抑癌基因CDKN2和癌基因ras产物与喉癌临床特征关系的初步探讨

为探讨抑癌基因CDKN2和癌基因ras与喉癌临床特征的关系，分别采用免疫组织化学染色SP法和双抗体标记流式细胞法，检测57例喉癌及正常喉粘膜上皮细胞内CDKN2基因产物P16蛋白和ras基因产物P21蛋白的表达。结果显示，正常喉粘膜上皮细胞内P16阳性率（95％）显高于喉癌细胞（45．6％），P＜0．01，P16阳性率在喉癌I期（66．7％）和Ⅱ期（57．1％），都分别显高于喉癌Ⅲ期（37．5％）和Ⅳ期（38．9％），P＜0．05；颈淋巴结转移组P16蛋白阳性率（36．4％）显低于非转移组（47．8％）；正常喉粘膜上皮细胞内P21蛋白为阴性，喉癌细胞内P21蛋白的阳性率为78．9％；高分化鳞癌组P21蛋白的阳性率（89．5％）显高于低分化组（70％），P＜0．05。结论：抑癌基因CDKN2的失活、丢失和癌基因ras的激活参与了喉癌的发生；P16蛋白的表达缺失、P21蛋白的阳性表达是反映喉癌细胞生物学行为及临床特征的较好指标。     

CD44s基因蛋白在非小细胞肺癌中的表达

目的：探讨标准型CD44（CD44s）基因蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）中各组织学类型的表达及与淋巴结转移的关系。方法：采用微波免疫组织化学染色方法（LSAB）检测CD44s在78例NSCLC中的阳性表达率。结果：NSCLC总阳性表达率为74．4％（58／78），鳞癌、腺癌、大细胞癌和腺鳞癌的阳性率分别是63．2％（24／38）、88．9％（24／27）、83．3％（5／6）和71．4％（5／7），鳞癌与腺癌、大细胞癌之间有非常显著差异（P＜0．01）。高、中、低和未分化组的阳性率分别是68．4％（13／19）、75．8％（25／33）、76．2％（16／21）和80．0％（4／5），高分化组和未分化组之间有显著性差异（P＜0．05），其他各组之间无显著性差异（P＞0．05）。转移和无转移的阳性率分别为48．1％（17／27）和88．2％（45／51），其中强阳性率分别是25．9％（7／27）和74．5％（38／51），不论是阳性率还是强阳性率，二组差异均非常显著（P＜0．01）。结论：CD44s阳性表达率高、阳性强度强的病人转移率低，CD44s可作为区分NSCLC组织学类型及淋巴结转移潜能的辅助指标。     

涎腺粘液表皮样癌p1 6癌基因蛋白表达的研究

目的：探讨p16癌基因蛋白表达与涎腺液表皮样癌分化程度的关系。方法：用超敏S－P免疫组化方法检测32例涎腺粘液表皮样癌p16癌基因蛋白的表达。结果：p16癌基因蛋白阳性表达主要见于细胞浆,阳性率为62．5％（20／32）;高分型、中分化型和低分化型肿瘤p16癌基因蛋白表达阳性率分别为86．67％（13／15）、54．55％（6／11）和16．67％（1／6）。经统计学处理,高分型与低分化型肿瘤p16癌基因蛋白表达差异有显著意义（P＜0．01）,高分化型与中分化型、中分化型与低分化型肿瘤p16癌基因蛋白表达差异无显著意义。结论：p16癌基因蛋白表达可作为判断涎腺粘液表皮样癌组织分化程度的一个参考指标。     

癌基因蛋白水平对上颌窦癌行为影响的初步研究

为探讨癌基因c-myc、bcl-2蛋白产物在上颌窦癌中的表达及其临床意义。采用免疫组织化学方法，对46例上颌窦癌及56例正常鼻粘膜组织中癌基因c-myc、bcl-2蛋白产物进行了检测。结果表明，正常鼻粘膜c-myc蛋白阳性率（91.7%,11/12)，显著高于未复发组（67.7%,23/34),P&;lt;0.01；复发组bcl-2蛋白阳性率（50%，6/12），显著低于未复发组（64.7%,22/34),P&;lt;0.05,c-myc蛋白Ⅳ期阳性率显著高于Ⅱ期（P&;lt;0.05)。bcl-2蛋白Ⅱ期阳性率显著高于Ⅳ期（P&;lt;0.05),bcl-2癌蛋白的阳性率与原发癌病理分级成反比。结论：c-myc、bcl-2基因参与了上颌窦的癌变及发展过程，对判断病情及预测复发有一定意义。     

抑癌基因p16在肺癌中的表达

应用ＳＰ免疫组织化学染色方法，检测抑癌基因ｐ１６在人肺癌和癌旁肺组织中的表达。结果ｐ１６蛋白在癌旁组织表达阳性率为９０％，明显高于癌组织的５８．５（Ｐ＜０．０１）。腺癌ｐ１６阳性率为７６．５％，高于鳞癌的５２．８％和小细胞癌的４２．１％（Ｐ＜０．０５）。在鳞癌和腺癌中ｐ１６表达阳性率随着分化程度的降低而下降，同时也与有无淋巴结转移呈显著负相关（Ｐ＜０．０５），但与肺癌临床病理分期相关不显著。本组结果表明：ｐ１６蛋白表达缺失与肺癌的发生有关，ｐ１６基因在不同类型肺癌的发生过程中作用不同，且与肺癌分化不良和有无淋巴结转移密切相关。     

在癌基因蛋白研究中免疫组化染色方法

在癌基因蛋白研究中免疫组化染色方法毕洁倪灿荣（第二军医大学卫生毒理学教研室，病理学教研室，上海２００４３３）人类恶性肿瘤普遍存在着癌基因的活化或抑癌基因的失活，对恶性肿瘤发生和发展具有极其重要的作用．我们应用突变型癌基因或抑癌基因蛋白的单抗或多抗，以...     

胃黏膜病变组织COX-2蛋白表达的研究

目的：研究胃黏膜病变组织中环氧化酶－2（COX－2）蛋白的表达，探讨其与胃癌类型，分期，分化，转移及幽门螺杆菌（Hp)感染之间的内在关系。方法：外科手术中取30例胃癌者的癌组织，癌旁非癌组织各两块，石蜡包埋，切片HE染色作病理及免疫组织化学检查COX－2蛋白表达，Hp阳性感染由快速尿素酶试验结合病理染色／^14C尿素呼气试验而确立。结果：COX－2在胃癌中阳性表达率（66．7％），癌旁组织（26．7％），差异具有显著性（P＜0．01），其表达强度差异也有非常显著性意义（P＜0．001）。COX－2蛋白阳性表达率；进展期胃癌（76．0％）显著高于早期胃癌（20．0％）（P＜0．05）；有淋巴结转移（79．2％）显著高于无淋巴结转移（16．7％）（P＜0．05）；肠型胃癌（66．7％）与胃型胃癌（66．7％），低，未分化癌（80．0％）与高、中分化癌（57．1％），相比统计学上均无显著性差异（P＞0．05）。Hp阳性肠化或异型增生组COX－2的表达显著高于Hp阴性组（P＜0．05）。结论：COX－2蛋白在胃癌有较高水平的表达，它的异常表达多与胃癌的进展及淋巴结转移有关而与胃癌类型，病理学上分化程度关系上。COX－2基因在胃癌早期发生发展过程中可能起重要的作用，并与Hp感染有一定关系。     

抑癌基因PTEN在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的探讨抑癌基因PTEN在子宫内膜癌发生、发展过程中所起的作用，分析抑癌基因PTEN在子宫内膜癌中与某些临床病理学参数之间的关系。方法采用链霉抗生物素蛋白一过氧化物酶免疫组织化学法分别检测抑癌基因PTEN蛋白在15例正常子宫内膜、15例子宫内膜癌前病变、40例原发性子宫内膜癌各组织标本中的表达情况。结果①抑癌基因PTEN在正常子宫内膜组织中的表达率最高，为93．3％（14／15）；在癌前病变组织中表达率有所下降，为66．7％（10／15）；而在癌组织中表达率最低，为45．0％（18／40），3者比较有统计学意义（P〈0．05）。②抑癌基因PTEN表达与子宫内膜癌的组织学类型有关，腺癌表达率（37．1％）明显低于其他类型子宫内膜癌的表达率（100％），2者相比差异有统计学意义（P〈0．05）。③抑癌基因PTEN表达与临床分期、肌层浸润深度、病理分化程度、淋巴结转移无关（P〉0．05）。④本研究对40例子宫内膜癌患者术后情况进行了随访，抑癌基因PTEN阳性表达者的病死率（5．6％）明显低于阴性表达者（40.9％），2者差异有统计学意义（P〈0．05）。随访5年以上18例，比较抑癌基因PTEN阳性与阴性表达者的5年生存率，阳性表达者5年生存率（100％）明显高于阴性表达者（50．0％）（P〈0．05）。结论抑癌基因PTEN在子宫内膜癌发生过程中起到重要作用，抑癌基因PTEN失表达与肿瘤的组织学类型有关。抑癌基因PTEN表达与临床分期、肌层浸润深度、病理学分级、淋巴结转移等临床病理学参数之间无明显相关性。抑癌基因PTEN表达与子宫内膜癌患者的预后有关。     

肝外胆管癌中Bcl-2、Bax和Fas的表达

目的研究Bcl-2、Bax、Fas在肝外胆管癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组化SP法测定41例肝外胆管癌中Bcl-2、Bax、Fas的表达。结果（1）肝外胆管癌组Bcl-2阳性率为58．54％（24／41）,其中高中分化癌组（A组）、低分化癌组（B组）、无转移组（C组）、转移组（D组）阳性率分别为75．00％（21／28）、23．08％（3／13）、76．00％（19／25）、31．25％（5／16）。A组与B组间、C组与D组间差异有显著性（P〈0．01）。（2）肝外胆管癌组Bax阳性率为56．10％（23／41）,其中A组、B组、C组、D组阳性率分别为67．86％（19／28）、30．77％（4／13）、72．00％（18．25）、31．25％（5／16）。A组与B组间、C组与D组间差异有显著性（P〈0．05）。（3）肝外胆管癌组Fas阳性率为51．22％（21／41）,其中A组、B组、C组、D组阳性分别率为67．86％（19／28）、15．37％（2／13）、76．00％（19／25）、12．50％（2／16）。A组与B组间、C组与D组间差异有显著性（P〈0．01）。结论Bcl-2、Bax、Fas的异常表达与肝外胆管癌的病理分级及转移有关,可作为判断胆管癌患者预后的参考指标。     

鼻咽癌中凋亡抑制基因bcl—2蛋白产物表达的探讨

目的 应用即用型ＳＡＢＣ免疫组化方法观察凋亡抑制基因bcl-2蛋白在４０例鼻咽癌组织中的表达情况，以探讨该基因与鼻咽癌发生、发展的关系。结果 bcl-2蛋白在鼻吕中有较高表达（５０％）；在高分化、低分化、未分化癌中bcl-2蛋白的阳性率随分化程度的降低而下降，高分化与未分化癌间bcl-2阳性率的差异有显著性；bcl-2蛋白表达与预后判别无显著性。结果 bcl-2蛋白过度表达是鼻咽癌的早期表现，可作为判断肿瘤生物学行为的一个重要参考指标。     

胃肠道腺癌组织中nm23与Ki-67、ToPoⅡ的表达情况分析

目的探讨nm23与Ki-67、ToPoⅡ在消化道腺癌中的表达情况。方法用Envision免疫组织化学方法检测nm23与Ki-67、ToPoⅡ在消化道89例腺癌中的表达,并对结果进行判断分析。结果rim23总阳性率为95．5％（85／89）,高一中分化癌阳性率93．8％（60／64）,低分化癌阳性率为100％。Ki-67总阳性率为91．0％（84／89）,高一中分化癌阳性率92．1％（59／64）,低分化癌阳性率为88．O％（22／25）。TOPoⅡ总阳性率为84．3％（75／89）,高一中分化癌阳性率81．2％〈52／64）,低分化癌阳性率为92．0％（23／25）。nm23与Ki-67有负相关性,随nm23阳性强度的增加,Ki-67阳性强度降低（P〈0．05）。nm23与ToPoⅡ无相关性（P〉0．05）。结论nm23与Ki-67呈负相关,与ToPoⅡ无相关性。     

环磷酰胺诱发叙利亚地鼠胚胎细胞恶性转化的分子生物学特征

采用杂交，测序，ＲＴ－ＰＣＲ等方法对环磷酰胺（ＣＰ）转化的不同叙利亚地鼠胚胎（ＳＨＥ）细胞株癌基因和抑癌基因进行了分析，结果表明，ｃ－ｍｙｃ癌基因以扩增的方式被激活，在Ｈａ－ｒａｓ和Ｋｉ－ｒａｓ癌基因上均存在着突变．在对Ｈａ－ｒａｓ２０７ｂｐ的一段ｃＤＮＡ序列分析中发现，总共发生了３５处碱基对的替换，除两处是在密码子的第一位碱基外，其余均发生于第三位碱基上，但除第６７位密码子的第三位碱基由于Ｇ－Ｔ颠换导致所编码的甲硫氨酸被异亮氨酸取代外，其余碱基的替换均未导致氨基酸的改变．分析还表明，ＣＰ致Ｈａ－ｒａｓ癌基因的突变无位点专一性．结果还表明，ｐ５３抑癌基因也发生了突变，并且可能属于点突变性质．因此，ＣＰ引起的ＳＨＥ细胞恶性转化的分子机理可能是以点突变和基因扩增的方式引起ｃ－ｍｙｃ，Ｋｉ－ｒａｓ，Ｈａ－ｒａｓ癌基因的激活及ｐ５３抑癌基因的失活或表达改变     

EB病毒潜伏膜蛋白LMP1与P53在鼻咽癌中表达的意义

目的：探讨EB病毒潜伏感染和抑癌基因P53异常表达与鼻咽癌的关系。方法：用免疫组化S－P方法对59例鼻咽癌（NPC）和12例鼻咽部正常或慢性炎症组织进行单克隆抗体LMP1，P53标记，并结合组织学类型、分化程度，发病年龄进行分组研究。结果：正常和慢性炎症的鼻咽粘膜均呈阴性表达，NPC中，LMP1阳性率69．49％（41／59），P53阳性率44．06％（26／59），双阳性率30．51％（18／59），LMP1在非角化性癌，低分化癌及青年组NPC中高表达；在鳞癌，高分化癌及老年组中低表达，P53在低分化癌中高表达，但与NPC组织学类型，发病年龄不存在明显相关性。结论：在NPC发生、发展过程中EBV潜伏感染起主导作用，P53基因异常表达可能起协同作用，EB病毒潜伏感染是NPC发病年龄年轻化的主要原因之一。     

P16 蛋白在鼻咽癌中的表达研究

目的研究P16蛋白在鼻咽癌中的表达情况及其与鼻咽癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白．过氧化物酶连接法检测48例鼻咽癌和16例正常鼻咽黏膜上皮组织中P16蛋白的表达情况,分析鼻咽癌患者中P16蛋白表达与鼻咽癌临床病理特征之间的关系。结果鼻咽癌中P16蛋白表达的缺失率为70．8％（34／48）;鼻咽正常黏膜上皮组织为37．5％（6／16）,二者缺失率比较,差异有统计学意义（Х^2=18．364,P=0.000）;P16蛋白表达缺失率在低分化鼻咽癌中为75．0％（30／40）,在中分化鼻咽癌中为50．0％（4／8）,二者比较,差异有统计学意义（Х^2=11．308,P=0.010）。P16蛋白表达与鼻咽癌临床分期、淋巴结转移、远处转移及复发呈负相关（P〈0．05）。结论P16蛋白对于提高鼻咽癌早期诊断的有效性和准确性有着重要作用,值得进一步研究。     

乳腺肿瘤中C-erbB-2 p53蛋白的表达及与激素受体的关系

目的 探讨癌基因Ｃ－ｅｒｂＢ－２、抑癌基因ｐ５３蛋白产物在乳腺良性肿瘤、癌前病变及乳腺癌中的表达情况,并讨论其与雌激素受体（ＥＲ）、孕激素受体（ＰＲ）表达及乳腺癌预后的关系。方法 应用免疫组织化学ＳＰ法对１２０例乳腺良恶性肿瘤进行Ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｐ５３基因蛋白检测,同时进行ＥＲ、ＰＲ检测。结累Ｐ５３蛋白在乳腺增生症、乳腺癌中表达阳性率为２５,０％、４６．２％,经ｘ２检验,Ｐ＞０．０５。在乳腺癌不同组织学分级表达阳性率经ｘ２检验Ｐ＜０．０５。Ｃ－ｅｒｂＢ－２在良性病变中无表达,在乳腺癌中表达阳性率为６９．２％,且在浸润性导管癌中高表达,随组织学分级增高阳性串显著升高,与淋巴结转移呈正相关,与ＥＲ、ＰＲ呈负相关。结论 抑癌基因ｐ５３蛋白的表达与乳腺癌组织学类型相关,但不能作为良恶性病变鉴别的客观指标。癌基因Ｃ－ｅｒｂＢ－２的表达既可用于鉴别乳腺良恶性病变,也可配合ＥＲ－ＰＲ作为判断乳腺癌预后的一项重要指标。     

nm23—H1基因在甲状腺乳头状癌的表达及临床意义

目的：探讨nm23-H1基因在甲状腺乳头状癌的表达及其与临床病理指标的关系。方法：采用免疫组化S－P法检测201例例甲状腺乳头状癌,30例甲状腺良性增生及30例正常甲状腺组织中nm23-H1的表达情况。结果：（1）nm23-H1在甲状腺乳头状癌的表达阳性率为62．7％,明显低于两对照组（P＜0．01或P＜0．05）。（2）在甲状腺乳头状 nm23-H1在Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型间及包膜内型、腺内型、腺外型间的表达均有显著性差异。（3）有淋巴结转移组nm23-H1的阳性率为54．5％,低于无淋巴结转移组（75．0％）,其蛋白表达与颈淋巴结转移呈负相关。nm23-H1阴性表达的患者发生颈淋巴结转移的可能性大。结论：nm23-H1基因的表达与甲状腺乳状癌的发和发展、浸润和颈淋巴结转移关系密切,检测nm23-H1可作为预测甲状腺乳头状癌颈淋巴、转移肾的有价值的参考指标。     

原发性小肠腺癌中 PTEN 蛋白及 PCNA 的表达及临床意义

目的：检测PTEN蛋白和PCNA在原发性小肠腺癌组织、癌旁组织及正常小肠组织中的表达,探讨其与原发性小肠腺癌的关系,为原发性小肠腺癌预后判断提供依据。方法采用SP免疫组化法对32例小肠腺癌及其相应癌旁组织、8例正常小肠组织进行PTEN蛋白及PCNA的定位观察。结果原发性小肠腺癌组织中PTEN蛋白阳性率为71．88％（23/32）,相应癌旁组织及正常小肠组织中PTEN蛋白未阳性率分别为15．63％（5/32）、2．50％（1/40）,2组比较差异有统计学意义（ P ＜0．05）;原发性小肠腺癌组织中PTEN蛋白的表达与其分化程度及有无淋巴结转移相关（ P ＜0．05）。原发性小肠腺癌组织中PCNA阳性率为65．63％（21/32）,相应癌旁组织6．25％（2/32）及正常组织PCNA阳性率为2．50％（1/40）,二者比较差异有统计学意义（ P ＜0．05）;原发性小肠腺癌组织中PCNA的表达与肿瘤部位、浸润深度、分化程度相关（ P ＜0．05）。结论小肠腺癌中PTEN蛋白和PCNA的高表达可作为判断预后的有效指标,两者联合检测可早期诊断小肠腺癌并判断预后。     

胶质瘤中的多基因突变的分析

研究胶质瘤中癌基因c－myc的扩增、H－ras的突变及抑癌基因p53的5～8外显子的突变情况以及与胶质瘤的恶性程度的关系。采用差异性PCR（DPCR）及PCR－SSCP、PCR－RFLP等方法检测22例脑胶质瘤的基因突变情况。22例胶质瘤中c－myc扩增率为63．6％（14／22），H－ras的突变率为36．4％（8／22），p53的突变率45．5％（10／22）。结论：癌基因c－myc的扩增及抑癌基因p53的突变与胶质瘤的恶性程度有关（P＜0．05），而癌基因H－ras的突变则与胶质瘤的发生有关，与胶质瘤的恶性程度似乎无关（P＞0．05）。     

P^53和c—erbB—2癌基因产物在乳腺导管上皮增生病变中的表达

应用免疫组化技术检测了３０例乳腺导管上皮增生（增生组，其中一般增生１８例，不典型增生１２例）、４０例导管癌（癌组）和２０例正常副乳腺（正常组）患者的Ｐ＾５３和ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因产物的表达及其分布。结果：增生组、癌组和正常的Ｐ＾５３蛋白阳性表达率分别为０、１７．５％和０，ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白阳性表达率分别为２６．７％，３７．５％和０，三组间差异显著（均Ｐ〈０．００５）。并且增生组中不典型增生的ｃ     

PTEN及Bcl-2蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

目的：探讨PTEN及Bcl-2蛋白在膀胱移行细胞癌的表达规律及其临床意义。方法：应用免疫组织化学链亲和素-生物素-霉复合物（SP）方法检测43例膀胱移行细胞癌和7例正常黏膜组织中PTEN及Bcl-2蛋白的表达．分析二者的表达与膀胱癌病理参数的关系。结果：（1）G1、G2、G3肿瘤PTEN表达阳性率分别为85．7％、80．4％、73．3％，浸润性肿瘤和表浅性肿瘤表达阳性率分别为70．4％和93．8％，说明PTEN表达阳性率与肿瘤病理分级、临床分期有关。（2）G。、G2、G3肿瘤Bcl-2表达阳性率分别为14．2％、57．14％、66．67％，浸润性肿瘤和表浅性肿瘤表达阳性率分别为59．3％和43．8％，说明Bcl-2表达阳性率与肿瘤病理分级、临床分期有关。（3）随着肿瘤恶性程度的增高和临床分期进展，PTEN蛋白阳性率呈下降，Bcl-2表达呈增高趋势，二者表达呈负相关关系。结论：PTEN的抑癌作用可能与Bcl-2有关．二者的异常表达在膀胱移行细胞癌的发生、发展过程中起重要作用。二者同时检测有助于判断预后。