大鼠血清碱性磷酸酶活性,km值及其同工酶在四氯化碳中毒性肝损伤时的变化(摘要)

实验大鼠分为两组,每组各16只,病理组用CCI_4注射造成肝损伤,对照组不注射为正常大鼠,两组大鼠血清ALP活性、Km值及ALP同工酶进行了测定,结果发现:病理组ALP活性为324±90.4单位/升,Km为0.71±0.17mM,对照组ALP活性为228±49.8单位/升,Km为1.2±0.25mM,表明病理组ALP活性比对照组增高非常明显(P<0.001),而Km测减小非常显著(P<0.001)、ALP同工酶测定结果表明:正常大鼠血清ALP同工酶出现一条带位于β—球蛋白部位,根据大鼠肝,肠,骨等组织的ALP同工酶谱,认为正常大鼠血清ALP同工酶主要来自肠和骨,病理组血清ALP同工酶出现两条带,一条位于α2-球蛋白     

胎龄和CV标本纯度对孕早期产前诊断低磷酸酶症的价值

严重婴儿型低磷酸酶症是一种常染色体隐性遗传病,具有不同程度的骨畸形,这种畸形在新生儿期常是致命的。此病严重型伴有非常低的肝/骨/肾(LBK)碱性磷酸酶(ALP)同工酶水平,但肠和胎盘同工酶水平正常。过去对先天性低磷酸酶症的产前诊断是靠超声扫描和测定羊水ALP同工酶水平。曾报告首例受累胎儿的诊断是用绒毛标本和特异单克隆抗体测定ALP。在17周用超声图标准证实其诊断。但单克隆抗体亲和力低,需要采用扩增系统。故本文作者对此例受累胎儿是通过孕早期绒毛取样(CVS),测定     

大鼠肝缺血再灌注损伤肾内过氧化物酶V、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶的表达变化

目的:观察大鼠肝缺血再灌注损伤模型肾的功能、形态以及过氧化物酶V(PrxV)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的表达变化,探讨肝缺血再灌注损伤对肾的影响及PrxV、CAT、SOD的抗氧化作用。方法:首先采用无损伤血管夹夹闭通往大鼠肝左叶、肝中叶的血管和胆管蒂30 min,然后松开血管夹恢复肝血液供应,制造大鼠70%肝缺血再灌注损伤模型;损伤再灌注6 h后取血、肝和肾。血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性采用速率法测定,血清肌酐(SCr)含量采用苦味酸法测定;血清尿素氮(BUN)含量采用酶耦联速率法测定。采用H-E染色观察肝、肾的形态学改变。肾组织MDA含量采用硫代巴比妥酸比色法测定,抗氧化酶PrxV、CAT、SOD mRNA表达水平采用RT-PCR的方法测定,其蛋白水平的表达变化采用免疫印迹测定。结果:肝缺血再灌注损伤组大鼠血清ALT活性、SCr和BUN含量明显高于对照组;H-E染色结果显示模型组大鼠肝组织、肾组织均明显受损。肾组织内的MDA含量明显高于对照组,PrxV、CAT、SOD的mRNA和蛋白表达水平与对照组相比也明显升高。结论:肝缺血再灌注损伤可导致肾的形态和功能受损,抗氧化酶PrxV、CAT、SOD在此过程中可能发挥了抗氧化应激作用,对肾具有保护功能。     

阿霉素对兔心肾损伤与一氧化氮合酶表达

目的:探讨阿霉素(Adr)对心和肾损伤与一氧化氮合酶(NOS)表达。方法:用治疗剂量阿霉素静脉注射法建立兔心、肾损伤模型组,测定兔心输出量(CO)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP):取心和肾组织进行HE染色及超薄切片染色;NADPH组化染色并进行图像分析,观察动物心和肾组织中ALP、Ca~(2+)-ATP酶和 NOS的变化。结果:实验组CO、LVSP均明显低于对照组,LVEDP明显高于对照组;实验组心和肾组织的超微结构受损伤,Ca~(2+)-ATP酶活性明显下降,而NOS表达明显上调。结论:治疗剂量阿霉素能够降低心和肾组织中Ca~(2+)-ATP酶的活性和上调NOS的表达,是导致心和肾组织损伤的重要原因。     

内源性二氧化硫及其生成酶在大鼠体内的生成与分布

目的：探讨内源性二氧化硫(SO2)及其生成酶谷氨酸草酰乙酸转移酶(GOT)在大鼠体内的正常分布。 方法：选用Wistar大鼠，分别留取心、肝、肺、肾、主动脉、肺动脉、肠系膜动脉、肾动脉和尾动脉，应用高效液相色谱荧光法(HPLC)检测各组织中亚硫酸盐的含量；应用酶学法测定各组织中GOT酶活性及荧光定量PCR测定各组织中GOT mRNA的含量；原位杂交检测血管组织中GOT mRNA的分布。结果：心、肝、肺、肾、主动脉、肺动脉、肠系膜动脉、肾动脉和尾动脉中均含有一定量的亚硫酸盐，且以动脉血管中的含量较高；心、肝、肾等组织中的GOT酶活性及GOT mRNA含量明显高于动脉血管的含量；GOT mRNA主要位于血管内皮细胞和近内皮的血管平滑肌细胞。结论：SO2可在心血管系统内源性产生，动脉血管中SO2含量高于组织器官中的含量，GOT酶及GOT mRNA的含量在动脉血管中较低，这可能与局部代谢及作用有关。     

阿霉素对兔肾ALP和Ca2+-ATP酶活性及NOS表达的影响

目的探讨阿霉素对肾损伤的毒性机制.方法用治疗剂量阿霉素静脉注射,建立兔阿霉素肾损伤模型作为模型组,静脉注射生理盐水作为对照组.取肾组织进行HE梁色;采用Gomori法、Padykula及Herman法和NADPH-d酶组织化学染色;进行图像发析,数据进行统计学检验;观察和比较两组动物肾组织中ALP、Ca2+-ATP酶和NOS酶的变化.结果病理学检查表明模型组肾组织受损伤,酶组织化学染色和图像分析显示ALP、Ca2+-ATP酶含量下降,而NOS表达上调,模型组与对照组相比,P＜0.01,具有显著性差异.结论治疗剂量阿霉素能够降低肾组织中ALP、Ca2+-ATP酶的活性和上调NOS的表达,可能是导致肾损伤的重要原因.     

大鼠肾缺血再灌注损伤肝内过氧化酶Ⅰ、过氧化氢酶、细胞外超氧化物歧化酶的表达变化

目的:观察大鼠肾缺血再灌注损伤模型肝的功能、形态、氧化应激水平以及抗氧化酶过氧化酶Ⅰ(PrxⅠ)、过氧化氢酶(CAT)、细胞外超氧化物歧化酶(EC-SOD)的表达变化,探讨肾缺血再灌注损伤对肝的影响及PrxⅠ、CAT、EC-SOD的抗氧化作用.方法:通过无损伤动脉夹钳夹肾动脉法建立肾缺血再灌注损伤模型.再灌注24 h后取血、肝和肾.血清ALT活性采用速率法测定,血清SCr含量采用苦味酸法测定;血清BUN含量采用酶耦联速率法测定.采用H-E染色观察肝、肾的形态学改变.肝组织MDA含量采用硫代巴比妥酸比色法测定;肝组织H2O2含量采用分光光度法测定.抗氧化酶PrxⅠ、CAT、EC-SOD mRNA表达水平采用RT-PCR的方法测定,其蛋白水平的表达变化采用免疫印迹测定.结果:肾缺血再灌注损伤组大鼠血清SCr含量、BUN含量和ALT活性均高于对照组;H-E染色结果显示模型组大鼠肾组织、肝组织形态结构均明显受损.肝组织内的MDA含量和H2O2含量明显高于对照组,PrxⅠ、CAT、EC-SOD的mRNA和蛋白表达水平与对照组相比也明显升高.结论:肾缺血再灌注损伤可导致肝遭受过氧化损伤,形态结构和功能受损,PrxⅠ、CAT、EC-SOD在此过程中可能发挥了抗氧化应激作用,对肝具有保护功能.     

阿霉素对兔心肾损伤与一氧化氦合酶表达

目的：探讨阿霉素(Adr)对心和肾损伤与一氧化氮合酶(NOS)表达。方法：用治疗剂量阿霉素静脉注射法建立兔心、肾损伤模型组，测定兔心输出量(CO)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)；取心和肾组织进行HE染色及超薄切片染色；NADPH组化染色并进行图像分析，观察动物心和肾组织中ALP、Ca-ATP酶和NOS的变化。结果：实验组CO、LVSP均明显低于对照组，LVEDP明显高于对照组；实验组心和肾组织的超微结构受损伤，Ca2-ATP酶活性明显下降，而NOS表达明显上调。结论：治疗剂量阿霉素能够降低心和肾组织中Ca2-ATP酶的活性和上调NOS的表达，是导致心和肾组织损伤的重要原因。     

热休克对小白鼠肾中碱性磷酸酶的影响

本文用酶组织化学方法研究了热休克对不同发育时期小鼠肾组织中碱性磷酸酶（ALP）的影响。结果表明，热休克处理后ALP活性有明显增高．提示ALP活性的增强是提高细胞的热耐受力、维持细胞正常生理功能的重要途径。     

大鼠肾缺血再灌注损伤肝内过氧化酶I、过氧化氢酶、细胞外超氧化物歧化酶的表达变化

目的:观察大鼠肾缺血再灌注损伤模型肝的功能、形态、氧化应激水平以及抗氧化酶过氧化酶I(PrxI)、过氧化氢酶(CAT)、细胞外超氧化物歧化酶(EC--SOD)的表达变化,探讨肾缺血再灌注损伤对肝的影响及PrxI、CAT、EC-SOD的抗氧化作用。方法:通过无损伤动脉夹钳夹肾动脉法建立肾缺血再灌注损伤模型。再灌注24 h后取血、肝和肾。血清ALT活性采用速率法测定,血清SCr含量采用苦味酸法测定;血清BUN含量采用酶耦联速率法测定。采用H-E染色观察肝、肾的形态学改变。肝组织MDA含量采用硫代巴比妥酸比色法测定;肝组织H_2O_2含量采用分光光度法测定。抗氧化酶PrxI、CAT、EC-SOD mRNA表达水平采用RT-PCR的方法测定,其蛋白水平的表达变化采用免疫印迹测定。结果:肾缺血再灌注损伤组大鼠血清SCr含量、BUN含量和ALT活性均高于对照组;H-E染色结果显示模型组大鼠肾组织、肝组织形态结构均明显受损。肝组织内的MDA含量和H_2O_2含量明显高于对照组,PrxI、CAT、EC-SOD的mRNA和蛋白表达水平与对照组相比也明显升高。结论:肾缺血再灌注损伤可导致肝遭受过氧化损伤,形态结构和功能受损,PrxI、CAT、EC-SOD在此过程中可能发挥了抗氧化应激作用,对肝具有保护功能。     

钙调神经磷酸酶在大鼠不同组织中的分布及活性

目的:观察钙调神经磷酸酶(CaN)在大鼠不同器官组织中的活性和蛋白分布。方法:取正常大鼠不同器官组织,应用Westernblot及免疫组织化学方法测定CaN催化亚单位α亚型(CnAα)在各组织中的蛋白含量及分布,并用[³²P]标记的底物肽测定各组织的CaN活性。结果:①Westernblot结果显示,CnAα在大鼠脑组织中有丰富表达,心脏、骨骼肌和肺中亦有表达,但肾脏及主动脉未检测出有CnAα表达。②免疫组织化学显示,大鼠脑组织、心肌细胞胞浆内、肺内巨噬细胞及细支气管周围的结缔组织、主动脉外膜、肾小血管周围结缔组织及肾远曲小管及集合管的外壁中存在免疫反应阳性产物。③CaN活性在脑组织最高,其次为骨骼肌、心肌和肺组织,主动脉和肾脏最低。结论:钙调神经磷酸酶在体内具有广泛分布,可能参与多种器官组织的功能调节。     

胃癌碱性磷酸酶同工酶组织化学,光镜和电镜观察

采用光间和电镜酶组织化学技术对胃癌和胃良性病变碱性磷酸酶同工酶的活性和分布进行观察，结果表明：Ｎａｇａｏ，Ｒｅｇａｎ和Ｋａｓａｈａｒａ同工酶在正常胃粘膜和非癌病变中均无表达，可作为胃癌的肿瘤标志；肠化上皮仅表达小肠型ＡＬＰ，是肠化上皮分化成熟的标志。从ＡＬＰ同工酶基因表达角度来看，两次突变假说和隐性基因突变假和说适用于胃癌。     

大鼠肢体缺血再灌注后肺组织一氧化氮合酶的变化

目的:研究正常大鼠肺组织内一氧化氮合酶(NOS)的分布及肢体缺血再灌注(LIR)后肺组织内NOS分布及活性的变化。方法:用止血带复制肢体缺血再灌注模型,利用β-NADPH-d组织化学方法、计算机图像分析系统及分光光度法,观察对照组大鼠肺内NOS的分布及LIR组肺内NOS分布及活性的变化。结果:组织学上显示,对照组大鼠呼吸道包括支气管、细支气管、终末细支气管、肺泡管的上皮细胞和血管内皮细胞NOS表达均阳性,肺泡上皮细胞NOS表达阴性;LIR组上述肺组织阳性部位NOS表达增强,且出现血管平滑肌细胞、肺泡上皮细胞NOS表达阳性;生化测定结果显示,LIR组与对照组比较,NOS活性增强,NO₂^-/NO₃^-水平增多。结论:一氧化氮不仅参与肺的生理过程,而且在LIR后急性肺损伤(ALI)病理生理过程中可能发挥重要作用。     

糖肾方对糖尿病肝损伤和肝组织中SIRT1和PGC-1α表达的影响

目的:观察糖肾方对糖尿病(DM)肝损伤的作用及其对肝组织沉默信息调节因子1(SIRT1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)表达的影响。方法:采用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素(STZ)诱导建立2型糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为DM模型组及糖肾方低、中、高剂量组,另设正常对照组。糖肾方给药12周后检测空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量;放射免疫法检测血清胰岛素(FINS)的水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);ELISA技术检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1(IL-1)含量;羟胺法和TBA法分别测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量;Western blot技术测定SIRT1和PGC-1α蛋白的表达;HE染色和Masson染色法检测肝组织病理变化。结果:与正常对照组相比,DM模型组血清FBG、TG、ALT、AST、FINS、HOMA-IR、TNF-α和IL-1均明显升高(P0.01);肝组织MDA含量升高,SOD活性及SIRT1和PGC-1α蛋白表达降低(P0.01);病理结果显示肝细胞呈明显脂肪变,局灶性坏死伴炎细胞浸润,门管区和小叶间可见胶原纤维增生。与DM模型组比较,糖肾方各治疗组FBG、TG、FINS、HOMA-IR、ALT和AST均明显降低(P0.05);肝脏组织损伤、炎症和纤维化程度明显改善;肝组织MDA水平降低,SOD活性及SIRT1和PGC-1α蛋白表达升高(P0.05)。结论:糖肾方可能通过促进SIRT1和PGC-1α蛋白表达来改善胰岛素抵抗和氧化应激,从而减轻糖尿病肝损伤。     

组织蛋白酶B在大鼠肝脏的分布

目的研究组织蛋白酶B(cathepsins B,CB)在正常SD大鼠肝脏组织中的表达。方法采用免疫荧光组织化学的方法,观察CB在大鼠肝脏组织中的分布。结果 CB免疫反应阳性细胞主要分布在肝细胞、枯否细胞、肝窦内皮细胞,枯否细胞、肝窦内皮细胞的免疫活性比较强,肝细胞的免疫活性比较弱,而肝星状细胞没有CB免疫活性。阳性物质分布于细胞质,细胞核阴性。结论 CB在大鼠肝脏组织的表达提示其可能在肝脏起着非常重要的作用。     

骨髓间充质干细胞成骨分化过程中碱性磷酸酶基因表达含量的变化

目的:提取鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行成骨诱导并对BMSCs成骨分化过程中碱性磷酸酶(ALP)的表达量进行定量监测,揭示BMSCs在成骨分化过程中活性的变化。方法:采用全骨髓贴壁法提取鼠BMSCs,培育、扩增至第3代时,以地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C为主要成分配制诱导培养基进行成骨诱导3周。在成骨诱导过程中,通过实时荧光定量(qRT-PCR)探针法对目标细胞的ALP表达量进行实时监测。结果:成骨诱导BMSCs,经显微镜观察、ALP染色、矿化结节染色等检测方法证实诱导成功。qRT-PCR实时检测的ALP表达量在1周后快速上升并维持1周的高值,2周后快速下降至初始值。结论:采用全骨髓贴壁法提取、培养的BMSCs,利用经典的成骨诱导方法可分化为成骨细胞。成骨分化过程中,目标细胞的成骨活性1周后开始快速增强,并可在高水平维持1周,2周后活性开始下降。     

人血小板裂解液促进人羊膜来源间充质干细胞的成骨分化

目的:研究人血小板裂解液(HPL)对羊膜来源间充质干细胞(AMMSCs)成骨分化的作用。方法:分别以含7%HPL(HPL组)和10%胎牛血清(FBS,FBS组)的LG-DMEM培养介质扩增AMMSCs,比较两组扩增AMMSCs效率及其免疫表型SSEA-3和SSEA-4的表达差异。使用MSCs成骨分化培养液诱导AMMSCs成骨,对比观察两组钙盐沉积量、钙化结节、碱性磷酸酶(ALP)活性;提取两组成骨诱导后AMMSCs总RNA,采用RTPCR检测成骨分化调节因子RUNX-2和ALP mRNA相对表达量。结果:HPL组扩增速度快于FBS组;AMMSCs的SSEA-3和SSEA-4表达较FBS组明显下调(P0.05)。HPL组钙盐沉积量、钙化结节数量、ALP活性以及RUNX-2和ALP mRNA表达量均明显高于FBS组(P均0.05)。结论:含HPL培养介质可促进AMMSCs成骨分化。     

乙二醛酶Ⅰ在肝再生中的作用研究进展

代谢产生的毒性物质甲基乙二醛(MG)可通过乙二醛酶系转化成非毒性物质D-乳酸.再生肝等正常生理性增生以及肝癌等病理性增生组织中,乙二醛酶Ⅰ (GLO1)的表达和活性增加,可提高肝脏的解毒能力和应激反应能力,促进肝细胞存活和增殖,保护肝脏细胞免受凋亡.     

PAI-1和TIMP-1基因在肾小管间质纤维化中的表达及HGF的干预作用

目的:研究纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)和组织基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)基因表达与梗阻性肾病小管间质纤维化(TIF)进展的关系及肝细胞生长因子(HGF)的干预作用。方法: 60只Wistar大鼠随机分为4组:正常大鼠组、假手术组、单侧输尿管梗阻组和HGF治疗组,分别于模型3 d、7 d、14 d、21 d处死大鼠。采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测PAI-1和TIMP-1 mRNA表达水平;底物酶谱法检测肾脏MMP2、9活性的变化,测定肾组织羟脯氨酸含量判断纤维化程度。结果:梗阻肾组织PAI-1和TIMP-1 mRNA表达显著高于对照组,并伴有明显的梗阻肾MMP2,MMP9活性低于和羟脯氨酸含量高于对照组,而21 d HGF治疗组PAI-1和TIMP-1 mRNA表达明显下调,MMP2,MMP9活性高于和肾组织羟脯氨酸含量少于对照组。结论: PAI-1、TIMP-1 mRNA表达增高是小管间质ECM降解减少的主要原因之一,也是造成TIF加重的重要因素,而HGF可拮抗这一进程,减轻小管间质纤维化。     

谷胱甘肽S—转移酶异质性研究

本文以不同状态的大鼠肝细胞为对象,采用生化和病理学方法研究了谷胱甘肽S-转移酶(GST)的异质性。根据GST同工酶酶谱分忻、GST活性改变状况和GST同工酶表达活性的改变等结果,表明GST无论在正常状态或病理状态下均具有显著的异质性。