膀胱尿路上皮癌中PTEN表达与其基因甲基化的关系

探讨膀胱尿路上皮癌（BUCC）中第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因（ PTEN）表达与其基因启动子甲基化的关系。方法应用Western blot、甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）,检测41 例BUCC和18 例正常膀胱组织中PTEN蛋白的表达水平及其基因启动子甲基化状态,并分析两者的相关性。结果BUCC 中PTEN 蛋白表达低于正常膀胱组织（p <0.05）,而BUCC 中基因启动子甲基化率为53.66%（22/41）,高于正常膀胱组织的0.00%（0/18）（ p<0.05）;与甲基化阴性组的BUCC 组织相比,22 例甲基化阳性 组的PTEN 表达水平降低（ p<0.05）。结论BUCC 中PTEN 蛋白的表达水平下调,这与其基因启动子高甲基化密切相关。     

PTEN甲基化及其异常表达与膀胱移行细胞癌的关系

目的探讨PTEN基因启动子甲基化及其mRNA异常表达与膀胱移行细胞癌临床及病理特征的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测膀胱移行细胞癌组织(48例)和正常膀胱组织(15例)PTEN基因启动子甲基化状态,应用RT-PCR技术检测其mRNA的表达水平。结果膀胱癌组织中PTEN启动子甲基化率为47.9%(23/48),而在15例正常膀胱组织中其启动子未发生甲基化,两组间差异具有统计学意义(P<0.01);PTEN基因mRNA在膀胱癌组织和正常膀胱组织中的阳性表达率分别是56.2%(27/48)和100.0%(15/15),两组间差异有统计学意义(P<0.01);PTEN基因启动子甲基化率与其mRNA表达水平在不同病理分级、临床分期间差异有统计学意义(P<0.05),且PTEN启动子甲基化与其mRNA表达存在明显关联性(χ2=21.372,r=0.555,P<0.01)。结论 PTEN基因启动子甲基化可导致其mRNA表达的缺失,对膀胱移行细胞癌的发生及转移有着极其重要的影响。     

膀胱移行细胞癌中PTEN基因启动子甲基化及其表达的研究

目的 检测膀胱移行细胞癌中PTEN基因启动子甲基化状态及其蛋白表达水平,并探讨它们与该肿瘤临床及病理特征的关系.方法 应用免疫组织化学(S-P)法检测PTEN蛋白的表达,甲基化特异性PCK(MSP)法检测PTEN基因启动子的甲基化状态.结果 PTEN蛋白在膀胱癌组织和正常膀胱组织中的阳性表达率分别是54.0%(27/50)和100.0%(10/10),两组间差异有显著性(P＜0.01),且其表达水平在不同病理分级、临床分期间差异也存在显著性(P＜0.01);在膀胱癌组织中PTEN基因启动子甲基化率为14.0%(7/50),而在正常膀胱组织中未检测到其启动子的甲基化(0/10),两组间差异有显著性(P＜0.05),且PTEN基因启动子甲基化与其蛋白表达水平呈负相关(P＜0.05).结论 PTEN基因启动子的甲基化可导致基因的沉默,是PTEN蛋白表达缺失的重要原因.PTEN基因启动子甲基化及其蛋白的表达缺失可能在膀胱移行细胞癌的发生及进展过程中起着重要作用,并对该肿瘤的生物学行为产生较大影响.     

EphA 2在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

[目的]探讨上皮细胞激酶2（EphA2）在膀胱移行细胞癌（Bladder transitional cell carcinoma BTCC ）中的表达及意义。[方法]采用Western blotting 和 RT-PCR技术测定20例BTCC组织和10例正常膀胱黏膜EphA2蛋白和 EphA2 mRNA的表达。[结果]EphA2蛋白在BTCC中的表达明显高于正常膀胱黏膜（ P ＜0．01）,在BTCC低分化组表达强于高分化组;EphA2 mRNA在BTCC中的表达高于正常膀胱黏膜（ P＜0．01）,与BTCC的分化程度无关（ P＝0．295）。[结论]EphA2将成为判定膀胱癌恶性程度的指标,EphA2 mRNA表达强度与EphA2蛋白表达强度不完全一致。提示转录后的调控机制干预了 BTCC中EphA2的表达。     

Survivin和bFGF基因在膀胱移行细胞癌组织中的表达及意义

目的：探讨Survivin和bFGF基因在膀胱移行上皮细胞癌（BTCC）中的表达及临床意义。方法：采用免疫组化S-P法，检测46例BTCC和10例正常膀胱组织中Survivin和bFGF基因的表达。结果：Survivin和bFGF基因在正常膀胱移行上皮细胞中不表达，两种基因在正常膀胱移行上皮细胞和BTCC中的表达之间差异有统计学意义（P〈0．01）；两种基因的阳性表达水平与BTCC中的病理分级、临床分期正相关（P〈0．05）；两种基因在BTCC中的表达水平之间正相关（P〈0．01）；两种蛋白在BTCC中的表达水平与BTCC的复发率正相关（P〈0．01）；两种蛋白在BTCC中的表达水平与BTCC无病生存率正相关（P〈0．05）。结论：Survivin和bFGF异常表达在BTCC发生、发展、转移、复发等过程中起着重要作用。联合检测能更好地判断BTCC的预后和制定合理治疗方案。     

BRCA1基因在散发性乳腺癌中的表达及异常甲基化

目的：通过检测乳腺癌易感基因1（BRCA1）基因在散发性乳腺癌中的表达情况及其启动子甲基化状态,探讨BRCA1基因与散发性乳腺癌的关系。方法应用实时荧光定量PCR的方法和免疫组织化学方法分别检测BRCA1 mRNA和蛋白在60例散发性乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织及30例乳腺良性病变组织中的表达情况;应用重亚硫酸盐测序PCR（BPS）联合TA克隆测序方法检测上述组织中BRCA1启动子CpG岛的甲基化状态,分析BRCA1基因表达和启动子甲基化相关性。结果BRCA1 mRNA和蛋白在散发性乳腺癌组织中的相对表达水平分别低于癌旁正常组织及乳腺良性病变组织,差异有统计学意义（P＜0．001）。乳腺癌组织中BRCA1蛋白的表达率为51．7％（31／60）,明显低于癌旁正常乳腺组织的71．7％（43／60）及乳腺良性病变组织的66．7％（20／30）,差异有统计学意义（P＜0．001）;散发性乳腺癌组织中BRCA1启动子甲基化率为31．7％（19／60）,癌旁正常乳腺组织及乳腺良性病变组织均未检测出甲基化,差异有统计学意义（P＝0．000）;BRCA1蛋白表达与其启动子甲基化呈负相关（r＝－0．345,P＝0．007）。结论乳腺癌易感基因BRCA1启动子区CpG岛甲基化导致BRCA1基因表达显著下调,可能参与散发性乳腺癌的发生、发展。     

促甲状腺激素受体基因启动子区甲基化与乳头状甲状腺癌的关系研究

目的观察促甲状腺激素受体（TSHR）在乳头状甲状腺癌（PTC）中的表达,分析其基因启动子区甲基化与肿瘤发生的关系。方法选择50例PTC和32例良性甲状腺肿瘤患者（对照组,包括20例结节性甲状腺肿和12例甲状腺腺瘤患者）,对两组患者手术获取的标本提取RNA后,逆转录为cDNA,进行PCR,检测鸭HR基因的表达情况;运用甲基化特异性PCR（MSP）法检测上述组织中TSHR基因启动子区甲基化的情况。结果PTC组患者中,有34例（68．0％）TSHR基因启动子发生甲基化,16例（32．0％）TSHR基因mRNA表达缺失;对照组患者中,有7例（21．9％）TSHR基因启动予发生甲基化,4例（12．5％）TSHR基因mRNA表达缺失,PTC组织TSHR基因启动子区甲基化率及TSHR基因mRNA表达缺失率均显著高于对照组,差异有统计学意义（X^2值分别为16．61和4．02,P〈0．05）。34例发生了TSHR基因启动子区甲基化的PTC患者中,有14例（41．2％）TSHRmRNA表达缺失;16例未发生甲基化的PTC患者中,2例（12．5％）发生了mRNA表达缺失,二者mRNA表达缺失率间差异有统计学意义（X^2=4．11,P〈0．05）。结论PTC患者TSHR基因启动子甲基化发生率显著高于良性甲状腺肿瘤患者,而TSHR基因mRNA的表达则较良性甲状腺肿瘤降低;推测TSHR基因启动子区甲基化可能与PTC的发生、发展相关。     

Livin蛋白在膀胱移行细胞癌组织芯片中的表达及临床意义

目的探讨Livin蛋白在膀胱移行细胞癌（BTCC）组织芯片中的表达及临床意义。方法免疫组化S-P法检测70例BTCC组织芯片标本中Livin蛋白的表达,并探讨其与患者的临床病理特征的关系。另选择30例正常的膀胱黏膜组织作对照。结果BTCC组织中Livin蛋白的阳性率明显高于正常膀胱黏膜组织（X2=36．51,P〈0．01）。BTCC组织中Livin蛋白的表达与肿瘤数量、转移与否、病理分级及临床分期无明显关系（P〉0．05）,与肿瘤的初发和复发密切相关（P〈0．05）。结论Livin基因参与BTCC的发生、发展和复发过程,可作为BTCC早期诊断和复发风险评估的一项重要指标,有望成为BTCC基因诊断和治疗的新靶点。     

肾细胞癌RASSFlA基因启动子区甲基化状况与表达水平研究

目的检测19例肾细胞癌患者癌组织及癌旁组织Ras相关区域家族蛋白1A（RASSFlA）基因启动子区甲基化情况并检测其mRNA表达水平,探索两者之间的联系。方法收集肾细胞癌患者癌组织及相应癌旁组织19份,分别提取其基因组DNA,以甲基化特异性PCR（Methylation special PCR,MSP）法检测RASSFlA基因启动子区甲基化情况。并以QPCR法检测了RASSFlA基因的mRNA表达水平。结果19例中有lO例肾细胞癌患者癌组织存在高甲基化,mRNA表达水平表达降低,二者之间存在显著负相关性（r=-0．8734,P〈0．01）。结论肾细胞癌中RASSFlA基因启动子区存在高甲基化,并抑制该基因的表达。     

APC基因异常甲基化在上皮性卵巢癌中的检测及临床意义

目的观察结肠腺瘤性息肉病（APC）基因异常甲基化在上皮性卵巢癌中的作用及临床意义。方法59例上皮性卵巢癌组织原发灶，32例相应的盆、腹腔转移灶，12例癌旁卵巢组织及30例正常卵巢组织，采用甲基化特异性聚合酶链式反应（MSP）法检测APC基因启动予区甲基化状态。结果上皮性卵巢癌组织原发灶及相应的盆、腹腔转移灶中存在APC基因启动子区异常甲基化，发生率分别为32．2％、40．6％，显著高于正常卵巢组织（P〈0．01）。12例癌旁卵巢组织中1例检测到APC基因启动子区甲基化，30例正常卵巢组织未检测到。APC基因启动子区甲基化的发生率在临床Ⅰ、Ⅱ期低于Ⅲ、Ⅳ期（P〈0．05），在高分化癌中低于低分化癌（P〈0．05）。结论APC基因启动子区异常甲基化与上皮性卵巢癌发生密切相关，并可能与上皮性卵巢癌临床分期及分化程度有关。     

Relationship between the Expression of RASSF1A Protein and Promoter Hypermethylation of RASSF1A Gene in Bladder Tumor

To investigate the relationship between the expression of RASSF1A protein and promoter hypermethylation of RASSF1A gene, RASSF1A protein expression was measured by Western blotting in 10 specimens of normal bladder tissues and 23 specimens of bladder transitional cell carcinoma （BTCC）. The promoter methylation in BTCC and normal bladder tissues was detected by methylation-specific PCR （MSP）. The results showed that the expression level of RASSF1A protein was significantly lower in BTCC tissues than that in normal bladder tissues. However, it was not correlated with its clinical stages and pathological grades. The frequency of promoter methylation of RASSF1A gene was higher in BTCC tissues than that in normal bladder tissues. In 14 patients with the aberrant promoter methylation, 13 showed loss or low expression of RASSF 1A protein. It is concluded that RASSF1A gene promoter methylation may contribute to the low level or loss of RASSF1A protein expression, the inactivation of RASSF1A gene and the genesis of BTCC. But, it may bear no correlation with its clinical stages and pathological grades.     

HIF -1α在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的：检测膀胱移行细胞癌（BTCC）中HIF-1α的表达情况,初步探讨HIF-1α在BTCC中表达的临床意义。方法：应用免疫组织化学及RT-PCR技术检测BTCC和正常膀胱组织中HIF-1α蛋白和mRNA表达情况,并分析其表达与肿瘤临床分期、病理分级及复发的关系。结果：免疫组织化学染色显示,12例正常膀胱组织未发现HIF-1α阳性表达,57例BTCC中有30例HIF-1α表达阳性,阳性表达率为52.6%。其表达与肿瘤的病理分级无关,但与肿瘤的临床分期及复发相关。RT-PCR检测显示,BTCC中HIF-1αmRNA的阳性表达率高于正常膀胱组织,差异具有统计学意义,但BTCC中HIF-1αmRNA的表达与其蛋白水平表达无明显相关性。结论：在BTCC中,HIF-1α的表达明显上调,可能在BTCC的侵袭等生物学过程中具有重要的作用。     

Skp2及PTEN在膀胱移行细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的研究Skp2及PTEN蛋白在膀胱移行细胞癌（膀胱癌）组织中的表达,探讨其临床意义。方法采用免疫组化方法检测在68例膀胱癌中Skp2和PTEN蛋白的表达。结果膀胱癌组织中Skp2阳性率（44.1%）显著高于膀胱正常黏膜组织（11.8%）（P〈0.05）,而PTEN则相反;Skp2与PTEN蛋白表达成负相关（P〈0.05）。结论 Skp2蛋白表达增高与膀胱癌的临床分期、病理分级相关,且与PTEN成负相关;联合检测Skp2、PTEN可作为判定膀胱癌生物学行为的客观指标。     

膀胱移行细胞癌组织中E2F3、C-myc和Bcl-2的表达及其与膀胱癌相关性研究

目的:探讨膀胱移行细胞癌(BTCC)组织及正常膀胱黏膜组织中E2F3基因及其下游相关基因C-myc和Bcl-2的表达情况,同时分析E2F3、C-myc和Bcl-2的表达与临床病理参数之间的关系及3个指标之间的相关性,初步揭示BTCC发生、发展的分子机制。方法:检测不同病理分期及组织分级的BTCC标本和正常膀胱黏膜中E2F3、C-myc与Bcl-2蛋白的表达情况,分析E2F3 mRNA在不同组织中的表达情况,探讨BTCC组织中E2F3、C-myc与Bcl-2蛋白的表达之间的关系及三者与临床病理参数之间的关系。结果:E2F3表达阳性率在膀胱移行细胞癌与正常膀胱黏膜中的差异有显著性(P<0.05),且与肿瘤分级和分期密切相关(P<0.01)。肿瘤组织中E2F3 mRNA阳性表达而正常黏膜中E2F3 mRNA呈阴性表达。C-myc及Bcl-2在移行细胞癌组及正常膀胱黏膜中的表达率均有显著性差异(P<0.01)。其中移行细胞癌组C-myc表达与病理分级、组织分期有关(P<0.01),Bcl-2的表达率只与病理分级相关(P<0.01)。结论:E2F3与膀胱癌的恶性程度密切相关,其不仅是膀胱癌的诊断与预后指标,而且为膀胱癌的基因靶向治疗提供理论依据。E2F3与靶基因C-myc和Bcl-2的表达密切相关,E2F3可能通过与C-myc及Bcl-2协同作用共同参与了膀胱移行细胞癌的发生、发展。     

膀胱癌中GDF15基因启动子区甲基化检测及逆转其甲基化状态对5637膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 检测生长分化因子15(GDF15)在膀胱癌中的甲基化状态,探讨其启动子区异常甲基化对于膀胱癌发生发展的作用.方法 应用重亚硫酸盐测序PCR(BSP)联合T-载体PCR产物(TA)克隆检测人膀胱移行细胞癌细胞系5637、HT1376、KU19-19、膀胱癌组织、癌旁组织、正常组织样品中GDF15启动子区甲基化状态,并用甲基化酶抑制剂5-Aza-2-deoxycitydine(5-Aza-dc)处理5637,观察处理前后平均甲基化率的变化情况,Western blot法检测5637处理前后蛋白表达情况,MTT法检测细胞增殖情况,划痕实验检测迁移情况,Transwell法检测侵袭能力.结果 5637、HT1376、KU19-19细胞中GDF15启动子区平均甲基化率为89.29%、10.71%、8.33%,肿瘤组织、癌旁组织及正常组织分别为86.91%、9.52%、5.95%,膀胱癌组织中 GDF15启动子区甲基化率较癌旁组织和正常组织中高,差异有统计学意义(P<0.05);5-Aza-dc可以逆转5637中GDF15的甲基化状态:与处理前相比,处理组5637细胞系GDF15蛋白表达增加,增殖、迁移、侵袭能力下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论 膀胱癌中GDF15基因表达与甲基化状态有关,启动子区高甲基化导致基因沉默,逆转甲基化状态可以使基因蛋白表达增加,细胞增殖、迁移、侵袭能力均降低.GDF15基因甲基化异常状态有可能成为膀胱癌诊断的潜在靶点.     

Runx3基因启动子甲基化及其蛋白表达与喉癌的关系

目的探讨Runx3基因启动子甲基化状态及其蛋白表达与喉癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测55例喉癌组织及癌旁正常黏膜组织中Runx3DNA的表达,并用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测Runx3基因启动子甲基化情况。结果55例喉癌组织标本中Runx3基因蛋白的表达较癌旁正常组织中表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;癌旁正常黏膜组织中无Runx3基因启动子的甲基化,喉癌组织中有32例（58.2%）检测到Runx3基因启动子的甲基化,2者比较差异有统计学意义（P〈0.05）;喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化及Runx3蛋白的表达与性别、临床分型及分级、有无淋巴结转移均无关（均P〉0.05）;喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化与Runx3蛋白表达呈负相关（r=-0.7092,P〈0.01）。结论Runx3基因启动子甲基化是其基因失活的可能机制之一,在喉癌的发生中起重要作用。     

膀胱移行细胞癌尿沉渣RASSF1A基因启动子的甲基化状况及意义

目的 探讨膀胱癌患者尿沉渣细胞中RASSF1A基因启动子CpG岛的甲基化状况及其临床意义.方法 选取病理确诊的39例膀胱癌标本,采用甲基化特异PCR方法检测膀胱癌肿瘤组织和配对的尿沉渣RASSF1A基因启动子CpG岛的甲基化异常频率,同时以45例非肿瘤性泌尿系疾病患者及14例健康志愿者的相关检测情况作为对照,分析膀胱肿瘤患者RASSF1A基因异常甲基化的情况.结果 膀胱癌组RASSF1A基因启动子甲基化阳性率（61.5%,24/39）显著高于非肿瘤组（4.4%,2/45）（P〈0.01）,非肿瘤组与志愿组间（阳性率为0）并无明显差异（P＞0.05）;尿沉渣RASSF1A基因甲基化对膀胱癌诊断的敏感性为61.5%（24/39）,特异性为95.6%（43/45）.性别、年龄、病理分级及临床分期与RASSF1A基因甲基化均无明显相关性（均P＞0.05）.膀胱癌肿瘤组织RASSF1A基因启动子甲基化阳性率为69.2%（27/39）.膀胱癌肿瘤组织和配对的尿沉渣同时出现RASSF1A基因甲基化为20例,同时仅出现非甲基化为8例,两者明显相关（P〈0.05）.结论 RASSF1A基因异常甲基化可能是膀胱癌的早期事件,其异常甲基化状态可能成为非侵入性诊断膀胱癌的分子标志物之一.