肺炎衣原体荧光PCR检测方法的建立和应用

目的采用Taqman探针技术,组建肺炎支原体荧光PCR基因检测方法。方法对GenBank登录的肺炎衣原体的基因序列进行生物信息学分析,针对保守区域设计引物和探针,组建实时荧光PCR检测方法。对来自本院的560份临床咽拭子样本和肺泡冲洗液样本进行检测。采用流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒进行特异性评价。结果本实时荧光PCR方法对甲型流感病毒(甲型、乙型)、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒无特异性反应。本院的临床样本检出26份,其中咽拭子9份,肺泡冲洗液17份。结论肺炎支原体荧光PCR检测方法可用于肺炎衣原体感染的辅助诊断。     

肺炎衣原体ELISA抗原检测方法的建立和应用

目的 采用ELISA技术,建立肺炎衣原体抗原检测方法.方法 建立酶联免疫吸附法,检测标本中的肺炎衣原体.采用常见的呼吸道病原体进行特异检测.对来自本院的560份临床咽拭子样本和肺泡冲洗液样本进行检测.采用流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒进行特异性评价.结果 本方法对流感病毒(甲型、乙型)、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒无特异性反应.对本院的临床样本检出13份,其中咽拭子4份,肺泡冲洗液9份.结论 本肺炎支原体抗原检测方法可用于肺炎衣原体感染的辅助诊断.     

肺炎衣原体实时定量PCR检测方法的建立

目的:探讨实时定量PCR检测肺炎衣原体(chlamydia pneumonia,Cpn)的方法.方法:根据GenBank提供的肺炎衣原体基因序列,选取高特异性和保守型的区域进行引物设计,并建立实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)的检测方法.同时用肺炎支原体、肺炎双球菌、流感病毒、副流感病毒以及腺病毒对Cpn引物的特异性进行分析.对呼吸道感染患者200个咽拭子样本和68个肺泡冲洗液样本进行检测,以荧光抗体检测法作对照,评价实时定量PCR检测Cpn的准确性.结果:Cpn PCR引物对肺炎支原体、肺炎双球菌、流感病毒、副流感病毒以及腺病毒均显示阴性,对Cpn显示为阳性,特异性良好;荧光实时定量PCR技术检测的准确性优于荧光抗体检测法.结论:荧光实时定量PCR技术检测Cpn体灵敏度高、周期短,可作为临床诊断Cpn的手段.     

2009~2010年广州地区儿童呼吸道合胞病毒感染分析

目的 应用实时荧光PCR方法检测呼吸道合胞病毒,分析2009~2010年广州地区儿童感染呼吸道合胞病毒的状况。方法 以呼吸道合胞病毒的N基因序列为参考,设计特异性引物和TaqMan荧光探针,建立实时荧光PCR方法,进行灵敏度和特异性检测。采用实时荧光PCR方法,对2009~2010年两年本院门诊或住院部急性呼吸道感染患儿的21458份咽拭子样本进行了检测。结果 （1）实时荧光PCR方法具有较好的特异性和灵敏度,与其他常见呼吸道病毒无交叉反应。（2）2009年的10477例临床标本中实时荧光PCR方法检测全年的呼吸道合胞病毒阳性率为7.25％,流行高峰在3月份,感染率为20.04%;2010年检测的10981例临床标本中,呼吸道合胞病毒阳性率为9.73％,有两个流行高峰,一个在2月,感染率为29.56％,另一个高峰在12月份,感染率达到22.20％。结论 本研究建立的实时荧光PCR方法具有简便快捷、特异、敏感的特点,适用于临床呼吸道合胞病毒的检测。2009~2010年呼吸道合胞病毒依然是广州地区儿童急性呼吸道感染的主要病原。     

实时荧光定量PCR法在急性呼吸道传染病病原筛查中的应用

目的利用实时荧光定量PCR法筛查和鉴定某战区发热伴呼吸道症状病例的呼吸道病毒感染情况,为部队呼吸道传染病疫情的早期预警和防控提供科学依据。方法采集某战区发热伴呼吸道症状病例咽拭子标本,采用实时荧光定量PCR法对标本进行流感病毒、副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒和冠状病毒5类常见呼吸道病毒及其亚型的检测和鉴定,评价该方法在呼吸道病毒检测中的应用价值。结果利用实时荧光定量PCR法在采集的488份咽拭子标本中筛查出了240份甲型流感病毒阳性标本(其中季节性流感H3亚型71份,其它分型未检出)、7份乙型流感病毒阳性标本,未检出副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒和冠状病毒。结论实时荧光定量PCR法可以对呼吸道病毒进行快速、特异、准确的筛查和鉴定,科学指导部队对呼吸道传染病疫情进行早期防控和预警预测。     

儿童呼吸道感染支原体、衣原体和常见呼吸道病毒病原学分析

目的分析本院儿童呼吸道感染支原体、衣原体和常见呼吸道病毒的感染特点,为临床诊治提供参考。方法选取我院儿科收治的486例呼吸道感染患儿为观察对象,检测肺炎支原体、肺炎衣原体、呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒1、2和3型的感染情况,分析不同年龄段患儿以上病原菌的感染特点。结果 486例呼吸道感染患儿中肺炎支原体感染125例,阳性率为25.72%;肺炎衣原体感染114例,阳性率为23.46%;呼吸道合胞病毒感染120例,阳性率为24.69%;腺病毒感染10例,阳性率为2.06%;甲型流感病毒感染7例,阳性率为1.44%;乙型流感病毒感染2例,阳性率为0.41%;1型副流感病毒感染3例,阳性率为0.62%;2型副流感病毒感染1例,阳性率为0.21%;3型副流感病毒感染33例,阳性率为6.79%。肺炎支原体感染阳性率随患儿年龄增加逐渐升高,比较差异有统计学意义（P〈0.05）肺炎衣原体和呼吸道合胞病毒感染阳性率随患儿年龄增加逐渐降低,比较差异有统计学意义（P〈0.05）;不同年龄组别患儿腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、1型副流感病毒和2型副流感病毒感染阳性率无明显差别,比较差异无统计学意义（均P〉0.05）。不同年龄组别患儿3型副流感病毒感染阳性率不同,比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论本院儿科呼吸道感染非细菌性病原菌主要为肺炎支原体、衣原体以及呼吸道合胞病毒。肺炎支原体感染主要见于学龄儿童,肺炎衣原体和呼吸道合胞病毒感染主要见于婴幼儿。     

呼吸道九联检试剂在儿童呼吸道感染病原体检测中的临床意义探讨

目的探讨呼吸道九联检试剂在儿童呼吸道感染病原体检测中的临床意义。方法对1 516例儿童呼吸道感染患者的血清标本应用呼吸道九联检试剂(间接免疫荧光法)同时检测九项主要病原体的Ig M抗体,包括嗜肺军团菌、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒。结果病原体感染率为35.5%(537/1 516),其中以肺炎支原体最为多见,其他依次为腺病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒。混合感染率达11.2%(170/1 516)。结论九项呼吸道联检试剂检测快速,操作简便,尤其对儿童急性呼吸道感染准确率高,适用于大型医院儿科患者快速检测。     

614例住院患儿急性呼吸道感染病原学分析

目的:了解急性呼吸道感染(Acute respiratory infection,ARI)患儿非典型病原体及病毒感染情况。方法:选择急性呼吸道感染患儿614例,取其入院第2天的静脉血,采用间接免疫荧光法进行呼吸道病原体IgM检测,包括非典型病原体(肺炎支原体、嗜肺军团菌Ⅰ型、Q热立克次体、肺炎衣原体)和病毒(呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型),并对检测标本阳性的病例进行统计分析。结果:在614例患儿送检标本中,171份阳性,阳性率为27.9%,其中肺炎支原体92例(15.0%),嗜肺军团菌Ⅰ型17例(2.8%),Q热立克次体6例(1.0%),肺炎衣原体1例(0.2%);呼吸道合胞病毒17例(2.8%),腺病毒6例(1.0%),乙型流感病毒13例(2.2%),副流感病毒Ⅰ型1例(0.2%),病原体的混合感染18例(2.9%)。结论:引起急性呼吸道感染的病原体以肺炎支原体为主,其次为嗜肺军团菌Ⅰ型、呼吸道合胞病毒,混合感染以肺炎支原体加嗜肺军团菌Ⅰ型为主。     

聚合酶链反应对小儿肺炎多病原检测及临床意义

目的 了解我区病毒性肺炎的病原以及病原之间的关系、病原与临床的关系。方法对200例肺炎患儿鼻咽部分泌物用PCR法检测呼吸道合胞病毒、腺病毒，流感Ⅰ、Ⅱ型，肺炎支原体。结果呼吸道合胞病毒48．2％、腺病毒23．4％、流感Ⅰ型23．4％、流感Ⅱ型2．1％、支原体2．8％，总阳性率70．5％，6个月以内以呼吸道病毒及流感Ⅰ型为主，6个月～3岁以腺病毒及呼吸道合胞病毒为主，年长儿则支原体感染率增加。结论采用PCR法进行的病毒检测提高阳性率。我区小儿肺炎常见病原以呼吸道合胞病毒为主，腺病毒及流感病毒次之，肺炎支原体肺炎占一定比例。     

3227例呼吸道感染患者的病毒及非典型病原体检测分析

目的 探讨北京地区呼吸道感染的病原学流行特点,为临床诊疗提供病原学依据.方法 采用间接免疫荧光法检测人血清中8种呼吸道病原体的IgM抗体,根据不同性别、不同人群、不同年份和不同季节的病原体阳性率进行统计分析.结果 3 227例患者中病原体的阳性率为39.3％,其中甲型流感病毒阳性率最高,其他依次为:嗜肺军团菌、乙型流感病毒、腺病毒、肺炎支原体、副流感病毒、肺炎衣原体和呼吸道合胞病毒;男性与女性患者病原体阳性率结果比较无统计学差异(P＞0.05);不同人群病原体感染阳性率有明显差异,成人组明显高于儿童组,结果比较差异有统计学意义(P＞0.05);成人组的嗜肺军团菌、甲型流感病毒、乙型流感病毒和肺炎衣原体阳性率显著高于儿童组,而肺炎支原体和腺病毒阳性率显著低于儿童组,结果比较差异有统计学意义(P＜0.05);2014年病原体阳性率显著高于2013年阳性率,两年间比较差异有统计学意义(P＜0.05);春季病原体阳性率显著高于夏季、秋季和冬季的阳性率,结果比较差异有统计学意义(P＞0.05).结论 本地区呼吸道感染病原体阳性率在不同的人群、年份和季节性存在差异,在性别间无差异,感染病原体以甲型流感病毒和嗜肺军团菌为主,甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒、肺炎支原体、呼吸道合胞病毒和肺炎衣原体流行有季节性特点,副流感病毒和嗜肺军团菌全年散发,未见明显季节性变化.