环境干扰物对卵巢癌细胞株PEO4增殖的影响

目的：观察环境干扰物壬基酚（4-n-nonyphenol,NP）、双酚A(bisphenolA,BisA）、邻苯二甲酸酯二丁酯（Dibutylphthalate DBP）对卵巢癌细胞株PEO4增殖的影响。方法PEO4细胞在DMEM培养基（含10％小牛血清）中采用开放式单层贴壁培养。试验前5d将细胞用PBS洗涤，改为在无酚红DMEM培养基（含5％活性碳－葡聚糖处理过的胎牛血清）中继续培养，以耗尽细胞内储存的柴激素，实验设溶剂对照、雌激素对照及3种受试物各4个剂量组，采用MTT法、^3H-TdR掺入法及流式细胞术对PEO4细胞的增殖情况进行分析。结果：3．2μmol/L NP、32μmol/L BisA和960μmol/L DBP对PEO4细胞处理72h可产生与雌激素类似的效果，即促进PEO4细胞增殖和细胞DNA合成，并推进G0／G1期细胞进入S期，提高细胞增殖指数，且其促进增殖作用存在时间－依赖和剂量－依赖关系。结论：对－壬基酚、双酚A和邻苯二甲酸酯二丁酯均能促进雌激素受体阳性卵巢癌细胞株PEO4增殖，提示近几年环境污染加剧可能与女性生殖肿瘤发病率增高有关。     

一些化工原料的雌激素样效应

采用雌激素受体阳性乳腺癌细胞株T47D在DMEM培养基 (含 1 0 %小牛血清 )中开放式单层贴壁培养的方法 ,探讨几种常见化工原料壬基酚 (NP)、双酚A(BisA)、邻苯二甲酸酯二丁酯 (DBP)的雌激素效应。于开始实验前将培养细胞用PBS洗涤后改为在无酚红DMEM(含 5 %CDT -FBS)中培养持续 5d ,其目的是耗尽内源性雌激素 ,实验设溶剂对照、雌激素阳性对照及 3种受试物各 4个剂量组 ,采用MTT法、3 H TdR掺入法及流式细胞术对T47D细胞增殖情况进行分析。结果显示NP、BisA和DBP对T47D细胞增殖的影响同雌激素类似 ,可促进T47D细胞增殖和细胞DNA合成 ,并推进G0 G1 期细胞进入S期 ,提高细胞增殖指数 ,随着培养时间 ,延长至 96h ,0 8μmol LNP、32 μmol LBisA和 32 0 μmol LDBP均对T47D细胞有明显促进增殖效果。结果提示这几种化合物具有雌激素效应 ,且其作用效果存在时间 -效应和剂量 -效应关系。由于T47D细胞增殖为雌激素依赖性 ,由此可推测它们有可能通过雌激素受体而发挥其作用的     

环境雌激素对乳腺癌细胞株MCF-7凋亡作用的影响

[目的] 通过观察对-壬基酚(nonylphenol,NP)、双酚A(bisphenol A,BisA)和邻苯二甲酸二丁酯(dibutylphthalate,DBP)对乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响,探讨环境雌激素促进MCF-7细胞增殖的生物学机制.[方法] 将在DMEM培养液(含10%小牛血清)中的MCF-7细胞采用开放式单层贴壁培养,加受试物前5 d将培养细胞用PBS洗涤后改为在无酚红DMEM(含5%经活性碳-葡聚糖苷处理的胎牛血清,CDT-FBS)中培养连续5 d,其目的是耗尽细胞内储存的雌激素.实验设溶剂对照组、雌激素对照组、抗雌激素(它莫西芬)对照组及三个实验组,采用流式细胞术、DNA片段凝胶电泳和细胞苏木素染色(HE),观察环境雌激素对雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡作用的影响.[结果] 3.2×10-6 mol/L NP和3.2×10-5 mol/L BisA对MCF-7细胞处理72 h,与对照组相比,流式细胞仪分析结果表明,二倍体细胞(G1期细胞)明显增加,亚二倍体细胞峰(即细胞凋亡率)消失,DNA凋亡片段凝胶电泳不显示典型的凋亡DNA片段梯带,细胞苏木素染色结果也显示凋亡细胞明显减少.[结论] 与溶剂对照组相比,NP和BisA均能够抑制MCF-7细胞的凋亡作用,而3.2×10-4 mol/L DBP对细胞凋亡的影响作用不明显.这一结果提示,该类物质有可能是通过抑制细胞凋亡而发挥其促进MCF-7细胞增殖作用的.     

双酚A等化学物对耗尽内源性雌激素诱导T47D细胞凋亡的影响

目的　在乳腺癌细胞株T4 7D细胞内采用雌激素耗尽的方法诱导其发生凋亡 ,然后观察对 壬基酚 (n 4 noniphenol,NP)、双酚A (bisphenolA ,BisA )和邻苯二甲酸酯二丁酯(dibutylphthalate ,DBP)对这种凋亡的影响 ,探讨环境雌激素是否能够抑制雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡作用。方法　T4 7D细胞在达克尔培养液 (DMEM ,含 10 %小牛血清 )中进行常规传代培养 ,于实验前 4d将细胞用磷酸盐缓冲盐水洗涤后改为在无酚红DMEM培养 ,目的是耗尽细胞内源性雌激素。实验设溶剂对照、雌激素对照 (E2 )、抗雌激素他莫昔芬 (TAM)对照及 3个试验组 ,采用流式细胞术 ,琼脂糖凝胶电泳和HE染色镜检观察环境雌激素对雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡的影响。结果　流式细胞仪分析结果表明 ,雌激素耗尽能够诱导T4 7D细胞发生凋亡 ,凋亡率为 34 5 % ,此时往培养液中分别加入 32× 10 -7mol/LNP和 32× 10 -7mol/LBisA ,对细胞处理 72h ,可显著抑制细胞凋亡作用 (凋亡率分别变为 2 0 1%和 16 5 % ) ;琼脂糖凝胶电泳显示 ,细胞凋亡特有的DNA ladder消逝 ;HE染色镜检表明 ,细胞出现活跃核分裂相。加入 5× 10 -7mol/LTAM可加重细胞的凋亡现象 (细胞凋亡率为 5 5 6 % )。结论　NP和BisA均可抑制雌激素耗尽所诱导的T4 7D细胞的凋亡作用 ;     

三种环境雌激素对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

[目的 ]探讨环境中常见的三种类雌激素壬基酚 (NP)、双酚A(BisA)和邻苯二甲酸二丁酯 (DBP)影响人乳腺癌细胞T47D增殖和凋亡的分子生物学作用机制。 [方法 ]T47D细胞在含 10 %胎牛血清的DMEM培养液中进行常规传代培养 ,实验前将细胞转移至无酚红DMEM(含 5 %活性碳葡聚糖苷处理过的FBS)中继续培养 5d ,收集细胞 ,PBS洗涤后接种于内置盖玻片的 6孔板或 75ml培养瓶中 ,用 3 2× 10 -7mol/LNP、3 2× 10 -7mol/LBisA及 3 2× 10 -6mol/LDBP对细胞分别处理 72h ,用半定量RT PCR技术观察这 3种化合物对核增殖抗原PCNA、bcl 2及baxmRNA表达的影响 ,并用免疫组化方法对结果进行验证。 [结果 ]与溶剂对照组相比 ,NP和BisA对T47D细胞处理 72h可显著抑制baxmRNA表达而促进bcl 2和PCNAmRNA的表达 ,随后的免疫组化实验也证实了这一结果 ;DBP可促进PCNAmRNA及蛋白的表达 ,但对bcl 2及bax的表达未见统计学意义。 [结论 ]环境雌激素NP和BisA可通过调节PCNA、bcl 2及bax的表达而调节乳腺癌T47D细胞的增殖和凋亡作用。DBP通过促进核增殖抗原PCNA的表达而促进T47D的增殖作用     

三种环境雌激素对卵巢癌PEO4细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响

目的　探讨几种常见的环境类雌激素壬基酚 (NP)、双酚A(BisA)和邻苯二甲酸二丁酯 (DBP)对人雌激素受体阳性卵巢癌细胞PEO4增殖和凋亡相关基因PCNA ,bcl 2和baxmRNA及相应蛋白质表达的影响。方法　PEO4细胞在DMEM培养液 (含 1 0 %小牛血清 )中进行常规传代培养 ,实验前将细胞转移至无酚红DMEM(含 5 %活性碳葡聚糖苷处理过的FBS)中继续培养 5d ,收集细胞 ,PBS洗涤后接种于内置血盖片的六孔板或 75ml培养瓶 ,32× 1 0 - 7mol LBisA和NP及 32× 1 0 - 6 mol LDBP对PEO4细胞分别处理 72h ,用半定量RT PCR技术观察其对核增殖抗原PCNA、bcl- 2及baxmRNA表达的影响 ,并用免疫组化方法对结果进行验证。结果　与溶剂对照组相比 ,32× 1 0 - 7mol LNP和BisA对PEO4处理 72h可促进核增殖抗原PCNA和抗凋亡基因bcl 2mRNA表达 ,但对baxmRNA的表达没有影响 ;DBP可促进PCNA的表达 ,但对bcl 2和bax的表达均没有明显的影响。随后进行的免疫组化实验结果显示 ,NP和BisA可促进Bcl 2蛋白的表达 ,并抑制Bax蛋白的表达。结论　对PCNA和bcl 2表达的影响可能是环境类雌激素调节卵巢癌细胞PEO4增殖和凋亡的重要机制之一。     

三种环境内分泌干扰物对前列腺癌细胞PC-3增殖的影响

[目的 ]通过观察环境内分泌干扰物对 壬基酚 (n 4 noniphenol,NP)、双酚A(bisphenolA ,BisA)和邻苯二甲酸二丁酯 (dibutylphthalate ,DBP)对前列腺癌细胞PC 3增殖的影响 ,探讨近几年来前列腺癌发病率增加的原因。 [方法 ]前列腺癌细胞株PC 3在RPMI 164 0培养液中采用开放式单层贴壁培养 ,培养条件为 3 7℃ ,5 %CO2 ,10 0 %相对饱和湿度 ,采用MTT法、3 H TdR掺入法及流式细胞术对PC 3细胞的增殖情况进行分析。实验设溶剂对照组及每种受试物各四个剂量组。 [结果 ]NP、BisA和DBP均可促进PC 3细胞增殖和细胞DNA合成并推进G0 /G1期细胞进入S期 ,提高细胞增殖指数 ;随着培养时间的延长至 96h ,在较低浓度条件下 ,0 5 μmol/LNP、0 .5 μmol/LBisA和 2 5 μmol/LDBP也能明显促进PC 3细胞增殖 (P <0 0 5 ) ,且其促进PC 3细胞增殖效应存在剂量 效应关系和时间 效应关系。 [结论 ]NP、BisA和DBP可促进前列腺癌细胞株PC 3的增殖 ,提示环境中内分泌干扰物污染增加 ,可能是近几十年来前列腺癌发病率上升的原因之一。     

报告基因方法对壬基酚、双酚A雌激素样活性的体外研究

目的利用基于报告基因的MCF7细胞体外雌激素检测方法对壬基酚(NP)、双酚A(BPA)的雌激素样活性及作用机制进行研究。方法合成人雌激素反应元件(ERE)核心片断并将其插入pGL3promoter载体的多克隆位点构建而成雌激素反应元件ERE调控的报告质粒pERELuc,用脂质体转染法将pERELuc及内对照质粒phRLSV40瞬时转染MCF7细胞,用17β雌二醇(E2)、三苯氧胺(Tam)、壬基酚、双酚A等处理后检测报告基因荧光素酶的表达。结果转染pERELuc的MCF7细胞的报告基因表达与E2呈明显的剂量-反应关系,1×10-11molLE2可引起报告基因的表达,至1×10-9molL可达到最大表达值,而未转染pERELuc时与E2无明显反应,三苯氧胺可以显著抑制E2引起的报告基因的表达。1×10-6molL以上NP和BPA出现雌激素样作用。NP的雌激素样活性略强于BPA。结论本试验建立并采用的基于报告基因的体外雌激素检测方法是可行的,NP和BPA有一定的雌激素样活性作用。     

壬基酚对卵巢癌细胞和蛋白表达的影响

目的　观察环境雌激素化合物壬基酚 (nonylphenol,NP)对卵巢癌细胞 (PEO4 )c -myc和 p5 3mRNA及蛋白表达的影响 ,以探讨NP雌激素活性的分子生物学作用机制。方法　将PEO4细胞在DMEM培养液中进行常规传代培养。采用MTT比色法观察NP对PEO4细胞增殖的影响 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)技术和免疫组化方法检测NP对c -myc原癌基因和p5 3抑癌基因表达的影响。 结果　与溶剂对照组相比 ,在 (8～ 96 )× 10 -7mol/L浓度范围内 ,NP与 8× 10 -9mol/L雌二醇作用类似可显著促进PEO4细胞增殖 (P <0 0 5 ) ,并表现出良好的剂量 -效应和时间 -效应关系。RT -PCR及免疫组化结果显示 ,32× 10 -7mol/LNP可促进卵巢癌细胞PEO4c -myc和 p5 3mR NA及蛋白表达。结论　NP具有雌激素样生物活性 ,可促进雌激素反应性肿瘤细胞PEO4增殖 ,这一效应主要是通过影响c-mycmRNA和蛋白质的表达而实现的。     

环境雌激素对卵巢癌细胞PE04凋亡的影响

目的探讨膳食中的环境雌激素大豆异黄酮(genistein,GS)及玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对卵巢癌细胞PEO4凋亡的影响.方法将PEO4细胞在DMEM培养液(含10%小牛血清)中采用开放式单层贴壁培养,开始试验前将培养细胞用磷酸盐缓冲溶液洗涤后改为在无酚红DMEM培养液(含5%CDT-FBS)中继续培养5 d,其目的是耗尽细胞内储存的雌激素.实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照及2个试验组.观察指标包括亚二倍体细胞的峰高及位置,DNA断裂片段及凋亡小体的形成情况.结果雌激素耗尽能够明显诱导PEO4细胞发生凋亡,在这时候往培养液中分别加入32×10-9mol/L及96×10-9 mol/L的ZEA可抑制细胞的凋亡作用;而分别加入32×10-6mol/L及96×10-6 mol/L GS对细胞处理72 h可加重细胞的凋亡现象.结论 ZEA具有雌激素效应,可模拟雌二醇抑制细胞的凋亡作用;GS具有抗雌激素效应,在较大剂量范围内可促进细胞的凋亡.     

植物雌激素对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的 :　探讨植物雌激素大豆异黄酮 (genistein,GS)和玉米赤霉烯酮 (zearalenone,ZEA)对乳腺癌细胞株 MCF- 7增殖的影响。方法 :　雌激素依赖性 MCF- 7细胞在 DMEM培养液(含小牛血清 1 0 % )中采用开放式单层贴壁培养 ,于加受试物前 5 d将细胞用 PBS洗涤后改为无酚红高糖 DMEM(含 5 %经活性碳 -葡聚糖苷处理的胎牛血清 ,CDT- FBS)培养 ,实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照及两种受试物各四个剂量组 ,采用噻唑蓝 (MTT)法、3H- Td R掺入法及流式细胞术对 MCF- 7细胞的增殖情况进行分析。结果 :　与溶剂对照组相比较 ,GS(96μmol/ L,2 4h)可明显抑制 MCF- 7细胞增殖和细胞 DNA合成 ,并将细胞周期阻滞在 G2 / M;8μmol/ L GS处理96 h也能产生类似的抑制效果。 96 nmol/ L ZEA处理 2 4 h可明显促进 MCF- 7细胞增殖和细胞DNA合成 ,并将细胞周期由 G0 / G1向 S期推进 ,提高细胞分裂增殖指数。结论 :　ZEA和 GS均属环境雌激素 ,但对乳腺癌细胞 MCF- 7增殖产生的影响不同 ,ZEA可促进 MCF- 7增殖 ,而 GS能够抑制 MCF- 7细胞的增殖 ,即 GS具有用于癌症预防及有关保健食品开发的价值     

大豆异黄酮和玉米赤霉烯酮对卵巢癌细胞株PEO4增殖的影响

目的 通过观察大豆异黄酮(genistein,GS)和玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对卵巢癌细胞(PEO4)增殖的影响探讨其雌激素效应。方法 雌激素受体阳性卵巢癌细胞株PEO4在达克尔培养基(DMEM,含小牛血清10％)中采用开放式单层贴壁培养,于加受试物5d前将细胞用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后改在无酚红高糖DMEM(含活性碳-葡聚糖苷处理过的胎牛血清5％)中培养,实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照和2种受试物各4个剂量组,采用噻唑蓝法、^3H—TdR掺人法及流式细胞术对PEO4细胞的增殖情况进行分析。结果 与溶剂对照组相比较,96μmol/L对PEO4处理24h,可明显抑制PEO4细胞增殖和细胞DNA合成,并将细胞周期阻滞在G2／M;随着培养时间延长至48h,32μmol/L GS也能明显抑制PEO4细胞增殖,在浓度低于8μmol/L时,GS有促进细胞增殖的趋势。ZEA对PEO4增殖的影响与雌二醇类似,96nmol/L ZEA对细胞处理24h可明显促进PEO4细胞增殖和细胞DNA合成,并将细胞周期由G0／Gl向S期推进,提高细胞分裂增殖指数。结论 ZEA具有较强的雌激素效应,在较低的浓度条件下(8nmol/L,92h)即可促进雌激素受体阳性细胞PEO4的增殖作用;GS对PEO4细胞的影响作用比较复杂,较低浓度的GS(＜10nmol／L)促进细胞的增殖作用,而在高浓度的处理条件下则抑制细胞的增殖作用。这些资料提示高剂量的GS有抗卵巢癌的作用,而ZEA具有雌激素样效应。     

膳食雌激素影响乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的:探讨膳食中常见的两种环境类雌激素大豆异黄酮(genistein,GS)、玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)影响人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的分子生物学作用机制。方法:MCF-7细胞在DMEM培养液(含10%胎牛血清)中进行常规传代培养,实验前将细胞转移至无酚红DMEM(含5%活性碳葡聚糖苷处理过的FBS)中继续培养5d,收集细胞,PBS洗涤后接种于内置血盖片的六孔板或75ml培养瓶,32×10-9mol/LZEA和75×10-6mol/LGS对细胞分别处理72h,用半定量RT-PCR技术观察GS对核增殖抗原PCNA、bcl-2及baxmRNA表达的影响,并用免疫组化方法对结果进行验证。结果:与溶剂对照组相比,75×10-6mol/LGS对MCF-7细胞处理72h可显著提高baxmRNA表达而抑制bcl-2和PCNAmRNA的表达,随后的免疫组化实验也证实了这一结果;ZEA的作用效应则与GS相反。结论:膳食雌激素GS和ZEA可通过影响细胞增殖和凋亡相关调节基因PCNA、bcl-2和bax表达而调节人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和凋亡作用。     

染料木黄酮对MCF-7细胞肿瘤相关基因表达的影响

目的:用基因芯片技术观察染料木黄酮(genistein,GS)对雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7肿瘤相关基因表达的影响。方法:75×10-6mol/LGS对MCF-7细胞处理72h,收集细胞并提取总mRNA,用Cy5和Cy3两种荧光染料通过逆转录反应将mRNA分别标记成两种探针,与载有一组靶基因的人肿瘤相关基因表达谱芯片杂交、经计算机扫描分析得出GS处理后的差异表达基因。结果:筛选出包括与细胞增殖、细胞凋亡、雌激素反应等相关的差异表达基因共22条(7.3%,22/300)。18个下调基因(占81.8%)主要是促进细胞增殖活力的原癌基因和与肿瘤细胞逃逸、扩散有关的肿瘤细胞表面抗原基因;4个上调基因均为雌激素反应性基因。结论:GS所影响的基因多与细胞增殖和肿瘤细胞免疫逃逸调节有关,调节此类基因的表达可能是GS发挥抗癌防癌作用的主要机制;GS上调的4个基因均属于雌激素上调基因,表明GS与雌激素受体结合后,除产生抗雌激素样效应外,还能激活雌激素反应元件而表现一定的雌激素效应。     

Effects of Xenoestrogenic Environmental Pollutants on the Proliferation of a Human Breast Cancer Cell Line (MCF-7)

A human breast cancer cell line (MCF-7) was used to develop an in vitro screening assay for the detection of xenoestrogenic environmental pollutants. MCF-7 cells were cultured in DMEM containing 5% fetal bovine serum (FBS). An estrogenic response was defined as an increase in the frequency of proliferating MCF-7 cells, and was measured using a thymidine analog, bromodeoxyuridine, and flow cytometry. Di-2-ethylhexyl phthalate (DEHP) and 4-n-nonylphenol (4-n-NP) were used as model chemicals. The proliferation rate of S-phase cells after 24 h of exposure to various concentrations of 17β-estradiol and to model compounds was compared with a positive and a negative control, containing 1 nM 17β-estradiol and 0.1% ethanol, respectively. DEHP and 4-n-NP increased the frequency of proliferating MCF-7 cells in a dose-dependent manner. The lowest concentration that significantly increased the proliferation of MCF-7 cells was 10 μM for DEHP and 1 μM for 4-n-NP. The results showed that the assay is accurate and quick to perform. It may prove a valuable tool for screening potential estrogen-mimicking environmental pollutants. Received: 5 May 1997/Accepted: 9 September 1997     

GPR30-EGFR信号通路在双酚A促乳腺癌细胞增殖中的作用

目的:探讨GPR30-EGFR信号传导通路在双酚A促乳腺癌MCF-7细胞增殖中的作用,为研究双酚A诱导乳腺癌的确切机制提供依据。方法:采用Western blot检测双酚A处理乳腺癌MCF-7细胞24 h和48 h后GPR30-EGFR的表达情况,采用MTT法检测AG1478抑制EGFR后双酚A对乳腺癌细胞增殖的影响。结果:EGFR在1μM双酚A作用48 h后其诱导表达最明显(P<0.05);GPR30在双酚A作用48 h后表达下调明显(P<0.05)。通过EGFR的高选择性抑制剂AG1478对乳腺癌细胞中的EGFR进行阻断,当AG1478和双酚A协同作用时,乳腺癌MCF-7细胞的增殖相对于双酚A单独作用组无明显区别(P>0.05)。结论:在双酚A所诱导的乳腺癌MCF-7细胞的增殖作用中,EGFR被有效地激活,GPR30蛋白在与双酚A作用后表达有所减弱;EGFR不是双酚A促细胞增殖的必经通路,双酚A可能通过其他通路发挥促细胞增殖作用。