海洛因成瘾大鼠硫化氢/胱硫醚β-合酶体系的变化

目的观察海洛因成瘾对大鼠硫化氢(hydrogen sulfide,H2 S)/胱硫醚β-合酶(cystathionine-β-synthase,CBS)体系产生的影响。方法实验大鼠分成健康对照组、heroin组、heroin+硫氢化钠(NaHS)组,每组10只。heroin组、heroin+NaHS组按剂量递增原则皮下注射海洛因9 d,对照组按同样方式注射等量生理盐水,heroin+NaHS组在每次注射海洛因前30 min腹腔注射NaHS,第10天纳洛酮腹腔注射观察戒断症状。采用亚甲基蓝比色法测定大鼠血浆及海马组织H2S含量,Real-time PCR检测海马组织CBS mRNA表达量。结果 heroin组与健康对照组比较,血浆及海马H2 S含量均明显降低(P<0.05),CBS mRNA表达量显著增高(P<0.05);heroin+NaHS组与健康对照组比较,海马H2S含量明显降低(P<0.05);heroin+NaHS组与heroin组比较,血浆及海马H2S含量明显增高(P<0.05),CBS mRNA表达量明显降低(P<0.05)。结论海洛因依赖可导致大鼠体内H2S水平下降,内源性H2S与CBS之间存在负反馈调节作用,使内源性H2S维持在生理浓度水平。     

胱硫醚-β-合成酶在年轻和老年大鼠海马中的表达分布

目的探讨硫化氢（H2S）合成酶胱硫醚-β-合成酶（CBS）在海马中的分布和表达是否受年龄因素的影响。方法用免疫组化和免疫印迹方法观察年轻（3月龄）和老年（24月龄）大鼠海马中CBS的分布和含量。结果 CBS在年轻和老年大鼠海马中主要分布在颗粒细胞层和锥体细胞层,呈区域性分布,其中CA1区表达最多,CA3区、DG区表达较少;CBS在老年大鼠和年轻大鼠海马中的表达和分布没有变化。结论 CBS在大鼠海马中呈区域性分布,CA1区表达最多,年龄不影响CBS的分布和表达。     

糖尿病大鼠肾脏胱硫醚-β-合成酶和胱硫醚-γ-裂解酶mRNA表达初步研究

目的研究糖尿病大鼠肾脏内源性硫化氢(H2S)的两种合成酶胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase CSE)mRNA表达.方法采用腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病模型,大鼠随机分为两组:正常对照组(C组)和糖尿病组(D组).建模后第8周,测定24 h尿蛋白、血糖及肌酐清除率[1],应用RT-PCR技术检测大鼠肾皮质CBS、CSE mRNA表达.结果糖尿病组大鼠尿蛋白、血糖及肌酐清除率均较正常对照组明显升高(P＜0.05),但肾皮质CBS、CSE mRNA表达较正常对照组无显著性差异(P＞0.05).结论CBS、CSE/H2S系统不能通过两种合成酶mRNA水平的改变而参与糖尿病肾病中血流动力学紊乱发生,其作用通路中的其他环节改变是否参与糖尿病肾病的发生发展尚需进一步证实.     

胱硫醚β-合酶研究进展

动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是心血管疾病的主要病理基础。近年来的研究发现,同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是心血管疾病的独立危险因素,胱硫醚β-合酶(cystathioninebeta-synthase,CBS)是Hcy转硫途径代谢的关键酶,CBS基因突变可引起CBS活性下降而导致高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocyseinemia,HHcy)。本文就近年来对CBS分子结构、基因特点、作用、CBS活性的影响因素以及HHcy与AS关系等方面的研究进展做一综述。     

硫化氢和胱硫醚β合酶在脑室周围白质软化新生大鼠脑组织中的表达

目的探讨缺氧缺血对3日龄大鼠脑白质细胞硫化氢(H2S)及胱硫醚β合酶(CBS)表达的影响,以及其在3日龄大鼠脑白质损伤(WMD)发病过程中的作用。方法将3日龄大鼠按照随机数字表法分为实验组和对照组,建立新生大鼠WMD模型,分别在缺氧缺血后第12、24、48、72 h和7 d处死大鼠,脑组织取材后行苏木精-伊红(HE)染色,并观察其病理变化。采取免疫组织化学法检测脑组织CBS的表达水平;用分光光度计法测大鼠血浆中H2S水平。结果在新生大鼠脑白质中,缺氧缺血后实验组大鼠脑组织CBS的表达和血浆H2S水平在12 h开始增强,24 h达高峰,7 d仍可见表达;实验组大鼠脑组织CBS的表达和血浆H2S水平在缺氧缺血后12、24、48、72 h和7 d均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论新生大鼠脑组织CBS和血浆H2S表达水平于缺氧缺血后显著增强,二者可能与新生大鼠WMD的病理生理过程有关。     

反复热性惊厥过程中γ-氨基丁酸B受体对一氧化氮/一氧化氮合酶体系的调节作用

目的:探讨γ-氨基丁酸B受体(γ-aminobutyric acid B receptor,GABABR)对热性惊厥(febrile seizure,FS)大鼠一氧化氮(nitric oxide,NO)/一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)体系表达的影响.方法:将21 d龄SD大鼠随机分为对照组、FS组、FS+巴氯芬(baclofen)组和FS+法克罗芬(phaclofen)组.采用热水浴诱导大鼠FS,隔日诱导1次,共10次.采用分光光度计法测定大鼠血浆中NO含量;用原位杂交方法观察神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)mRNA表达情况;用免疫组化方法观察nNOS蛋白表达情况.结果:FS+baclofen组NO含量低于FS组[(19.02±9.31)μmol/L比(40.03±9.12)μmol/L],同时nNOS蛋白和mRNA表达也较FS组减弱;而FS+phaclofen组NO含量高于FS组[(66.46±8.15)μmol/L比(40.03±9.12)μmol/L],同时nNOS蛋白和mRNA表达也较FS组增强.结论:反复热性惊厥过程中,GABABR的改变可影响NO/NOS体系的表达.     

脑血栓患者胱硫醚-β合成酶的基因多态性研究

目的 :探讨同型半胱氨酸 (Hcy)代谢过程的关键酶之一胱硫醚 -β合成酶 (CBS)基因多态性与脑血栓的关系及其家族遗传性。方法 :采用限制性内切酶片段长度多态性方法检测患者 CBS基因T2 7796 C位碱基突变。结果 :病例组与对照组 CBS基因分布频率和等位基因频数分布差异无显著性(P>0 .0 5 ) ;一级亲属和对照组 CBS基因分布频率差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,C纯合型与对照组差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,杂合型差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,杂合型比纯合型患脑血管病的危险度高 3.2倍。结论 :不能排除 CBS基因 T2 7796 C点突变是脑血管疾病发病的遗传因素     

自发性高血压大鼠硫化氢/胱硫醚γ-裂解酶体系的实验观察

目的　探讨硫化氢 /胱硫醚γ 裂解酶 (H2 S/CSE)体系在自发性高血压形成及发展中的变化及重要作用。方法　 4周龄雄性正常血压大鼠 (WKY) 8只 ,作为WKY对照组 (n =8) ,自发性高血压大鼠 (SHR) 16只 ,随机分为SHR对照组 (n =8)及SHR NaHS(外源性H2 S供体 )组 (n =8) ,其中SHR NaHS组每日腹腔注射NaHS ,WKY对照组及SHR对照组注射同样剂量的生理盐水。相同条件下饲养 5周后 ,检测其血压、左心与全心重量比 ,血浆H2 S水平、胸主动脉CSEmRNA转录水平以及胸主动脉显微结构。结果　 9周龄时SHR对照组大鼠血压显著高于WKY对照组大鼠 [(184±12 )mmHgvs (10 8± 2 3)mmHg ,1mmHg =0 .133kPa],左心与全心比值大于WKY对照组[(0 85 3± 0 0 2 1)vs (0 82 6± 0 0 2 4 ) ],胸主动脉CSEmRNA转录水平及血浆H2 S水平均低于WKY对照组大鼠 [(9 3± 0 7)× 10 -8fmolvs (16 1± 1 0 )× 10 -8fmol]及 [(2 0± 9) μmol/Lvs (4 8± 13)μmol/L],而胸主动脉显微结构结果显示胸主动脉外径、中膜面积、壁厚腔径比均大于WKY对照组大鼠 [外径 (1999± 4 5 ) μmvs (1790± 96 ) μm],中膜面积 (0 6 0± 0 0 6 )mm2 vs (0 4 8± 0 0 3)mm2 ,壁厚腔径比 (0 0 6 6± 0 0 0 6 )vs (0 0 6 0± 0 0 0 4 )。给予NaHS干预     

胰岛素样生长因子1对PC12细胞胱硫醚-β-合成酶和硫化氢的影响及机制

\[摘要\]目的观察胰岛素样生长因子1(IGF-1)对大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12)胱硫醚-β-合成酶(CBS)及硫化氢(H2S)表达的影响以及可能的细胞信号通路机制。方法用不同剂量IGF-1(20、 40、80 ng/ml)作用体外培养的PC12细胞24 h,荧光定量PCR检测CBS基因表达,蛋白质印迹分析检测CBS、细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)相关蛋白表达,敏感硫电极法检测H2S气体含量。之后选取最佳剂量的IGF-1(80 ng/ml) 作用于30 min前已加入ERK/MAPK抑制剂PD98059的PC12细胞再次检测CBS、ERK/MAPK相关蛋白及H2S气体表达水平。结果IGF-1增加CBS的表达和H2S的含量,上调pERK1/2的表达;而PD98059能够抑制IGF-1的上述作用。结论IGF-1及其调控的ERK/MAPK信号通路参与调节CBS及H2S的表达。     

高原肺动脉高压大鼠硫化氢／胱硫醚-γ-裂解酶体系的变化

目的探讨气体信号分子H2S及其生成酶胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）在大鼠高原性肺动脉高压形成中的作用及其动态变化规律。方法60只雄性Wister大鼠,随机抽取10只大鼠作为低海拔对照组,其余50只为高原组。高原组大鼠在到达海拔4617m的第1、3、7、15、30d不同时间采集血浆及肺组织标本,采用右心导管法测定肺动脉压、敏感硫电极法测定血浆H,S浓度、酶促反应法测定肺组织CSE转化率、Western blot方法检测CSE在蛋白中的表达。结果大鼠第1d到达高原时,各项观察指标无明显变化;到达高原第3d时肺动脉压（18．12±3．34mmHg）无明显变化,而血浆H2S和CSE转化率明显增高;大鼠在高原7d时可形成肺动脉高压[（30．31±4．05）mmHg];随着高原低压低氧和大鼠肺动脉高压的持续,血浆H2S浓度、肺组织CSE转化率及蛋白表达逐渐下降,15d组和30d组与其他各组比较差异均有统计学意义。结论在高原暴露早期,内源性H2S／CSE体系上调而肺动脉压不增高,而在后期H2S／CSE体系下调且肺动脉压增高,提示内源性H2S体系可能与高原性肺动脉高压形成有关,并起着保护作用。     

冠心病患者胱硫醚-β合成酶的基因多态性研究

目的　探讨同型半胱氨酸 (Hcy)代谢过程的关键酶之一胱硫醚 β合成酶 (CBS)基因多态性与冠心病的关系。方法　PCR扩增 86例冠心病和 14 3例正常人的CBS 84 4ins6 8基因突变点 ,直接行琼脂糖凝胶电泳确定其基因型。结果　病例组与对照组CBS基因分布频率和等位基因频数分布差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　CBS 84 4ins 6 8突变可能不足以构成冠心病的独立遗传性危险因子。     

活细胞硫化氢检测新方法

目的:建立测定活细胞释放微量硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)的简易方法。方法:在细胞培养板盖上方黏附滤膜,细胞释放的硫化氢与滤膜上的醋酸锌反应产生硫化锌,采用亚甲基蓝分光光度法测定并计算细胞释放的硫化氢的量。应用该方法分别检测了HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞硫化氢的释放量。结果:HepG2细胞添加L-半胱氨酸以及辅酶磷酸吡哆醛后,继续培养12 h,H2S释放量为(859.39±19.12)nmol/(min.106cells);给予胱硫醚-γ-裂解酶抑制剂炔丙基甘氨酸(DL-propargylglycine,PAG)后,H2S产率下降到(341.34±105.90)nmol/(min.106cells);胱硫醚-β-合酶抑制剂间羟胺处理后,H2S产率下降到(375.05±174.50)nmol/(min.106cells);两种酶抑制剂联合使用后H2S释放量显著抑制,为(204.47±97.14)nmol/(min.106cells)。人脐静脉内皮细胞也可内源性产生H2S,HUVEC细胞H2S的释放量为(26.23±3.24)nmol/(min.106cells),约为HepG2细胞产量的1/30。台盼蓝检测细胞活性大于95%,细胞生长状态良好,表明该方法无细胞毒作用,细胞可根据实验需要继续培养。结论:滤膜吸附法简便易行、实用可靠,可应用于活细胞释放硫化氢的测定。     

热性惊厥导致T细胞功能改变的观察

目的：探讨热性惊厥患儿外周血T淋巴细胞免疫功能的变化。方法：应用APAAP法检测82例热性惊厥患儿,40例上呼吸道感染患儿及40例正常小儿T淋巴细胞亚群,CD25抗原在自然状态和PHA激活后的活化状态的百分率。结果：热性惊厥患儿外周血中,CD3,CD4,CD4／CD8比值,均显低于两对照组;热性惊厥患儿在自然状态下的CD25抗原表达率明显低于两对照组,经PHA刺激后,CD25抗原表达在各组显增多,但热性惊厥组仍仍于两对照组。结论：热性惊厥患儿存在着细胞免疫损害,这可能是热性惊厥发生和复发的一个重要因素。预防热性惊厥复发,必须从提高细胞免疫功能着手。     

硫化氢及其合成酶在膀胱癌细胞株中的表达及其作用

目的：探讨正常膀胱和膀胱癌细胞株中硫化氢（H₂S）及其合成酶胱硫醚β合成酶（CBS）和胱硫醚γ裂解酶（CSE）的表达,阐明其在膀胱癌发生发展中的作用。方法：选取膀胱癌5637、T24、EJ、UM-UC-3细胞株和人膀胱永生化上皮SV-HUC-1细胞株,Western blotting检测CBS和CSE蛋白酶表达水平,敏感硫电极法检测H₂S产率;选取EJ细胞株进行药物处理,实验分组为,① 10 μmol·L^-1硫酸氢钠（NaHS）组、50 μmol·L^-1NaHS组、100 μmol·L^-1NaHS组和对照组,MTT法检测24和48 h细胞生存率;②顺铂组（5 μg·L^-1）、顺铂（5 μg·L^-1）+NaHS（100 μmol·L^-1）组,另设无药物处理为对照组,药物处理48 h,MTT法和流式细胞术分别检测各组细胞增殖活性和凋亡率。结果：与SV-HUC-1细胞株比较,膀胱癌5637、T24、EJ和UM-UC-3细胞中CBS和CSE表达及H₂S产率均明显增加（P<0.05或P<0.01）;外源性H₂S可促进EJ细胞增殖,细胞增殖活性随药物剂量增加而升高（P<0.05）,且随着药物作用时间的延长而增加（P<0.05）。与顺铂组比较,顺铂联合NaHS组细胞增殖活性明显升高（P<0.05）,细胞凋亡率明显下降（P<0.05）。结论：H₂S及其合成酶CBS和CSE在膀胱癌细胞株中有表达且高于膀胱正常上皮细胞,H₂S促进膀胱癌细胞增殖并降低顺铂的促细胞凋亡作用。     

胱硫醚β-合酶活性测定及应用

0引言 目前国外测定胱硫醚β-合酶（CBS;EC4·2·1·22）活性的方法有放射性同位素标记法和分光光度法,而国内还少有报道．我们在动物实验表明消脂方具有防治动脉粥样硬化作用的基础上,为了解消脂方是否通过影响CBS以抗动脉粥样硬化,建立CBS活性分光光度测定方法,并用此法检测消脂方对实验性鹌鹑CBS活性的影响．     

胱硫醚β-合酶基因多态性与冠心病的关系研究进展

冠心病是现代社会最主要的疾病 ,对人们的健康危害极大 ,在中国发病率逐年增加 ,并年轻化。目前我们对冠心病的传统危险因素如高血压、高胆固醇血症、肥胖、吸烟、糖尿病等有了一定的了解。然而仅有 5 0 %的动脉粥样硬化具有上述危险因素〔1 ,2〕。因此科研人员仍在探导新的危险因素 ,近些年来同型半胱氨酸与动脉粥样硬化之间的关系引起了学术界的广泛注意。高同型半胱氨酸血症是动脉粥样硬化一个独立的危险因子〔3〕已为众多试验所证实。胱硫醚 β -合酶 (CBS)是于 1 96 9年首先由哈佛大学病理学教授发现常染色体隐性遗传疾病———先天…     

反复热性惊厥大鼠体内促炎症细胞因子水平的变化

目的:研究反复热性惊厥(febrile seizures,FS)大鼠海马IL-1 β、IL-6和TNF-α的变化特点,以探讨其在FS的病理生理学机制中的作用.方法:将大鼠随机分为:正常对照组(n=10,NC组),高热对照组(n=12,HC组)和热性惊厥组(n=21,FS组).分别用ELISA和RT-PCR方法测大鼠海马IL-1 β、IL-6和TNF-α蛋白和mRNA水平.结果:①FS组大鼠海马IL-1 β mRNA和蛋白含量明显高于HC组(P＜0.05或P＜0.01).FS组和HC组大鼠海马IL-6和TNF-α的mRNA及蛋白含量比较差别均无统计学意义(P＞.05).②海马IL-6含量与海马IL-1 β含量之间存在正相关关系(r=0.536,P＜0.01,n=24).结论:IL-1 β参与了FS的病理生理学改变,IL-6和TNF-α与FS相关脑损伤的产生过程无关.     

胱硫醚-β-合成酶基因多态性与精神分裂症的关联研究

目的 探讨胱硫醚-β-合成酶(CBS) 基因T833C、G919A多态性与精神分裂症的关系.方法 采用聚合酶链式反应(PCR)和DNA测序技术,对93例精神分裂症患者(病例组)和102例正常对照者(对照组)的CBS基因多态性进行检测.结果 ⑴所有受检者均未发现CBS基因T833C、G919A多态性,但在下游8-9内含子33bp处检测到G→A突变;病例组见G/A杂合和A/A纯合,对照组仅见G/A杂合.⑵病例组与对照组在G→A突变的基因型分布上差异无显著性(P>0.05),但病例组A等位基因频率(8.07%)高于对照组(3.43%)(χ2=3.92,P=0.048,OR=2.47,95%CI=1.01～6.05).⑶各临床亚组与对照组在G→A突变的基因型分布上差异无显著性(均P>0.05),但阳性组和晚发组A等位基因频率(8.70%,8.93%)高于对照组(3.43%) (χ2=4.35,P=0.037,OR=2.68,95%CI=1.06～6.77;χ2=4.29,P=0.038,OR=2.76,95%CI=1.06～6.43).结论 CBS基因T833C、G919A突变很低,可能与精神分裂症无关;CBS基因8-9内含子33bp处G→A突变可能是晚发、阳性型精神分裂症的风险因子之一.     

鹌鹑肝组织胱硫醚β-合酶基因RT-PCR的实验研究

[目的]建立一种有效的鹌鹑肝组织胱硫醚β-合酶(CBS)RT-PCR,为实现CBS Real-time PCR提供条件。[方法]采取一步法,改进一步法,异硫氰酸胍法(重复抽提)和异硫氰酸胍法(一步法)四种方法提取总RNA,以CBS cDNA共有序列设计鹌鹑CBS引物,进行CBS RT-PCR引物筛选。[结果]除改进一步法外,其他三种方法提取的总RNA完整性好;除异硫氰酸胍法(一步法)外,其他三种方法提取的总RNA的A260/A280都在1.8以上纯度。异硫氰酸胍法(重复抽提)提取的总RNA极少残留DNA。[结论]四种方法都能较好地扩增CBS片段,一步法最省时。但异硫氰酸胍法(重复抽提)抽提得到的RNA质量较好.     

诱导型一氧化氮合酶和胱硫醚-β-合酶在新生大鼠缺氧缺血脑组织中的表达

目的研究缺氧缺血(HI)对新生大鼠脑白质细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及胱硫醚-β-合酶(CBS)表达的影响及二者的相关性,以及它们在新生大鼠脑白质损伤(WMD)发病机制中的作用。方法将80只3日龄大鼠随机分为实验组和对照组,每组40只。建立新生大鼠WMD模型,分别于HI后12、24、48、72 h及7 d处死,取大鼠脑组织应用免疫组织化学法检测iNOS及CBS的表达水平。结果实验组大鼠脑白质和胼胝体中iNOS于HI后12 h表达开始增加,72 h达高峰,7 d仍有表达;CBS于HI后12 h表达开始增加,24 h达高峰,7 d仍有表达。实验组大鼠HI后12、24、48、72 h及7 d iNOS和CBS在胼胝体和脑室周围白质的表达均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。iNOS和CBS在大鼠脑室周围白质和胼胝体的表达呈正相关(rs=0.66、0.68,P<0.05)。结论 HI可导致新生大鼠脑白质iNOS及CBS表达水平增高,iNOS和CBS可能参与新生大鼠WMD的病理生理过程。