人TPO N端结构域在毕赤酵母中的分泌表达及产物鉴定

目的在酵母系统中分泌表达人ＴＰＯＮ－端结构域，对其生物学活性进行初步研究，为与其它ＴＰＯ分子进行ＴＰＯ糖基化生物学意义的研究打基础。方法将编码人ＴＰＯ成熟肽Ｎ端１９５个氨基酸的ｃＤＮＡ与酵母整合型载体ｐＰＩＣＺαＡ重组，构建的重组质粒用ＤｒａⅠ消化成线性ＤＮＡ，转染酵母细胞ＧＳ１１５，使ＴＰＯ基因整合到酵母染色体上；用ＴＰＯ抗体筛选获得遗传性分泌稳定表达的重组酵母细胞株；用ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ鉴定ＴＰＯ产物及分子量；用对小鼠骨髓细胞形成巨核细胞集落形成单位（Ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ，ＣＦＵ－Ｍｅｇ）的方法测定活性。结果获得了ＴＰＯＮ－端结构域在酵母系统中的分泌表达，表达产物可被ＴＰＯ抗血清识别，分子量约为２２０００；其产物对小鼠骨髓细胞形成ＣＦＵ－Ｍｅｇ具有明显的刺激作用。结论在巴氏毕赤酵母系统中成功地分泌表达了有生物学活性的人ＴＰＯＮ－端结构域     

血小板生成素糖基化与其体内生物学活性关系的研究

为探讨血小板生成素（ＴＰＯ）糖基化与其体内生物学活性的关系，给血小板缺乏症小鼠模型腹腔分别注射相同活性单位酵母系统表达的人ＴＰＯ成熟肽或大肠杆菌表达的人ＴＰＯＮ－端结构域蛋白，连续给药５ｄ，每天一次，末次给药后３ｄ，比较两种ＴＰＯ组动物外周血血小板数量、骨髓巨核细胞培养单位（ＣＦＵ－Ｍｅｇ）、骨髓有核细胞ＤＮＡ含量。结果高、中、低剂量的ＴＰＯ成熟肽组动物的血小板数、巨核细胞集落数和骨髓ＤＮＡ含量均明显高于ＴＰＯＮ－端结构域蛋白的相应组（Ｐ＜０．０１）。显示酵母系统表达的ＴＰＯ成熟肽比大肠杆菌表达的ＴＰＯＮ－端结构域有明显的生物学活性，这可能与它们的糖基化程度及半衰期有关。     

人TPO全长分子在大肠杆菌中的表达及其活性分析

利用反转录－ＰＣＲ从人胎肝中获得编码血小板生成素（ｈＴＰＯ）全长ｃＤＮＡ，在大肠杆菌中表达了人ＴＰＯ全长分子。电镜观察结果，目的蛋白在菌体内以包涵体形式存在，表达量约占菌体总蛋白的２７％；表达产物经初步纯化后，与ＣＯＳ－７细胞中表达的人ＴＰＯ３５３个氨基酸全长分子分别做ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体内活性分析，结果表明，原核与真核系统表达的ＴＰＯ均具有明显促进血小板生成的作用。这为进一步研究ＴＰＯ的糖基化与其生物学活性及半衰期关系打下基础。     

血小板生成素糖基化与基体内生物学活性关系的研究

为探讨血小板生成素糖基化与其体内生物学活性的关系,给血小板缺乏症小鼠模型腹腔分别注射相同活性单位酵母系系统表达的人ＴＰＯ成熟肽或大肠杆菌表达的人ＴＰＯＮ－Ｕ端结构域蛋白,连续给药５ｄ,第天一次,未次给药后３ｄ,比较两种ＴＰＯ组动物外周血血小板数量、骨髓巨核细胞培养单位、     

人血小板生成素在重组痘苗病毒中的分泌表达

目的研究人血小板生成素（ｈＴＰＯ）在重组痘苗病毒中的表达。方法以ＰＣＲ法从人胚肝ｃＤＮＡ文库中克隆完整的ｈＴＰＯ基因,将所克隆基因插入痘苗病毒表达质粒ｐＪＳＡ１１７５ＳｍａⅠ位点,置于７．５Ｋ启动子控制之下,并构建在３４９位氨基酸变异与非变异的两种ＴＰＯ重组痘苗病毒。以Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法和促ＴＰＯ依赖细胞增殖的活性测定,进行表达产物的检测。结果研究证实：ｈＴＰＯ可分泌性的表达于重组痘苗病毒感染细胞上清中,并具有特异性的生物学活性。结论ｈＴＰＯ在重组痘苗病毒中的表达为ＴＰＯ结构与功能研究提供了一条新途径。     

血清抗甲状腺球蛋白抗体和抗甲状腺过氧化物酶抗体检测在甲状腺疾病诊断及甲亢预后判断中的价值

采用放免法检测甲状豚疾病患者抗甲状腺球蛋白抗体（ＴＧＡｂ）和抗甲状腺过氧化物酶抗体（ＴＰＯＡｂ）、并对部分Ｇｒａｖｅｓ病患者停药后随诊一年的结果进行分析。结果显示：（１）自身免疫性甲状腺疾病患者ＴＧＡｂ和ＴＰＯＡｂ活性及阳性率明显高于非ＡＩＴＤ，尤以桥本甲状腺炎为然。（２）ＧＤ治疗前及停药时ＴＧＡｂ和ＴＰＯＡｂ均阴性者与均阳性者停药一年内的复发率分别为０．５８３和０．２３１。（３）ＴＧＡｂ和ＴＰＯＡｂ均阴性，而停药时甲状腺刺激抗体（ＴＳＡｂ）阳性者，停药时ＧＤ复发的机率最大（０．９０９），提示ＴＧＡｂ和ＴＰＯＡｂ检测在ＡＩＴＤ诊断，鉴别诊断以及ＧＤ预后判断中具有重要的临床意义。     

血清抗甲状腺球蛋白抗体和抗甲状腺过氧化物酶抗体检测在？…

采用放免法检测甲状腺疾病患者抗甲状腺球蛋白抗体（ＨＴＧＡｂ）和抗甲状腺过氧化物酶抗体（ＴＰＯＡｂ），并对部分Ｇｒａｖｅｓ病患者焦药后随诊一年的结果进行分析。结果显示：（１）自身免疫性甲状腺疾病患者ＴＧＡｂ和ＴＰＯＡｂ活性及阳性率及明显高于ＡＩＴＤ，尤以桥本甲状腺炎为然。（２）ＧＤ治疗前及停药时ＴＧＡｂＴ和ＴＧＡｂ和ＴＰＯＡｂ均阴性者与均阳性者停药一年内的复发率分别为０．５８３和０．２３１。（３）Ｔ     

雷公藤抑制致敏小鼠CD4^＋T细胞核因子GATA3,NFAT的活性

目的 探讨致敏小鼠ＣＤ４＾＋Ｔ淋巴细胞核转录因子ＧＡＴＡ３、ＮＦＡＴ活性的变化及雷公藤内酯醇（ＴＰ）的作用。方法 采用卵蛋白（ＯＶＡ）致敏的方法建立模型；运用ｐａｎｎｉｎｇ法分离ＣＤ４＾＋Ｔ淋巴细胞；通过凝胶电泳迁移率实验（ＥＭＳＡ）对ＣＤ４＾＋Ｔ淋巴细胞核因子ＧＡＴＡ３、ＮＦＡＴ的ＤＮＡ结合活性及ＴＰ的作用进行检测，同时就ＴＰ的作用与地塞米松（ＤＭ）相比较。结果 正常小鼠ＣＤ４＾＋Ｔ淋巴细胞核因     

氧自由基产生体系及丹参素对大鼠心肌线粒体质子ATP酶水解…

本实验采用ＦｅＳＯ４／抗坏血酸体系观察了氧自由基对大鼠心肌线粒体质子ＡＴＰ酶（Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ）水解与合成活性的损伤作用及丹参素（ＤＳ－１８２）的保护作用效应。结果表明：ＦｅＳＯ４／抗坏血酸体系产生的氧自由基可使线粒体Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ水解活性明显升高、合成活性明显下降，丹参素可以防止Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ水解活性升高，合成活性下降，显示出良好的保护作用。     

人血小板生成素cDNA的克隆及序列分析

血小板生成素（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＴＰＯ）是促进血小板生成的重要细胞因子，它主要促进巨核细胞的成熟以至形成血小板。自从１９９４年报道了ＴＰＯｃＤＮＡ的序列后，ＴＰＯ的基因工程研究成为继ＥＰＯ之后的又一个热点。我们根据人ＴＰＯ信号肽和成熟肽编码区ｃＤＮＡ的５′和３′端分别合成两条引物，采用反转录－ＰＣＲ技术，成功地从人胎肝细胞ｍＲＮＡ中获得了ＴＰＯ信号肽和成熟肽编码区ｃＤＮＡ。反转录产物经ＰＣＲ扩增出分子量约为１．１ｋｂ的片段，与预计片段大小相符合。ＴＰＯｃＤＮＡ在ＡＴＧ下游３６６ｂｐ处…     

氧自由基产生体系及丹参素对大鼠心肌线粒体质子ATP酶水解与合成活性的影响

本实验采用ＦｅＳＯ＿４／抗坏血酸体系观察了氧自由基对大鼠心肌线粒体质子ＡＴＰ酶（Ｈ￣＋－ＡＴＰａｓｅ）水解与合成活性的损伤作用及丹参素（ＤＳ－１８２）的保护作用效应。结果表明：ＦｅＳＯ＿４／抗坏血酸体系产生的氧自由基可使线粒体Ｈ￣＋－ＡＴＰａｓｅ水解活性明显升高、合成活性明显下降，丹参素可以防止Ｈ￣＋－ＡＴＰａｓｅ水解活性升高，合成活性下降、显示出良好的保护作用。     

血小板生成素的研究新进展

血小板生成素（ＴＰＯ）又称巨核细胞生长发育因子（ＭＧＤＦ）或Ｃ－ｍｐＬ配体（ＭＬ）。它由３３２个氨基酸组成，主要由肝脏产生。ＴＰＯ与巨核细胞系表面的细胞膜受体结合后，激活了细胞内的信号传导系统。Ｊａｋ２，Ｓｈｃ，Ｇｒｂ２，Ｓｔａｔ３，Ｓｔａｔ５等信号分子参与了ＴＰＯ作用下的信号传导过程。巨核细胞的数量比循环中的血小板数更决定体内ＴＰＯ的水平。ＴＰＯ在巨核细胞的增殖分化过程中具有关键作用，是血小板生成的最重要调节因子，同时与其它多能的细胞因子协同促进造血干细胞增殖分化为红系和粒系祖细胞     

磁场对AMI大鼠血SOD活性及心肌ATP含量变化的影响

本实验将大鼠随机分为五组：空白对照组、磁作用对照组、ＡＭＩ组、ＡＭＩ药物（心得安）治疗组、ＡＭＩ磁场治疗组。分别采用四氮唑蓝法和生物发光法测定各组大鼠血红细胞ＳＯＤ活性及心肌ＡＴＰ含量。结果表明：ＡＭＩ磁场治疗组血红细胞ＳＯＤ活性及心肌ＡＴＰ含量均明显高于ＡＭＩ组（Ｐ＜０．０１），磁作用对照组高于空白对照组（Ｐ＜０．０５）。初步证实，磁场对ＡＭＩ大鼠和健康大鼠心肌具有一定的保护作用，此种作用对ＡＭＩ大鼠更为明显。     

抗人甲状腺过氧化物酶抗体与其他自身抗体的关系

甲状腺过氧化物酶（ＴＰＯ）是甲状腺微粒体的抗原成分。在纯化抗原建立测定抗ＴＰＯ抗体ＥＬＩＳＡ法的基础上，并对抗ＴＰＯ与其他自身抗体的伴随关系作了研究。发现除自身免疫性甲状腺病有较高阳性率外，ＳＬＥ等患者抗ＴＰＯ检出率也很高（１０％￣５２．１％），且抗ＴＰＯ阳性者，抗核抗体等其他自身抗体的阳性率也高达３０．８％￣９５．２％。抗ＴＰＯ抗体与其他自身抗体的相关系数ｒ＝０．７４６７（Ｐ〈０．０１）。     

gp130单克隆抗体(B-K5)抑制OM的生物学活性

目的一组抗ｇｐ１３０分子的单克隆抗体已被制备。对这组单抗的生物学及功能特性的研究首次表明，ｇｐ１３０分子上不同位点涉及不同的ｇｐ１３０细胞因子的生物学活性。在本研究中，其中一个抗ｇｐ１３０单抗，Ｂ－Ｋ５，将被作进一步研究。方法采用ｇｐ１３０细胞因子ＯＭ和ＬＩＦ，Ｂ－Ｋ５单抗以及对ｇｐ１３０细胞因子高度敏感的细胞株（ＸＧ４－ＣＮＴＦ），通过３Ｈ－ＴｄＲ的掺入作生物学检测，以期进一步确定Ｂ－Ｋ５单抗的生物学特性。结果当ＯＭ和ＬＩＦ的浓度各自为３００ｐｇ／ｍｌ和１００ｐｇ／ｍｌ时，Ｂ－Ｋ５单抗可抑制ＯＭ和ＬＩＦ的生物学活性；但当ＯＭ的浓度上升至３ｎｇ／ｍｌ时，Ｂ－Ｋ５仍可抑制ＯＭ的生物学活性。相反，当ＬＩＦ浓度在１ｎｇ／ｍｌ时，Ｂ－Ｋ５却不能抑制了，即使Ｂ－Ｋ５单抗的浓度已被提高。结论Ｂ－Ｋ５单抗主要影响ＯＭ的生物学活性。     

NO与细胞凋亡

自由基ＮＯ是体内ＮＯＳ催化Ｌ－精氨酸氧化生成的一种具有多种生物学效应的特殊介质，通过和细胞内的酶作用，形成ＯＨ－，直接损伤ＤＮＡ等方式发挥其影响。除在转录及表达水平经防止凋亡抑制基因ｂｃ１－２表达减少而阻止Ｂ细胞凋亡外，ＮＯ经损伤ＤＮＡ、抑制核酸和蛋白质合成、减少ＡＴＰ产生、降低ｐＨ和改变Ｃａ２＋分布、增强ｐ５３表达等途径介导其他多种细胞凋亡。     

Graves病患者甲状腺和外周静脉血中甲状腺特异性抗体的对比研究

本文对比研究１１例Ｇｒａｖｅｓ病（ＧＤ）和９例非ＧＤ患者甲状腺静脉血（ＴＶＢ）和外周静脉血（ＰＶＢ）中甲状腺刺激抗体（ＴＳＡｂ）、甲状腺球蛋白抗体（ＴＧＡｂ）和甲状腺过氧化物酶抗体（ＴＰＯＡｂ）的活性和Ｔ３、Ｔ４浓度。结果显示：（１）抗体阳性的ＧＤ患者，其ＴＶＢ中ＴＳＡｂ、ＴＧＡｂ和ＴＰＯＡｂ水平均显著高于ＰＶＥ的，ＰＶＢ和ＴＶＢ的ＴＳＡｂ活性呈显著正相关，这提示甲状腺本身是甲状腺特异性抗体产生的主要部位；（２）ＧＤ组和非ＧＤ组ＴＶＢ和ＰＶＢ的血清Ｔ３、Ｔ４不形成浓度梯度；（３）ＴＳＡｂ、ＴＧＡｂ和ＴＰＯＡｂ活性及其在ＴＶＢ和ＰＶＢ之间的活性梯度，与ＴＶＢ和ＰＶＢ中Ｔ３、Ｔ４浓度均无相关关系。     

牛磺酸对离体大鼠脊髓缺氧／复氧损伤的保护作用

本文在孵育的离体大鼠脊髓组织切片上，观察牛磺酸对缺氧／复氧损伤的影响，缺氧／复氧损伤引起大鼠脊髓组织ＡＴＰ含量减少和ＬＤＨ漏出增多，ＮＯ生成和ＮＯＳ活性明显增加，Ｌ－精氨酸转运Ｖｍａｘ增加９７％（Ｐ〈０．０１），Ｋｍ值无明显变化，用１０和２０ｍｍｏｌ／Ｌ牛磺酸卵育与单纯缺氧／臭氧组比较，显著减轻了缺氧／复氧引起的组织ＡＴＰ减少和ＬＤＨ漏出，ＮＯ生成分别低３４％（Ｐ〈０．０１）和４０％（Ｐ〈０．０１     

老化对心肌缺氧性应激耐受力的影响及SOD,ATP,四逆汤的保护作用

用小鼠研究了老年心脏的自由基及对缺氧应激耐受力（Ｔ－ＡＳ）的变化，同时探讨了外源性ＳＯＤＡＴＰ及四逆汤对老年心脏耐受性缺氧应激的影响，结果表明：与青年对照小鼠相比，老年小鼠心脏在缺氧环境下心电话动时间（ＣＥＡＴ）显著缩短，缺氧１５ｍｉｎ内停电率明显上升，提示，老年心脏Ｔ－ＡＳ明显减弱，同时，老年心脏ＯＦＲ浓度增加，ＳＯＤ活性下降，ＭＤＡ含量上升，提示，老年心脏存在异常的自由基反应，这可能是老年心脏     

人血小板生成素cDNA转染COS-7细胞及表达产物对小鼠骨髓巨核细胞的作用

将克隆全长１．１ｋｂ血小板生成素（ＴＰＯ）ｃＤＮＡ构建重组ＰＣＩｎｅｏＴＰＯ表达载体，利用ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎＴＭ介导转染ＣＯＳ－７细胞中，对阳性克隆ＣＯＳ－７细胞的ＤＮＡ、ｍＲＮＡ和培养上清分别进行ＰＣＲ扩增Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、斑点杂交和ＴＰＯ夹心ＥＬＩＳＡ检测，观察表达产物对小鼠骨髓巨核细胞的作用。结果表明：全长１．１ｋｂＴＰＯｃＤＮＡ转染ＣＯＳ－７细胞获得表达，最高表达量可达４８．２８Ｕ／ｍｌ，其产物使骨髓巨核细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＭＫ）集落数增加４倍，巨核细胞增大至４２．１０±６．７０μｍ（Ｐ＜０．０１）；动态观察骨髓ＣＦＵ－ＭＫ集落数于实验第８天达最高峰，约持续２ｄ，第１０天后开始下降。提示ＴＰＯｃＤＮＡ转染ＣＯＳ－７细胞表达产物对骨髓巨核细胞生成有刺激活性