和络泄浊方防治单侧输尿管梗阻后大鼠肾间质纤维化的研究

目的:探讨和络泄浊方对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)后大鼠肾间质纤维化过程的防治作用。方法:采用UUO大鼠模型,将48只Waster大鼠随机分为假手术组(Sham)、手术组(UUO)、和络泄浊方治疗组(UUO+REL)。在造模后第1天开始和络泄浊方治疗组给予中药15 ml/kg.d-1,分早晚2次灌胃,假手术组和手术组每天给予等量生理盐水灌胃。在造模后第3 d、10 d、20 d、30 d每组取4只处死,左肾组织HE染色,光镜观察肾间质病理形态学变化;免疫组织化学染色法检测α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA)的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾脏基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)mRNA的变化。结果:手术组呈进行性肾间质纤维化,肾小管上皮细胞及间质-αSMA表达明显增加(P<0.01),TIMP-1mRNA的表达明显高于假手术组(P<0.01),中药灌胃组的-αSMA及TIMP-1mRNA表达均明显低于手术组(P<0.01)。MMP-9在手术组术后明显升高,第10天时达到高峰,继之下降。中药灌胃组在第10天后下降幅度较小,在20 d3、0 d时高于手术组(P<0.01)。结论:和络泄浊方对单侧输尿管梗阻后的肾间质纤维化有抑制作用,通过调节MMP-9/TIMP-1的基因表达,减少-αSMA的形成,从而减轻肾间质纤维化。     

和络泄浊方对肾间质纤维化大鼠MMP-9 TIMP-1基因表达的影响

目的:探讨和络泄浊方对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)后大鼠肾脏组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因表达的影响。方法:采用UUO大鼠模型,将48只Waster大鼠随机分为假手术组、模型组、中药灌胃组。在术后第1天开始,中药灌胃组给予中药15mL/kg,分早晚2次灌胃,假手术组和模型组每天给予等量生理盐水灌胃。在术后3、10、20、30天每组各取4只处死,左肾组织行HE染色,评定各组大鼠肾小管间质损害程度,采用RT-PCR法检测肾脏MMP-9、TIMP-1mRNA的变化。并分析TIMP-1mRNA与肾小管间质损伤指数的相关性。结果:模型组的肾小管间质损伤指数及TIMP-1mRNA的表达明显高于假手术组(P<0.01),中药灌胃组的肾小管间质损伤指数及TIMP-1mRNA表达低于模型组(P<0.05或P<0.01)。MMP-9在模型组UUO术后明显升高,第10天时达到高峰,继之出现下降;在中药灌胃组第10天后下降幅度较小,在20天、30天时间点高于模型组(P<0.01)。结论:和络泄浊方通过调节MMP-9/TIMP-1的基因表达,促进了ECM的降解过程,从而减轻肾间质纤维化。     

和络泄浊方对肾纤维化大鼠肾组织α-SMA、Ⅳ型胶原表达的影响

本实验主要观察和络泄浊方对肾纤维化大鼠肾组织α-SMA、Ⅳ型胶原表达的影响,旨在进一步探讨其抗肾纤维化作用的可能机制。1材料1·1动物健康Wistar大鼠48只,动物许可证号SCXK(鲁)20030010,雌雄各半,6~8周龄,体重180g~220g,平均体重200g,由青岛市动物研究所提供。于室温23℃,用     

消瘀泄浊饮对肾间质纤维化大鼠的肾脏保护作用研究

目的:探讨消瘀泄浊饮对UUO模型大鼠的保护作用及作用机制。方法:实验采用UUO大鼠模型,将32只SD大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、洛汀新治疗组(B组)、消瘀泄浊饮组(X组)。分组用药并监测体重,给药14天后处死大鼠。测定大鼠左肾指数,血清肌酐、尿素氮、白蛋白水平;肾组织HE染色观察病理改变;用免疫组织化学方法检测肾组织α-SMA的表达。结果:消瘀泄浊饮能够明显降低实验大鼠血清肌酐、尿素氮水平,升高白蛋白水平,能降低肾组织中α-SMA蛋白表达,与模型组比较有显著性差异,形态学观察也显示其肾脏损害轻于模型组。结论:消瘀泄浊饮能有效地延缓肾间质纤维化的进程,可通过抑制α-SMA的表达,减少肌成纤维细胞的活化和形成,从而起到抗肾纤维化的作用。     

和络泄浊方对肾间质纤维化大鼠转化生长因子β1表达的影响

目的：探讨中药和络泄浊方对肾间质纤维化的作用机制。方法：将60只Wistsr大鼠随机分为4组（正常对照组、正常灌胃组、造模组及造模灌胃组），运用单侧输尿管结扎法（UUO）制造肾间质纤维化模型，术后5周取术侧肾脏组织做HE染色，并应用免疫组化检测各组大鼠转化生长因子β1（TGF—β1）的表达。结果：肾间质纤维化后致纤维化因子TGF—β1表达上调，经和络泄浊方灌胃后，肾间质TGF—β1表达下调，纤维化程度较造模组显著改善。结论：和络泄浊方可通过抑制TGF—β1的表达，改善肾间质纤维化。     

和络泄浊方对肾间质纤维化大鼠转化生长因子β1表达的影响

目的:探讨中药和络泄浊方对肾间质纤维化的作用机制。方法:将60只W istar大鼠随机分为4组(正常对照组、正常灌胃组、造模组及造模灌胃组),运用单侧输尿管结扎法(UUO)制造肾间质纤维化模型,术后5周取术侧肾脏组织做HE染色,并应用免疫组化检测各组大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)的表达。结果:肾间质纤维化后致纤维化因子TGF-β1表达上调,经和络泄浊方灌胃后,肾间质TGF-β1表达下调,纤维化程度较造模组显著改善。结论:和络泄浊方可通过抑制TGF-β1的表达,改善肾间质纤维化。     

健脾补肾、和解泄浊法抑制肾间质纤维化的实验研究

目的 观察补肾排毒合剂对单侧输尿管梗阻（UUO）后大鼠肾间质α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）表达的影响及对肾间质纤维化的保护作用。方法 采用UUO诱导肾间质纤维化的动物模型，将48只Wistar大鼠随机分为假手术组（Sham）、模型组（UUO）和补肾排毒合剂治疗组（REM），每组分别于造模后3、10、20、30d各处死4只，取左肾组织行HE染色，动态观察肾脏病理学变化，评定各组肾小管间质损害程度，以免疫组化方法测定肾组织中α—SMA、Col Ⅳ。结果 与UUO组比较，REM组大鼠肾间质病变程度明显减轻，α-SMA、Col Ⅳ在肾间质中的表达也有明显降低。结论 补肾排毒合剂可通过降低α—SMA、Col Ⅳ的表达，减少肾间质细胞外基质合成，延缓肾间质纤维化的进展。     

参芪泄浊饮对腺嘌呤肾间质纤维化模型大鼠肾组织MMP-9、TIMP-1基因表达的影响

目的:观察参芪泄浊饮对慢性肾衰大鼠肾组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)基因表达的影响。方法:采用Yokozawa法复制慢性肾衰大鼠模型,随机分为参芪泄浊饮高剂量组、常规剂量组、氯沙坦组、模型组及空白组,高剂量组、常规剂量组、氯沙坦组分别予参芪泄浊饮水煎液20 m L/(kg·d)、参芪泄浊饮10 m L/(kg·d)、氯沙坦9 mg/(kg·d),模型组与空白组大鼠均予纯净水10 m L/(kg·d),连续给药8周,全部大鼠麻醉后腹腔采血,取左肾,ELLISA法测量血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、丙氨酸转氨酶(ALT)并采用荧光定量PCR检测肾脏MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达。结果:1高剂量组Scr水平明显低于常规剂量组、氯沙坦组及模型组;常规剂量组与氯沙坦组无明显差别,且均低于模型组;2高剂量组MMP-9 mRNA表达水平明显高于常规剂量组、氯沙坦组及模型组;常规剂量组与氯沙坦组无明显差别,且均高于模型组;高剂量组TIMP-1 mRNA表达水平明显低于常规剂量组、氯沙坦组及模型组;常规剂量组与氯沙坦组无明显差别,且均低于模型组;3各组ALT水平较空白组比较均无显著差别。结论:参芪泄浊饮可通过调节MMP-9及TIMP-1表达来缓解慢性肾衰肾脏功能的恶化。     

扶正化瘀方对大鼠肾间质纤维化肾组织基质金属蛋白酶活性调节的作用

目的:探讨扶正化瘀方影响肾间质纤维化大鼠肾组织基质金属蛋白酶(MMPs)活性调节的抗肾纤维化作用机制。方法:大鼠分为正常组、模型组与扶正化瘀方组,以氯化汞灌胃诱导大鼠肾间质纤维化模型,扶正化瘀方组以4g/kg扶正化瘀方灌胃。生化检测血清肾功能、肾组织羟脯氨酸(Hyp)含量;病理染色观察肾组织病理形态改变;蛋白印迹法分析肾组织MMP-13、MMP-2、膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)及金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP-1/2)蛋白表达;明胶酶谱法测定MMP-2活性;荧光底物反应法检测MMP-13活性。结果:与模型组比较,扶正化瘀方组明显改善大鼠血清肾功能指标,降低肾组织Hyp含量,减轻肾组织胶原沉积,降低大鼠肾组织的MMP-2、MT1-MMP、TIMP-1/2蛋白表达,降低MMP-2活性,但增加MMP-13活性。结论:扶正化瘀方抗肾间质纤维化的作用机制在于:抑制MMP-2活性,保护肾组织基底膜;抑制TIMP-1表达,提高MMP-13活性与促进病理沉积间质性胶原的降解。     

益肾清利、和络泄浊方对腺嘌呤诱导的肾性贫血大鼠的作用研究

目的：探讨中药益肾清利、和络泄浊方对腺嘌呤诱导的慢性肾脏病（Chronic Kidney Disease,CKD）肾性贫血（Renal Anemia,RA）大鼠的影响,并探讨该方的作用机制。方法：采用腺嘌呤灌胃的方法复制CKD-RA大鼠模型。将造模组大鼠分为模型组、中药高、中、低剂量组、促红细胞生成素（Erythropoietin,EPO）组,检测血红蛋白、红细胞压积、尿素氮、肌酐、EPO、肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α),留取肾组织进行病理学观察。结果：（1）中药高、中、低剂量组和EPO组治疗后尿素、肌酐均较治疗前显著下降,治疗后中药高、中剂量组显著低于模型组;中药中剂量组、EPO组治疗后TNF-α显著下降;中药高、中、低剂量组、EPO组血清EPO均较前显著升高;治疗后与模型组比较,中药高、中剂量组、EPO组差异有统计学意义（P <0.05）;治疗后中药低剂量组血清EPO数值低于EPO组,差异有统计学意义（P <0.05）。（2）中药高、中、低剂量组和EPO组治疗后血红蛋白、红细胞压积水平均较治疗前升高,差异有统计学意义（P ...     

真武汤抗大鼠肾间质纤维化作用的研究

目的:观察真武汤对肾间质纤维化大鼠的作用,并通过观察真武汤对肾脏Ⅰ,Ⅲ型胶原纤维的影响,探讨真武汤抗肾间质纤维化的作用机制。方法:采用"单肾切除加腺嘌呤灌胃法"建立大鼠慢性肾衰竭模型。治疗组予真武汤9.8,2.45g.kg-1 ig,对照组予尿毒清溶液ig。给药4周后处死大鼠取血测肌酐(Cr),尿素氮(BUN),钙(Ca2+)、磷(P3+),肾脏切片分别进行HE染色、PASM染色、Masson染色、Sirius Red染色、Mallory染色,光镜下观察大鼠肾组织的病理形态学改变,HE染色进行肾小管间质病变半定量分析,PASM染色、Masson染色、Sirius Red染色进行肾脏组织病理学图像分析。结果:在肾间质纤维化面积、肾小球系膜积分吸光度等方面,真武汤高、低剂量组的作用优于模型组和尿毒清组,P0.05。真武汤高、低剂量组在肾间质中Ⅰ,Ⅲ型胶原分布面积等方面的作用与模型组比,P0.05。结论:真武汤具有抗肾间质纤维化的作用,其作用途径可能与抑制Ⅰ,Ⅲ型胶原纤维增生有关。     

灯盏细辛注射液对大鼠肾间质纤维化的影响

目的 观察灯盏细辛注射液对大鼠肾间质纤维化的改善作用并探讨其机制。方法 采用单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠模型为研究对象。36只SD大鼠随机分为对照组、UUO模型组（模型组）和灯盏细辛治疗组（治疗组）。治疗组每天给予灯盏细辛注射液〔5 mL/(kg·d)〕腹腔注射治疗,由术前24 h 始至术后第9天止;术后第10天取术侧肾脏组织,常规石蜡包埋切片,HE、PAS和苦味酸－天狼星红染色,光镜下观察大鼠肾小管间质病理改变、肾脏皮质相对间质容积和相对胶原含量的变化;免疫组织化学方法检测肾脏转化生长因子β1（TGF β1）、α 平滑肌肌动蛋白（α SMA）和Ⅰ型胶原的表达。结果 模型组和治疗组均出现明显的肾间质纤维化病理改变,但治疗组病变程度相对较轻。肾皮质相对间质容积和相对胶原含量模型组及治疗组明显高于对照组,但治疗组明显少于模型组（P＜0.01）。免疫组化染色显示： TGF β1、α-SMA和Ⅰ型胶原表达模型组和治疗组明显多于对照组,但治疗组较模型组明显减少（P＜0.05）。结论 灯盏细辛注射液对大鼠肾间质纤维化具有显著的改善作用,这种作用可能是通过抑制TGF-β1表达,阻止肾小管上皮细胞转分化,减少Ⅰ型胶原合成实现的。     

梗阻性肾间质纤维化大鼠血流变及微循环研究

目的 观察单侧输尿管梗阻(UUO)致大鼠肾间质纤维化的血液流变学及微循环的变化特点,从络病角度探讨肾间质纤维化的中医病机.方法 建立单侧输尿管梗阻致大鼠肾间质纤维化模型,观察肾间质纤维化大鼠全血粘度150/s切变率、30/s切变率、5/s切变率、1/s切变率、红细胞压积、舌下及耳廓的脉络变化,同时检测肾纤维化指标、血清肌酐及尿素氮.结果 肾间质纤维化模型组的全血粘度150/s切变率、30/s切变率、5/s切变率、1/s切变率、红细胞压积、透明质酸酶(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、IV型胶原(C IV)、血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)与假手术组相比显著升高;且肾纤维化指标(HA、LN、 PCⅢ、C IV)与全血粘度的各个切变率及红细胞压积呈显著正相关.结论 肾间质纤维化大鼠血流变及微循环的变化特点一定程度上反应了肾间质纤维化"络脉瘀组"的中医病机,为抗肾间质纤维化"活血通络"的治疗提供初步依据.     

苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响

目的探讨苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响及可能机制。方法大鼠行单侧输尿管结扎（UUO）建立肾小管间质纤维化模型。实验分为假手术、UUO及苦参素治疗组。治疗组在UUO的基础上每天以苦参素100mg/kg腹腔注射。各组于术后第7、14、21天分别处死5只大鼠,分别检测大鼠血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）及24h尿蛋白定量。用PAS及Masson染色法观察肾脏病理改变。用免疫组织化学法观察转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad3、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅰ型胶原（ColⅠ）的表达。用RT-PCR法测定肾组织TGF-β1及α-SMA mRNA水平。结果与UUO组比较,苦参素治疗组肾脏TGF-β1、Smad3、α-SMA及ColⅠ的表达明显减少,肾小管损害和肾间质纤维化的程度也明显减轻。治疗组TGF-β1 mRNA及α-SMA mRNA表达显著低于对应时间点的UUO组。结论苦参素可下调TGF-β1、ColⅠ的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化及肌成纤维细胞的活化与增殖,其作用途径可能是通过下调Smad3的表达,从而干预Smad3介导的细胞内信号转导,最终减轻肾间质纤维化。     

益肾降浊汤对慢性肾功能衰竭大鼠肾间质纤维化的影响

目的：研究益肾降浊汤对慢性肾功能衰竭（CRF）肾间质纤维化的疗效与机理。方法：将66只雌雄各半的SD大鼠,随机分为正常对照组、假手术组、病理模型组、依那普利对照组、大黄对照组和益肾降浊汤治疗组。采用5/6肾切除大鼠CRF模型进行造模,并给予不同的药物治疗。观察各组大鼠的血清肌酐（Scr）、血清尿素氮（BUN）、尿渗透压（Urine osmolality）,观察残余肾组织常规病理,并用免疫组化法检测骨形成蛋白-7（BMP-7）及转化生长因子β1（TGF-β1）的表达。结果：依那普利对照组、大黄对照组和益肾降浊汤治疗组肾间质纤维化程度显著轻于病理模型组,而其中益肾降浊汤治疗组病变较依那普利对照组和大黄对照组轻,依那普利对照组和大黄对照组相比无明显差异。Urine os-molality减少的程度、Scr、BUN的结果同肾间质纤维化变化的程度一致（P〈0.01及P〈0.05）。BMP-7在正常组和假手术组中的表达最多,在各治疗组中又以益肾降浊汤治疗组表达最多。TGF-β1在病理模型组表达最多,正常组中表达很少,在各治疗组中益肾降浊汤治疗组表达最少。结论：益肾降浊汤可以延缓CRF大鼠病变的进展,其作用强于单味大黄及依那普利。推测益肾降浊汤具有延缓CRF大鼠肾间质纤维化,降低残余肾脏受损程度的作用。     

红花黄色素对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化的影响

目的：探讨红花黄色素对大鼠肾间质纤维化的影响。方法：将40只SD雄性大鼠随机分为假手术（SO）组、单侧输尿管梗阻（UUO） 组、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂厄贝沙坦组（IRB组） 和红花黄色素组（SY组） 。大鼠肾组织行苏木精-伊红和Masson染色,计算肾间质纤维化的相对面积。免疫组化技术检测I型胶原（Col I）和纤维连接蛋白（FN）在肾组织中的表达。结果：SY治疗组和IRB治疗组能有效改善UUO大鼠的肾脏间质纤维化,SY组和IRB组中各时间点Col I和FN蛋白的表达均低于UUO组（P0.05）。结论：红花黄色素可减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度,延缓肾脏间质纤维化。     

金匮肾气丸对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的影响

目的:研究金匮肾气丸对腺嘌呤致大鼠肾间质纤维化的保护作用,并探讨其作用机制。方法:96只SD大鼠随机分成正常组、模型组、氯沙坦组(5 mg·kg-1)和金匮肾气丸高、中、低剂量组(2.4,1.2,0.6 g·kg-1),采用腺嘌呤灌胃(200 mg·kg~(-1)·d~(-1))诱导肾间质纤维化大鼠模型,2 h后灌胃给予相应药物,造模连续9周;给药连续16周。采用生化法测定血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理改变情况;马松(Masson)染色观察大鼠肾脏胶原沉积情况;以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定大鼠肾脏组组转化生长因子-β1(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),钙黏蛋白(E-cadherin),Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ),Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ),Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ),基质金属蛋白酶-1(MMP-1),基质金属蛋白酶-2(MMP-2),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1),基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)mRNA的表达;以免疫组化法测定大鼠肾脏TGF-β1,α-SMA和E-cadherin的表达。结果:与正常组比较,模型组中SCr和BUN显著升高(P0.01),给予金匮肾气丸干预后SCr和BUN水平降低(P0.05);HE染色和Masson染色结果显示,与正常组比较,模型组肾间质损伤严重且肾间质胶原物质大量沉积,给予金匮肾气丸干预后肾间质小管损伤减轻,肾间质胶原物质沉积减少;Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组TGF-β1,α-SMA,Col-Ⅰ,Col-Ⅲ,Col-Ⅳ,TIMP-1,TIMP-2mRNA表达上调(P0.05),模型组E-cadherin,MMP-1,MMP-2,MMP-9 mRNA表达下调(P0.05),给予金匮肾气丸干预后E-cadherin,MMP-1,MMP-2,MMP-9 mRNA的表达上调(P0.05),TGF-β1,α-SMA,Col-Ⅰ,Col-Ⅲ,Col-Ⅳ,TIMP-1,TIMP-2mRNA的表达明显下调(P0.05);免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组E-cadherin蛋白表达下调(P0.01),TGF-β1和α-SMA蛋白表达上调,金匮肾气丸干预后E-cadherin蛋白表达上调(P0.05),TGF-β1和α-SMA蛋白表达下调(P0.05)。结论:金匮肾气丸可有效改善肾间质纤维化并对肾脏有一定的保护作用,其改善肾间质纤维化的机制可能与降低基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1,TIMP-2)活性,TGF-β1蛋白表达,α-SMA蛋白表达,升高基质金属蛋白酶(MMP-1,MMP-2,MMP-9)活性,E-cadherin蛋白表达,从而减少胶原物质的沉积有关。     

肾苏合剂对腺嘌呤所致大鼠肾间质纤维化影响的实验研究

目的:观察肾苏合剂对大鼠肾间质纤维化生化指标、病理形态学及血管活性物质AngⅡ、ET-1的影响。方法:采用腺嘌呤灌胃法建立大鼠肾间质纤维化模型,将实验动物随机分为正常组、中药组(肾苏合剂)、西药组(苯那普利)和模型组。于造模后及治疗3、6周分别检测血清BUN、Scr、TP、ALB和24hTP、NAG、GAL。实验6周末采用光镜和电镜分别观察各组大鼠肾脏病理形态学及肾脏超微结构变化;采用放免法检测血管活性物质AngⅡ和ET-1。结果:①中药组血清BUN、Scr、24hTP、NAG、GAL等指标明显改善(P<0.05)。其中,在降低血清BUN、SCr方面,中药组优于西药组(P<0.05)。②光镜与电镜均显示,中药组大鼠肾小管损害及肾间质纤维化程度均明显减轻,西药组与中药组病理改变基本相同。③中药组肾组织中AngⅡ、ET-1的浓度明显降低(P<0.05)。结论:肾苏合剂能明显减轻腺嘌呤大鼠模型肾小管间质病理损害,阻抑肾间质纤维化的进展。