美托洛尔下调CaMKIIδC-p38通路对异丙肾上腺素诱导心力衰竭的保护机制

目的研究美托洛尔下调CaMKIIδC—p38通路对异丙肾上腺素诱导心力衰竭的保护机制。方法40只SD大鼠随机分成四组，正常对照组（Control）、异丙肾上腺组（Iso）、异丙肾上腺＋美托洛尔组（Iso＋Meto）和美托洛尔组（Meto），每组10只，所有动物均自由进食进水。（1）Iso组大鼠背部皮下注射Iso5my／（kg·d），连续10d；对照组背部皮下注射相同体积的生理盐水；Iso＋Meto组大鼠背部皮下注射Iso5mg／（kg·d）．连续10d，在背部皮下注射Iso前1天开始Meto10mg／（kg·d）灌胃，连续4固；Meto组给予10mg／（kg·d），连续4周灌胃；（2）所有大鼠饲养4周后，采用MillarP-V Loop导管经颈动脉插管至左心室，使用Powerlab生理记录系统测量血流动力学相关指标；统计各组大鼠心脏重量和心脏重量／体重比值；（3）TUNEL法和Caspase-3活性检测心肌细胞凋亡；（4）ELISA分析CAMKII活性；（5）Westernblot检测CaMKIl8、p-CaMKIIδ、CaMKIIδC和MAPKs家族（p-38、JNK、ERK）、和凋亡相关基因Bcl-2／Bax的蛋白表达水平。结果40只sD大鼠实验过程精神状态好，进食进水正常，无呼吸困难及水肿。（1）Iso和Meto干预SD大鼠心脏重塑和血流动力学指标有显著改变，与Control组相比．Iso组心脏重量和心脏重量指数明显增加（P〈0．05）；而Iso＋Meto组心脏重量和心脏重量指数明显低于Iso组（P〈0．05）；大鼠体重、肝重和肺重四组间也无明显差异。大鼠血流动力学指标心率（HR）、平均动脉血压（MBP）和亢事舒张末压（LVEDP）Iso组明显高于Control组；但左室压力变化速率（LV±dp/dt max）Iso组明显低于Control组（P〈0．05）；而Iso＋Meto组HR、MBP和LVEDP明显低于Iso组（P〈0．05），但Iso＋Meto组±dp／dtmax明显高于Iso组（P〈0．05）；（2）Iso组SD大鼠心肌细胞TUNEL阳性细胞数和Caspase-3活性明显高于Control组（P〈0．05）；Western杂?     

美托洛尔下调CaMKⅡδC-p38通路对异丙肾上腺素诱导心力衰竭的保护机制

目的研究美托洛尔下调CaMKⅡδC-p38通路对异丙肾上腺素诱导心力衰竭的保护机制。方法40只SD大鼠随机分成四组,正常对照组(Control)、异丙肾上腺组(Iso)、异丙肾上腺 美托洛尔组(Iso Meto)和美托洛尔组(Meto),每组10只,所有动物均自由进食进水。(1)Iso组大鼠背部皮下注射Iso 5 mg/(kg·d),连续10 d;对照组背部皮下注射相同体积的生理盐水;Iso Meto组大鼠背部皮下注射Iso 5 mg/(kg·d),连续10 d,在背部皮下注射Iso前1天开始Meto 10 mg/(kg·d)灌胃,连续4周;Meto组给予10 mg/(kg·d),连续4周灌胃;(2)所有大鼠饲养4周后,采用Millar P-V Loop导管经颈动脉插管至左心室,使用Powerlab生理记录系统测量血流动力学相关指标;统计各组大鼠心脏重量和心脏重量/体重比值;(3)TUNEL法和Caspase-3活性检测心肌细胞凋亡;(4)ELISA分析CAMKⅡ活性;(5)Western blot检测CaMKⅡδ、p-CaMKⅡδ、CaMKⅡδC和MAPKs家族(p-38、JNK、ERK)、和凋亡相关基因Bcl-2/Bax的蛋白表达水平。结果40只SD大鼠实验过程精神状态好,进食进水正常,无呼吸困难及水肿。(1)Iso和Meto干预SD大鼠心脏重塑和血流动力学指标有显著改变,与Control组相比,Iso组心脏重量和心脏重量指数明显增加(P<0.05);而Iso Meto组心脏重量和心脏重量指数明显低于Iso组(P<0.05);大鼠体重、肝重和肺重四组间也无明显差异。大鼠血流动力学指标心率(HR)、平均动脉血压(MBP)和左室舒张末压(LVEDP)Iso组明显高于Control组;但左室压力变化速率(LV±dp/dt max) Iso组明显低于Control组(P<0.05);而Iso Meto组HR、MBP和LVEDP明显低于Iso组(P<0.05),但Iso Meto组±dp/dtmax明显高于Iso组(P<0.05);(2)Iso组SD大鼠心肌细胞TUNEL阳性细胞数和Caspase-3活性明显高于Control组(P<0.05);Western杂交分析检测Iso组抗凋亡蛋白bcl-2表达明显低于Control组(P<0.05),而促抗凋亡蛋白Bax表达明显高于Control组;(3)CaMKⅡ活性分析结果显示Iso组明显高于Control组(P<0.05)。说明Iso诱导了明显的心肌细胞凋亡,并且心肌细胞凋亡和CaMKⅡ活性明显正相关;(4)CaMKⅡδ异构体、MAPKs家族在β1-AR持久兴奋的SD大鼠心肌表达情况,我们用Western blot方法分析结果显示Iso组CaMKⅡδC和p-CaMKⅡδ、p38 MAPK、JNK蛋白表达明显高于Control组(P<0.05),但与Control组比较,Iso组ERK蛋白表达明显减少(P<0.05)。与Iso组相比,β1-AR阻滞剂Meto可减少CaMKⅡδC和p-CaMKⅡδ、p38 MAPK、JNK蛋白表达,增加ERK蛋白表达(P<0.05)。结论(1)持久兴奋β1-AR激活CaMKⅡδC-p38通路诱导心肌细胞凋亡,导致心肌重塑、心力衰竭;(2)β1-AR阻断剂美托洛尔可阻断β1-AR持久激活CaMKⅡδC—p38导致心肌细胞凋亡途径,对心脏有保护效应。     

抗β1肾上腺素受体细胞外第二环自身抗体长期存在对大鼠心肌组织钙调蛋白激酶Ⅱδ亚型表达的影响

目的 通过动物实验研究,观察抗β1肾上腺素受体细胞外第二环抗体(抗β1AR-ECⅡ抗体)长期持续存在对心肌组织钙调蛋白激酶Ⅱδ亚型(CaMK Ⅱδ)表达的影响.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA法)筛选血清抗β1AR-ECⅡ抗体阴性的健康成年雄性Wistar大鼠,通过背部皮下定期给人免疫佐剂和针对β1肾上腺素受体细胞外第二环(β1AR-ECⅡ)抗原多肽的混合物建立主动免疫模型,定期采用ELISA法检测免疫过程中大鼠血清中抗β1-AR-ECⅡ抗体水平及大鼠心功能的变化情况;利用荧光法检测心肌组织caspase-3活性;采用Western-blot法检测大鼠心肌组织中CaMK Ⅱδ的表达情况.结果 用β1AR-ECⅡ抗原肽段长期主动免疫大鼠可导致心功能下降及心肌组织凋亡的增加,同时伴随有大鼠心肌组织中CaMKⅡδ表达增加,并具有时间依赖性.结论 抗β1AR-ECⅡ抗体长期存在可导致大鼠心肌组织CaMKⅡδ表达的增加,CaMKⅡδ可能是抗β1AR-ECⅡ抗体诱发心肌细胞凋亡,进而导致心功能障碍过程中的关键信号分子.     

胰高血糖素样肽-1保护内质网应激诱导的胰岛β细胞凋亡

目的探讨胰高血糖素样肽-1（GLP-1）对毒胡萝卜素（TG）诱导的胰岛13细胞凋亡的保护作用及可能机制。方法体外培养大鼠胰岛β细胞系-19细胞,采用TG诱导内质网应激,并比较存在GLP-1和GLP-1受体激动剂exendin-4的条件下胰岛B细胞凋亡情况。实验分为正常对照组、TG组（100nmol／L）、GLP-1（10nmol／L）＋TG（100nmol／L）组和exendin-4（100nmol／L）＋TG（100nmol／L）组,通过DNA片段化、原位转移酶缺口末端标记法（TUNEL）染色、AnnexinV—PI（膜连蛋白V／碘化丙啶）双染流式细胞仪检测4组细胞凋亡率的差异。采用Westernblot检测细胞色素c的释放。通过荧光探针DCFH—DA检测细胞活性氧簇（ROS）水平。罗丹明-R110（Z—DEVD—R110）染色检测细胞Caspase-3活性。2组间均数比较采用t检验,4组间比较采用单因素方差分析。结果DNA片段化检测和TUNEL染色实验均显示后两组细胞凋亡较TG组明显减少（F=2．16;t值分别为6．13和6．73,均P〈0．01）。AnnexinV—PI双染流式细胞仪检测显示TG组细胞的凋亡率为26％,在GLP-1和exendin-4存在的条件下,TG诱导的细胞凋亡明显减至19．7％和19．2％。进-步实验表明GLP-1和exendin-4能降低内质网应激过程中细胞色素c释放、活性氧簇ROS的产生和Caspase-3活性。细胞浆蛋白的Westernblot检测结果显示,给予GLP-1和exendin-4能降低内质网应激过程中细胞色素c释放（F=0．875;t值为5．37和7．26,P〈0．01）。细胞浆中凋亡蛋白酶Caspase-3的检测结果显示,GLP-1和exendin-4能抑制Caspase-3的激活和释放（F=0．838,t值为3．46和4．52,P〈0．01）。细胞线粒体活性氧的释放检测结果显示,正常情况下,细胞浆中可检测到-定量的活性氧,给予TG后释放的活性氧明显增多（61．67±7．64,t=22．13,P〈0．01）,给予GLP-1和exendin-4能减少活性氧的释放（32．3±3．21,t值分别为12．41和15．28,P〈0．01）。结论GLP-1对TG诱导的B细胞凋亡具有保护作用,其机制可能通过与内质网应激导致的细胞色素c释放、Caspase-3的激活和ROS的产生有关。     

熊脱氧胆酸减轻内质网应激介导的胰岛β细胞凋亡的机制

目的 探讨熊脱氧胆酸( Ursodeoxycholic acid,UDCA)通过减轻内质网应激保护链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡的作用.方法 链脲佐菌素(50 mg/kg)一次性腹腔注射建立糖尿病大鼠模型(n=40),并将14只造模成功大鼠按随机数字表法随机分为糖尿病组7只,UDCA组7只,另取正常对照组10只.自造模成功第10天开始以UDCA(40 mg·kg-1·d-1)给大鼠灌胃30 d.饲养期间观察大鼠血搪.处死后留取大鼠血清和组织标本,测定空腹胰岛素,TUNEL检测胰岛β细胞凋亡的形态学改变.胰腺组织总RNA采用定制基因芯片对89条凋亡相关基因的表达进行检测,以RT-PCR和Western印迹法验证相关基因的表达.结果 糖尿病大鼠血糖在给予UDCA治疗后逐渐下降,但仍然未降到正常水平.糖尿病大鼠空腹胰岛素降低,给予UDCA治疗后空腹胰岛素水平有所增加.TUNEL显示糖尿病组大鼠予UDCA治疗后减少了由链脲佐菌素引起的胰岛β细胞凋亡(P＜0.01).在89条基因中,糖尿病组上调基因42条,下调基因46条.UDCA可以逆转部分基因的影响.与对照组相比,糖尿病组大鼠Bax、Caspase-3、Bip、CHOPmRNA和CHOP蛋白显著上调(P＜0.05),而抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA显著下调(P＜0.05),给予UDCA治疗后这些参数均有明显改善(P＜0.05).结论 熊脱氧胆酸可能通过减轻内质网应激达到保护链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡的作用.     

Ac-SDKP通过抑制内质网应激对肺纤维化细胞凋亡的影响

目的探讨体内、外肺间质纤维化模型中Ac-SDKP延缓肺纤维化发展的可能机制。 方法体内实验：将24只健康雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组（8只）、肺纤维化模型组（8只）、肺纤维化+Ac-SDKP治疗组（8只）。采用气管内注入博来霉素（5 mg/kg）法建立小鼠肺纤维化模型,对照组为气管内注入等体积0.9%氯化钠溶液。造模后肺纤维化+Ac-SDKP治疗组小鼠腹腔内埋入Ac-SDKP微量注射泵（Ac-SDKP 800μg·kg^-1·d^-1,冰乙酸0.1 mol/L,卡托普利100 mg·kg^-1·d^-1）,持续干预21 d。对照组及肺纤维化模型组小鼠均于造模完成后第21天处死,肺纤维化+Ac-SDKP治疗组小鼠于干预21 d后处死,取肺组织观察其病理学变化;按试剂盒说明测定羟脯氨酸含量测定;TUNEL法测定肺泡上皮细胞凋亡率;Western-blot、免疫组化法检测GRP78、CHOP蛋白及mRNA的表达水平。体外实验：培养A549细胞,经TGF-β干预24 h后收集细胞,RT-PCR检测GRP78、CHOP mRNA的表达水平。正态分布计量资料多组间比较采用方差分析,两两比较采用SNK-q检验;非正态分布计量资料多组间比较采用kruskal-WallisH检验。 结果（1）一般观察：对照组小鼠双肺表面及切面光滑,未见结节形成;肺纤维化模型组肺组织表面及切面可见散在小结节;肺纤维化+Ac-SDKP治疗组肺组织表面也可见小结节,但较肺纤维化模型组稀少。（2）HE及Masson染色：肺纤维化模型组出现明显的纤维化改变,肺纤维化+Ac-SDKP治疗组肺纤维化程度有所减轻。（3）羟脯氨酸含量：3组间羟脯氨酸含量差异有统计学意义（H=20.490,P<0.01）,其中肺纤维化模型组、肺纤维化+Ac-SDKP治疗组明显高于对照组（q=0.517、0.167,P<0.05）,肺纤维化+Ac-SDKP治疗组明显低于肺纤维化模型组（q=0.351,P<0.05）。（4）肺泡上皮细胞凋亡指数：3组间差异有统计学意义（F=57.720,P<0.01）,其中肺纤维化模型组、肺纤维化+Ac-SDKP组明显高于对照组（q=8.471、3.639,均P<0.01）,肺纤维化+Ac-SDKP组明显低于肺纤维化模型组（q=4.832,P<0.01）。（5）CHOP、GRP78蛋白水平表达：肺纤维化模型组、肺纤维化+Ac-SDKP治疗组较对照组明显下降（q=22.630、8.921,138.812、41.233;P<0.01）,肺纤维化+Ac-SDKP治疗组较肺纤维化组明显升高（q=13.711、97.583,P<0.01）。（6）GRP78、CHOP mRNA表达量：TGF-β干预组较对照组明显升高（q=8.791、7.782,P<0.05）;TGF-β+Ac-SDKP干预组较单纯Ac-SDKP干预组明显升高（q=4.399、5.561,P<0.05)。 结论Ac-SDKP可能通过抑制内质网应激减缓肺泡上皮细胞凋亡,从而发挥其抗肺间质纤维化的作用。     

Bcl-2抑制剂S1通过内质网途径诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的机制

目的探讨Bcl-2抑制剂S1诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的机制。方法实验分为对照组、S1低剂量组(S1 2.5μmol/L)、S1中剂量组(S1 5μmol/L)和S1高剂量组(S1 10μmol/L),MTT检测细胞存活率、流式细胞术检测细胞凋亡率、Western印迹检测内质网应激凋亡相关蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,S1可以明显降低B16细胞存活率,差异有统计学意义(P﹤0.05);给予S1后B16细胞凋亡率明显上升,同时Western印迹结果显示,内质网应激相关蛋白GRP78以及内质网应激-凋亡相关蛋白CHOP表达水平明显上升,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论小分子化合物S1可以通过内质网凋亡信号通路引起B16细胞发生凋亡。     

内质网应激介导β细胞生存/死亡的研究进展

内质网应激（ERS）是细胞应激的重要组成部分,表现为内质网腔内错误折叠和未折叠蛋白聚集以及细胞内Ca^2＋平衡紊乱,与应激细胞的适应、损伤或凋亡直接相关。ERS诱发的主要信号通路有未折叠蛋白反应（UPR）、固醇调节级联反应以及凋亡信号通路。β细胞具有高度发达的内质网,对ERS极具易感性。β细胞可通过上述信号通路维持内质网稳态以求得细胞生存,但过长、过强的ERS可激活特有的凋亡通路导致β细胞的死亡。     

脂联素通过减轻内质网应激介导的凋亡抑制心肌细胞钙化

目的通过培养SD大鼠乳鼠心室肌细胞并建立细胞钙化模型,观察脂联素对心肌细胞钙化的影响及其机制。方法采用Ⅱ型胶原酶消化法原代培养SD大鼠乳鼠心室肌细胞,α肌动蛋白免疫荧光法进行鉴定。选用培养72 h的单层心肌细胞,实验分为3组:对照组、钙化组、脂联素+钙化组。β-甘油磷酸钠和丙酮酸钠联合诱导制备心肌细胞钙化模型,茜素红和Von Kossa染色法对钙化心肌细胞进行鉴定,通过细胞钙含量、碱性磷酸酶活性和骨钙素的测定判断钙化程度。通过乳酸脱氢酶活性测定和流式细胞术检测心肌细胞凋亡。用定量实时聚合酶链反应测定骨保护素及内质网应激指标葡萄糖调节蛋白78、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12的表达。结果与对照组相比,单纯心肌细胞钙化后,钙含量、碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌量显著增加(P<0.01),骨保护素及内质网应激指标葡萄糖调节蛋白78和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12在mRNA水平表达明显增高,乳酸脱氢酶活性和细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。用脂联素进行干预后,可较大程度地逆转上述指标变化,与心肌细胞钙化组相比均具有显著差异(P<0.05),并且呈现一定的浓度依赖性。结论钙化心肌细胞可以诱导心肌细胞内质网应激介导的凋亡;脂联素可促进血管保护因子骨保护素的表达,并通过减轻内质网应激来减轻心肌细胞钙化及凋亡,对心肌细胞有保护作用。     

β1-受体自身抗体与慢性心力衰竭

近年研究表明慢性心力衰竭与自身免疫显著相关,与β1-受体自身抗体的关系尤其受到关注。β1-受体自身抗体可以发挥部分肾上腺素能受体激动剂样作用,可能与心力衰竭患者易发心律失常有关,可以导致心肌β1-受体密度下调,促进心肌细胞凋亡,导致心力衰竭恶化。但β1-受体自身抗体与慢性心力衰竭的因果关系尚无定论,对于β1-受体自身抗体阳性的心力衰竭患者的治疗与阴性患者有无区别尚待研究。     

环孢菌素A抑制内质网应激减轻β淀粉样蛋白_(25-35)对PC12细胞凋亡的研究

目的探讨环孢菌素A对β淀粉样蛋白_(25-35)(Aβ_(25-35))诱导PC12细胞凋亡的保护机制。方法 PC12细胞传代培养,分为对照组、Aβ_(25-35)组、Aβ_(25-35)+环孢菌素A组(环孢菌素A组)。Aβ_(25-35) 10μmol/L,环孢菌素A 20 -μmol/L。药物作用24 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测内质网应激蛋白钙网蛋白、半胱天冬氨酸酶12(caspase 12)活化片断的蛋白表达。结果与对照组细胞凋亡率(2.0±0.2)%比较,Aβ_(25-35)组细胞凋亡率(45.0±3.7)%明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);而环孢菌素A组细胞凋亡率为(27.0±2.4)%,较Aβ_(25-35)组明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot显示,与对照组比较,Aβ25 35组钙网蛋白、caspase-12活化片断表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与Aβ_(25-35)组比较,环孢菌素A组钙网蛋白、caspase 12活化片断表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论环孢菌素A可通过抑制内质网应激相关蛋白表达,来减轻Aβ_(25-35)对PC12细胞的凋亡作用。     

不同G蛋白耦联受体激酶对β-肾上腺素受体诱导心肌钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活化的影响

目的探讨不同G蛋白耦联受体激酶(GRK)对β-肾上腺素受体(β-AR)诱导的心肌钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活化的影响。方法雄性小鼠(体质量20²8 g)分为野生对照组(WT:SPF级C57BL/6小鼠,作为阳性对照)、GRK2,3,5,6基因敲除组(GRK2KO、GRK3KO、GRK5KO、GRK6KO)和β1、2-AR突变组[GRK(-):β-AR缺乏GRK磷酸化位点,作为阴性对照]。各组小鼠分别给予异丙基肾上腺素(ISO)刺激或等量生理盐水2周,断颈处死动物,切取左心室并剥离粘连组织,经液态氮处理后贮存于-80℃。Western blot用于检测有活性的CaMKⅡ(p-CaMKⅡThr286/T-CaMKⅡ)的表达变化;采用ELISA方法检测心肌匀浆CaMKⅡ活性;HE染色检测心肌细胞组织学变化。结果给予ISO刺激后,与阳性对照WT小鼠变化相同,GRK2KO,GRK3KO和GRK6KO小鼠心肌组织中p-CaMKⅡ表达水平明显增加(ISO刺激与非刺激小鼠比较,均为P<0.05),而GRK5KO与阴性对照GRK(-)小鼠变化相同,ISO刺激组与非刺激组相比心肌组织中p-CaMKⅡ表达无明显增加;ELISA检测也发现,ISO刺激后WT及GRK2KO,GRK3KO,GRK6KO小鼠心肌组织匀浆的CaMKⅡ活性显著增加(ISO刺激与非刺激小鼠比较,均为P<0.05),而GRK5KO及GRK(-)小鼠ISO的CaMKⅡ活性无明显增加。HE染色发现,WT小鼠ISO刺激与非刺激组相比心肌横截面积明显增大[(1388.2±270.3)μm2比(825.5±414.9)μm2,P<0.05],GRK5KO小鼠ISO刺激组与非刺激组比较,心肌横截面积无明显差异[(837.1±112.8)μm2比(883.5±235.9)μm2,P>0.05]。结论 GRK5对β-AR诱导的CaMKⅡ激活是必要的;GRK5基因敲除可能通过引起CaMKⅡ表达改变而改善β-AR持久兴奋诱导的心肌肥厚。     

心力衰竭患者外周血淋巴细胞β1-受体基因变化的意义

目的：研究心力衰竭（简称心衰）患者外周血淋巴细胞β１ 受体基因变化的意义。方法：采用逆转录多聚酶链反应（ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ）方法测定６０例心脏病患者及２０例健康人的外周血淋巴细胞 β１ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平。结果：①外周血淋巴细胞β１受体ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平随心功能分级增高而下降;②这种变化出现较早,心功能Ⅱ级时已很明显,心功能Ⅳ级时可下降５０以上;③β１ 受体 ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平随患者年龄增加、病程延长、左室质量增加、左室舒张功能减退而下降,与体重指数、血压、血脂、血糖等关系不明显。结论：用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 技术检测外周血淋巴细胞 β１受体对评价心衰患者的病情有一定参考价值。     

消癌解毒方通过内质网应激诱导肝癌HepG2细胞凋亡的研究

[目的]探讨内质网应激在消癌解毒方在人肝癌HepG2细胞凋亡中的作用。[方法]CCK-8法检测不同浓度的消癌解毒方处理HepG2细胞12、24、48 h后细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测细胞消癌解毒方处理HepG2细胞24 h凋亡情况;应用qRT-PCR检测内质网应激上游分子标记GRP78、PERK、ATF-6、IRE-1的mRNA水平;采用Western blot方法分析消癌解毒方对PERK、ATF4、CHOP和TRB3蛋白的表达情况;并用CCK-8法检测内质网抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)对HepG2细胞凋亡率的影响。[结果]消癌解毒方抑制HepG2细胞的增殖,并且这种效应呈现时间和浓度依赖;ATF-6和IRE-1 mRNA水平无明显变化,GRP78和PERK mRNA水平较阴性对照组均显著增加;消癌解毒方可上调内质网应激通路的标志蛋白质PERK、ATF4、CHOP水平,增加下游TRB3蛋白的表达。4-PBA与消癌解毒方联合作用组的细胞凋亡率显著减少。[结论]消癌解毒方通过内质网应激诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡,其可能是通过PERK通路上调内质网应激相关凋亡蛋白CHOP的表达。     

7-酮基胆固醇通过激活内质网应激通路诱导胰岛β细胞凋亡的研究

目的探讨7-酮基胆固醇(7-KC)对胰岛β细胞凋亡的影响及其可能分子机制。方法用0、0.25、2.5和25 μmol/L浓度的7-KC孵育INS-1细胞24 h, 应用Western blotting法筛选出引起INS-1细胞凋亡的浓度。再将INS-1细胞分为对照组、25 μmol/L 7-KC组、25 μmol/L 7-KC+1 mmol/L 4-苯基丁酸(4-PBA)组以及1 mmol/L 4-PBA组。应用Western blotting、流式细胞仪、免疫荧光、电镜和免疫共沉淀技术, 检测细胞内质网应激标志蛋白[肌醇需求酶1α(IRE-1α)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、转录激活因子4(ATF4)、磷酸化α亚基的真核起始因子2(p-eIF-2α)、α亚基的真核起始因子2(eIF-2α)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)、磷酸化IRE-1α(p-IRE-1α)、磷酸化PERK(p-PERK)和转录激活因子6(ATF6)]、凋亡蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase 3)]、内...     

褪黑素通过减轻内质网应激抗心肌缺血/再灌注损伤的作用及机制

目的 研究褪黑素（melatonin,Mel）对大鼠心肌缺血/再灌注（MI/R）损伤的预防作用与心肌内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ER stress）水平变化情况。方法 90只体质量180~220 g雄性SD大鼠,随机分为3个组:假手术（Sham）组、溶剂对照（MI/R+V）组、Mel预防（MI/R+Mel）组。结扎大鼠左冠状动脉前降支30min后松开结扎线恢复血流灌注,建立MI/R损伤模型,再灌注4 h后Western blot法检测ER stress水平标志分子葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein78,GRP78）及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP）和凋亡相关蛋白表达情况;再灌6 h后ELISA法检测血清酶学指标,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,Evans blue-TTC双染法测定梗死面积;再灌注24 h后检测各大鼠超声心动图。结果 Mel预防性治疗4周可提高左室射血分数（LVEF）及左室短轴缩短率（LVFS）,降低血清乳酸脱氢酶（LDH）及血清肌酸激酶（CK）水平,下调心肌细胞凋亡率及梗死面积,降低ER stress标志蛋白GGRP78及CHOP,降低凋亡通路蛋白（均P<0.01）。结论 Mel预防性治疗显著减轻心肌缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制ER stress相关。     

胰高血糖素样肽-1受体激动剂对秋田小鼠内质网应激介导的胰岛β细胞损伤的影响

2型糖尿病的主要特征是胰岛β细胞功能和总量丧失，近来提出的内质网应激可能是其中的一个重要原因。本实验旨在研究胰高血糖素样肽-1受体激动剂对内质网应激介导的β细胞凋亡的保护作用。     

葡多酚通过缓解内质网应激改善胰岛β细胞功能的机制

目的探讨葡多酚对胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能的影响及机制。方法从克伦生葡萄提取葡多酚后干预高脂(HDF)喂养小鼠和胰岛β细胞株Min-6,检测内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白(GRP)-78、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、长链非编码RNA(lncRNA)GAS5及microRNA(miR)-346表达。通过小分子RNA干扰(siRNA)下调lncRNA GAS5后验证lncRNA GAS5在葡多酚调节内质网应激和miR-346表达水平中的作用。结果葡多酚可降低HDF动物血糖并改善胰岛素抵抗;同时抑制HDF导致小鼠胰腺内质网标志物GRP-78及CHOP升高。葡多酚还上调lncRNA GAS5和下调miR-346。siRNA-lncRNA GAS5可抑制葡多酚介导的GRP-78和miR-346下调。结论葡萄酚通过抑制内质网应激改善胰岛素抵抗和胰岛β细胞,其抑制内质网应激是通过上调lncRNA GAS5继而下调miR-346实现的。     

TXNIP过表达对INS-1细胞凋亡通路的影响

摘要：目的：本文使用腺病毒转染技术,观察在正常糖脂浓度下培养的INS-1细胞过表达TXNIP是否引起细胞凋亡,并对TXNIP介导细胞凋亡的通路进行了初步分析。方法：将处于对数生长期在正常糖脂浓度下培养的INS-1细胞分为三组,即正常培养组,空病毒（Ad-eGFP）组,TXNIP过表达（Ad-TXNIP-eGFP）组,均于转染48h后收集细胞进行指标测定。结果：转染细胞48h时病毒转染率达到高峰,并且荧光蛋白表达量基本一致。同Ad-eGFP组相比,Ad-TXNIP-eGFP组TXNIP mRNA（38.68±7.35 vs 0.73±0.39,P ＜0.01）和蛋白表达量（1.28±0.25 vs 0.62±0.16,P ＜0.01）均明显增高,说明转染及TXNIP过表达成功;与Ad-eGFP组相比,Ad-TXNIP-eGFP组Caspase-3相对活性明显增高（3.823±0.238 vs 0.956±0.107,单位nmol?h-1?mg-1 pro, P＜0.01）;反映下游不同通路的Caspase-8（132.10±27.33 vs 81.01±15.34,单位pg?ml-1 ,P＜0.01）和Caspase-9（290.76±43.15 vs 88.94±14.68,单位pg?ml-1 ,P＜0.01）和Caspase-12活性均明显增高（266.96±18.50 vs 52.05±6.13,单位pg?ml-1 ,P＜0.01）;。结论：单纯过表达TXNIP可以引起正常糖脂浓度培养下INS-1细胞凋亡,线粒体凋亡途径、死亡受体活化途径和内质网应激介导途径均参与了TXNIP引的起INS-1细胞凋亡的发生。     

上调糖皮质诱导型蛋白激酶-1能够保护Aβ1～42诱导的细胞凋亡

目的探讨上调糖皮质诱导型蛋白激酶(SGK-1)能否保护Aβ1～42诱导的细胞毒性及其保护机制。方法在HEK293细胞中给予不同浓度Aβ1～42聚集体处理,摸索合适的诱导细胞毒性的浓度。HEK293细胞转染SGK-1质粒24 h后再给予Aβ1～42处理24 h,通过细胞活性分析以及Western印迹实验检测凋亡相关通路变化。结果过表达SGK-1能够明显改善HEK293细胞由Aβ1～42诱导的细胞毒性(P<0.05),SGK-1的上调伴随着JNK-1(P<0.01)和Caspase-3的抑制(P<0.05)。结论上调SGK-1可能通过抑制JNK-1的激活从而抑制Caspase-3的活化来保护细胞,上调SGK-1可以作为治疗阿尔茨海默病(AD)患者Aβ细胞毒性的保护靶点。