50例肝癌患者外周血淋巴细胞亚群比例与肝功能损伤的关系

目的探讨肝癌患者外周血CD3~+T淋巴细胞、CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞、NK细胞亚群与肝功能损伤的关系。方法回顾性分析上海交通大学医学院附属仁济医院50例肝癌住院患者(原发性肝癌10例,继发性肝癌30例,合并其他肝脏疾病10例)外周血淋巴细胞亚群比例。以10例合并其他肝脏疾病患者作为疾病对照组,40名健康体检者作为健康对照组,结合患者的肝功能指标进行差异性和相关性分析。结果原发性肝癌患者淋巴细胞亚群比例与合并其他肝病组及健康对照组比较差异均无统计学意义。继发性肝癌患者CD4~+T淋巴细胞比例显著低于健康对照组[(29.18±2.11)%比(35.68±0.56)%,P0.05],NK细胞比例显著高于健康对照组[(21.45±1.69)%比(15.78±0.72)%,P0.01],其淋巴细胞亚群比例与合并其他肝病组比较差异均无统计学意义。原发性肝癌患者肝细胞损伤者CD4~+T淋巴细胞比例显著高于未损伤者[(45.90±5.96)%比(30.93±1.76)%,P0.05],CD4~+T淋巴细胞比例与ALT、AST均呈高度正相关(r=0.941、r=0.903,均P0.01),肝脏代谢功能受损者CD8~+T细胞比例显著低于正常者[(27.00±4.63)%比(34.01±7.98)%,P0.05],CD8~+T细胞比例与STB、PT均呈显著负相关(r=-0.596、r=-0.577,均P0.05)。继发性肝癌患者肝细胞损伤者CD4~+T细胞比例显著低于未损伤者[(23.22±3.28)%比(33.24±2.29)%,P0.05],CD8~+T细胞比例显著高于未损伤者[(34.70±4.26)%比(25.84±1.99)%,P0.05],CD4~+/CD8~+比值与ALT、AST均呈显著负相关(r=-0.470、r=-0.424,均P0.05),肝脏代谢功能受损者CD4~+T细胞比例显著高于正常者[(35.64±2.84)%比(25.56±2.57)%,P0.05],CD4~+/CD8~+比值与STB、PT均呈显著正相关(r=0.400、r=0.481,均P0.05)。结论肝癌患者外周血淋巴细胞亚群比例与肝功能损伤密切相关,机体免疫平衡状态的维持对于保护肝癌患者肝脏功能具有重要意义。     

老年特发性膜性肾病患者的临床病理特点及其免疫系统功能的变化

目的:特发性膜性肾病(IMN)是老年肾病综合征常见病因.本文旨在分析阐明老年IMN临床病理特点及外周血淋巴细胞亚群的变化. 方法:根据年龄,选取两组IMN患者,共83例,其中老年组43例,年龄≥65岁;非老年组40例,年龄<50岁,流式细胞仪测定外周血T淋巴细胞亚群(CD3~+、CD4~+、CD8~+细胞)、B淋巴细胞(CD20~+细胞)和调节性T细胞(CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞),观察肾组织病理改变.40例健康志愿者作为对照. 结果:(1)老年组男性28例,女性15例,年龄65～78岁,平均(67.35±3.70)岁,非老年组男性26例,女性14例,年龄15～50岁,平均(38.08±7.91)岁,两组男女比例无明显差别,老年组患者高血压发生率升高(67.44%vs27.5%,P<0.01).(2)老年组和非老年组相比,24h尿蛋白定量无明显差别,但镜下血尿发生率老年组明显增加(55.81%vs 22.5%,P<0.01);老年组.肾小管功能受损明显,表现为尿NAG酶增高[(42.26±23.99)u/g·cr vs(29.80 ±16.53)u/g·cr,P<0.05],尿渗量降低[(522.62±138.02)mOsm/Kg·H_2O vs (642.0±136.81)mOsm/Kg·H_2O,P<0.01];老年组BUN和血清肌酐水平均较非老年组明显升高[(6.3±2.6)mmol/L vs(4.93±1.87)mmol/L,P<0.01],[(72.5±14.1)μmol/L vs (65.4±17.7)μmol/L,P<0.05].(3)老年组患者肾组织小管间质慢性化病变较非老年患者明显(P<0.01),球性硬化发生率高(P<0.05).(4)与正常对照相比,老年组和非老年组患者均存在外周血B淋巴细胞计数显著升高,T调节细胞计数显著降低,两组之间无明显筹别;非老年组外周血CD4~+、CD8~+细胞计数及CD4~+/CD8~+比值均较正常无照无显著筹别,老年组外剧血CD4~+细胞计数较正常对照组及非老年组均无明显差别,但CD8~+细胞计数较正常对照组及非老年组均明显下降[(328±106)cells/μl vs(464±200)cells/μl,P<0.01],[(328±106)cells/μl vs(430±200)cells/μl,P<0.01],CD4~+/CD8~+比值均明显升高(2.40±0.97 vs 1.52±0.48,P<0.01),(2.40±0.97 vs 1.81±0.89,P<0.01). 结论:老年IMN患者高血压,镜下血尿发生率升高,肾小管功能受损明显,肾小球硬化及肾小管间质慢性化病变严重,老年IMN患者治疗反应差,预后不佳可能与此有关.老年人IMN患者除与非老年患者同样表现出调节T细胞水平降低,B淋巴细胞水平上调外,CD8~+细胞水平下降,CD4~+、CD8~+比例失衡是老年人IMN患者免疫功能异常的特点.     

病毒性心肌炎患者外周血T淋巴细胞亚群及B淋巴细胞的研究

目的: 测定不同时期病毒性心肌炎(VMC)患者T淋巴细胞亚群及B淋巴细胞的数量,并同时检测患者血清心肌损害标志物心肌肌钙蛋白I(cTnI)的水平,探讨其在VMC发病机制中的作用。方法: 采用流式细胞术检测不同时期VMC患者(n=126)外周血CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+以及CD19+的表达,并设正常人群作为对照组(n=50)。结果: 急性期（<3个月）患者CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+以及CD19+与对照组相比差异显著。<1个月以CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+为著（P<0.01;P<0.01）。病程<7 d的患者与对照组相比,CD4+CD45RA+值的降低具有显著性(P<0.01);CD4+CD45RO+值下降明显(P<0.01)。而病程7~14 d、14~21 d及21~30 d的患者CD4+CD45RA+值、CD4+CD45RO+值及CD19+值与对照组相比差异均有统计学意义,CD4+CD45RO+值恢复较快。CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+在发病14 d内的患者与对照组差异无统计学意义;而14~30 d的患者与对照组相比差异有显著性。发病1~3个月患者以CD19+为著（P<0.01）。急性期CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+细胞的比例失衡。恢复期（3~12个月）患者CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+以及CD19+、CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+细胞的比例与对照组相比差异无显著性。结论: VMC患者感染初期（<1个月）以T淋巴细胞亚群异常为主,感染后期（1~3个月）以B淋巴细胞异常较为显著,以上两时期均存在CD4+CD45RA+/ CD4+CD45RO+细胞比例失衡。恢复期（3~12个月）T淋巴细胞及B淋巴细胞逐渐恢复至正常。     

特发性膜性肾病患者调节性T细胞和B淋巴细胞的变化及其临床意义

目的:观察特发性膜性肾病(IMN)患者外周血调节性T细胞、B淋巴细胞亚群以及肾组织中B淋巴细胞浸润分布的变化,探讨与膜性肾病(MN)发病机制及临床表现的关系. 方法:66例(男性45例,女性21例,年龄15～71岁)经肾活检确诊为MN,排除各种继发因素,近期未使用大剂量免疫抑制剂的IMN患者,流式细胞仪测定外周血调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞)、B淋巴细胞(CD20+细胞)和T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+细胞)的计数;另采用免疫组织化学方法检测患者肾组织中B淋巴细胞数量及分布.40例年龄、性别匹配的健康志愿者作为对照.根据患者尿蛋白水平,将其分为大量蛋白尿组(尿蛋白定量≥3.5 g/d)及非大量蛋白尿组(尿蛋白定量＜3.5g/d).比较IMN患者外周血调节性T细胞,B淋巴细胞及T淋巴细胞亚群与正常对照的差别,以及IMN患者中大量蛋白尿者和非大量蛋白尿者之间上述淋巴细胞亚群水平的差异及其可能的临床意义. 结果:(1)IMN患者外周血调节性T细胞计数较正常对照组显著降低[(23.2±10.7) cells/μl vs (31.4±7.29) cells/μl,P<0.01].(2)与正常对照组比较,IMN患者外周血B淋巴细胞计数显著升高[(208±111) cells/μl vs (137±64) cells/μl,P<0.01].(3)IMN患者和正常对照组相比,其CD4+细胞计数有升高趋势[(715±267) cells/μl vs (657±214) cells/μl,P>0.05],CD8+细胞计数有降低趋势[(393±178) cells/μl vs (464±200) cells/μl,P>0.05],而CD4+/CD8+比值较正常对照显著升高(2.04±0.92 vs 1.52±0.48,P<0.01).(4)大量蛋白尿组B淋巴细胞计数明显高于非大量蛋白尿组[(246±117) cells/μl vs (186±108) cells/μl,P<0.05],但两组之间调节性T细胞、CD4+细胞、CD8+细胞计数及CD4+/CD8+比值均无统计学差异(P>0.05).(5)IMN患者肾组织中B淋巴细胞浸润数量较正常对照升高,伴肾组织B淋巴细胞灶性聚集者其尿NAG酶水平升高. 结论:IMN患者表现出调节性T细胞水平降低,B淋巴细胞水平上调和CD4+/CD8+细胞比值的偏移.外周血B淋巴细胞水平升高与IMN患者大量蛋白尿关系密切,肾组织中B淋巴细胞浸润数目较正常对照升高,存在局灶B淋巴细胞聚集的患者小管间质急性损伤加重.对IMN患者B淋巴细胞的数目和组织分布进行观察,有可能为监测病情、指导治疗提供帮助.     

燃煤型砷中毒患者外周血淋巴细胞表型特征及临床意义

目的 探讨燃煤型砷中毒患者免疫功能改变及其规律,为肿瘤风险评估提供依据.方法 70例患者均系贵州省黔西南州燃煤型砷中毒高发区既往经临床及实验室确诊的燃煤型砷中毒病例,其中男性44例,女性26例,年龄24～71岁,平均年龄41岁.按病程及是否癌变分为4组:<10年组,23例;10～19年组,21例;≥20年组,20例;癌变组(病程≥20年),6例.对照组为健康职工和大学生自愿者,26例.采静脉血,流式细胞仪分析各组人群外周血淋巴细胞亚群CD3+(总T细胞)、CD3+D4+(诱导性/辅助性T细胞)、CD3+CD8+(抑制性/细胞毒性T细胞)、CD19+(B淋巴细胞)和CD56+CD16+(自然杀伤细胞,NK)细胞组成比例.并对淋巴细胞膜人类白细胞组织相容性抗原-DR(HLA-DR)、细胞表面抗原(CD)25和CD38分子表达率进行检测.结果 <10年组、10～19年组、≥20年组和癌变组人群外周血CD3+细胞百分率分别为(63.76±9.32)%、(55.63±12.97)%、(51.00 ±12.23)%、(49.83 ±9.89)%,均低于对照组[(68.10±8.62)%],组间比较差异有统计学意义(F=12.862,P<0.05).CD3+CD4+细胞比例上述各组分别为(31.35±6.62)%、(28.38±8.66)%、(24.13±6.46)%、(19.17±4.96)%,明显低于对照组[(34.28±7.32)%],组间比较差异有统计学意义(F=10.455.P<0.05).≥20年组和癌变组CD19+细胞百分率[(9.00±5.32)%、(9.00±3.29)%]低于对照组和<10年组[(11.80±3.43)%、(12.35 ±4.53)%],组间比较差异有统计学意义(P<0.05);其余各组之间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05).癌变组淋巴细胞CD25和CD38表达率[(17.96±4.98)%、(41.38±8.54)%]明显高于对照组[(13.10±3.38)%、(28.60±5.51)%].组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05);HLA-DR表达率在10～19年组[(18.20±6.25)%]明显高于对照组[(10.72±7.06)%]和<10年组[(11.78±5.13)%],≥20年组[(20.30±8.01)%]与癌变组[(21.82±10.97)%]在同一水平.结论 砷所致机体细胞免疫功能削弱可能是燃煤型砷中毒患者皮肤癌变的重要机制,细胞免疫功能状态可作为燃煤砷中毒患者皮肤癌变的预警信号.     

日本血吸虫感染小鼠肝脏和脾脏淋巴细胞及其表面程序性死亡配体1表达动态变化的研究

目的初步研究日本血吸虫感染对小鼠肝脏和脾脏淋巴细胞数量及其表面程序性死亡配体1(PD-L1)功能的影响。方法 30只BALB/c小鼠随机分为感染组和未感染组,每组15只,感染组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(20±2)条/鼠。感染后2、 4、 6、 8和10周,分别随机取两组小鼠各3只,颈椎脱臼处死小鼠,分离小鼠肝脏和脾脏的淋巴细胞,采用流式细胞术检测CD3~+T细胞(CD3~+CD19~-)、 CD19~+B细胞(CD3~-CD19~+)、 CD4~+T细胞(CD3~+CD19~-CD4~+CD8~-)和CD8~+T细胞(CD3~+CD19~-CD4~-CD8~+)淋巴细胞比例的动态变化,以及这些细胞群上的PD-L1表达变化。组间差异比较采用ANOVA检验。结果感染日本血吸虫后4～8周,小鼠肝脏和脾脏中的CD3~+T细胞、 CD19~+B细胞和CD4~+T细胞比例均低于未感染组(P 0.05或0.01,P 0.05)。感染日本血吸虫后6周的小鼠肝脏中CD8~+T细胞比例增加[(38.03±7.41)%],与未感染组[(23.37±3.98)%]比较,差异有统计学意义(P 0.01);但脾脏中无明显变化。在感染日本血吸虫后6周,小鼠肝脏中CD19~+B细胞上PD-L1的表达被显著抑制[(7.25±3.47)%],与未感染组[(22.77±8.90)%]比较,差异有统计学意义(P 0.01);脾脏相对肝脏较晚,感染后8周CD19~+B细胞上PD-L1的表达被抑制[(22.37±4.01)%],与未感染组[(51.97±1.62)%]比较,差异有统计学意义(P 0.01),且此后在肝脏和脾脏中保持低水平表达。感染后2～10周,肝脏中的CD3~+T和CD4~+T细胞表面PD-L1的表达低于未感染组(P 0.05或0.01, P 0.05),脾脏中的CD3~+T和CD4~+T细胞表面PD-L1的表达分别于感染后4～8周和6～10周低于未感染组(P 0.05)。肝脏和脾脏中CD8~+T细胞上PD-L1的表达在感染早期无变化,感染后10周比例增加,为(34.80±3.68)%、(31.90±2.53)%,与未感染组[(25.5±0.80)%、(29.91±3.55)%]比较,差异有统计学意义(P 0.01)。结论日本血吸虫感染BALB/c小鼠后,肝脏和脾脏中CD19~+B、 CD3~+T和CD4~+T淋巴细胞亚群的比例显著降低,但对CD8~+T细胞比例影响不明显。感染对PD-L1在上述淋巴细胞亚群的表达也有相同的变化,在CD19~+B、CD3~+T和CD4~+T细胞上表达受抑制,在CD8~+T细胞上的表达影响较小,且肝脏局部淋巴细胞的变化早于脾脏。     

老年人外周血淋巴细胞CD28及CD95表达变化研究

目的通过对老年人与成年人外周血淋巴细胞CD28及CD95表达水平的比较性研究,观察淋巴细胞凋亡在免疫衰老中的作用。方法采用免疫荧光标记流式细胞术,分析成年组(20~59岁)与老年组(60~90岁)各20例的外周血淋巴细胞表型水平。结果老年组CD28 CD95-[(8.80±4.86)%]及CD28 细胞[(36.32±10.38)%]明显低于成年组[(23.09±3.48)%、(52.29±4.90)%](P<0.01),而CD28-CD95 [(53.23±8.28)%]、CD95 [(80.25±7.19)%]及CD28-细胞[(63.68±10.38)%]明显高于成年组[(33.58±4.72)%、(63.18±4.12)%、(47.71±4.90)%](P<0.01)。结论老年人CD28 表达随年龄增长而下降,CD28-及CD95 表达随年龄增长而上升。提示淋巴细胞凋亡在免疫衰老中可能具有重要作用。     

CD4+CD25-Foxp3+T淋巴细胞的表型鉴定及其在初发系统性红斑狼疮中的意义

目的 对初发系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血异常表达CD4+CD25-Foxp3+T淋巴细胞进行表型鉴定,并探讨其临床意义.方法 对初发SLE患者外周血CD4+T淋巴细胞进行细胞表面分子[CD25、CD127、CCR4、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)、细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CT-LA-4)]和胞内分子(Foxp3)标染,流式细胞仪检测,并研究CD4+各细胞亚群与狼疮肾炎和疾病活动度(SLEDAI)相关性.结果 SLE患者外周血CD4+CD25-Foxp3+T淋巴细胞表面 GITR、CTLA-4和CCR4表达率与活化T淋巴细胞(CD4+CD25+Foxp3-)相比差异无统计学意义(P均>0.05),而显著低于调节性T淋巴细胞(CD4+CD25+Foxp3+)(P均<0.01);CD4+Foxp3+CD25high,CD4+Foxp3+CD25low和CD4+Foxp3+CD25-细胞中CD127low-百分率分别为(93.8±,3.5)%,(93.7±2.3)%,(92.0±2.1)%,三者之间差异无统计学意义(P>0.05);在CD4+细胞亚群中,当CD127low-时,Foxp3+在CD25high,CD25low和CD25-中表达率分别为 (91.4±2.6)%,(71.9±3.3)%,(9.0±2.2)%,三者之间差异均有统计学意义(P<0.01);SLE患者外周血CD4+CCR4+CD25highT淋巴细胞百分率与SLEDAI呈显著负相关(r=-0.695,P<0.001),狼疮肾炎患者(1.10±0.17)%显著低于SLE无肾炎组[(1.61±0.23)%,P<0.01]和健康对照组[(1.75±0.10)%,P<0.01];狼疮肾炎患者外周血CD4+ CCR4+CD25low-T淋巴细胞百分率显著高于健康对照组[(11.5 ±2.3)%与(8.0±1.0)%,P<0.01)].结论 初发SLE中异常升高的CD4+CD25-Foxp3+T淋巴细胞的表型类似早期活化效应T淋巴细胞.可以用CD4+CD25highCD127low-T淋巴细胞替选CD4+CD25highFoxp3+调节性T淋巴细胞.CCR4+调节性T淋巴细胞可能参与狼疮肾炎发病.     

原发性免疫性血小板减少症患者脾切除术前T淋巴细胞亚群检测的临床意义

目的分析激素治疗无效或停药后复发的原发性免疫性血小板减少症(ITP)患者脾切除术前T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞的变化,探讨其与脾切除后ITP早期复发的关系。方法收集2009年1月-2015年12月于深圳市宝安区人民医院治疗的ITP脾切除患者32例,随访时间3~60个月,按脾切除疗效分为早期复发组(脾切除后6个月内复发,PLT30×109/L)及有效组(脾切除后PLT30×109/L且较切除前PLT增加2倍以上)。应用流式细胞技术检测患者脾切除术前外周血T淋巴细胞亚群(CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD4+/CD3+CD8+、CD3-CD19+)及CD56+CD16+自然杀伤细胞的百分比(CD3-/CD16+CD56+)。计量资料组间比较采用t检验,计数资料组间比较采用χ2检验或Fisher检验。结果早期复发组患者11例(占34.4%),有效组21例(占65.6%)。早期复发组脾切除术前CD3+CD4+、CD3+CD4+/CD3+CD8+明显低于有效组[(21.7±5.4)%vs(32.6±4.1)%,t=6.39,P=0.015;0.65±0.21 vs 1.29±0.36,t=3.92,P=0.003];早期复发组脾切除术前CD3+CD8+明显高于有效组[(34.5±5.9)%vs(26.8±6.6)%,t=-3.20,P=0.030];两组患者CD3-/CD16+CD56+、CD3-CD19+差异均无统计学意义(P值均0.05)。结论行脾切除术治疗前CD3+CD4+、CD3+CD4+/CD3+CD8+低的ITP患者,术后易出现复发,提示T淋巴细胞亚群异常可作为ITP脾切除疗效预测的参考指标之一。     

早期肠内谷氨酰胺补给对烫伤大鼠Peyer's结淋巴细胞亚群的影响

目的:观察烫伤大鼠伤后不同时间Peyer's结细胞总数及淋巴细胞亚群在营养支持影响下的变化形式,了解不同肠内营养支持对Peyer's结内细胞亚群的影响.方法:选取健康SD大鼠,随机分为标准肠内营养组(EN组,n=32)和谷氨酰胺补给组(EN+Gln组,n=32),制成烫伤动物模型(30%TBSAⅢ度烫伤),伤后早期分别给予标准肠内营养制剂(能全力)和标准肠内营养制剂+谷氨酰胺,于伤后第1、4、7、10天观察Peyer's结细胞总数及进行流式细胞仪细胞亚群(CD3+、CD45Ra+、CD3+/CD4+、CD3+/CD8+)分析.结果:烫伤后Peyer's结淋巴细胞总数在伤后1 d明显减少,主要体现为B细胞总数的减少.EN+Gln组在伤后7 d时淋巴细胞总数恢复至伤前水平[(5.29±1.03)×106vs(6.13±1.14)×106,P>0.05],而EN组没有恢复:EN+Gln组B细胞比例及总数在7、10 d时与伤前比较无明显差异[(28.7±0.69)×106,(3.05±0.72)×106vs(3.29±0.62)×106,P>0.05],而EN组B细胞总数在10 d时与伤前比较明显减少[(2.07±0.63)×106vs(3.29±0.62)×106,P<0.05]:CD4+和CD8+细胞在伤后两组变化不明显.结论:肠内谷氨酰胺补给支持能快速有效地促进Peyer's结淋巴细胞增殖,尤其是B细胞.增加Peyer's结内淋巴细胞总数;有利于肠道免疫屏障的恢复和强化.     

支气管哮喘儿童急性发作期诱导痰液T细胞亚群及自然杀伤T细胞的变化

目的 分析支气管哮喘(简称哮喘)儿童急性发作期及缓解期诱导痰液T细胞亚群及自然杀伤T细胞(NKT细胞)的变化,探讨T细胞及NKT细胞在儿童哮喘气道炎症中的作用.方法 选取18例哮喘急性发作、21例哮喘缓解期及12名正常儿童的痰液,采用流式细胞术比较各组儿童诱导痰液CD3、CD4、CD8、NKT(CD3~+ CD56~+)百分比及CD4/CD8比值.结果 哮喘急性发作组CD4细胞百分比[(43.75±13.5)%]明显高于缓解期组[(37.04±7.11)%]和正常对照组[(33.57±7.54)%](P＜0.05),CD8细胞百分比[(21.10±6.10)%]明显低于缓解期组[(28.67±5.32)%]和正常对照组[(28.31±9.46)%](P<0.05),CD4/CD8比值(2.14±0.94)高于缓解期组(1.33±0.35)和正常对照组(1.31±0.42)(P＜0.05),CD4、CD8细胞百分比及CD4/CD8缓解期组和正常对照组差异无统计学意义(P>0.05),急性发作组CD4/CD8比值与嗜酸粒细胞百分比呈正相关(r=0.559,P＜0.05).缓解期组CD4/CD8比值与嗜酸粒细胞无相关性(r=0.398,P>0.05).急性发作组CD3+ CD56+细胞百分比[(3.33±1.69)%]略高于缓解组[(3.09±1.23)%]及对照组[(2.94±0.87)%],但差异无统计学意义(P>0.05).CD3- CD56+细胞百分比在三组之间无统计学差异(P>0.05).结论 儿童哮喘急性发作期,气道内CD4细胞占优势,CD4/CD8细胞比例失衡,CD4细胞可能介导儿童哮喘气道炎症过程.     

胆碱纠正三氧化二砷诱导豚鼠心电图QT间期延长的分子生物学机制

目的 观察胆碱对三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导豚鼠心电图QT间期延长的纠正作用,探讨其分子生物学机制.方法 40只豚鼠按体质量随机分为5组:0(对照)、0.4、0.8、1.6me/kgAs203组和胆碱+As2O3组(8 mg/kg胆碱+1.6 mg/kg As2O3),每组8只,静脉给药后,分别测量6个时间点(0、10、30、60、90、120min)的心电图,观察校正的QT间期(QTc)的变化.6 h后.提取心肌组织总RNA,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)察胆碱对As2O3诱导豚鼠心肌L-型钙通道αIC和钾通道GPERG mRNA表达改变的影响.结果 在0.8 mg/kg As2O3组,60、90、120 min时的QTc(354±22、366±31、368±29)与同时间对照组(325±26、336±26、324±20)比较,差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01);90、120 min时的QTc与0 min时(334±12)比较,差异均有统计学意义(P<0.05).在1.6 mg/kg As2O3组,10、30、60、90、120 min时的QTc(362±33、380±21、382±35、388±39、388±31)与同时间对照组(328±20、324±25、325±26、336±26、324±20)比较,差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01);与0 min时(329±31)比较,差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01).在30、60、90、120 rain时,胆碱+As2O3组的QTc(337±17、341±15、344±22、343±19)与1.6 mg/kgAs2O3组相同时间比较,差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01).RT-PCR结果显示1.6 mg/kg As2O3组的心肌L-型钙通道αIC mRNA表达量为(1.27±0.14),对照组为(1.02±0.12),组间差异有统计学意义(P<0.01):胆碱+As2O3组的心肌L-型钙通道α1C mRNA表达量为(1.10±0.13),与1.6 mg/kg As2O3组比较.差异有统计学意义(P<0.05).0.4、0.8、1.6mg/kgAs2O3组豚鼠心肌钾通道GPERGmRNA表达量分别为1.29±0.11、1.22±0.12、1.27±0.16,与对照组(1.23±0.08)相比较,差异均无统计学意义(P>0.05);胆碱+As2O3 1.6 mg/kg组表达量为1.30±0.14,与1.6mg/ksAs2O3组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 胆碱可以纠正由As203诱导的豚鼠心肌QT间期延长,其机制可能与胆碱调节由As2O3引起的L-型钙通道mRNA表达异常有关.     

亚砷酸对狼疮鼠自身抗体和白细胞介素-1012表达的影响

目的 探讨亚砷酸(ATO)对狼疮鼠自身抗体和白细胞介素(IL)-10、IL-12表达的影响.方法 MRL/lpr狼疮鼠随机分为ATO组、环磷酰胺(CTX)组和生理盐水(NS)组,给药2个月.用四色流式细胞术测脾脏CD3~+(T)细胞和CD3~+CD4~+(Th)细胞的百分率以及CD3~+CD4~+(Th)细胞内IL-10和IL-12的水平;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测血清中抗双链DNA(dsDNA)抗体、IL-10和IL-12的浓度.分别采用单因素方差分析、LSD检验,配对t检验进行统计学处理.结果 ①给药后ATO组小鼠血清的抗dsDNA抗体水平吸光度值(A)0.92±0.06,较给药前1.14±0.58明显下降(P<0.01);②ATO组CD3~+细胞和CD3~+CD4~+百分率[分别为(44±4)%和(20±4)%]均显著均低于NS组水平[分别为(59±5)%和(30±3)%](P<0.01);③ATO组的血清IL-12浓度(84±12)pg/ml较NS组水平(103±13)pg/ml显著降低(P=0.018);④ATO组Th细胞内IL-10和IL-12的表达水平(1.5±0.4)%和(2.43±0.42)%显著低于NS组(2.5±0.5)%和(3.24±0.40)%(P<0.01).结论 亚砷酸能显著降低MRL/lpr狼疮鼠血清抗dsDNA抗体的水平,抑制T细胞和Th细胞增生和活化功能,降低IL-12的血清水平和Th细胞的诱生水平,及能降低IL-10的Th细胞的诱生水平.     

日本血吸虫可溶性成虫抗原和虫卵抗原对CD4~+ T淋巴细胞凋亡和细胞周期的影响

目的观察并比较日本血吸虫可溶性成虫抗原(SWA)、可溶性虫卵抗原(SEA)对小鼠CD4+T淋巴细胞凋亡和细胞周期的影响。方法以免疫磁珠分选正常小鼠脾细胞中的CD4+T淋巴细胞后,与羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记的抗原递呈细胞共培养,并分别以PBS、SWA、SEA刺激。36h后以流式细胞术(FCM)结合caspase-3荧光抗体标记技术检测CD4+T淋巴细胞的凋亡水平;96h后以碘化丙锭染色结合FCM分析CD4+T淋巴细胞周期分布情况。结果凋亡分析结果显示,经SEA和SWA刺激后,外周CD4+T细胞的凋亡百分比分别为(1.24±0.29)%和(1.52±0.38)%,两者差异无统计学意义(P0.05)。细胞周期分析表明,SWA组处于G1期、S期和G2/M期的细胞百分比分别为(78.91±2.98)%、(7.39±0.85%)和(10.69±1.05)%;与之相比,SEA组G1期细胞百分比[(59.42±1.32)%]显著降低,S期[(21.07±0.88)%]和G2/M期[(18.88±1.21)%]显著增加,差异均有统计学意义(P均0.01)。结论SWA、SEA均可诱导CD4+T淋巴细胞凋亡,SEA促进CD4+T淋巴细胞进入分裂周期的作用更明显。     

沙利度胺对系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨沙利度胺(Thd)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞的免疫凋节作用.方法 用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测Thd对SLE患者外周血T淋巴细胞增殖的影响,用流式细胞术检测T淋巴细胞早期凋亡及CD3~+CD28~+和CD8~+CD152~+的表达,用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测T淋巴细胞白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-a mRNA的表达,采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 在体外,500 μg/ml Thd组CD3~+CD28~+表达为(48±9)%显著低于对照组(57±9)%(P<0.05)、500μg/ml Thd组T淋巴细胞凋亡率为(36±8)%显著高于对照组(23±5)%(P<0.05);100、300、500μg/ml Thd组A_(570nm)值分别为:0.39±0.05、0.34±0.04、0.30±0.03较对照组(0.51±0.07)均有明显下降(P<0.05);100、500 μg/ml Thd组CD8~+CD152~+表达分别为(5.0±0.6)%、(7.8±0.7)%,明显高于对照组(4.2±0.6)%(P<0.05);500μg/ml Thd能抑制IL-6 mRNA的表达,各剂量组均抑制IL-10、TNF-a mRNA表达.结论 Thd可能通过抑制T淋巴细胞增殖、CD28的表达、IL-6、IL-10、TNF-a mRNA的表达和促进T淋巴细胞凋亡、CD152表达来下调SLE患者的免疫反应.     

氟铝联合对大鼠全血锌、铁、钙、镁、铜的影响

目的 探讨过量氟、铝及其联合作用对大鼠全血锌(Zn)、铁(Fe)、钙(Ca)、镁(Mg)、铜(Cu)的影响.方法 48只SD大鼠按体质量随机分为4组:对照组、高铝组、高氟组、高氟铝组,饮水含铝量分别为0,90、0.90 mg/L:饲料含氟量分别为5.2、5.2、106.0、106.0 mg/kg,含铝量分别为6.8、6.8 19.7、19.7 mg/kg;90 d后原子吸收光谱分析法测定全血Zn、Fe、Ca、Mg、Cu水平.结果 组间比较,全血含Zn、Fe、Mg、Cu量差异有统计学意义(F值分别为46.25、14.74、6.10、Z93,P<0.05),而全血含Ca量未见明显改变(F=2.81,P>0.05).析因分析显示.高铝摄入明显降低全血含Zn、Fe、Mg量(F值分别为42.66、5.41、7.04,P<0.05),高氟摄人明显降低全血含Zn、Fe、Mg、Cu量(F值分别为64.50、37.90、9.75、6.74,P<0.05),氟铝联合对全血含Zn量有交互作用(F:31.59,P<0.05),Fe、Ca、Mg、Cu均未见明显交互作用(F值分别为0.91、1.63、1.51、0.00,P>0.05).与对照组全血含Zn、Fe、Mg、Cu量[(131.30±13.86)μmol/L,(10.24±1.02)、(1.71±0.19)mmol/L,(20.43±4.42)μmol/L]比较,高铝组全血含Zn量[(90.84±9.98)μmol/L]明显降低(P<0.05),高氟组全血含Zn、Fe、Mg量[(85.85±10.92)μmol/L,(8.49±0.68)、(1.52±0.13)mmol/L]也明显降低(P<0.05),高氟铝组全血含Zn、Fe、Mg、Cu量[(82.82±11.00)μmol/L,(8.16±0.45)、(1.46±0.09)mmol/L,(15.69±2.38)μmol/L]均明显降低(P<0.05);与高铝组[(9.43±1.09)mmool/L]比较,高氟铝组全血含Fe量[(8.16±0.45)mmol/L]明显降低(P<0.05).结论 过量氟能引起全血含Zn Fe、Mg、Cu量下降,过量铝能引起全血含Zn、Fe、Mg量降低;氟铝联合对大鼠全血含Ca量无影响,仅对全血含Zn量有明显交互作用.     

氟和铝对大鼠血常规和血生化指标的影响

目的 探讨氟和铝对大鼠血常规和血生化指标的影响.方法 健康Wistar大鼠56只,体质量130～200 g,按体质量随机分为对照组、低氟组、中氟组、高氟组、低氟+铝组、中氟+铝组、高氟+铝组7组,每组8只,灌胃给予不同剂量的氟化钠和三氯化铝,剂量分别为(0+0)、(100+0)、(200+0)、(300+0)、(100+10)、(200+10)、(300+10)mg/L,时间为90 d.实验期满后,检测血常规,项目包括红细胞数(RBC)、红细胞平均容积(MCV)、白细胞数(WBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞比积(HCT)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC),血小板数(PIJT)、淋巴细胞数(LYM)、红细胞体积分布宽度(RDW);检测肝、肾功能血清生化指标,包括天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素(Urea)、彤L酐(Cr);称取肝、肾质量,计算脏器系数.结果 大鼠RBC、HCT、MCV各组间比较,差异有统计学意义(F值分别为3.202、3.316、2.915,P均<0.05).RBC、HCT,低氟组[(7.59±2.40)×10~(12)个/L、0.51±0.11]、中氟组[(8.60±1.16)×10~(12)个/L、0.55±0.05]、高氟组[(9.23±0.60)×10~(12)个/L、0.54±0.03]、低氟+铝组[(9.25±0.79)×10~(12)个/L、0.53±0.04]、中氟+铝组[(7.98±2.14)×10~(12)个/L、0.49±0.08]、高氟+铝组[(7.61±3.17)×10~(12)个/L、0.49±0.16]均明显高于对照组[(4.46±3.10)×10~(12)个/L、0.31±0.16,P<0.05或<0.01];MCV,中氟组[(64.06±6.51)fl]、高氟组[(58.67±1.13)fl]、低氟+铝组[(57.78±1.57)fl]、中氟+铝组[(63.04±10.64)fl]均明显高于对照组[(78.54±15.57)fl,P<0.05或<0.01].大鼠血清AST、Urea各组间比较,差异有统计学意义(F值分别为2.847、5.549,P<0.05或<0.01);血清AST水平,低氟组[(399.00±54.99)U/L]、中氟组[(465.60±76.99)U/L]、高氟组[(465.80±75.41)U/L]、低氟+铝组[(346.00±69.26)U/L]、中氟+铝组[(437.40±68.31)U/L]、高氟+铝组[(403.00±30.61)U/L]明显高于对照组[(336.67±94.34)U/L,P<0.05],高氟组明显高于高氟+铝组(P<0.05);血清Urea水平,中氟组[(7.70±0.52)mmol/L]、高氟组[(8.44±1.30)mmol/L]、低氟+铝组[(7.83±0.62)mmol/L]、中氟+铝组[(7.73±0.47)mmol/L]、高氟+铝组[(7.70±0.21)mmol/L]明显高于对照组[(6.55±0.50)mmol/L,P<0.05或<0.01],低氟组明显低于低氟+铝组(P<0.01),高氟组明显高于高氟+铝组(P<0.05).低氟组肝脏脏器系数(2.94±0.36)高于低氟+铝组(2.60±0.15,P<0.05).结论 氟及氟和铝对大鼠血常规和肝、肾功能血清生化指标有一定程度的影响,大鼠红细胞增生而细胞体积变小,质量下降,肝、肾功能受损.铝对不同剂量氟所起的作用不同.     

骨髓源性间充质干细胞联合来氟米特对小鼠T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨骨髓源性间充质干细胞(BMSCs)在体外联合来氟米特(LEF)对小鼠T淋巴细胞的免疫调节作用.方法 直接贴壁筛选法分离培养小鼠BMSCs,流式细胞分析(FCM)鉴定BMSCs的纯度.用EZ-SepTMm Mouse 1X分离异体BALB/c小鼠的脾淋巴细胞,在刀豆球蛋白A(ConA)诱导的同时,先经LEF处理,洗去LEF后,脾淋巴细胞再和BMSCs共培养.分组:A组:脾淋巴细胞;B组:脾淋巴细胞+BMSCs;C组:LEF处理的脾淋巴细胞;D组:LEF处理的脾淋巴细胞+BMSCs.用四甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测各组T淋巴细胞的增殖情况,流式细胞术分析各组T淋巴细胞的活化及凋亡情况,定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组T淋巴细胞的白细胞介素(IL)-2、IL-10基因水平.结果 在体外,BM-SCs处理组(B组)T淋巴细胞的A570 nm值为0.578±0.042,LEF处理组(C组)A570 nm值为0.5024±0.040,两组A570 nm值均显著低于对照组(A组)A570 nm值为0.778±0.035(P<0.01).BMSCs联合LEF组(D组)A570 nm值为0.218±0.033,显著低于BMSCs处理组及LEF处理组(P<0.01). BMSCs联合LEF对CD3+CD69+、CD3+CD28+表达、IL-2基因表达均无明显影响.BMSCs单独或联合LEF组T淋巴细胞凋亡率分别为(2.29±0.32)%、(4.22±0.98)%,较A组T淋巴细胞凋亡率(8.08±1.20)%均明显下降.BMSCs处理组和LEF处理组T淋巴细胞IL-10基因相对表达分别为:0.098±0.039、0.054±0.022明显低于A组(IL-10基因相对表达为1.000)(P<0.01),MSCs联合LEF组IL-10基因相对表达为:0.023±0.015,显著低于BMSCs处理组及LEF处理组(P<0.01).结论 BMSCs联合LEF对小鼠T淋巴细胞有一定程度的协同免疫调节作用.     

系统性红斑狼疮患者CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞中Foxp3的表达及免疫抑制功能研究

目的 研究系统性红斑狼疮(SEE)外周血中调节性T细胞不同标志以及调节性T细胞在SLE发病中的作用;探讨CD127与Foxp3的相关性,明确CD127定义调节性T细胞的特异性;鉴定CD4~+CD25~+CD127~(low/-)T淋巴细胞免疫抑制功能.方法 ①采用四色直接荧光素标记法和多参数流式细胞术检测40例SLE患者(19例初发和21例缓解)及15名健康对照外周血CD4~+CD25~+T淋巴细胞、CD4~+CD25~+CD127~(low-)T淋巴细胞、CD4~+CD25~+Foxp3~+T淋巴细胞、CD4~+CD25~(high)T淋巴细胞、CD4~+CD25~(high)CD127~(low/-)T淋巴细胞、CD4~+CD25~(high)Foxp3~+T淋巴细胞以及CD4~+CD127~(low/-)Foxp3~+T淋巴细胞占CD4~+T淋巴细胞的比率,并且将7种调节性T细胞比率与外周血抗双链DNA(dsDNA)等抗体及SLE疾病活动指数(SLEDA1)评分等进行相关性分析.②以流式细胞分选术结合细胞培养技术,检测和分析3例SLE患者和4名健康人外周血中CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞对CD4~+CD25~-效应性T细胞增殖的抑制作用.采用两样本均数的t检验,重复测量的方差分析,Pearson相关与Spearman相关分析进行统计学处理.结果 ①SLE患者组7种调节性T细胞比率分别为(6.1±1.7)%,(3.1±1.3)%,(2.1±1.0)%,(1.6±0.3)%,(0.97±0.28)%,(0.69±0.23)%和(0.71±0.35)%.与健康对照组比较:SLE患者组前6种调节性T细胞比率均低于健康对照组(P<0.05).②SLE患者组:CD4~+CD25~+Foxp3~+、CD4~+CD25~(high)Foxp3~+T淋巴细胞比率与IgA呈正相关;CD4~+CD25~(high)CD127~(low/-)T淋巴细胞比率与抗SSB抗体呈正相关.③SLE患者初发组和缓解组比较:SLE患者初发组7种调节性T细胞中除CD4~+CD127~(low/-)Foxp3~+T淋巴细胞比率外,其余均低于缓解组(P<0.05).④SLE患者初发组治疗前后比较:激素治疗前6种调节性T细胞比率均低于激素治疗后(P<0.05).⑤SLE患者初发组、缓解组和对照组中,CD4~+CD25~+T淋巴细胞及CD4~+CD25~(high)T淋巴细胞中Foxp3的表达与CD127低表达均呈正相关.⑥SLE患者、健康人CD4+CD25-效应性T细胞的体外增殖都可以被自身CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞所抑制,但SLE患者的抑制率明显低于健康对照.结论 SLE的免疫异常可能与调节性T细胞的数量和功能缺陷有关;CD127可能代替Foxp3作为调节性T细胞特异性的表面标记物.