肥大细胞类胰蛋白酶与支气管哮喘

支气管哮喘 (以下简称哮喘 )一直被认为与I型变态反应密切相关 ,而肥大细胞是介导I型变态反应的重要成分之一。肥大细胞的活化信号主要来自变应原与IgE的桥联 ,但神经肽及其它因素也能使肥大细胞活化。活化肥大细胞脱颗粒 ,释放出颗粒中预先合成和新合成的各种介质 ,如类胰蛋白酶、类糜蛋白酶、组胺、肝素等。这些介质作用于靶分子、靶细胞和靶组织 ,引起哮喘在病理、病理生理等方面的变化。目前普遍认为哮喘是一种复杂的慢性呼吸道炎症 ,其主要特征为对特异性和非特异性刺激物诱发的气道高反应性、炎症细胞浸润及气道重塑[1,2 ,2 1] 。虽…     

类糜蛋白酶抑制剂对人大肠肥大细胞类胰蛋白酶释放的影响

目的：研究类糜蛋白酶抑制剂对人大肠肥大细胞释放类胰蛋白酶的影响。方法：人大肠组织经酶消化后，细胞成份有全HBSS重新悬浮。激发过程在LP4试管中、37℃条件下完成。类胰蛋白酶水平用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法测定。结果：促分泌剂抗IgE抗体和CI在培养15分钟和35分钟时可明显刺激人大肠肥大细胞类胰蛋白酶的释放，在相同实验体系中，类糜蛋白酶抑制剂ZIGPFM、TPCK和α1-抗胰蛋白酶无明显刺激人大肠肥大细胞释放类胰蛋白酶的作用。类糜蛋白酶抑制剂均可以剂量依赖性的方式抑制抗IgE抗体诱导的类胰蛋白酶的释放，最大浓度的ZIGPFM（1 μmol／ml）、TPCK（80 μmol／ml）和α1-抗胰蛋白酶（30 μmol／ml）可分别抑制37％、40％和36．6％的类胰蛋白酶释放。在37℃条件下同大肠细胞预培养20分钟与无预培养相比，ZIGPFM和TPCK对抗IgE抗体诱导的类胰蛋白酶释放的抑制作用略增强。Amastatin对抗IgE抗体诱导的类胰蛋白酶的释放无作用。类糜蛋白酶抑制剂均可以剂量依赖性的方式抑制CI诱导的类胰蛋白酶的释放，抑制范围在23％-35．3％。在37℃条件下同大肠细胞预培养20分钟与无预培养相比，ZIGPFM对CI诱导的类胰蛋白酶释放的抑制作用有增强，TPCK则无此特点。结论：类糜蛋白酶抑制剂可抑制人大肠肥大细胞IgE依赖性和非依赖性类胰蛋白酶的释放，提示类糜蛋白酶抑制剂可望成为炎症性肠病或其它肥大细胞相关疾病的一个新的治疗途径。     

绵羊肥大细胞中类胰蛋白酶的证实

用甲苯胺蓝和阿尔辛蓝常规组织化学方法及特异性酶底物鉴定人肥大细胞类胰蛋白酶的酶组织化学技术，采用小鼠抗人肥大细胞类胰蛋白酶单克隆抗体，（ＡＡ１、ＡＡ３和ＡＡ５）通过间接免疫过的经物酶技术对绵羊肥大细胞的组织化学特性进行研究，酶组织化学技术及免疫组织化学技术均首次证实了绵羊肥大细胞颗粒中含有类胰蛋白酶，且该酶可作为绵羊肥大细胞的特异性标志，对于绵羊肥大细胞的常规组织化学染色，Ｃａｒｎｏｙ液及中性缓门     

产毒性大肠杆菌肠毒素对及豚鼠回肠上皮细胞的影响

产毒性大肠杆菌 (ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ,ＥＴＥＣ)是引起人和家畜急性腹泻病的主要病原菌之一[1] 。ＥＴＥＣ的致病主要与肠毒素有关。它能产生两类肠毒素 :不耐热肠毒素(ｈｅａｔ ｌａｂｉｌｅｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ ,ＬＴ)和耐热肠毒素 (ｈｅａｔ ｓｔａｂｌｅｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ,ＳＴ)。为进一步探讨ＥＴＥＣ肠毒素的作用机制 ,本研究观察了ＬＴ和ＳＴ对豚鼠离体回肠上皮细胞的影响。1　材料与方法1 1　豚鼠 :为非纯种短毛白色豚鼠 ,体重 35 0～ 45 0ｇ ,雌雄不限 ,由本校动物所提供。1 2…     

CFSE标记分析小鼠胸腺及末梢T淋巴细胞的活化分裂

Ｔ细胞表面受体 (ＴＣＲ)识别抗原提呈细胞(ＡＰＣ)提呈的抗原肽 ＭＨＣ分子复合物 ,产生第一信号 ,Ｔ细胞及ＡＰＣ表面的协同刺激分子与配体的结合产生第二信号 ,双信号使Ｔ细胞活化、增殖及分化 ,双信号的强度及信号持续时间决定细胞的活化及进行增值的程度〔1〕。我们采用ＣＦＳＥ(5 ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏ ｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｄｉａｃｅｔａｔｅｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌｅｓｔｅｒ)标记细胞 ,结合流式细胞仪分析的方法 ,分析了小鼠外周Ｔ淋巴细胞在不同刺激下的分裂情况 ,并与其胸腺Ｔ细胞进行了比较 ,结果报告如下 :材料与方法动…     

肥大细胞的分子生物学及其生物学效应新进展

肥大细胞研究的新进展包括：①发现并克隆了肥大细胞表面新的受体ｇＰ４９受体家族和多种肥大细胞蛋白酶；并对肥大细胞表面Ｃ－ｋｉｔＲ和ＩｇＥ ＦｃεＲＩ和介导效应有了新的认识，其机制是与早期应答基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ的表达有关。②肥大细胞具有产生多种细胞因子的特性，并通过其分泌的细胞因子如ＴＮＦα，ＩＬ－１等导致血管通透性增加和淋巴细胞浸润，从而参与ＬＰＲｓ炎症反应过程；另外亦发现ＴＮＦα可能是肥大     

人肥大细胞类糜蛋白酶基因的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

目的:克隆人肥大细胞类糜蛋白酶cDNA,并进行原核表达,制备重组蛋白免疫家兔,制备兔抗类糜蛋白酶多克隆抗体。方法:用RT-PCR技术克隆类糜蛋白酶cDNA,用Gateway技术构建表达载体,以大肠杆菌为宿主,用L-阿拉伯糖诱导重组肥大细胞类糜蛋白酶的表达,经Ni-NTA-Agarose柱层析纯化后,以其为免疫原制备兔抗类糜蛋白酶多抗,并以间接ELISA测定抗体效价,以Westernblot鉴定抗体的特异性。结果:成功地克隆了人肥大细胞类糜蛋白酶cDNA,并在大肠杆菌BL21-AI中表达成功,用纯化的重组类糜蛋白酶为免疫原,免疫家兔制备了兔抗类糜蛋白酶抗体,ELISA结果显示效价达1:12800,Western blot分析表明该抗体能特异结合类糜蛋白酶。结论:以纯化的重组类糜蛋白酶为免疫原,成功地制备了效价及特异性较高的兔抗类糜蛋白酶抗体,为进一步建立简便的类糜蛋白酶检测方法及研究类糜蛋白酶生物学功能奠定了良好的基础。     

肥大细胞的分子生物学及其生物学效应新进展

肥大细胞研究的新进展包括：①发现并克隆了肥大细胞表面新的受体ｇＰ４９受体家族和多种肥大细胞蛋白酶；并对肥大细胞表面Ｃ－ｋｉｔＲ和ＩｇＥＦｃεＲＩ和介导效应有了新的认识，其机制是与早期应答基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ的表达有关。②肥大细胞具有产生多种细胞因子的特性，并通过其分泌的细胞因子如ＴＮＦα，ＩＬ－１等导致血管通透性增加和淋巴细胞浸润，从而参与ＬＰＲｓ炎症反应过程；另外亦发现ＴＮＦα可能是肥大细胞的一种新类型的介质；对肥大细胞和白细胞分泌的细胞因子级联反应的深入了解可能有一定的临床意义。     

小鼠胸腺基质细胞株中细胞多核化现象探讨

在建立小鼠胸腺基质细胞株时发现小鼠胸腺基质细胞株ＭＴＳＣＢ和ＭＴＳＣＣ自发产生多核细胞及单核巨细胞，对上述细胞进行了非特异性酯酶（ＮＳＥ）、酸性磷酸酶（ＡｃＰ）和琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）反应，多核细胞及单核巨细胞的ＮＳＥ、ＡｃＰ和ＳＤＨ活性均强于单核小细胞。在ＭＴＳＣＢ中多核细胞的百分数为１．１％；ＭＴＳＣＣ中多核细胞为０．６％，实验中对一核细胞和多核细胞出现的百分数与Ｐｏｉｓｓｏｎ分布的理论频率进     

蛋白酶抑制剂对肥大细胞类胰蛋白酶分泌的影响

目的 探讨蛋白酶抑制剂和组胺对肥大细胞类胰蛋白酶分泌的影响。方法 扁桃体组织经酶消化后，细胞成份用全HBSS重新悬浮，肥大细胞激发和抑制剂作用的试验在37℃条件下完成。类胰蛋白酶水平用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法测定。结果 鱼精蛋白具有刺激人类扁桃体肥大细胞释放类胰蛋白酶的作用，其分泌量可高达基础分泌量的5倍。高浓度TLCK和TPGK可抑制抗-IgE诱导的类胰蛋白酶释放，TLCK在有否预培养的情况下均能抑制钙离子导入剂（cal-cium ionophore,CI)诱导的类胰蛋白酶释放，而TPCK则只有在20min预培养后才能显示此作用。结论 TLCK和TPCK抑制IgE依赖性和非依赖性类胰蛋白酶释放提示具有胰蛋白酶和糜蛋白酶活性的酶参与肥大细胞的激活-分泌偶联过程。     

重组分枝杆菌噬菌体检测分枝杆菌活力的研究

重组的可表达荧光素酶的分枝杆菌噬菌体,由于可特异地感染宿主菌———分枝杆菌并在宿主菌中快速增殖,同时表达荧光素酶,因此通过检测荧光素酶的浓度即可快速检测分枝杆菌的活力。本实验比较了温敏噬菌体Ｐｈａｇｅ88和非温敏株Ｐｈａｇｅ40对不同分枝杆菌:卡介苗(ＢＣＧ)、结核分枝杆菌Ｈ37Ｒａ(ＡＴＣＣ25177)、Ｈ37Ｒｖ(ＡＴＣＣ36801)、耻垢分枝杆菌(Ｍ.ｓｍｅｇｍａｔｉｓ)ｍｃ155(ＡＴＣＣ19420)活力测定的灵敏度,并对大肠杆菌(Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ)(ＡＴＣＣ25922)的发光值进行了测量,以确定该方法的特异性。本实验所用的…     

小鼠胸腺基质细胞系的分型

为鉴定８株小鼠胸腺基质细胞（Ｔｈｙｍｉｃｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓ，Ｔｓｃ）系的类型及本室研制出的抗小鼠ＴＳＣ单抗的价值，我们采用细胞ＥＬＩＳＡ和免疫荧光法对３０种自制的及国外引进的ＭＴＳ系列抗小鼠ＴＳＣ单抗与８株ＭＴＳＣ细胞系的反应性进行了观察，结果表明：①ＭＴＳＣ１，２为髓质型胸腺上皮细胞（Ｔｈｙｍｉｃｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ＴＥＣ）的不同亚群；ＭＴＳＣ３，５，６，７，８为皮髓质交界型ＴＥＣ的不同亚群。②在不同类型的ＴＳＣ间及胸腺细胞和ＴＳＣ间，均存在共同抗原。③ＭＴＳ系列ＭｃＡｂ不能鉴定的ＭＴＳＣ系，能用本室自制的抗小鼠ＴＳＣＭｃＡｂｓ定型。     

类胰蛋白酶与疾病

70年代以来 ,人们用胰蛋白酶 (ｔｒｙｐｓｉｎ)的组织酶　　 1998年 ,Ｐｅｒｅｉｒａ等[3] 解决了人 β -类胰蛋白酶的晶体结构 ,为一指环状同源四聚体。每个四聚体有如舒张支气管的神经肽、血管活性肠肽 (ｖａｓｏａｃｔｉｖｅｉｎ ｔｅｓｔｉｎａｌｐｅｐｔｉｄｅ ,ＶＩＰ)和组氨酸甲硫氨酸肽 (ｐｅｐｔｉｄｅｈｉｓ 的气道平滑肌和成纤维细胞负担增加有关 ,由于肌细胞和成纤维细胞[10 ] 的增生 ,这可能与哮喘病人以上提到的β -类胰蛋白酶的可能作用外 ,过敏性疾病病人体内含量的升高也引起了人们的注意。使用(ＫＩＴＷ/ＫＩＴＷ -ｖ)中…     

蛋白酶激活受体2介导肥大细胞IL-4分泌

目的:探讨蛋白酶激活受体2(Proteinase activated receptor-2,PAR-2)的激活对肥大细胞P815介质分泌的影响.方法:肥大细胞培养后用PAR-2激动肽,胰蛋白酶、类胰蛋白酶、弹性蛋白酶结合PAR-2拮抗肽激发肥大细胞,收集上清并用ELISA方法检测组胺、IL-4和IL-6的水平.结果:PAR-2激动肽、胰蛋白酶、类胰蛋白酶以浓度依赖的方式促进肥大细胞P815分泌IL-4.PAR-2拮抗肽能阻断胰蛋白酶和类胰蛋白酶引起的肥大细胞IL-4分泌(P<0.05).胰蛋白酶、类胰蛋白酶以及PAR-2激动肽对肥大细胞IL-6的分泌和组胺释放无明显影响.弹性蛋白酶对肥大细胞IL-4、IL-6分泌及组胺释放功能无影响.结论:PAR-2的激活介导肥大细胞P815分泌IL-4;胰蛋白酶和类胰蛋白酶刺激肥大细胞IL-4分泌的发现为肥大细胞激活的自我放大机制提供了新的理论依据.     

肥大细胞亚群

肥大细胞在不同种属、同一种属的不同个体、同一个体的不同部位及同一部位的不同细胞都存在着异质性。啮齿动物(如大、小鼠等)的肥大细胞,主要根据其分布的不同,可分为两大亚群:粘膜肥大细胞和结缔组织肥大细胞。人的肥大细胞,主要根据其所含糜蛋白酶(Chymuse)和类胰蛋白酶(Trptose)情况的不同分为两大亚群:TC 肥大细胞和T 肥大细胞。两大亚群在解剖定位、组化染色、生化和功能等方面都有很大不同。肥大细胞亚群研究的不断深入,对于理解由肥大细胞参与急慢性炎症反应和变态反应性疾病至关重要。     

头孢哌酮钠/舒巴坦钠的药理、毒理与临床研究概述

头孢哌酮钠 /舒巴坦钠是头孢哌酮钠 (ｃｅｆｏｐｅｒａａ ｚｏｎｅ ,ＣＰＺ)与舒巴坦钠 (ｓｕｌｂａｃｔａｍ ,ＳＢＴ)以 1∶1混合制成的供注用 ,最初由美国辉瑞公司开发 ,商品名为舒普深 (ｓｕｌｐｅｒａｚｏｎｅ)。ＳＢＴ对金葡菌和多数革兰阴性菌产生的 β 内酰胺酶有很强的、不可逆的抑制的作用。ＳＢＴ仅对淋球菌、脑膜炎球菌及不动杆菌有较强作用外 ,对其他的细菌作用极差。ＳＢＴ与青霉素类及头孢菌素类合用 ,通过ＳＢＴ对 β 内酰胺酶的抑制可出现明显的协同抗菌作用 ,并拓宽抗菌谱。本文综合介绍头孢哌酮钠 /舒巴坦钠的临床前药理…     

细胞凋亡信号转导的分子研究新进展

细胞凋亡是目前生物医学领域中的一个重要研究课题 ,阐明细胞凋亡的分子机制可对一些疾病的防治 (如肿瘤、神经退行性疾病等 )产生积极影响。从文献检索的结果来看 ,目前细胞凋亡的研究热点已转移到发现新的凋亡分子、解析细胞凋亡的信号转导过程上。作者旨在综述这方面的研究进展。1　Ｃａｓｐａｓｅｓ在细胞凋亡这的作用Ｃａｓｐａｓｅｓ是半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶 (ｃｙｓｔｅｉｎｙｌａｓｐａｒ ｔａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ)的简称 ,是一类位点特异性蛋白水解酶 ,在细胞凋亡的信号转导中起着重要作用 ,处于信号转导…     

先天性巨结肠RET基因的突变

酪氨酸激酶受体基因（ｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅｇｅｎｅ，ＲＥＴ基因）被定位于染色体１０ｑ１１．２上，其突变可导致３种多发性内分泌瘤综合征和先天性巨结肠的发生。为了探讨ＲＥＴ基因突变在先天性巨结肠发病中的作用，采用多聚酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）及单链ＤＮＡ构象多态性分析（ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅｄＤＮＡｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＳＣＰ）的方法，对３４例散发先天性巨结肠基因组ＤＮＡ进行ＲＥＴ基因第６外显子突变筛查，并对电泳条带变异的ＰＣＲ产物进行了直接核苷酸序列分析。发现１例为ＧＡＣＴＣＡＧＡＣ→ＧＡＡＴＣＡＡＡＣ碱基突变，导致两个氨基酸发生改变。表明ＲＥＴ基因突变与先天性巨结肠发病有关。     

灵杆菌LPS的抑瘤作用研究

灵杆菌ＬＰＳ (ＢａｃｔｅｒｉｕｍＰｒｏｄｉｇｉｏｓｕｍＬＰＳ ,ＢＰ ＬＰＳ)是从非致病性革兰氏阴性菌 (产色型灵杆菌ＢＰ Ｓ0 0 3号 )中提取的一种活性物质。以三氯乙酸法(ＴｒｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃＡｃｉｄ ,ＴＣＡ )及酚水法(ＰｈｏｎｅｌＷａｔｅｒ,ＰＷ )两种不同工艺提取的ＢＰ ＬＰＳ ,进行了抑瘤试验。产色型灵杆菌ＢＰ Ｓ0 0 3号 (来源于黑龙江省应用微生物研究所 )作为菌种 ,经发酵后收集菌体 ,分别经ＴＣＡ法与ＰＷ法提取纯化得ＢＰ ＬＰＳ。ＴＣＡ法提取物简称ＢＰ(Ｔ) ＬＰＳ ;ＰＷ法提取物简称ＢＰ(Ｐ) ＬＰＳ。…     

变态反应性哮喘炎症的可溶性标志

在变态反应性哮喘炎症的发生、发展中，嗜酸性粒细胞、肥大细胞、中性粒细胞和Ｔ细胞等均起了重要作用。检测血清中这些炎细胞的可溶性标志，嗜酸性粒细胞脱颗粒产生的ＥＣＰ，ＥＰＯ，ＥＰＸ／ＥＰＮ，肥大细胞释放的类胰蛋白酶，中性粒细胞的ＭＰＯ，４０－ＫＤａ蛋白，Ｔ细胞的活化标志ＩＬ－２Ｒ及其它可溶性标志如细胞因子，可溶性粘附分子等物质的水平对于确定变态反应性嗜喘炎症及临床均具有重要意义。