Attractin蛋白和mRNA在不同日龄大鼠睾丸中的表达

目的:已知成熟大鼠睾丸组织中有Attractin蛋白的广泛表达,本文旨在进一步探讨Attractin蛋白和AttractinmRNA在各年龄段大鼠睾丸组织中的分布。方法:取出生第1d(新生鼠)、第5d(青春前期)、第20d(青春中期)、第50d(青春后期)及第70d(成年期)大鼠睾丸和附睾组织固定,采用酶免疫组织化学和原位杂交方法检测Attractin和AttractinmRNA在大鼠睾丸组织中的表达。结果:免疫组化显示各年龄段大鼠睾丸生精小管和间质细胞、管周肌样细胞上均有Attractin蛋白的表达,分布于胞膜和胞质,精子和附睾上未见表达。随着日龄的增加,间质细胞的表达逐渐增强。原位杂交显示各年龄段大鼠睾丸生精小管和间质细胞、管周肌样细胞、支持细胞上也均有AttractinmRNA阳性棕色颗粒杂交信号,主要表达于胞核及胞质。且随着日龄的增加,睾丸生精细胞表达略强于间质细胞。精子和附睾上未见表达。结论:AttractinmRNA和Attractin蛋白在各日龄大鼠睾丸组织中均有广泛的分布,且分布一致。提示各日龄大鼠睾丸组织都具有合成Attractin蛋白的能力。其生理功能和机制尚有待进一步探讨。     

Mahoganoid蛋白及其mRNA在大鼠睾丸和附睾中的表达

目的:探讨M ahoganoid(Md)蛋白及其mRNA在成熟大鼠睾丸和附睾组织中的表达。方法:健康成年SD大鼠20只,取睾丸和附睾组织4%多聚甲醛固定,石蜡切片,用免疫组化SP法和原位杂交方法分别检测Md蛋白及其mRNA在睾丸和附睾组织中的表达。结果:免疫组化SP法显示:睾丸组织间质细胞、睾丸生精小管管周肌样细胞和各级生精细胞(精原细胞、初级精母细胞和精子细胞)、支持细胞呈阳性反应,Md蛋白主要表达于胞膜及胞质。在附睾组织,棕色免疫阳性反应物质可见于输出管的高柱状细胞、低柱状细胞的胞膜及胞质,以及附睾管的高柱状细胞、主细胞、基细胞的胞膜及胞质。其中,在附睾尾部的上皮细胞中仅见微弱的棕色免疫阳性反应物质。原位杂交方法显示:睾丸组织间质细胞、睾丸生精小管管周肌样细胞和各级生精细胞(精原细胞、初级精母细胞和精子细胞)、支持细胞上也均有Md mRNA阳性棕色颗粒杂交信号,主要表达于胞膜及胞质。在附睾组织,Md mRNA阳性棕色颗粒杂交信号也均可见于高柱状细胞、主细胞、基细胞的胞膜及胞质。结论:Md蛋白及其mRNA在成熟大鼠睾丸和附睾组织中均有表达,其生理功能尚有待阐明。     

Attractin蛋白在不同病理分型无精子症患者睾丸组织中的表达

目的探讨Attractin蛋白在不同生精功能状态的人睾丸组织中的表达情况。方法对31例无精子症患者进行睾丸组织病理检查诊断,根据病理形态的不同分为:唯支持细胞综合征型(n=4),生精功能低下型(n=12),生精阻滞型(n=5),生精功能基本正常型(n=10)。选择上述各型结构完整的睾丸组织,分别应用免疫组化法(SP)观察Attractin蛋白在不同生精功能状态的睾丸组织中的表达。结果各组睾丸组织内均存在Attractin蛋白的表达,其分布特点为:睾丸生精小管和间质细胞、管周肌样细胞、支持细胞上均有Attractin蛋白的表达,主要表达于胞膜和胞质,胞膜表达强于胞质。Leydig细胞、Sertoli细胞、精原细胞、精母细胞及精子细胞均为阳性表达,呈棕黄色着染。Attractin的表达与生精功能有关,正常组表达明显高于其它组,唯支组表达明显低于其他组。结论 Attractin蛋白与男性生殖密切相关,但其具体作用环节尚有待进一步研究。     

附睾分泌蛋白2β1在青春期雄性大鼠睾丸和附睾中的表达

目的:探讨附睾分泌蛋白2(HE2/EP2)的一种异构体———HE2β1在青春期雄性大鼠睾丸和附睾中的表达及其意义。方法:应用免疫组化SP法检测15只青春期SD大鼠睾丸和附睾组织中HE2β1的定位及其表达情况。结果:HE2β1在青春期大鼠睾丸和附睾组织中均有表达。在附睾中,HE2β1主要表达于附睾管上皮主细胞胞质内,而在亮细胞、晕细胞及基细胞内未见阳性表达;其表达水平在附睾头部远段较弱,在体部近、中段及尾部较强,而在附睾始段未见阳性表达。在睾丸生精小管中,部分精原细胞核及支持细胞核均可见明显的棕褐色的阳性颗粒,其他生精细胞以及间质细胞均为阴性。结论:HE2β1在青春期雄性大鼠的睾丸和附睾上皮中均有表达,其定位及表达水平具有区域特异性和细胞特异性,提示其在大鼠精子发生、成熟及附睾上皮天然抗感染机制中发挥重要的作用。     

血管内皮生长因子和其受体Flt-1在青春期大鼠睾丸、附睾及附睾内精子上的表达研究

目的:通过对血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt-1在大鼠睾丸、附睾及附睾内精子上表达的研究,探讨其在雄性生殖系统中的作用。方法:免疫组化SP法和免疫荧光法检测20只青春期SD大鼠睾丸、附睾及精子上VEGF和Flt-1蛋白的表达情况。结果:VEGF和Flt-1在大鼠睾丸和附睾组织及精子上均有特征性表达。睾丸内VEGF蛋白表达于生精细胞、精子细胞发育中的顶体、Sertoli和Leydig细胞胞质内;Flt-1只见于精子细胞发育中的顶体及Leydig细胞胞质中。附睾中VEGF表达于各段上皮主细胞胞质内,而Flt-1表达于头、尾段上皮主细胞胞质内,体部免疫染色阴性;两者在附睾上皮亮细胞、晕细胞和基细胞中均为阴性表达。免疫荧光染色显示,VEGF和Flt-1共同定位于附睾内精子头部的顶体,尾部的颈、中和主段。结论:VEGF和Flt-1蛋白在大鼠睾丸、附睾及精子中的特异性表达提示,他们可由不同生精上皮细胞、间质细胞和附睾主细胞产生,可能以自分泌或旁分泌的形式单独或共同作用于睾丸和附睾的生殖细胞或Leydig细胞,直接或间接地影响精子的发生、发育和成熟过程,并与精子的活动和受精能力有关。     

年龄相关分子c-kit、HIWI和波形蛋白在不同月龄大鼠睾丸和附睾中的表达

目的:检查c-kit、HIWI和波形蛋白在不同月龄大鼠睾丸和附睾组织中的表达差异,研究睾丸和附睾在成熟和衰老过程中特征性分子表达的规律性改变,为研究男性生殖系统衰老提供实验依据。方法:运用免疫组织化学方法检查6、12、24月龄SD大鼠睾丸和附睾组织中c-kit、HIWI和波形蛋白抗体免疫反应强度,并对其进行比较分析。结果:c-kit特异性免疫反应阳性主要表达于精原细胞,其他细胞表达水平甚弱,不同月龄差异不显著。附睾上皮、附睾管腔内成分亦有c-kit阳性表达。HIWI在大鼠睾丸和附睾组织中表达也很丰富,6月龄和12月龄大鼠中各级生精细胞,尤其是精原细胞和初级精母细胞为免疫反应强阳性细胞;支持细胞、间质细胞、类肌细胞和血管内皮细胞亦为HIWI阳性细胞。附睾上皮有HIWI阳性表达。但是24月龄大鼠睾丸和附睾组织中HIWI表达下调。波形蛋白在睾丸和附睾组织中表达模式为6月龄大鼠睾丸和附睾组织中低表达,24月龄大鼠睾丸和附睾组织表达明显上调(P<0.01)。结论:c-kit、HIWI在24月龄动物睾丸和附睾组织中表达下调,波形蛋白表达随增龄而明显增强。结果提示,睾丸和附睾组织的衰老与细胞和细胞信号转导异常密切相关。     

年龄相关分子c-kit、HIWI和波形蛋白在不同月龄大鼠睾丸和附睾中的表达

目的：检查c-kit、HIWI和波形蛋白在不同月龄大鼠睾丸和附睾组织中的表达差异,研究睾丸和附睾在成熟和衰老过程中特征性分子表达的规律性改变,为研究男性生殖系统衰老提供实验依据。方法：运用免疫组织化学方法检查6、12、24月龄SD大鼠睾丸和附睾组织中c-kit、HIWI和波形蛋白抗体免疫反应强度,并对其进行比较分析。结果：c-kit特异性免疫反应阳性主要表达于精原细胞,其他细胞表达水平甚弱,不同月龄差异不显著。附睾上皮、附睾管腔内成分亦有c-kit阳性表达。HIWI在大鼠睾丸和附睾组织中表达也很丰富,6月龄和12月龄大鼠中各级生精细胞,尤其是精原细胞和初级精母细胞为免疫反应强阳性细胞;支持细胞、间质细胞、类肌细胞和血管内皮细胞亦为HIWI阳性细胞。附睾上皮有HIWI阳性表达。但是24月龄大鼠睾丸和附睾组织中HIWI表达下调。波形蛋白在睾丸和附睾组织中表达模式为6月龄大鼠睾丸和附睾组织中低表达,24月龄大鼠睾丸和附睾组织表达明显上调（P〈0.01）。结论：c-kit、HIWI在24月龄动物睾丸和附睾组织中表达下调,波形蛋白表达随增龄而明显增强。结果提示,睾丸和附睾组织的衰老与细胞和细胞信号转导异常密切相关。     

成年大鼠睾丸Smad1和Smad5的免疫组织化学研究

目的 :探讨骨形态形成蛋白的细胞内信号传导分子Smad1和Smad5蛋白在成年大鼠睾丸内的表达。　方法 :应用免疫组织化学ABC法结合葡萄糖氧化酶 DAB 硫酸镍铵增强技术 ,检测成年大鼠睾丸Smad1和Smad5蛋白的表达和定位。　结果 :Smad1蛋白表达于大鼠睾丸精曲小管的各级生精细胞的胞质内 ,呈淡染的紫蓝色颗粒 ,胞核为阴性 ,免疫染色阳性细胞主要包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞 ;而Smad5蛋白阳性染色不明显 ,只有睾丸间质细胞呈弱阳性反应 ,免疫反应阳性物质主要定位于细胞质。　结论 :Smad1蛋白主要表达于睾丸精曲小管各级生精细胞 ,Smad5蛋白表达于间质细胞 ,为揭示TGF β超家族在精子发生中的分子机理提供了直接证据。     

环氧合酶-2在成年雄性大鼠睾丸和附睾中的表达

目的:探讨环氧合酶 2在雄性大鼠睾丸和附睾组织中的表达及其意义。　方法:应用免疫组化SP法检测 40只雄性SD大鼠睾丸和附睾组织中环氧合酶 2的表达及其定位情况。　结果:环氧合酶 2在雄性大鼠的睾丸和 附睾组织中有较强的表达。在附睾头部主要表达于腔上皮细胞的细胞核内,部分细胞质内也可见表达,睾丸精原 细胞胞质和细胞核内均可见棕黄色颗粒。　结论:免疫组化法可较为敏感地检测环氧合酶 2在雄性大鼠睾丸和 附睾组织的表达。     

实验性精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸、附睾中CRES蛋白表达的影响

目的:研究青春期大鼠实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对睾丸和附睾中胱蛋白酶抑制剂相关的附睾精子发生(CRES)蛋白表达的影响,探索精索静脉曲张导致不育的机制。方法:建立青春期雄性SD大鼠ELV模型,采用免疫组化及蛋白印迹方法检测CRES蛋白在ELV 2周组(n=8)、4周组(n=8)及其相应的对照组(n均=5)大鼠睾丸和附睾头、体、尾中的表达变化。结果:免疫组化显示,CRES蛋白在ELV实验组和对照组大鼠睾丸和附睾中均有表达。在睾丸中,CRES蛋白主要定位于圆形和长形精子细胞的胞质、精子的顶体以及残余体中,其表达与生精周期密切相关,Ⅰ~Ⅲ和Ⅸ~ⅩⅣ期表达最强,Ⅶ~Ⅷ期表达次之,Ⅳ~Ⅵ期表达减弱。在附睾中,CRES蛋白主要表达于从附睾起始段到尾部的上皮主细胞的胞质中,且以体、尾部表达最强,头部次之,管腔分泌物也呈阳性表达。实验组比对照组CRES蛋白表达增强。W estern印迹显示:实验组和对照组大鼠睾丸和附睾在相对分子质量(Mr)为19 000和14 000处均可见CRES蛋白条带,其中以Mr19 000处表达更为明显。实验组CRES蛋白的表达比对照组明显增强。对免疫组化和W estern印迹结果进行灰度值和积分吸光度值(IA)测定,并经统计学分析显示:ELV 2周组和4周组比其相对应的对照组表达增强且差异有显著性(P<0.05或P<0.01),而ELV各组间未见CRES蛋白表达有明显差异(P>0.05)。结论:CRES蛋白在大鼠睾丸和附睾中均有表达,睾丸中表达呈现生精周期特异性和细胞特异性,附睾中表达呈现附睾上皮区段和细胞特异性;CRES蛋白在青春期ELV大鼠睾丸和附睾中的表达比对照组明显增强。这些结果提示CRES蛋白在精子发生和精子成熟过程中可能起着重要的作用,并且可能与ELV引起的不育或生育力低下有关。     

Distribution of Mahoganoid protein its mRNA in the testes and epididymides of mature male rats]

OBJECTIVE: To localize the Mahoganoid protein and Mahoganoid mRNA in the testes and epididymides of mature male rats. METHODS: Testes and epididymides obtained from mature male SD rats (n = 20) were fixed by 4% poly formaldehyde and sliced for immunohistochemical (IHC) test and in situ hybridization (ISH) test, respectively, for detecting Mahoganoid protein and Mahoganoid mRNA. RESULTS: In both the 2 tests, clear brown staining was observed in Leydig cells, spermatogonia, primary spermatocytes, spermatids, Sertoli cells, and peritubular myoid cells. Both the Mahoganoid protein and its mRNA were mainly located on cell membrane and cytoplasm. And in the epididymis tissues, the Mahoganoid protein and Mahoganoid mRNA were respectively expressed within the membrane and cytoplasm of principal cells, basic cells and epithelial cells. CONCLUSION: Both Mahoganoid protein and Mahoganoid mRNA are expressed in the male rat reproductive system and localized in Leydig cells, Sertoli cells, spermatogenic cells and epithelial cells. They play an important role in spermatogenesis but their physiological significance remains to be clarified.     

Differential expression and regulation of integral membrane protein 2b in rat male reproductive tissues

Aim： To examine the expression and regulation of integral membrane protein 2b （Itm2b） in rat male reproductive tissues during sexual maturation and under different treatments by in situ hybridization. Methods： Testis, epididymis, and vas deferens were collected on days 1-70 to examine Itm2b expression during sexual maturation. To further examine the regulation of Itm2b, adult rats underwent surgical castration and cryptorchidism. Ethylene dimethane sulfonate and busulfan treatments were carried out to test the regulation of Itm2b after destruction of Leydig cells and germ cells. Results： In testis, Itm2b expression was moderately detected in the adluminal area of seminiferous cords on days 1-10, and detected at a low level in the spermatogonia on days 20 and 30. The Itm2b level was markedly increased in Leydig cells from day 20 to day 70. In epididymis and vas deferens, Itm2b was detected from neonate to adults, and the signal gradually increased in accordance with sexual maturation. Itm2b expression was significantly downregulated in epididymis and vas deferens of castrated rats, and strongly stimulated when castrated rats were treated with testosterone. Cryptorchidism led to a significant decline of Itm2b expression in testis and caput epididymis. Itm2b expression in epididymis and vas deferens was significantly decreased after the Leydig ceils were destroyed by ethylene dimethane sulfonate. Busulfan treatment produced no obvious change in Itm2b expression in epididymis or vas deferens. Conelusion： Our data suggested that Itm2b expression is upregulated by testosterone and might play a role in rat male reproduction.     

5α-还原酶I型同功酶基因在人睾丸、附睾和输精管组织中的表达

我们对人５α－还原酶Ｉ型同功酶基因在正常人睾丸、附睾及输精管组织细胞内的定位表达进行了初步的研究。采用非同位素地高辛标记ｃＲＮＡ探针对人睾丸、附睾和输精管组织冰冻切片进行原位杂交。结果：人睾丸Ｓｅｒｔｏｌｉ和Ｌｅｙｄｉｇ细胞胞浆、附睾和输精管上皮的主细胞及假复层柱状上皮细胞的胞浆中均有较强的杂交信号；细胞核中未见杂交信号；睾丸生精细胞及基底膜、附睾和输精管上皮的基底膜、间质和肌层也未见杂交信号。证明人与灵长类和大鼠的５α－还原酶基因表达及其分布基本一致。本结果对深入研究５α－还原酶及其产物在人类生殖中的作用具重要意义。     

Effects of flavonoids from Semen Cuscutae on the reproductive system in male rats

Aim: To evaluate the effects of the flavonoids extracted from the Semen Cuscutae (FSC) on the reproductive and endocrine functions in male rats. Methods: (1) FSC were obtained from the semen of Cuscuta sinensis l_;am through solvent extraction and polyamide columnar chromatography; (2) Effect of FSC on the reproductive organs was assessed in immature rats. Rats were administered FSC through gastric garage at a dose of 300 mg/kg per day for 7 days and the weights of testis, epididymis, seminal vesicle and pituitary gland were then observed; (3) To observe the effect of FSC on the reproductive endocrine function: same dose level of FSC was given to male rats of different age groups for 7days; on day 8, the plasma testosterone (T), estradiol (E2) and LH were determined by RIA, the specific binding of LH was estimated and the testes were weighed. (4) Effect of FSC on LH secretion was assessed in vitro on cultured adenohypophysis. (5) Effect of FSC on T secretion was assessed in vitro on Leydig cell culture. Results: FSC increased the weights of testis, epididymis and pituitary gland, and stimulated T and LH secretion both in vitro and in immature rats. Conclusion: FSC invigorates the reproductive system and reproductive endocrine function in male rats.     

淫羊藿总黄酮对雄性大鼠生殖功能影响的初步研究

目的 研究淫羊藿总黄酮对雄性大鼠生殖内分泌功能的影响。方法 (1)观察淫羊藿总黄酮对未成年大鼠生殖器官重量的影响。淫羊藿总黄酮经灌胃给药7天后。腺垂体、睾丸、附睾及精囊腺称重；(2)观察相同剂量的淫羊藿总黄酮对不同年龄大鼠睾酮、雌二醇和黄体生成素的影响。睾酮、雌二醇和黄体生成素水平用放免法测定；(3)观察淫羊藿总黄酮在大鼠睾丸间质细胞体外培养中对睾酮的影响。结果 淫羊藿总黄酮可增加未成年大鼠腺垂体、附睾及精囊腺重量。提高睾酮、雌二醇和黄体生成素水平。能明显促进离体大鼠间质细胞睾酮基础分泌。结论研究表明。淫羊藿总黄酮对雄性生殖系统和生殖内分泌的功能具有促进作用。