC之间的表型和MLR差异无统计学意义，并均刺激TH和Tc分泌IFN-γ。DC／Ad-S免疫后2周能诱导比DNA疫苗更强产生IFN-γ的TH（P〈0．05），以及比DC／HBsAg和DNA疫苗更强分泌IFN-γ的Tc（均P〈0．01）和特异性CTL（P〈0．05，P〈0．01）。但DC／Ad-S和DC／HBsAg诱导的CTL反应及Tc分泌IFN-γ在免疫后4周均明显减弱，且诱导抗．HBs作用弱于DNA疫苗。结论 HBsAg重组腺病毒转染的DC比HBsAg冲击的DC及DNA疫苗能诱导更强的TH1/Tcl（Ⅰ型）细胞免疫和特异性CTL反应，是诱导抗HBV细胞免疫的有效刺激细胞。