内毒素与内皮细胞直接结合和损伤特性的研究

目的 观察内毒素（LPS）和内皮细胞的结合及损伤特性。方法 分离培养大鼠心肌微血管内皮细胞（MMECs）,选择不同浓度的LPS及同一浓度不同时相点,作用于贴壁状态的MMECs,应用流式细胞仪,激光共聚焦荧光扫描显微镜（laser confocal scanning microscope,LCSM）进行观察和图象分析。结果 （1）随孵育时间延长,LPS作用后MMECs的OD值逐渐增加,30min为最高点,有时间依赖性。（2）LPS和MMECs共培养2h ,LPS浓度从0.03125-2.00000g/L,都可以使MMECs的阳性细胞数及OD值增加,0.2500g/L时是OD值的峰值,提示该浓度是LPS与MMECs的最佳结合浓度,有浓度的饱和性。（3）LPS可以进入MMECs胞浆和胞核。（4）LPS可导致MMECs的核移位和脱核。结论 （1）LPS在无血清状况下可以与内皮细胞结合,并进入细胞核。（2）LPS可导致内皮细胞的直接损伤。     

胰岛细胞移植物活体成像技术研究的新进展

胰岛细胞移植作为一种新的糖尿病治疗方法，给1型糖尿病患者带来了福音，可以使患者获得胰岛素独立和近似正常的血糖水平，不再增加低血糖的发生率。在过去的数10年里，对胰岛移植虽然作了大量的基础和临床研究，但在20世纪90年代以前，胰岛移植的总体成功率不足10％，90年代后期的近10年里，胰岛移植取得了巨大的进步，特别是2000年Emonton疗法被报道以后。糖尿病的治疗需要进行多次大量的胰岛细胞移植，有学者研究表明，     

活体肝脏移植动物模型实验研究进展

肝移植已被公认为是治疗终末期肝病的最有效治疗手段,但供体缺乏是目前阻碍肝移植发展的最大障碍之一。活体肝移植是目前解决供体缺乏的主要途径,建立活体肝脏移植的动物模型是开展临床活体肝移植工作的前提和进行基础研究的平台。现就目前国内外活体肝脏移植动物模型实验研究的进展作一综述。     

激光共聚焦显微镜技术在研究肠上皮细胞内钙超载中的应用

细胞内钙稳态的维持对生命活动至关重要。病理状态下细胞内钙超负荷将造成一系列代谢紊乱，致细胞坏死和凋亡。目前有关肠上皮细胞（IEC）缺血缺氧损伤导致IEC细胞内钙超载是否确切，钙离子阻断剂是否有防治作用，目前尚无这方面的研究报道。     

五倍子水提取物对菌斑生物膜早期形成过程中结构及细菌活性的影响

目的：应用人工口腔观察五倍子水提取物对菌斑生物膜早期形成过程中结构及细菌活性的影响。方法：选用与致龋相关的三种细菌在人工口腔中形成菌斑生物膜,实验组和对照组分别用2mg/ml五倍子水提取物和生理盐水处理;通过在激光共聚焦显微镜下,特异性荧光染料技术标记死菌和活菌,观察五倍子水提取物对菌斑生物膜早期形成过程中结构和细菌活性的影响。结果：实验组菌斑生物膜厚度降低,细菌呈散在分布,且死菌面积增大,活菌面积减小,细菌活性明显低于对照组。结论：五倍子水提取物能杀灭菌斑生物膜内的细菌,降低生物膜的活性,改变其结构的完整性。     

MSCT血管成像在活体肝移植供体评价中的应用

目的评价多层螺旋CT血管成像(MSCTA)在活体肝移植供体中的临床应用价值。方法对14例活体肝移植供体行MSCT检查．运用最大密度投影(MIP)和容积重建(VR)两种后处理方法．3例增加CPR,重建肝脏血管。结果14例供体中7例供体有8支重要的肝脏变异血管：3支肝动脉变异、3支肝静脉变异和2支门静脉变异。结论在活体肝移植供体评价中MSCTA是一种无创性的、可靠的检查方法．有较高的临床应用价值。     

胆道数字成像技术在活体肝移植肝内胆道解剖分型及胆道切面确定中的应用

目的 评价术中胆道数字成像技术在活体肝移植(living donor liver transplantation,LDLT)肝内胆道解剖分型和胆道切面确定中的作用及临床价值.方法 66例LDLT供者,通过术中胆道数字减影了解胆道分型及变异,结合金属标志物准确选择胆道离断位置,与手术结果比较,分析其在LDLT供者术中胆道解剖描述及切面确定中的作用.结果 所有供者均采用胆道数字成像技术对肝内胆道解剖进行分型,Ⅰ型(经典型)45例(68.2%),Ⅱ型(三叉型,胆总管由右前肝管、右后肝管、左肝管汇合而成)7例(10.6%),Ⅲ型(无右肝管主干,右后肝管汇入肝总管)13例(19.7%),Ⅳ型(无右肝管主干,右后肝管汇入左肝管)1例(1.5%),Ⅴ型(复杂分型)0例(0%).Ⅰ型所有供者均形成单一吻合口;Ⅱ型7例供者中4例形成2个吻合口,3例经成形或非成形后形成1个吻合口;Ⅲ型13例供者中9例形成2个吻合口,4例经成形后形成1个吻合口;Ⅳ型1例供者,2个胆道吻合口.所有供者都完成活体右半肝切取术.结论 术中胆道数字减影结合金属标志物可以精确显示肝内胆道解剖及变异并准确定位肝管切面,减少胆道吻合口数目,有助于供肝的安全获取和移植.

Abstract：

Objective To evaluate biliary digital imaging technology in determining the type of the intrahepatic bile duct anatomy and the transection plane of the duct in right lobe living donor liver transplantation(LDLT). Methods Mobile digital subtraction angiography was performed to show the intrahepatic bile duct anatomy of 66 liver transplant donor candidates. Combined with metal markers, the bile duct transection plane was defined. Comparing with the actual results, the effect of digital imaging technology in determining the intrahepatic anatomical variations and transection plane of the duct in LDLT was evaluated. Results Intrahepatic bile duct anatomical variations were showed in all donors by using digital imaging technology. type Ⅰ (classical type) was identified in45 cases (68.2%), type Ⅱ (with triple confluence, the simultaneous emptying of the right anterior segmental duct, right posterior segmental duct and left hepatic duct into the common hepatic duct) in 7 cases ( 10.6% ), type Ⅲ (no right hepatic duct stem, right posterior segmental duct draining into common hepatic duct) in 13 cases ( 19. 7% ), type Ⅳ (no right hepatic duct stem, right posterior segmental duct draining into left hepatic duct) in 1 case (1.5%), and type Ⅴ (complex variation ) in no case (0%). As a result, cases of type Ⅰ form a single anastomosis. In type Ⅱ, four cases formed double anastomoses, three cases formed single anastomosis with or without ductoplasty. In type Ⅲ, two anastomoses were formed in 9 cases, single anastomosis in 4 cases with ductoplasty. The case of type Ⅳ had double anastomoses. In all cases right lobe liver were harvested.Conclusions Biliary digital subtraction image combined with metal markers accurately defines intrahepatic bile duct anatomy and the transection plane, helping to reduce number of bile duct anastomosis, and contributes to safe graft harvesting.     

腹腔镜活体肝移植供肝切取技术的发展现状

活体肝移植在一定程度上解决了供体不足的窘境,但开腹手术创伤太大,制约了活体肝移植的发展,如何尽量减小创伤成为亟待解决的重大课题.腹腔镜技术以创伤小、康复快、对患者负担小的优势成为解决这一难题的有效途径.本文就腹腔镜在活体肝移植方面的应用发展做一综述.     

PKH26标记结合活体荧光成像技术在椎间盘组织工程研究中的应用

目的体外评估PKH26标记对山羊髓核细胞生物学功能的影响,并结合活体荧光成像系统评价种子细胞在裸鼠体内的生物学行为。方法取1岁龄山羊椎间盘分离髓核组织,通过酶消化法获取原代细胞,倒置相差显微镜下观察,传代获取第1代髓核细胞,行PKH26荧光标记,荧光显微镜下观察标记后的细胞荧光强度,并行甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色观察,锥虫蓝染色比较标记前后细胞活性,MTT法检测标记前后细胞增殖特性,实时荧光定量PCR检测细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白聚糖基因表达。将标记后的髓核细胞接种至一体化纤维化-髓核支架的髓核部分,纤维环部分作为阴性对照,体外培养3 d后植入5只6周龄雄性裸鼠体内,培养6周后活体成像技术检测髓核细胞-支架复合物在体内的荧光强度及范围。结果倒置相差显微镜观察示原代髓核细胞簇状生长,呈卵圆形,第1代髓核细胞呈类软骨样细胞形态;标记后的第1代髓核细胞甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色均呈阳性;标记后荧光强度均匀,标记前后细胞活性均在95%以上;标记前后细胞生长曲线比较差异无统计学意义(P>0.05);实时荧光定量PCR检测示标记前后细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。活体成像技术显示体内髓核支架有强烈荧光,纤维环支架未见荧光。结论 PKH26标记对髓核细胞的活性、增殖及细胞表型的表达无明显影响,结合体内活体荧光成像系统可以追踪细胞在体内的生物学行为。     

一种可用活体荧光成像技术检测的前列腺原位肿瘤模型的建立

目的建立可用活体荧光成像技术动态观察前列腺原位肿瘤发生及生长的裸鼠模型。方法 10只BALB/c裸鼠前列腺背侧包膜内注入携带红色荧光蛋白（RFP）的前列腺癌PC-3细胞（PR7细胞）悬液20μL,第2、4、6、8周分别用非侵入式活体分子影像系统观察前列腺原位肿瘤发生及其转移情况。尸检取前列腺原位肿瘤、肺、肝、肾、股骨、盆腔淋巴结等组织,制成冰冻切片,通过荧光显微镜下观察及HE染色等方法分别检测肿瘤发生及有无转移等情况。结果第2周开始可用非侵入式活体分子影像系统检测到前列腺原位肿瘤形成,第4周开始可于裸鼠下腹部触及原位肿瘤,第6～8周裸鼠逐渐出现恶液质。荧光信号随原位肿瘤长大而增强,但并未见明显转移灶。尸检也未发现转移灶。结论前列腺包膜内注入携带RFP的前列腺癌PR7细胞可成功建立可用活体荧光成像技术监测的前列腺原位肿瘤模型,该模型可作为研究前列腺肿瘤发生发展及治疗方式的较理想的动物模型。     

胆道数字成像技术在活体肝移植肝内胆道解剖分型及胆道切面确定中的应用

Objective To evaluate biliary digital imaging technology in determining the type of the intrahepatic bile duct anatomy and the transection plane of the duct in right lobe living donor liver transplantation(LDLT). Methods Mobile digital subtraction angiography was performed to show the intrahepatic bile duct anatomy of 66 liver transplant donor candidates. Combined with metal markers, the bile duct transection plane was defined. Comparing with the actual results, the effect of digital imaging technology in determining the intrahepatic anatomical variations and transection plane of the duct in LDLT was evaluated. Results Intrahepatic bile duct anatomical variations were showed in all donors by using digital imaging technology. type Ⅰ (classical type) was identified in45 cases (68.2%), type Ⅱ (with triple confluence, the simultaneous emptying of the right anterior segmental duct, right posterior segmental duct and left hepatic duct into the common hepatic duct) in 7 cases ( 10.6% ), type Ⅲ (no right hepatic duct stem, right posterior segmental duct draining into common hepatic duct) in 13 cases ( 19. 7% ), type Ⅳ (no right hepatic duct stem, right posterior segmental duct draining into left hepatic duct) in 1 case (1.5%), and type Ⅴ (complex variation ) in no case (0%). As a result, cases of type Ⅰ form a single anastomosis. In type Ⅱ, four cases formed double anastomoses, three cases formed single anastomosis with or without ductoplasty. In type Ⅲ, two anastomoses were formed in 9 cases, single anastomosis in 4 cases with ductoplasty. The case of type Ⅳ had double anastomoses. In all cases right lobe liver were harvested.Conclusions Biliary digital subtraction image combined with metal markers accurately defines intrahepatic bile duct anatomy and the transection plane, helping to reduce number of bile duct anastomosis, and contributes to safe graft harvesting.     

胆道数字成像技术在活体肝移植肝内胆道解剖分型及胆道切面确定中的应用

Objective To evaluate biliary digital imaging technology in determining the type of the intrahepatic bile duct anatomy and the transection plane of the duct in right lobe living donor liver transplantation(LDLT). Methods Mobile digital subtraction angiography was performed to show the intrahepatic bile duct anatomy of 66 liver transplant donor candidates. Combined with metal markers, the bile duct transection plane was defined. Comparing with the actual results, the effect of digital imaging technology in determining the intrahepatic anatomical variations and transection plane of the duct in LDLT was evaluated. Results Intrahepatic bile duct anatomical variations were showed in all donors by using digital imaging technology. type Ⅰ (classical type) was identified in45 cases (68.2%), type Ⅱ (with triple confluence, the simultaneous emptying of the right anterior segmental duct, right posterior segmental duct and left hepatic duct into the common hepatic duct) in 7 cases ( 10.6% ), type Ⅲ (no right hepatic duct stem, right posterior segmental duct draining into common hepatic duct) in 13 cases ( 19. 7% ), type Ⅳ (no right hepatic duct stem, right posterior segmental duct draining into left hepatic duct) in 1 case (1.5%), and type Ⅴ (complex variation ) in no case (0%). As a result, cases of type Ⅰ form a single anastomosis. In type Ⅱ, four cases formed double anastomoses, three cases formed single anastomosis with or without ductoplasty. In type Ⅲ, two anastomoses were formed in 9 cases, single anastomosis in 4 cases with ductoplasty. The case of type Ⅳ had double anastomoses. In all cases right lobe liver were harvested.Conclusions Biliary digital subtraction image combined with metal markers accurately defines intrahepatic bile duct anatomy and the transection plane, helping to reduce number of bile duct anastomosis, and contributes to safe graft harvesting.     

钛板和死骨表面细菌生物膜模型的建立及观察

[目的]探讨所建立的钛板和死骨表面的细菌生物膜(BBF)模型用于研究同种细菌在不同异物表面的BBF形成能力的可行性,从而指导慢性骨髓炎的治疗.[方法]采用改良的置片培养法建立钛板和死骨表面的BBF模型.用激光共聚焦显微镜采集BBF图像及测量BBF厚度、活菌百分率.[结果]BBF是具有高度组织化的多细胞群体结构.实验组钛板和死骨的BBF厚度分别为(39.20±4.26)μm和(44.70±4.22)μn(P＜0.05).在实验组钛板表面,中层和底层活菌百分率分别为(81.05±10.46)%和(52.20±5.45)%(P＜0.01).在实验组死骨表面,中层和底层活菌百分率分别为(85.50±6.42)%和(57.30±4.92)%(P＜0.01).[结论]此次实验所建立的模型可用于研究同种细菌在不同异物表面的BBF形成能力.金黄色葡萄球菌在死骨表面的BBF形成能力比钛板强.在BBF里,底层活菌的新陈代谢比中层的慢,并且活菌大多被死菌所包裹,这种结构可能是造成慢性骨髓炎难以治愈的原因之一.     

64层螺旋CT血管成像及三维重建后处理技术对活体供肾血管的评估

目的 评价64层螺旋CT血管成像及三维重建后处理技术对活体供肾血管术前评估的临床价值.方法 回顾性分析2011年1月至2013年3月临沂市人民医院泌尿外科61例亲属活体肾移植供者术前64层螺旋CT血管成像及三维重建影像资料,观察供肾实质、肾动脉、肾静脉和肾盂、输尿管排泄系统,并与术中所见结果进行对照分析.结果 64层螺旋CT血管成像及三维重建图像基本清晰显示所有供者的双肾解剖结构及毗邻关系情况.肾实质密度及肾动脉管径、形态均正常,其中47例双肾均为单支肾动脉,4例左肾为2支肾动脉,5例右肾为2支肾动脉,5例双肾均为2支肾动脉.53例容积再现结合最大密度投影图像对输尿管排泄系统显示较好,49例表面遮盖成像图像较好地显示了肾动脉主干的起源、管径、形态及与周围组织的解剖关系,肾动脉CT仿真内镜成像能清晰显示腹主动脉、双肾动脉开口及肾动脉管腔.61例供者均行单侧肾切除术,术前血管成像结果与术中所见基本吻合.结论 64层螺旋CT血管成像及三维重建后处理技术能真实反映肾血管的解剖及毗邻关系,在某种程度上完全可以替代数字减影血管造影,可作为术前评估活体供肾血管的有效方法.     

精子细胞显微受精技术的研究进展

采用卵胞质内圆形精子细胞注射 (roundspermatidinjection ,ROSI)或长形精子细胞注射 (elongatedspermatidin jection ,ELSI)技术治疗完全不能产生精子的非梗阻性无精子症 (NOA)病人已获成功 ,精子细胞可从病人精液或从睾丸活检组织中获取。但精子细胞的受精率和妊娠率令人失望 ,限制这项技术成功和阻碍其临床应用的许多问题仍然没有解决 ,包括精子细胞的核蛋白不完全成熟、卵子激活不足及如何正确选择存活精子细胞等     

用于活体成像的人肺腺癌自发骨转移小鼠模型

目的建立小鼠人肺腺癌PC-9细胞株骨转移模型,初步探讨由模型动物中分离上皮-间质细胞转化(EMT)癌细胞的可行性。方法采用肺原位注射法对低、中、高浓度组的雄性BALB/c裸鼠分别注射1×104、5×104、1×105个/20μL的高骨亲和性的人肺腺癌PC-9细胞悬液,对照组注射5×104/20μL的原始人肺腺癌PC-9细胞,空白组注射20μL空白混合胶体,观察小鼠的生存时间、体重变化及肺腺癌骨转移模型的成模率,并采用流式细胞技术对分离外周血EMT癌细胞进行鉴定。结果注射PC-9细胞后21 d,对照组和低、中、高浓度组小鼠均出现体重下降、摄食减少等,与空白组相比体重明显降低(P<0.05)。高浓度组小鼠注射PC细胞后20 d出现骨转移病灶,27 d出现死亡。低、中、高浓度组的肺腺癌骨转移模型成模率分别为0%(0/5)、25%(2/8)、60%(6/10)。造模成功的小鼠肺部和骨骼出现转移灶,病理检查可见肺腺癌细胞,其外周血可成功分离EMT癌细胞,其中EMT癌细胞阳性小鼠骨转移发生率较高。结论本研究成功构建了可用于活体成像的人肺腺癌骨转移小鼠模型,并可从其外周血中分离EMT癌细胞,为肿瘤生长转移机制的研究及抗肿瘤药物的研发提供了重要工具。     

活体肝移植治疗终末期肝病的研究进展

肝移植是治疗终末期肝病的有效治疗手段,为解决供体严重短缺的问题,在活体肝移植方面发展了新的手术技术,边缘供体已被用于活体肝移植以扩大供体库.     

豚鼠膀胱cajal样细胞的类型

目的：观察豚鼠膀胱cajal样细胞形态学特点并结合该细胞具有的特殊功能,探讨cajal样细胞在膀胱组织中的类型。方法：豚鼠膀胱经手术取材后制成冷冻切片和体外培养膀胱cajal样细胞,采用间接免疫荧光染色后在激光共聚焦显微镜观察cajal样细胞形态学特点,然后将体外培养的膀胱cajal样细胞应用Fluo一4AM标记细胞内钙离子浓度含量,在激光共聚焦显微镜下观察cajal样细胞钙离子振荡功能。结果：膀胱组织冷冻切片和体外cajal样细胞培养均可见单体cajal样细胞和二聚体cajal样细胞,体外培养的两种类型的cajal样细胞具有钙离子振荡功能。结论：豚鼠膀胱组织中存在单体和二聚体两种不同类型的cajal样细胞。     

活体肝移植治疗终末期肝病的研究进展

肝移植是治疗终末期肝病的有效治疗手段,为解决供体严重短缺的问题,在活体肝移植方面发展了新的手术技术,边缘供体已被用于活体肝移植以扩大供体库.