绿色荧光裸小鼠的选育初报

目的 选育系统表达绿色荧光蛋白的BALB/c裸小鼠,并对该小鼠各组织器官绿色荧光蛋白表达情况进行观察.方法 根据遗传学原理对C57BL/6-TgN(GFP)小鼠与BALB/c裸小鼠进行杂交、自交和回交,建立稳定表达绿色荧光蛋白的BALB/c裸小鼠,对该小鼠遗传质量进行检测;解剖观察胸腺生长情况以及多组织器官绿色荧光蛋白的表达情况.结果 成功选育出的BALB/c带绿色荧光蛋白的裸小鼠(简称荧光裸小鼠),外观呈黄绿色;胸腺缺失;在荧光显微镜下,脑、心脏、肺脏、肝脏、肾脏及胰腺等组织器官可见明显绿色荧光.结论 成功选育出BALB/c绿色荧光裸小鼠,该小鼠外观呈黄绿色,全身主要组织器官稳定表达绿色荧光蛋白.     

应用祼鼠移植人癌的实验研究及其进展

裸小鼠由Flanagan(1966)作为无毛突变种发现,随后Pantelouris(1968)查明此类小白鼠先天性胸腺缺失。Rugaard等(1969)第1次将人类肿瘤成功地移植到裸小鼠身上。至今这种动物几乎广泛地应用于癌研究的所有领域,特别是在人癌的移植、机能研究及治疗方面。由于裸小鼠移植人体肿瘤可以保存原来组织的性质,所以,经裸小鼠移植后,人癌产生的很多物质仍能很     

TA2小鼠自发乳腺癌血清蛋白质组学研究

目的:采用双向电泳-质谱技术寻找TA2小鼠自发性乳腺癌发生相关的差异蛋白.方法:收集5只TA2自发乳腺癌小鼠和5只正常TA2小鼠血清,将血清标本进行双向电泳,经软件分析结合人工比对确认差异蛋白点,基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱对差异蛋白点进行鉴定.结果:在TA2自发乳腺癌小鼠和正常TA2小鼠血清间共找到11个差异蛋白质点,成功鉴定出5种蛋白质,它们分别为:妊娠区带蛋白、对氧磷酶、HemK家族修饰性甲基化酶、结合珠蛋白和血清淀粉样P成分.其中这5种蛋白均在TA2自发乳腺癌小鼠高表达,而在正常TA2小鼠呈低表达或表达缺失.结论:通过双向电泳质谱技术鉴定出的5种差异蛋白与乳腺癌的发生有一定关系,初步阐述了TA2小鼠自发乳腺癌发生的机制.     

小鼠卵巢蛋白质双向凝胶电泳蛋白谱系的初步建立及其功能分析

目的:初步建立性成熟小鼠卵巢蛋白质图谱,并对其中的蛋白质功能进行研究.方法:通过双向电泳和质谱技术分析性成熟小鼠卵巢蛋白质组,并对其中的一种蛋白质进行免疫组化研究.结果:(1)获得高重复性和高分辨率小鼠卵巢蛋白图谱.软件分析显示,3个不同卵巢样品24 cm银染蛋白凝胶上的蛋白点均有±2 000点,胶重复性好,大部分蛋白点位于相对相同的位置.(2)质谱共鉴定出52种蛋白质,按功能对其进行分类:参与细胞代谢、细胞信号传导/交流、细胞结构/运动、细胞/器官防御与抗氧化作用、调节RNA合成、调节蛋白表达及未分类.(3)通过对其中的一种蛋白(GRP78)行免疫组化分析,发现随着卵巢由卵泡早期逐渐生长到排卵前卵泡期成熟并转向黄体期,其在颗粒细胞中的表达信号增强.结论:(1)3个不同卵巢样品蛋白质双向电泳图重复性好.我们通过质谱分析共鉴定出约52种蛋白质,初步构建了小鼠卵巢双向电泳蛋白图谱,对研究卵巢病理与生理、发育过程有着重要的参考价值.(2)行免疫组化分析结果显示,在卵巢周期变化过程中,GRP78蛋白对颗粒细胞的增生、分化、形成黄体颗粒细胞起着重要的调控作用.     

乳小鼠培养肝细胞蛋白质双向电泳技术的建立

目的 :建立培养乳小鼠肝细胞蛋白质的双向电泳技术。方法 :取乳小鼠肝脏组织 ,进行肝细胞原代培养 ,提取肝细胞蛋白 ,以固相pH梯度 (IPG)等点聚焦为第一向 ,垂直SDS -PAGE为第二向进行双向电泳 ,并对样品处理方式、蛋白上样量、IPG等电聚焦和SDS -PAGE电泳参数设置、凝胶浓度等关键因素和环节进行了比较研究。结果 :通过实验条件的筛选和优化获得了较满意的双向电泳图谱。结论 :本文建立乳小鼠双向电泳分离技术 ,具有较高的分辨率和重复性 ,为研究肝脏不同条件下特异性蛋白的表达及分子标记奠定了基础     

人脑胶质瘤干细胞移植于表达绿色荧光蛋白裸小鼠的研究

目的 培育表达绿色荧光蛋白(GFP)的裸小鼠,并探讨将其用于人胶质瘤干细胞(HGSC)移植实验研究.方法 将C57BL/6J-GFP转基因小鼠与NC系裸小鼠进行交配,在继代时严格挑选都表达GFP的无毛雄鼠与有毛母鼠交配,通过肉眼、免疫组织化学和荧光显微镜等方法观察GFP在裸小鼠皮肤和脏器中的表达情况,继将HGSC原位移植于表达GFP的裸小鼠,以观察移植瘤的生长情况.结果 传至8代的裸小鼠,包括脑在内的全身主要器官和细胞都表达GFP.对用于HGSC原位移植的脑,能清晰辨认出不发光的瘤细胞和发光的宿主细胞.而瘤细胞经人特异白细胞抗体(HLA)连接红色荧光剂(PE)的免疫组织化学染色后,在共聚焦显微镜下可清晰显示与宿主脑细胞的组织学关系.结论 用免疫功能健全、表达GFP的转基因鼠与免疫功能缺陷的裸小鼠杂交,可获得脑等组织器官表达GFP的裸小鼠.对其进行HGSC原位移植,因可清晰辨认移植瘤与宿主组织的关系而有望用于肿瘤组织重构的研究.     

双向电泳中人血清蛋白样品不同处理方法的比较

目的针对人血清双向电泳流程中样品制备的不同方法,本研究进行了系统的比较和分析。方法采用丙酮沉淀法,三氯醋酸沉淀法,三氯醋酸/丙酮沉淀法,蛋白纯化试剂盒,去白蛋白及免疫球蛋白试剂盒预处理血清样品;双向电泳分离;硝酸银染色;软件分析所得蛋白质斑点。结果对丙酮沉淀法,三氯醋酸沉淀法,三氯醋酸/丙酮沉淀法,蛋白纯化试剂盒处理血清所得到的2 DE图谱统计分析,得到平均蛋白质点数分别为1?802±12,1?648±10,1?727±13,1?670±14;对去除白蛋白及免疫球蛋白血清所得到的双向电泳（2 DE）图谱与丙酮沉淀血清所得到的图谱进行统计,得到平均蛋白质点数分别为1?212±16,1?258±12,并对其中差异蛋白进行了质谱鉴定。结论结果表明不同血清沉淀方法对血清的双向电泳各有优劣;血清去除白蛋白及免疫球蛋白之后,可以提高一些低丰度蛋白的检出,但会导致部分蛋白的丢失。     

健脾为基础中药方对人胃癌MKN-45裸小鼠皮下移植瘤生长及瘤组织内P-Stat3蛋白表达的影响

目的研究健脾为基础中药方对人胃癌MKN-45裸小鼠皮下移植瘤生长及瘤组织内P-Stat3蛋白表达的影响。方法将裸小鼠皮下移植瘤模型随机分为中药组及生理盐水组,比较第31天2组实验鼠皮下移植瘤生长及瘤组织内P-Stat3的蛋白表达情况。结果中药组的抑瘤率为23.68%,P-Stat3蛋白表达相对定量值为(0.33±0.52),与生理盐水组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。结论健脾为基础的中药方可抑制人胃癌细胞MKN-45裸小鼠皮下移植瘤的生长,并能抑制P-Stat3的蛋白表达。     

猪无蛋白血清治疗烧伤小白鼠和家兔软组织损伤创面愈合的研究

猪无蛋白血清—SNPS研制和动物实验已有报道。小牛无蛋白血清—Solcoseryl,国内外已用于临床。本文用SNPS治疗小白鼠烧伤和家兔软组织损伤的疗效探讨。 材料和方法 SNPS为本所研制产品。实验用小白鼠33只,体重20—26g,治疗组20只,对照组13只。小鼠背     

东方田鼠组织/器官体外杀日本血吸虫童虫作用

目的 :筛选东方田鼠特异性杀伤日本血吸虫童虫的组织 器官。方法 :将日本血吸虫童虫与东方田鼠心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏和肌肉的组织 器官匀浆上清液以及不同浓度东方田鼠血清混合培养 ,以昆明小鼠相应的组织 器官匀浆上清及相应浓度的血清做为对照 ,观察其杀童虫效应。结果 :东方田鼠各组织 器官与昆明小鼠各组织 器官匀浆的杀伤童虫效应比较差异均无显著性 (P >0 .0 5 ) ;东方田鼠血清较昆明小鼠血清的杀伤效应强 (P =0 .0 0 1) ;东方田鼠各组织 器官匀浆之间杀伤效应差异亦无显著性 (P >0 .0 5 ) ;东方田鼠血清较东方田鼠各组织 器官的杀伤效应强 (P <0 .0 5 ) ;东方田鼠新鲜血清与灭活补体血清的杀伤效应无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,其 4 0 %新鲜血清较2 0 %新鲜血清的杀伤效应强 (P <0 .0 0 1)。结论 :东方田鼠血清较组织 器官的杀伤效应强 ;也较昆明小鼠血清的杀伤效应强 ,东方田鼠 4 0 %血清浓度较 2 0 %血清浓度的杀童虫效应强     

人肝癌细胞MHCC-97H裸小鼠原位移植模型的建立

【目的】建立人肝癌细胞MHCC-97H原位移植裸鼠模型并检测其中甲胎蛋白（AFP）基因的表达。【方法】原位移植造模;提取模型肝癌组织中的总RNA和总蛋白,采用RT-PCR及Westernblomng两种方法分别检测AFP基因在转录水平和翻译水平的表达情况。【结果】模型肝癌组织在转录和翻译两个水平均检测出AFP基因的表达。【结论】该肝癌裸鼠模型建立成功,可作为肝癌研究的动物模型。     

绿色荧光裸鼠的建立和验证

目的建立系统性表达绿色荧光蛋白的裸鼠,接种人源肺癌细胞验证该模型是否具有免疫缺陷性,并观察双色荧光的成像效果。方法利用系统性表达绿色荧光蛋白的C57BL/6J小鼠与BALB/C裸小鼠多代杂交和互交,建立稳定表达绿色荧光蛋白的裸鼠。大体解剖观察胸腺生长情况,整体和器官荧光成像验证绿色荧光蛋白的表达情况。以2×106/只的剂量对其皮下腋下接种表达红色荧光蛋白的人类A549肺癌细胞(RFP-A549),通过观测肿瘤生长来验证模型的免疫缺陷性。同时,利用红色荧光标记的肿瘤和绿色宿主鼠,对双色的整体成像效果进行观测。结果构建出系统性表达绿色荧光蛋白的裸鼠,大体解剖可见胸腺缺失。在激发光的激发下,绿色荧光裸鼠全身发出清晰的绿色荧光,脑、心脏、肺脏、肝脏、肾脏,肠胃及胰腺等主要器官可见明显绿色荧光。接种RFP-A549细胞后,成瘤率达到100%,整体动物荧光成像表现出清晰的双色。结论本研究构建出的绿色荧光裸鼠,动物整体可以清晰地表达绿色荧光并具有免疫缺陷性     

工程化人胃癌裸鼠原位模型的建立及其活体荧光成像观察

目的建立工程化人胃癌裸鼠原位模型,并利用活体荧光成像技术进行观察。方法以胶原为支架材料,表达绿色荧光的人
胃癌BGC823-EGFP细胞为种子细胞,建立人胃癌体外模型;倒置显微镜观察肿瘤细胞生长状态;通过注射将体外模型移植到裸
鼠体内;活体荧光成像评估胃癌原位模型的建立;解剖观察原位肿瘤的移植成功率,生长及转移情况;冰冻切片及HE染色进行
组织学观察。结果工程化人胃癌体外模型中肿瘤细胞呈立体生长;原位肿瘤成瘤率100%,可见腹腔重要脏器转移;组织学特征
呈典型低分化腺癌;活体荧光观察可见原位肿瘤形成,但效果不理想。结论建立了工程化人胃癌裸鼠原位模型;绿色荧光成像
效果较差,活体荧光成像观察应选用穿透力较强的荧光。
     

开普拓对人宫颈癌荷瘤裸鼠放射增敏作用的实验研究

目的探讨开普拓（CPT-11）对人宫颈癌荷瘤裸鼠放射增敏效应和毒性反应。方法以人宫颈癌系Hela接种于Balb／C裸鼠右后大腿皮下，分组后给予CPT-11化疗、单纯放疗和联合放疗进行干预，观察荷瘤鼠肿瘤生长状况，计算肿瘤生长延缓时间和增敏系数（EF）；测量治疗后20d荷瘤鼠肿瘤体积、体重、外周血白细胞数，观察各重要脏器组织病理学变化，计算荷瘤鼠肿瘤抑制率及预期值／观察值（E／O）。结果联合放疗组荷瘤鼠肿瘤生长延缓时间明显延长，EF为1．45；治疗后20天单纯化疗组、单纯放疗组和联合放疗组荷瘤鼠肿瘤抑制率分别26．89％、52．94％和79、83％；E／O值为1．71；各组荷瘤鼠体重和外周血白细胞数无明显差异，重要脏器未见明显毒性病理学改变。结论CPT-11对人宫颈癌荷瘤裸鼠肿瘤有抑制效应和放射增敏作用，对荷瘤鼠重要脏器无明显毒性，是一种安全、有效的放射增敏剂。但用于临床还有待于进一步探索其安全与作用机制。     

非肿瘤细胞凋亡引起肿瘤机体血清细胞色素C增高

Background  Neuroblastoma (NB) is one of the most common malignant solid tumors of childhood. It is still not clear whether the apoptosis of tumor cells or the non-tumor cells contributes to the increase of concentration of cytochrome c (Cyt c) in the serum of the cancer patients. The aim of this research was to identify the source of the Cyt c in the serum when the tumor grows up by subcutaneous inoculation of human NB cells into nude mice.

Methods  We subcutaneously inoculated human NB cells (KP-N-NS) into nude mice and collected the sera of tumor-bearing mice (n=14) and control mice (n=25) 4 weeks later in order to screen for and identify differentially expressed proteins in the serum. Differentially expressed proteins in the serum were screened by surface-enhanced laser desorption/ionization-time-of-flight (SELDI-TOF) mass spectrometry.

Results  The relative intensity of a protein having a mass-to-charge ratio (m/z) of 11 609 was 3338.37±3410.85 in the tumor group and 59.84±40.74 in the control group, indicating that the expression level of this protein in the tumor group was 55.8 times higher than that in the control group. Serum proteins were separated and purified by high-performance liquid chromatography (HPLC). Liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) was performed to produce peptide mass fingerprints (PMFs). Spectrum analysis and a database search revealed that the highly expressed protein (m/z=11 605.4) from the serum of tumor-bearing mice was the mouse Cyt c.

Conclusions  Increased concentration of Cyt c in the serum of tumor-bearing nude mice might be partially attributed to the secretion of this protein by non-tumor cells.

     

BALB/c荧光裸鼠脾脏组织学的观察

目的 探讨不同日龄阶段BALB/c荧光裸鼠脾脏组织学变化;以及与BALB/c普通裸鼠脾脏组织学的差异。 方法 取不同日龄（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）BALB/c荧光裸鼠及BALB/c普通裸鼠各32只,雌雄各半,处死取脾脏,对脾脏的绝对重量、脾脏指数进行测量分析,对脾脏的组织学改变进行观察,并对脾脏淋巴细胞数进行统计分析。 结果 与14日龄荧光裸鼠相比,28日龄荧光裸鼠脾脏指数明显较高（p<0.05）。与14日龄荧光裸鼠相比,49日龄、70日龄荧光裸鼠淋巴细胞数明显变少（p<0.05）。与普通裸鼠（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）相比较,相同日龄荧光裸鼠（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）淋巴细胞数明显减少（p<0.05）。 结论 GFP基因对不同日龄荧光裸鼠的脾脏发育及其功能有一定影响。     

利用人脐带血干细胞制备人鼠肝组织嵌合体模型

目的利用人脐带血干细胞研究制备HBV感染人鼠嵌合小鼠模型。方法将人脐血干细胞,经尾静脉分两次注射到裸鼠体内。分别于第7,14,21天取肝组织,进行AFP免疫组织化学检测,分析人肝细胞在裸鼠体内嵌合生长情况,并进行乙肝病毒感染实验,定量检测感染后小鼠血清中AFP、ALB。结果实验组小鼠在第7、14、21天肝脏内AFP持续阳性表达,AFP表达于细胞质内。HBV感染后小鼠肝脏HBsAg组化显示密集成片的阳性细胞。实验组和对照组表达差异显著(P<0.05)。结论将人脐血干细胞移植裸鼠肝脏内可以存活并分化成人肝细胞形成嵌合鼠,并能被HBV感染。     

酪酪肽对荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤的影响

目的 研究酪酪肽(PYY)对荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响并初步探讨其作用机制.方法 用含1×107/ml的HepG2人肝癌细胞悬液0.2 ml打人裸鼠皮下,待其长出的肿瘤直径约1cm时将瘤块取出,在无菌PBS液中剪成大小1 min×1 mm×1mm的小块,用组织插块法制作裸鼠皮下肝癌模型.选取成瘤的32只裸鼠平均分为4组:PYY大、小剂量组,阳性对照组给与腹腔注射氟尿苷,阴性对照组给与皮下注射生理盐水.实验过程中观察裸鼠的一般情况.结果 PYY大、小剂量组在肿瘤体积、血清AFP、瘤重及瘤组织cAMP中均低于阴性对照组(P＜0.05).结论 PYY可以抑制裸鼠肝癌皮下移植瘤的生长,其机制可能与抑制肝癌细胞内cAMP的含量有关.