金雀异黄素对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的:研究金雀异黄素对人脐静脉内皮细胞(hU-VEC)生长的影响及机制。方法:培养并鉴定hUVEC;用不同浓度金雀异黄素(0·1、1、10和50μmol)对hUVEC作用24h;先用MTT比色法观察细胞存活率、流式细胞术检测细胞DNA含量及细胞周期观察其对hUVEC生长的影响,流式细胞术检测凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2的表达,探讨金雀异黄素诱导hU-VEC增殖的可能机制。结果:金雀异黄素能诱导hUVEC的增殖(P<0·05或P<0·01),其效应随浓度的增加而增强;细胞周期显示S期细胞明显增加;金雀异黄素促进Bcl-2的表达,抑制Fas的表达。结论:金雀异黄素能诱导hUVEC增殖,其机制可能与上调Bcl-2及下调Fas的表达有关。     

脂多糖诱导小鼠肺损伤模型巨噬细胞活化及共刺激分子CD40上调研究

目的观察肺泡巨噬细胞（AM）活化过程和共刺激分子CD40表达变化，探讨其在脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）模型中所发挥的作用。方法BALB／c小鼠分为正常对照组和LPS处理组。光镜观察24、48h肺组织病理变化；RT-PCR测定活化巨噬细胞（activated macrophage，AMφ）中TLR4表达；电泳迁移率变动分析（EMSA）检测AMφ核提取物中NF-κB的活性；Northern blot检测CD40 mRNA表达，流式细胞术检测CD40蛋白表达；ELISA测定肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、MIP-2及IL-1β的含量。结果小鼠吸入LPS后，肺泡隔断裂、肺间质充血及肺泡腔中性粒细胞浸润，并检测到AMφ表面TLR4的表达、核转录因子NF-κB活性增强、共刺激分子CD40mRNA和蛋白显著表达，并随着时间延长出现增加趋势，BALF中炎症因子释放增加，正常对照组无明显变化（P〈0．05）。结论LPS诱导的ALI中，AM活化和共刺激分子CD40上调，导致瀑链式炎症反应，造成肺急性炎症损伤。     

金雀异黄素对胶质瘤细胞株U251MG凋亡的影响

目的 研究金雀异黄素(Genistein)对人胶质瘤U251MG细胞凋亡的影响及机制.方法 碘化丙啶(propidium iodide,PI)和Annexin V-FITC双染色的流式细胞分析方法检测凋亡,并通过流式细胞仪和免疫细胞化学染色检测Bcl-2、bax蛋白的表达.结果 Genistein在25 μg/ml和50 μg/ml作用48 h后,早期凋亡率均较对照组明显增加(P<0.01),并呈剂量依赖性.Bcl-2蛋白表达较对照组明显下降(P<0.01),而bax蛋白则较对照组明显增加(P<0.01),呈剂量依赖性.结论 Genistein可诱导胶质瘤U251MG细胞凋亡,其机制可能与其上调bax蛋白以及下调Bcl-2蛋白的表达有关.     

金雀异黄素防治绝经后骨质疏松症机制的研究进展

大豆制品中所含的植物雌激素金雀异黄素，作为一种天然的选择性雌激素受体调节剂，具有雌激素样作用而无雌激素样副作用，已成为取代传统激素替代疗法的热门研发对象。金雀异黄素防治绝经后骨质疏松的机制可能涉及到多种途径，包括ER受体途径，局部细胞因子途径，旁分泌激素途径，OPG/RANK/RANKL途径等。     

脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞基因表达谱分析

目的　利用基因芯片技术分析脂多糖 (LPS)活化的小鼠腹腔巨噬细胞基因表达谱 ,以更全面地了解LPS诱导的巨噬细胞反应。方法　以未刺激的和用 1mg/LLPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞制备3 3 P标记的cDNA探针 ,分别与含有 1176个已知基因的小鼠cDNA芯片杂交。结果　活化组和未刺激组间的 2倍差异表达基因为 118个 ,3倍差异表达基因为 6 9个 ,其中 4 4个上调 ,2 5个下调。转录因子、细胞内信号调节蛋白、炎症细胞因子和细胞凋亡相关基因的转录发生明显的调节变化。结论提供了LPS活化的巨噬细胞综合基因表达信息 ,并筛选出一些新的可能与LPS活化相关的基因。     

槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞CD14、P38、iNOS表达的影响

目的 探讨槐定碱不同给药方式对内毒素诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞表达CD14、p38 MAPK及i NOS的影响及意义。方法 采用LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型;实验细胞分为4组(n=6):空白对照组、LPS组、槐定碱预处理组、槐定碱预混合组;分别利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测RAW264.7巨噬细胞CD14、p38、i NOS m RNA表达量及蛋白表达量。结果 槐定碱2种给药方式(预处理及预混合)均可显著下调LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞p38、i NOS m RNA及CD14、p-p38、i NOS蛋白表达;槐定碱与LPS预混合可下调LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞CD14 m RNA表达,而槐定碱预处理对CD14 m RNA表达无明显影响。结论 槐定碱可能通过调控CD14、p38、i NOS表达与活化发挥抗内毒素效应。     

脂多糖诱导地鼠肺泡巨噬细胞中一氧化氮对TNF—α的调节作用

对地鼠肺进行灌洗,利用灌洗液分离纯化出肺泡巨噬细胞（ＡＭ）,并进行培养。脂多糖（ＬＰＳ）刺激后,分 别加入一氧化氮合酶（ＮＯＳ）抑制剂和一氧化氮（ＮＯ）供体,观察ＮＯ和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）的变化,探讨ＮＯ 对ＴＮＦ－α的作用关系。结果显示：ＬＰＳ刺激ＡＭ使ＮＯ和ＴＮＦ－α含量均增加（Ｐ＜０．０１）,特异性ｉＮＯＳ抑制剂使活化 的ＡＭ分泌产生ＴＮＦ－α上调,ＮＯ供体可显著抑制ＴＮＦ－α的释放。不同的ＮＯ抑制剂和ＮＯ供体使ＮＯ和ＴＮＦ－α含 量变化不同。提示 ＮＯ和 ＴＮＦ－α是 ＡＭ分泌的炎症细胞因子, ＮＯ对 ＴＮＦ－α存在着调节作用。     

Rab7 基因沉默对巨噬细胞中R848 激活的细胞因子及MAPK 信号通路影响

目的:本实验阐述了Rab7 对Raw264.7 巨噬细胞中R848 激活TLR7(Toll like receptor-7)所产生的细胞因子的影响,并探讨Rab7 对MAPK 信号转导的影响。方法:使用Rab7 刺激silence-Rab7-Raw264.7 细胞,检测R848 激活TLR7 后产生的TNF鄄琢、IL鄄6、IFN-α、IFN-β与IP-10,通过Western blot 检测MAPK 的磷酸化水平,分析Rab7 对MAPK 的信号转导的作用。结果:Rab7 对TLR7 激活后细胞因子的产生具有抑制作用,Rab7 对MAPK 信号通路具有抑制作用。结论:本实验结果进一步说明Rab7 是TLR7 信号转导通路的负向调控因子,并且参与到MAPK 信号通路中。     

根皮素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞的体外抗炎作用机制

目的:研究根皮素对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞体外抗炎的作用机制,以全方位认识根皮素的抗炎作用机制并为临床开发新药提供理论依据.方法:CCK-8法检测根皮素对巨噬细胞增殖的影响,ELISA、实时荧光定量PCR、Western blot、荧光抗体技术(ICC-IF)分别检测TNF-α、IL-6、IL-1...     

免疫抑制剂对巨噬细胞Dectin-1 和TLR2 表达的影响

目的:研究地塞米松、环磷酰胺、环孢素A 和霉酚酸酯对小鼠RAW264.7 巨噬细胞Dectin-1 和TLR2 受体表达的影响。方法:体外培养RAW264.7 巨噬细胞,分别给予不同浓度的地塞米松、环磷酰胺、环孢素A 和霉酚酸酯刺激细胞24 h,CCK-8 检测RAW264.7 细胞毒性作用,RT-PCR 检测细胞Dectin-1 和TLR2 mRNA 表达情况,流式细胞术检测Dectin-1 和TLR2 蛋白水平变化。结果:不同剂量的地塞米松、环磷酰胺、环孢素A 和霉酚酸酯作用细胞24 h 后均对细胞表现出一定的毒性作用(P<0.05),且随着药物浓度增加毒性作用越大。地塞米松降低Dectin-1 mRNA 和蛋白水平的表达,上调TLR2 受体转录和翻译(P<0.05);环磷酰胺对巨噬细胞Dectin-1 和TLR2 的转录翻译无明显影响(P>0.05);霉酚酸酯和环孢素A 能够同时下调Dectin-1、TLR2 mRNA 和蛋白水平表达(P<0.05)。结论:不同免疫抑制剂对模式识别受体表达的调节作用具有差异性,通过选择性调节各自靶点PRRs 的表达抑制机体对各种真菌病原体的免疫识别过程,同时也能够抑制巨噬细胞的生长增殖,共同介导免疫抑制功能。     

TREM-1促进巨噬细胞的迁移并参与脂多糖诱导的小鼠心肌功能障碍

目的探讨髓系细胞触发受体-l(triggering receptor expressed oil myeloid cells-1,TREM-1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠心肌功能障碍的作用以及对巨噬细胞RAW264.7迁移的影响。方法将健康C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、LPS组、LPS+LP17组、LPS+TAK-242组并进行相应处理,6 h后超声心电图检测小鼠心功能指标,12 h取心肌组织HE染色观察病理改变,免疫组化染色观察巨噬细胞表面分子F4/80阳性表达,ELISA检测血清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β及IFN-γ的表达情况,实时荧光定量PCR检测TREM-1、BNP以及炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ的mRNA水平;培养巨噬细胞RAW264.7,将细胞随机分为正常组、LPS组、LP17+LPS组、TAK-242+LPS组并进行对应处理,实时荧光定量PCR检测TREM-1与TLR4的mRNA水平,ELISA检测细胞培养液中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β及IFN-γ的表达情况,Transwell小室观测RAW264.7细胞迁移情况,蛋白免疫印迹检测RAW264.7中TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白水平。结果与对照组相比,超声心电图检测结果显示LPS组小鼠的EF与FS下降,LVD增大,IVS减小,LVPW变薄,变化均显著(P0.05),实时荧光定量PCR结果显示TREM-1 mRNA与BNP mRNA表达水平上升(P0.05),免疫组化染色法显示F4/80有大量阳性表达(P0.01),ELISA检测显示炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ的含量增加(P0.05),实时荧光定量PCR检测也表明这些炎性因子mRNA水平升高(P0.05);与LPS组小鼠相比,注射TREM-1抑制剂LP17使EF、FS上升,有效抑制了LVD增大、IVS减小以及LVPW变薄的现象(P0.05),TREM-1 mRNA与BNP mRNA表达水平均降低(P0.05),心肌损伤减轻,F4/80阳性表达减少(P0.01),炎症因子水平也明显下降(P0.05),与注射TLR4抑制剂TAK-242的效果一致。与对照组相比,LPS诱导RAW264.7细胞后,细胞中TREM-1 mRNA与TLR4 mRNA水平升高(P0.05),炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ的含量增加(P0.05),细胞大量迁移(P0.01),细胞中TLR4、MyD88、NF-κBp65、p-IκBα蛋白水平升高(P0.05);与LPS组相比,TREM-1抑制剂LP17预处理后再给予LPS诱导,细胞中TREM-1 mRNA与TLR4 mRNA水平降低(P0.05),炎症因子的含量下降(P0.05),RAW264.7细胞迁移被抑制(P0.01),TLR4、MyD88、NF-κBp65、p-IκBα蛋白水平也明显降低(P0.05)。结论给小鼠注射TREM-1抑制剂可有效减轻LPS诱导的心肌功能障碍,抑制RAW264.7细胞TREM-1表达可抑制细胞的迁移,TLR4/NF-κB途径可能参与了这一过程。     

MAPK信号通路参与调控大鼠腹腔巨噬细胞表达CRH

为了解终末巨噬细胞表达促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)的胞内信号转导机制,明确丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路与脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹腔表达CRH的关系。我们利用体外培养的大鼠腹腔巨噬细胞,采用RT-PCR及ELISA方法观察MAPK信号通路中关键激酶特异性阻断剂(PD98059、SB203580、SP600125)对LPS诱导的CRH表达的影响。结果显示,LPS促进了大鼠腹腔巨噬细胞表达CRH,MAPK三条主要信号通路中关键激酶特异性阻断剂均剂量依赖性地抑制了LPS诱导的CRH表达。因此,我们认为LPS可以促进终末巨噬细胞表达CRH,而MAPK信号通路参与了该过程。     

脂多糖诱导多形核白细胞和肺泡巨噬细胞凋亡异常在急性肺？…

目的：探讨ＰＭＮ和ＡＭ凋亡异常的机制和意义；为适度调控炎性细胞凋亡防治ＡＬＩ提供理论依据。方法：通过建立大鼠外周血多形核白细胞（ＰＭＮ）和肺泡巨噬细胞（ＡＭ）体外培养，采用流式细胞技术观察ＬＰＳ对上述细胞凋亡的影响。结果：ＬＰＳ加入体外培养大鼠外周血ＰＭＮ中，培养２４h，ＰＭＮ的凋亡率明显降低，ＬＰＳ可明显促进体外培养 的大鼠ＡＭ凋亡，并呈剂量、时间信赖关第。结论：ＬＰＳ诱导ＰＭＮ和ＡＭ细胞凋亡异常     

金雀异黄素对氧化低密度脂蛋白刺激大鼠系膜细胞的保护作用

探讨金雀异黄素(Gen)作为抗氧化剂对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)刺激SD大鼠肾小球系膜细胞(MC)的保护作用.以体外培养的SD大鼠MC为研究对象,分为对照组、OX-LDL组和Gen组.检测胞浆内活性氧物质(ROS)、抗氧化酶(AOEs)活力和丙二醛(MDA)水平,以及核转录因子-kB(NF-kB)亚基P65核转位的表现,并明确量效关系.结果表明:OX-LDL刺激的MC与对照组相比胞浆内ROS明显增多,AOEs活力显著下降,MDA显著增加,p65发生了核转位,而Gen则能抑制上述效应,且具有时间和浓度依赖性.说明在体外培养条件下,OX-LDL刺激的MC呈现氧化应激状态.Gen能够减少实验组ROS和MDA生成,升高AOEs活力,抑制NF-kB的活化,且具有时间和浓度依赖性,其机制可能均与Gen灭活氧化应激有关,提示Gen对OX-LDL刺激下的MC具有保护作用.     

α-MSH对内毒素诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA表达的影响

目的 :内毒素 (LPS)是革兰氏阴性细菌细胞膜的主要成分 ,能引起机体广泛的免疫反应 ,短时间内通过其相应的受体产生大量的促炎因子和共刺激因子。CD14和TLR4是内毒素跨膜信号转导的关键受体。α -黑色素细胞刺激素 (α -melanocyte -stimulatinghornone ,α-MSH)有拮抗内毒素的作用 ,但是其作用环节及机制还不清楚。本实验通过研究α -MSH对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4mRNA表达及NO产生的影响 ,进一步探讨α-MSH的抗内毒素作用机制 ,从而为防治内毒素引起的疾病提供理论依据。方法 :用半定量RT -PCR技术检测LPS诱导…     

脂多糖体内外诱导年轻和衰老小鼠腹腔巨噬细胞表达IL-6的差异研究

目的 探讨脂多糖(LPS)对年轻和老龄小鼠腹腔巨噬细胞体内外表达炎性细胞因子IL-6的影响.方法 年轻(2个月)和年老(18个月)小鼠分别腹腔注射LPS,对照组注射PBS,24h后处死小鼠,分离腹腔巨噬细胞,收集细胞,real time PCR检测IL-6的表达水平.未经LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞,体外用LPS处理2...     

Fasudil通过TLR4通路抑制脂多糖诱导的小鼠BV-2小胶质细胞TNF-α和IL-1β的表达

目的探讨Fasudil对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞系促炎细胞因子表达中的作用。方法体外培养BV-2小胶质细胞系,实验分为PBS对照组、LPS刺激组、LPS联合Fasudil干预组,ELISA检测细胞TNF-α、IL-1β的释放,Griess法检测NO释放水平,流式细胞术检测Toll样受体4(TLR4)、TLR2蛋白表达。结果 LPS刺激BV-2细胞可导致TNF-α、IL-1β和NO的释放明显增加,还可导致炎性信号通路中的受体TLR4表达明显增加。Fasudil能明显抑制炎性因子的释放和TLR4的表达。结论 Fasudil可抑制LPS诱导的小胶质细胞NO、TNF-α和IL-1β释放,其作用机制可能与Fasudil下调TLR4通路有关。     

血管活性肠肽对肺泡巨噬细胞活化和p38MAPK信号通路影响的实验研究

目的 研究血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）对肺泡巨噬细胞活化的影响。方法 原代小鼠肺泡巨噬细胞分为Normal组（正常对照）、LPS组（脂多糖刺激巨噬细胞活化）、LPS+VIP组(脂多糖刺激巨噬细胞活化后,10^-6mol/L VIP干预)。3 C57BL/6小鼠随机分为Normal组（正常对照）,ALI组（急性肺损伤）,ALI+VIP组(急性肺损伤后,10^-8mol/L VIP气管滴入)。免疫荧光法检测肺泡巨噬细胞标记物CD86和白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）的表达;ELISA法检测细胞培养上清和血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、IL-6的含量;RT-PCR法检测巨噬细胞和肺组织内TNF-α、IL-6、p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase, MAPK）mRNA的表达水平;Western blot法检测各组巨噬细胞和肺组织内TNF-α、IL-6、p38MAPK、p-p...     

CCK—8对内毒素休克大鼠肺泡巨噬细胞吞噬及p38MAPK 表达的影响

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对脂多糖(LPS)引起的内毒素性休克(ES)大鼠脾脏和肺脏的TNF-α基因表达的影响,进一步探讨CCK-8的受体作用机制.方法尾静脉注入LPS(8mg/kgiv)复制大鼠ES模型、LPS注入前10min尾静脉注入CCK-8(40μg/kgiv)、单独注入CCK-8(40μg/kgiv)或生理盐水(对照)的四组大鼠分别于LPS注入后30min、2h和6h取脾脏和肺脏进行RT-PCR检测TNF-αmRNA表达.LPS注入后2h、6h和12h取脾脏进行RT-PCR检测CCKA/B受体mRNA表达.结果CCK-8可抑制LPS注入后30min和2h引起的脾脏和肺脏TNF-αmRNA表达的上调,注入LPS后6hTNF-αmRNA的表达与对照组比较没有显著差异.LPS注入后2h、6h和12hES大鼠脾脏CCK-8受体表达较对照组上调,以2h上调作用最为显著.讨论和结论TNF-α是一个早期的重要炎症介质,由于TNF-α能促进IL-1和IL-6等炎症介质的产生,而引起级链式的炎症反应,引起持续损害,LPS组6h尽管TNF-α下降,但病理损害仍比2h明显加重.我室以往研究已证实CCK-8有抗ES的作用.脾脏和肺脏是产生TNF-α的重要器官,CCK-8能抑制TNF-α的产生,可能通过抑制其转录而起作用.LPS诱导脾脏CCK受体表达增加,属疾病状态下的受体、配体间的正向调节.LPS致机体损伤的同时也启动了机体的保护机制,CCKA/B受体表达增加,是该保护机制之一.这些发现提示CCK-8逆转ES可能与其抑制TNF-α基因表达的作用有关;LPS可上调脾脏CCKA/B受体表达,说明CCK-8保护作用的受体机制.