不同浓度芬太尼对分娩镇痛中罗哌卡因EC50的影响

目的测定罗哌卡因用于硬膜外分娩镇痛的半数有效浓度（EC50）并观察芬太尼对罗哌卡因EC50的影响。方法随机将90例产妇分为A组（单纯罗哌卡因）、B组（罗哌卡因＋1μg／mE芬太尼）、C组（罗哌卡因＋2μg／mL芬太尼）各30例，罗哌卡因的浓度按序贯实验法进行调整。以视觉模拟评分法（VAS）评估镇痛效果，VAS≤1cm为有效，VAS〉1cm为无效。按Dixon法计算罗哌卡因EC50的值。结果A组EC50为0．156％，B组EC50为0．150％，C组EC50为0．114％。C组EC50显著低于A、B组（P〈0．01），B组EC50与A组EC50无显著差异（P〉0．05）。结论罗哌卡因硬膜外分娩镇痛的EC50为0．156％。2μg／mL芬太尼可以降低硬膜外罗哌卡因分娩镇痛的半数有效浓度，是分娩镇痛中复合罗哌卡因适宜的浓度。     

自发性破裂肝癌组织 CD16突变结构基因检测

目的：检测肝癌自发性破裂中 CD16结构基因突变,从分子水平更深入地探讨肝癌自发性破裂的机制。方法收集肝癌自发性破裂及非破裂患者各22例资料。患者肝癌组织中 CD16结构基因 S1、EC1和 EC2 DNA 突变情况应用PCR 法及基因测序技术进行检测。结果 EC1内第1483位、1533位及1605位出现 G/ A、G/ A 及 A/ G 等错义突变, EC2内在第5223位及5277位出现 T/ C 及 T/ G 等错义突变。Y5223H 及 Y5277F 两个错义位点突变率（54.54% vs 0）在两组之间差异有统计学意义（P <0.05）,非破裂组 EC1及 EC2总的突变发生频率显著低于破裂组（ P <0.05）。结论FcγRⅢA 结构基因突变表面与肝癌巨噬细胞受体 CD16合成下降有关,是肝癌自发性破裂的可能机制。     

HBV DNA PreC／C和BCP片段基因多态性研究

目的：研究乙肝患者HBV DNA核苷酸（nt）1735～1965片段突变及其临床意义。方法：PCR扩增HBV DNA nt1735～1965片段，将产物进行HBV DNA测序。结果：在68例乙肝患者中。nt1735～1965突变阳性率为48．5％，检出点突变总数168个，频率前10位的是nt1764（58．8％）、1762（44．1％）、1799（20．6％）、1766（14．7％）、1896（13．2％）、1754（8．8％）、1899（8．8％）、1768（7．4％）、1814（7．4％）及1913（7．4％）。同时，首次检出nt1907、1922、1923位点突变。     

K i-67、E2 F-1在子宫内膜癌中的表达及意义

目的：探讨Ki-67、E2F-1在子宫内膜癌（Endometrial carcinoma ,EC ）组织中表达情况及其意义。方法：选取2008年4月-2013年8月本院妇科EC手术切除子宫标本120例,采用免疫组织化学S-P法检测正常子宫内膜组织64例及EC 120例中Ki-67、E2F-1的表达并比较。结果：EC组织中Ki-67、E2F-1表达定位于细胞核,其阳性表达率分别为85．00％（102/120）和58．33％（70/120）,均明显高于正常子宫内膜组织0％、12．5％（8/64）（P＜0．05）;两者的表达与淋巴结转移、临床分期及病理分期有关（P＜0．05）;在EC组织中Ki-67、E2F-1表达无明显相关性。结论：Ki-67、E2F-1在EC呈高表达,并与EC的发生、发展和转移联系密切。     

成都地区β地中海贫血基因突变型及产前基因诊断初步分析

我们通过ＤＮＡ扩增和等位特异寡核苷酸探针杂交，检测了成都地区可疑β地中海贫血（简称地贫）患者３３个家系，９５人。共检出５８例、７３条染色体的β珠蛋白基因突变。其中，Ｃｏｄｏｎ１７（Ａ→Ｔ）突变２８例（３８．４％）ｌｃＯｄｏｎ４１－４２（－ＴＴＣＴ）突变２１例（２８．８％）；ＩＶＳ－Ⅱ－６５４（Ｃ→Ｔ）突变１４例（１９．０％）；ｎｔ－２８（Ａ→Ｇ）和ｎｔ－２９（Ａ→Ｇ）突变分别是６例（８．２％）和４例（５．５％）。在测知双亲β地贫突变类型的基础上，对两例β地贫风险胎儿采羊水细胞分离ＤＮＡ，用相同方法进行了产前基因诊断，获满意结果。     

遗传性非息肉性结肠直肠癌患者中移码突变累积对结肠直肠癌发生发展的作用

目的：目前还没有关于移码突变和时限在遗传性非息肉性结肠直肠癌中致癌作用的研究。该研究旨在验证遗传性非息肉性结肠直肠癌患移码突变和结肠直肠癌临床病理学特征间的关系。方法：遗传性非息肉性结肠直肠癌中选取31例不同临床病理学分期的患，分析18个基因的移码突变。结果：在所有病理分期中发现了高表达的（94％-100％）ACVR2和PTHLH移码突变基因，突变基因MARCKS在DukesB和C期癌症中高表达（94％）。该频率高于TGF—β RII基因失活频率（64％-88％）。在癌症各期中，hMSH3、TCF4、CASP5、RIZ、RAD50和MBD4基因突变率较高（〉35％）。失活基因MARCKS、BAX、IGF IIR和PTEN的突变率在DukesB和C期较A期高（P〈0．05）。累积的移码突变数量在DukesB和C期比A期高（9．4vs6．8；P=0．003）。     

武汉地区戊型肝炎病毒基因型及ORF3基因序列准种特点

目的 研究武汉地区戊型肝炎病毒（HEV）基因型及HEV开放读码框架3（ORF3）基因序列的准种特点。方法 应用逆转录-巢式聚合酶链反应法（RT-nested-PCR）扩增HEV开放读码框架2（ORF2）的部分序列，选取其中25份进行测序，用Clustal X和Mega软件比较武汉地区HEV序列与4个HEV主要代表株序列；并扩增其中2份HEV开放读码框架3（ORF3）的全部序列，克隆入pMD18-TVector，其中1例挑选30个克隆进行DNA测序。结果 25例HEV-ORF2核苷酸同源性为82．61％～98．55％，与Ⅰ型（缅甸株）、Ⅱ型（墨西哥株）、Ⅲ型（美国株）、Ⅳ型（中国／台湾株）核苷酸同源性分别为76．52％～81．74％、70．43％～73．04％、76．52％～81．16％和84．35％～88．70％。来源于同一患者ORF3区全基因组不同克隆之间的碱基序列同源性为97．97％～99．71％，与Ⅳ型（中国／台湾株）核苷酸同源性为89．86％～99．71％。ORF3区可检出点突变、缺失突变、短序列的插入突变。结论 武汉地区散发性戊型肝炎患者以HEV Ⅳ型感染为主。多克隆测序结果提示患者体内HEV呈现准种群共存，HEV-ORF3C末端第2个富含脯氨酸区多有点突变，点突变不影响脯氨酸表达，这些变异的临床意义值得进一步研究。     

黄体生成素β亚基Trp8Arg和Ile15Thr突变与多囊卵巢综合征

【目的】探讨黄体生成素（1uteinizing hormone，LH）β亚基Trp8Arg和Ile15Thr突变与中国人多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）的关系。【方法】采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR—RFLP）技术检测113例PCOS患者和68例正常妇女，分析LHβ亚基基因突变与PCOS之间的关系。【结果】PCOS组血清LH、睾酮、游离睾酮及胰岛素抵抗指数（HOMA—IR）均显著高于对照组（P〈0．05）。在两组中均有β亚基突变发现，Trp8Arg突变率在PCOS组16例（14．16％），对照组4例（5．88％）；Ile15Thr突变率在PCOS组15例（13．27％），对照组4例（5．88％），突变频率在两组间没有统计学差异。两组中突变杂合子与非突变者性激素水平没有统计学差异。【结论】PCOS患者促性腺激素和性激素水平发生紊乱。PCOS组LHβ亚基Trp8Arg和Ile15Thr突变发生率高于正常对照组，但差异未有统计学意义。本研究未发现突变杂合子改变了LH的生物学功能。     

肺癌患者P53基因突变的检测

应用多聚酶链反应单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）研究技术，从分子生物学角度探讨Ｐ５３肿瘤抑制基因在肺癌中的突变情况。结果：①３６例肺癌中有１７例出现Ｐ５３基因突变，占４７％；其中鳞癌突变发生率为２９％（４／１４），腺癌为５０％（５／１０），小细胞肺癌为７３％（８／１１）；１例肺泡癌未发现突变。②突变集中在Ｐ５３基因的５第５、６和７个外显子，分别有６、３和３例肺癌在相应的外显子部位发生突变。③突变     

人肺癌、胃癌及肝癌c－Ki－ras第12密码子点突变的研究

以３０例肺癌、４０例胃癌及２２例肝癌石蜡包埋组织提取的ＤＮＡ为模板，经两轮ＰＣＲ扩增一限制性内切酶酶切，用限制性酶切片段长度多态性方法（ＲＦＬＰ）检测ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１２密码子点突变。结果发现，肺癌组织中２０％（６／３０）有突变，其中４０％（４／１０）鳞癌和２０％（２／１０）腺癌有突变，小细胞肺癌（０／１０）无突变；４０例胃癌中仅１例（２．５％）有突变，２２例肝癌无１例突变。ＰＣＲ－ＲＦＬＰ是一种很敏感及快速检测基因突变的方法。     

广东顺德地区β-地中海贫血流行病学调查

目的调查顺德地区婚检人群β-地中海贫血（β-地贫）基因的携带率、基因突变类型及其频率分布。方法血液学筛查β-地贫阳性指征者，应用PCR结合反向斑点杂交法（RDB）进行β-地贫基因分析。结果在1100例婚检对象中，初筛表型阳性样品43例，检出率3．91％。经基因分析，全部携带β-地贫基因，其中以CD41—42，IVS-Ⅱ-654、-28、CD17、βE为最常见的突变位点，上述5种突变类型占所有检出突变位点的95．3％。结论顺德地区β-地中海贫血基因携带率比广东其他地区稍高，在预防干预中应给予重视。     

乙型肝炎病毒感染者前C区A83位点突变

目的：分析乙型肝炎病毒（HBV）感染者前C区A83位点突变情况及其与HBeAg表达的关系。方法：对122例乙型病毒感染者采用Amplification refactory mutations system(ARMS)方法进行检测，扩增前C区基因片段经过酶联反应显色。结果：在HBeAg阳性的54例患者血清中检测出5例A83位点突变，占9．3％，在HBeAg阴性的68例患者血清检测出48例A83位点突变，占70．6％。15例急性乙型肝炎（AH）患者未检测到A83位点突变，70例慢性乙型肝炎患者（CH）检测到26例A83位点突变（35．6％），29例乙肝肝硬化患者（HLC）中有19例A83位点突变（65．5％），8例乙肝肝癌患者（HCC）均有A83位点突变（100％）。结论：HBeAg阴性患者A83位点突变率高于HBeAg阳性患者，前C区A83位点突变与乙型肝炎病毒感染后的慢性化有关。     

肺癌患者P53基因突变的检测

应用多聚酶链反应单链构象多态性（ＰＣＲＳＳＣＰ）研究技术，从分子生物学角度探讨Ｐ５３肿瘤抑制基因在肺癌中的突变情况。结果：①３６例肺癌中有１７例出现Ｐ５３基因突变，占４７％；其中鳞癌突变发生率为２９％（４／１４），腺癌为５０％（５／１０），小细胞肺癌为７３％（８／１１）；１例肺泡癌未发现突变。②突变集中在Ｐ５３基因的第５、６和７个外显子，分别有６、３和３例肺癌在相应的外显子部位发生突变。③突变类型均为插入型突变，分别插入３～６个碱基对。结论：细胞分化程度低的肺癌Ｐ５３基因突变发生率高，预后差     

特应性皮炎丝聚合蛋白基因突变的检测

目的探讨丝聚合蛋白（Filaggrin，FLG）基因的突变与特应性皮炎（Atopicdermatitis，AD）的相关性。方法提取50例汉族AD患者及100例健康对照者的基因组DNA，利用SequenomMassArray质谱阵列技术分析FLG基因（3321delA，441delA，1249insG，E1795X和S3296X）五个突变位点。结果14例（28％）AD患者发现FLG基因332ldelA突变，对照组有4例（4％）发生该基因突变。6例（12％）AD患者发现FLG基因441delA突变，对照组有0例（O％）发生该基因突变。患者组及对照组均未见FLG基因1249insG，E1795X和S3296X突变。结论FLG基因突变可能与AD易感性相关。     

湖南汉族人群遗传性脊髓小脑型共济失调患者三核苷酸突变频率分布

目的：研究湖南汉族人群中脊髓小脑性共济失调（SCAs）不同基因亚型的分布状况。方法：应用聚合酶链式反应（PCR）和变性聚丙烯胺凝胶电泳以及测序技术，检测分析了139个常染色体显性遗传SCA家系和61个散发SCA患者的SCA1，SCA2，SCA3，SCA6，SCA7，SCA17，齿状核红核苍白球路易体萎缩（DRPLA）三核苷酸重复序列突变。结果：在139个SCA家系中，11个家系（7．9％）有SCA1突变，9个家系（6．5％）有SCA2突变，71个SCA家系（51.1％）有SCA3突变，4个家系（2．9％）有SCA6突变，2个家系（1．4％）有SCA7突变。未检出SCA17，DRPLA亚型。在散发患者中发现1例SCA2患者、3例SCA3患者、1例SCA6患者。结论：SCA3为最常见类型；其次为SCA1，SCA2；SCA6，SCA7患者少见。     

中国3种特有小型猪品系脂联素受体1基因外显子5的多态性分析

目的探讨我国三个特有的小型猪品系-中国农大小型猪，五指山小型猪，广西巴马小型猪脂联素受体1基因多态性分布，为这些小型猪在代谢性疾病和2型糖尿病研究中的应用提供基础资料。方法提取三个品系小型猪血液基因组DNA，针对脂联素受体1基因外显子5～内含子5的部分序列进行PCR扩增，对产物进行鉴定和测序，分析基因多态性。结果在所扩增的片段中共检测出5个sNPs——sNP1：G138A，发生在所有的小型猪品系中，并导致第45位的氨基酸由甘氨酸（Gly）转变为谷氨酸（Glu）；SNP2：G185A，所有的纯合突变均发生在五指山小型猪品系中（4／6，66．67％），而所有的杂合突变则发生在中国农大小型猪品系中（3／10，30％）；SNP3：G200A，全部发生在中国农大小型猪品系中，且均为杂合突变（3／10，30％）；SNP4：C295T，发生在广西巴马小型猪品系中的突变既有杂合突变（1／6，16．67％）也有纯合突变（2／6，33．33％），发生在中国农大小型猪品系中的突变全为杂合突变（2／10，20％）；SNP5：T337G，只出现在中国农大小型猪品系中，且为杂合突变（1／10，10％）。结论SNP1，在所有测定的小型猪品系中检出，这可能是所测小型猪共有的特性。SNP2，可能是小型猪品系之间的差异。SNP3和SNP4，可能是小型猪品系之间的差异，也可能是个体的差异。SNP5，可能是个体差异。     

在浅表扩散型、结节型、肢端型和恶性雀斑样痣型原发性黑素瘤中BRAF外显子15突变的发生率

从52例厚的原发性黑素瘤中提取DNA，用变性高效液相色谱（dHPLC）进行片段分析、测序和等位基因特异性PCR方法，在B础F（v-raf鼠肉瘤的病毒性致瘤基因同系物B1）基因外显子15上寻找突变。在13／52例（25％）原发性黑素瘤患者中发现BRAF外显子15突变。这些患者包括5／17例（29％）浅表扩散型黑素瘤，3／11例（27％）结节型黑素瘤，2／13例（15％）例肢端雀斑样痣型黑素瘤，1／1例（100％）黏膜黑素瘤和2／10例（20％）恶性雀斑样痣型黑素瘤。与其他人研究相同的是，作者的研究结果表明在浅表扩散型和结节型黑素瘤中有较多BRAF外显子15突变，但增加了进一步证据，即该突变对于黑素细胞恶性转化并非必需。     

胰高血糖素样肽1受体在子宫内膜癌中的表达及意义研究

目的分析胰高血糖素样肽1受体（GLP1R）在子宫内膜癌（EC）组织、细胞中的表达情况，并探讨GLP1R对EC细胞活力的影响。方法选取2019年至2020年在浙江省立同德医院行手术治疗的EC患者5例，收集EC患者内膜组织和配对的正常内膜组织。购买的5种人EC细胞系分别为HEC-1A、RL95-2、KLE、Ishikawa和AN3CA。分别采用RT-qPCR法、Westernblot法检测EC组织或细胞GLP1RmRNA、蛋白表达水平；采用免疫组化法定性检测EC组织GLP1R蛋白表达情况；采用靶向GLP1R的小干扰RNA(siRNA)转染AN3CA细胞，或用GLP-1类似物exendin-4处理AN3CA细胞，采用CCK-8法检测转染后细胞活力。结果EC组织GLP1RmRNA、蛋白表达水平均高于正常内膜组织（均P＜0.05）。免疫组化检测显示，GLP1R蛋白主要在肿瘤细胞膜上表达。5种EC细胞（HEC-1A、RL95-2、KLE、Ishikawa和AN3CA）中，AN3CA细胞GLP1RmRNA、蛋白表达水平高于其他4种细胞（均P＜0.05）。转染siRNA的AN3CA细胞GLP1RmRNA表达水平均低于未转染的AN3CA细胞（对照组）（均P＜0.05）；AN3CA细胞用GLP-1类似物exendin-4处理后，GLP1RmRNA表达水平明显高于对照组细胞（P＜0.05）。在培养48、72h时，exendin-4处理的AN3CA细胞存活率高于对照组（P＜0.05），转染siRNA后的AN3CA细胞存活率低于转染siNC（阴性对照）的AN3CA细胞（P＜0.05）。结论EC组织和细胞中GLP1R表达上调，其表达上调促进EC细胞增殖，加速EC的进展。GLP1R可能在EC细胞中发挥致癌基因功能。GLP1R或可成为EC的生物标志物和治疗EC的生物靶点。     

AECOPD患者呼吸道EC耐药性及感染MREC的危险因素

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）患者呼吸道的阴沟肠杆菌（EC）耐药性及感染多重耐药EC（MREC）危险因素。方法 从AECOPD患者呼吸道中分离96株EC。采用全自动微生物分析仪测定EC药物敏感性，采用酶提取物三维试验法检测AmpC酶，统计总体EC、MREC、AmpC酶阳性EC在各级 COPD 中的分布情况，采用多因素Logistic回归分析感染MREC危险因素。结果 MREC占333%（32株）。阿米卡星、头孢他啶、复方新诺明、左氧氟沙星、四环素、氯霉素在MREC组中的耐药率均明显高于耐药组（均P＜0.05）。AmpC酶的检出率为292％（28株），AmpC酶阳性EC对头孢他啶、左氧氟沙星、氯霉素的耐药率均高于AmpC酶阴性EC（均P＜0.05）。AmpC酶阳性EC、MREC、AmpC酶EC阳性+MREC在Ⅰ~Ⅱ级COPD的构成比明显低于Ⅲ~Ⅳ级COPD（均P＜0.05）。多因素Logistic回归分析显示，“AmpC酶阳性”、“超广谱β 内酰胺酶阳性”和“COPD 临床严重程度分级≥Ⅲ级”（均P＜0.05）。结论 感染AECOPD患者EC的耐药性严重，特别是MREC和AmpC酶阳性EC的耐药形势更是不容乐观。各种EC主要感染COPD 临床严重程度分级≥Ⅲ级的患者。“AmpC酶阳性”和“超广谱β 内酰胺酶阳性”、“COPD 临床严重程度分级≥Ⅲ级”是AECOPD患者感染MREC的独立危险因素。     

Wilson病突变热点PCR-RFLP分析及血浆铜蓝蛋白检测

目的 检测中国Wilson病（WD）患者高频基因突变点，并了解突变患者的血浆铜蓝蛋白水平。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）对71例WD患者和30例正常对照者进行高频基因突变点检测，采用速率散射比浊法检测患者血浆铜蓝蛋白水平。结果 29．6％（21／71）的患者在第8外显子检测到Arg778Leu突变，其中17例杂合突变，4例纯合突变。11．3％（8／71）的患者检测到第12外显子Thr935Met突变，其中6例杂合子突变，2例纯合突变。携带Arg778Leu和Thr935Met突变患者的血浆铜蓝蛋白水平与未发生该点突变患者比较，差异有显著意义。结论 WD基因第8外显子778密码子和12外显子935密码子是中国WD患者的高频突变点；PCRRFLP检测这两个点突变的检出率较高，可作为WD常用的基因诊断方法；突变患者血浆铜蓝蛋白水平有最著变化。