金属蛋白酶解离素28在牙齿发育中的研究进展

金属蛋白酶解离素28（a disintegrin and metallo2 proteinase 28，ADAM28）是ADAM家族最近发现的一种分泌性糖蛋白，它同样具有ADAM家族的生理功能：参与细胞增殖，分化，胞外基质重建，裂解基质蛋白和细胞迁移等。研究显示，ADAM28基因参与了牙胚的发育过程，并在牙源性间充质细胞的增殖、分化和凋亡中发挥重要的调控作用。同时ADAM28基因具有金属蛋白酶活性，因而它对于细胞外基质的形成和蛋白的外功能区脱落有重要的调节作用。本文着重回顾了近年来国内外关于ADAM28生物学功能的研究及其在牙齿发育中的作用机制。     

牙齿发育相关基因ADAM28在人牙乳头细胞中的定位分布研究

目的探讨牙齿发育相关基因金属蛋白酶解离素28(a disintegrin and metalloproteinase28,ADAM28)在人牙乳头细胞(human dental papilla cells,HDPC)中的定位分布及作用。方法应用基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-ADAM28,通过细胞培养、基因转染HDPC后,采用免疫荧光、RT-PCR及Western blot检测ADAM28在HDPC中的表达分布。结果成功构建并鉴定ADAM28真核质粒,瞬时转染HDPC72h后,HDPC的胞质和胞膜上均表达ADAM28蛋白,而两对照组均无表达。结论ADAM28在HDPC内能被正确地翻译、表达,可能作为一种胞质蛋白调控着牙源性间充质细胞的增殖和分化。     

ADAM28真核表达质粒的构建及转染人牙囊细胞后的表达分析

目的:构建金属蛋白酶解离素28(ADAM28)真核表达质粒,转染人牙囊细胞(HDFC)后检测ADAM28在HDFC中的表达分布。方法:采用基因重组技术构建ADAM28真核表达质粒,通过细胞培养、脂质体Lipofectamine2000介导转染HDFC后,应用免疫荧光、RT-PCR及Western印迹检测ADAM28在HDFC中的表达。结果:成功构建并鉴定ADAM28真核质粒,瞬时转染HDFC72h后,检测证实真核质粒转染组的HDFC表达ADAM28蛋白,而2个对照组均无表达。结论:ADAM28在HDFC内能被正确翻译和表达,为进一步探讨其在牙源性细胞中的生物学功能奠定了基础。     

ADAM28反义核酸对人牙乳头细胞内ADAM28表达的影响

目的：探讨金属蛋白酶解离素28（ADAM28）反义核酸对人牙乳头细胞（HDPC）内ADAM28蛋白表达的影响。方法：应用反义核酸技术,设计并合成与ADAM28mRNA特异序列互补的AS-ODN和正义对照S-ODN转染HDPC后,通过免疫细胞化学、PCR和Westernblot检测细胞中ADAM28的表达差异。结果：ADAM28AS-ODN转RT-染HDPC后,在转录、翻译和蛋白水平细胞内ADAM28的表达均明显减弱,统计学分析有显著性差异（P〈0.01）。结论：应用ADAM28AS-ODN可有效封闭HDPC内ADAM28的表达,为进一步研究反义核酸在牙胚组织和细胞中的功能提供实验和理论依据。     

ADAM10在舌癌中的表达及其意义

目的：研究ADAM10在舌鳞状细胞癌（tongue squamous cell carcinomas,TSCC）中的表达及其与临床病理因素的关系。方法：应用S-P免疫组织化学法检测49例舌鳞癌中ADAM10蛋白表达情况,并分析临床特征及病理学特点。结果：ADAM10蛋白的阳性表达主要定位于胞浆和胞膜。舌鳞癌伴淋巴结转移ADAM10表达高于未发生淋巴结转移者（P〈0.05）。ADAM10表达与肿瘤组织分化程度和临床参数无关。结论：ADAM10在舌癌组织中的表达与淋巴结转移相关,有可能成为新的临床观察指标。     

小鼠诱导性多能干细胞向牙源性上皮细胞分化的实验研究

目的：探讨小鼠诱导性多能干细胞（iPS, induced pluripotent stem cell）向牙源性上皮细胞分化的可能性和诱导条件，为牙齿再生提供细胞来源。方法：以成釉细胞无血清条件培养液（ASF—CM）为诱导微环境，定向诱导小鼠iPS细胞向牙源性上皮细胞转化，观察培养后形态改变，细胞免疫荧光及RT—PCR检测成釉蛋白（AMBN，ameloblastin）、釉原蛋白（AMGN，amelogenin）、细胞角蛋白14（CKl4，cytokeratin 14）的表达。结果：小鼠iPS细胞在ASF—CM诱导微环境下，成功分化为牙源性上皮样细胞，呈典型的上皮样细胞形态，免疫荧光及RT-PCR结果显示：AMBN、AMGN、CK14表达阳性，对照组表达阴性。结论：ASF-CM提供了适宜的成牙微环境，能够促进小鼠jPS细胞向牙源性上皮细胞分化。     

ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空表达

目的:研究ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空分布。方法:采用免疫组织化学方法和图像分析技术观察ADAM28在小鼠牙胚发育各期的表达分布及差异。结果:ADAM28在牙胚发育各时期均有不同程度的表达。帽状期开始即在口腔上皮及成釉器星网层细胞、基底膜、牙乳头细胞和牙囊细胞表达强阳性,到钟状晚期,成釉细胞、釉基质、上皮根鞘和牙乳头细胞阳性表达;至冠根硬组织发育期,成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘、成牙骨质细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞阳性表达。结论:ADAM28作为上皮和间充质间重要的信号分子,参与了从蕾状期到钟状晚期、从基质分泌到硬组织形成的牙冠、牙根形态发生过程,它可能在牙源性间充质细胞的早期形成、增殖与分化启动中发挥重要作用。     

ADAM28反义核酸对人牙乳头细胞表达细胞外基质蛋白的影响

目的：研究金属蛋白酶解离素28（ADAM28）反义核酸（AS—ODN）转染人牙乳头细胞（HDPC）后，对其表达多种细胞外基质蛋白（BSP、OPN、DSPP、CollagenⅠ／Ⅲ）的影响。方法：采用细胞培养、基因转染、免疫细胞化学和图像分析技术检测ADAM28反义核酸对HDPC表达上述基质蛋白的影响。结果：ADAM28反义核酸转染HDPC后BSP、DSPP、CollagenⅠ的表达明显减弱（P〈0．01），OPN、Collagen Ⅲ的表达无明显变化（P〉0．05）。结论：ADAM28反义核酸可有效封闭人牙乳头细胞内BSP、DSPP、CollagenⅠ的表达，ADAM28基因对BSP、DSPP、CollagenⅠ的表达起显著的正向调节作用。     

ADAM9、ADAM10基因沉默对腺样囊性癌高转移潜能细胞生物学行为的影响

目的：探讨ADAM9、ADAM10基因沉默对腺样囊性癌高转移潜能细胞生物学行为的影响。方法：采用免疫组化检测15例腺样囊性癌原发灶和相应淋巴结转移组织中ADAM9、ADAM10蛋白的表达情况;采用RNA干扰方法抑制腺样囊性癌高转移潜能细胞系ACC-M、SACC-LM中ADAM9、ADAM10基因的表达,检测该基因沉默后对肿瘤细胞周期及体外增殖、转移能力的影响。采用SPSS11.0软件包对数据进行单因素方差分析及Fisher确切概率检验。结果：ADAM9、ADAM10蛋白在腺样囊性癌淋巴结转移组织中的表达比在原发灶组织中显著增高（P〈0.05）;ADAM9、ADAM10基因沉默后细胞增殖能力下降（P〈0.05）,肿瘤细胞出现S期阻滞;并且ADAM9、ADAM10基因沉默后,肿瘤细胞的体外侵袭能力显著下降（P〈0.01）。结论：ADAM9和ADAM10基因表达与腺样囊性癌的转移有关。ADAM9、ADAM10基因沉默可改变腺样囊性癌细胞体外增殖能力、侵袭能力等生物学特性。     

ADAM28反义核酸对人牙髓干细胞生物学特性的影响

目的：探讨金属蛋白酶解离素28（ADAM28）反义核酸（AS-ODN）对人牙髓干细胞（HDPSCs）增殖、分化、凋亡特性的影响并分析可能的作用机制。方法：体外分离培养、鉴定HDPSCs,将FITC荧光标记的ADAM28反义核酸（AS-ODN）和正义对照（S-ODN）分别转染HDPSCs,用半定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印迹法（Westernblot）检测ADAM28AS-ODN转染48h后的封闭效率,应用四唑盐（MTT）比色法、酶动力学法和流式细胞术（FCM）分别检测实验各组HDPSCs的增殖活性、碱性磷酸酶（AKP）的分泌活性以及细胞周期分布和凋亡百分比。采用SPSS13.0软件包的SNK检验进行统计学分析。结果：AS-ODN转染组ADAM28mRNA和蛋白的表达水平均明显下调（P〈0.05）,细胞增殖活性、增殖指数明显降低（P〈0.05）,碱性磷酸酶（AKP）分泌水平和细胞凋亡率显著增高（P〈0.05）。结论：ADAM28AS-ODN可显著抑制HDPSCs的增殖并影响细胞周期的变化,促进AKP的分泌活性并诱导HDPSCs的凋亡。     

ADAM28反义核酸对人牙乳头细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的研究金属蛋白酶解离素28（ADAM28）反义核酸（AS-ODN）对人牙乳头细胞（HDPC）增殖、分化、凋亡等生物学特性的影响并分析可能的作用机制。方法采用细胞培养、基因转染、四唑盐（MTr）比色法、酶动力学法和流式细胞术（FCM）检测ADAM28反义核酸转染HDPC后对细胞生物学特性的影响。结果ADAM28 AS-ODN组HDPC的增殖活性、增殖指数、碱性磷酸酶（ALP）分泌活性显著降低,凋亡细胞百分比明显上升。结论ADAM28反义核酸可显著抑制HDPC的增殖和ALP的活性,显著诱导HDPC的凋亡并影响细胞周期的变化。     

ADAM28反义核酸对人牙囊细胞内ADAM28表达的影响

目的探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸对人牙囊细胞(HDFC)内ADAM28蛋白表达的影响。方法应用反义核酸技术,设计并合成与ADAM28 mRNA特异序列互补的AS-ODN和正义对照S-ODN转染HDFC后,通过免疫细胞化学、RT-PCR和Western blot检测细胞中ADAM28的表达差异。结果ADAM28 AS-ODN转染HDFC后,在转录、翻译和蛋白水平细胞内ADAM28的表达均明显减弱,统计学分析有显著性差异(P<0.01)。结论ADAM28 AS-ODN可有效封闭HDFC内ADAM28的表达。     

ADAM28反义核酸对人牙囊细胞生物学特性的影响

目的：研究ADAM28反义核酸（As—ODN）对人牙囊细胞（HDFC）增殖、分化、凋亡等生物学特性的影响。方法：采用细胞培养、基因转染、四唑盐（MTT）比色法、酶动力学方法和流式细胞术（FCM）检测ADAM28反义核酸转染HDFC后对细胞生物学特性的影响。结果：ADAM28AS—ODN组HDFC的增殖活性、增殖指数、碱性磷酸酶（ALP）分泌活性显著降低，凋亡细胞百分比明显上升。结论：ADAM28反义核酸可显著抑制HDFC的增殖和ALP的活性，显著诱导HDFC的凋亡并影响细胞周期的变化。     

金属蛋白酶解离素28对人牙乳头细胞生物学特性的影响

目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)基因对人牙乳头细胞(HDPC)增殖、分化、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制.方法:应用细胞培养、基因转染、MTT、流式细胞术(FCM)和酶动力学等方法,探讨ADAM28基因对HDPC生物学特性的影响,采用SPSS12.0软件包中的SNK检验进行统计学分析.结果:成功转染ADAM28真核质粒,真核质粒转染组HDPC的增殖活性、增殖指数、碱性磷酸酶(ALP)分泌活性显著高于空载体组、未转染组,而凋亡细胞百分比显著低于两对照组,P<0.01.结论:ADAM28可显著促进HDPC的增殖和ALP的分泌,显著抑制HDPC的凋亡.