大鼠关节组织硝酸、EDTA脱钙对石蜡制片的影响及比较

骨组织脱钙技术是病理实验室常用技术之一.它的应用,使难以切片或不能完整制片的骨或软骨组织达到完整制片的目的.适用组织化学、免疫组化等技术的染色.大鼠关节组织制片的关键步骤是脱钙,其直接影响到制片的成败.现在大鼠关节组织石蜡制片实验中,分别用10%硝酸和乙二胺四乙酸二钠(EDTA)复合液进行脱钙处理后,石蜡包埋、制片、染色.对用两种方法脱钙处理的大鼠关节组织石蜡制片后染色,镜下观察形态及着色效果.     

硝酸液对骨组织脱钙后方法的改良

常规骨及钙化组织石蜡切片其脱钙过程往往需要酸处理 ,酸必然在脱钙的同时对骨的有机物质引起一定的损害。在制作前一般先经无机酸稀溶液浸渍脱钙再用流水洗涤 2 4小时 ,除去组织内原性酸性物质 ,然后才能按常规制片染色。此种方法脱钙时间长、速度慢 ,在客观上延长了病理诊断和临床治疗 ,而且染色效果并不太理想。我们经过反复实践 ,探索出一种有效的快速脱钙方法。1　材料和方法骨及钙化组织 ,锯成 1.2 cm× 1.0 cm× 0 .3cm薄片 ;10 %～15 %中性福尔吗林固定 ,8%硝酸脱钙 ,水洗 1分钟 ,置入 3%氢氧化钠液浸渍 5分钟 ,经 A- F液、95 %乙…     

内耳组织石蜡制片技术的改进与应用

豚鼠内耳耳蜗石蜡制片技术是耳科组织形态学实验研究中最常用的技术之一，它具有方便、快捷的特点，适用于组织化学、免疫组化等新技术。耳蜗制片的关键步骤是脱钙，其直接影响到制片的成败。我们在豚鼠耳蜗毒性损伤的实验研究中，用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)作为脱钙液，在微波辐射下进行脱钙，缩短了脱钙时间，做出了高质量的耳蜗组织切片。     

RapidCal．Immuno脱钙剂在石蜡组织制片中的应用

我们在日常石蜡组织切片时经常会遇到一些诸如子宫肌瘤、角化严重的皮肤纤维瘤等硬韧组织或脱钙不佳的骨组织石蜡标本.对此类组织往住不易获得较好的石蜡组织切片.我们在工作中试用了RapidCal.Immuno脱钙剂,可以迅速和方便地软化此类硬韧的石蜡组织块,也可以对脱钙不佳的骨组织石蜡标本直接重复脱钙,易于切取较好的组织切片,从而提高HE染色质量.     

生物硬组织透射电镜样品EDTA脱钙制样法

生物硬组织透射电镜样品ＥＤＴＡ脱钙制样法朱世柱，张友云，陈锡昌，皮昕，杜昌连，李春芳，孟杨，王纪透射电镜是形态学研究的主要方法之一，它在生物软组织的研究中得到了广泛应用。而生物硬组织因硬度大，很难超薄切片，防碍了对它的观察，因此人们一直在探索其脱钙制...     

不同脱钙液对牙齿牙周联合石蜡切片HE染色的影响

目的探讨不同脱钙液对牙齿牙周联合切片HE染色质量的影响。方法选用10%乙二胺四乙酸钠（EDTA）、复合酸（Plank-Rychlo脱钙液）和5%硝酸3种不同的脱钙液,分成A、B、C3组用于犬和大鼠牙齿牙周组织联合石蜡切片脱钙,通过记录脱钙时间,观察HE染色效果,评价室温下（20℃～28℃）不同脱钙液对切片制作的影响。结果A组脱钙液所制切片染色效果良好,但脱钙速度缓慢,所需时间较长;B组脱钙液脱钙速度快,所制切片染色好;C组脱钙液所制切片的染色强度和对比度均不如前两种脱钙液。结论在制作牙齿牙周联合切片时,EDTA脱钙液和Plank-Rychlo脱钙液所制切片均能取得良好的染色效果,但EDTA脱钙液脱钙周期过长;Plank-Rychlo脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合于临床速检工作;硝酸脱钙液组染色效果较差。     

改良脱钙液制作脱钙骨石蜡切片与传统方法的比较

目的:常规的脱钙骨切片制作方法在脱钙、组织结构完整性等方面存在一定的缺陷.比较用改良后方法制作的脱钙骨组织切片与常规制作的脱钙骨组织切片质量的差异.方法:①实验材料:实验于2004-12/2007-12在广东医学院组织和胚胎学教研室及药理教研室完成.SPF级雌性SD大鼠10只,鼠龄6个月.②实验方法:取大鼠左右股骨和胫骨标本各20个,分为两组,左股骨和右胫骨为实验组,右股骨和左胫骨为对照组.实验组经过常规同定,而后应用改良脱钙液(甲酸10 mL、浓盐酸(相对密度1.19)8 mL、氯化铝3 g、体积分数为0.4的甲醛20mL、冰乙酸3mL,加生理盐水至总体积200mL)脱钙、脱水、氯仿透明、包埋时间延长、染色、封固和切片;对照组进行常规固定、脱钙、脱水、透明、包埋、染色、封固和切片.③实验评估:比较两组切片的质量和效果.结果:①实验组大鼠的脱钙骨切片与对照组比较,标本脱钙时间缩短,脱水时间变化不大,而透明效果明显改善.②与对照组比较,实验组骨组织切片标本薄均匀、平坦完整,脱蜡完整均匀.染色成功的切片,骨与骨周围的组织形态保持完整.结论:改良的脱钙大鼠股骨和胫骨石蜡切片制作方法能使标本脱钙更彻底、结构更清晰、组织完整性更好.     

环保醇性组织固定液和硬脂酸石蜡混合液制片的探讨

为进一步提高病理切片质量,保护医院工作环境,我科近4年来一直采用环保醇性组织固定液替代甲醛,用硬脂酸石蜡混合液替代二甲苯透明剂透明,经反复摸索和实践已取得较满意的制片效果,现介绍如下。     

两种组织处理模式在消化道黏膜小标本石蜡制片中的比较

<正>为有效缩短病理报告周期,笔者使用超声波模式处理组织,并与常规模式各环节进行对比。结果表明：超声波模式可有效缩短组织处理时间,制片效果与传统常规制片无差异,可满足病理科诊断需求,现介绍如下。1 材料与方法1.1 材料选用未经固定的消化系统切除标本：食管1例、胃9例、肠21例,共计31例。1.2 方法1.2.1 试剂4%中性缓冲甲醛液固定;组织前处理试剂(500 ml, 山东骏腾医疗科技有限公司);95%乙醇、     

脱钙骨关节诱导关节软骨再生的蛋白质组学初步研究

目的:通过分析在脱钙骨关节及软骨诱导关节软骨再生的过程中宿主所产生的特异性蛋白,探讨关节软骨再生的机制.方法:将24只新西兰大白兔分为3组,Ⅰ、Ⅱ组为实验组,分别对其关节软骨面进行破坏,并在关节腔内植入脱钙骨关节或软骨,Ⅲ组为空白对照组,分别于第8、第12、第16周抽取各组关节液,进行双向电泳及质谱分析.结果:与空白对照组相比,两个实验组中分别出现了分子量为15313.8与11 337.7的两种未命名的差异蛋白.结论:在植入脱钙骨关节以及软骨的宿主关节滑液中产生了与关节软骨再生可能密切相关的差异蛋白,为进一步研究奠定了基础.     

EDTA脱钙液在原位杂交中的应用

脱钙是含钙组织进行常规病理染色、免疫组化染色及原位杂交染色过程中必不可少的重要环节。由于脱钙液的种类很多，本研究发现，10％的EDTA脱钙液（内含1‰的DEPC水）能有效的保护组织内的核酸不受破坏，报告如下。     

骨及钙化组织脱钙过度后的补救

骨及钙化组织的石蜡切片,组织在充分固定后,应进行脱钙处理,一般先经有机酸或无机酸稀溶液浸渍脱钙,再用流水冲洗24h,除去组织内的酸,然后才能按常规脱水、浸蜡、切片、HE染色。但脱钙是否完全不好掌握,如果脱钙过度会对组织和抗原造成破坏,影响染色,造成病理诊断困难,至今尚未见解决办法的报道。我们应用酸碱中和的原理对脱钙过度的组织进行处理,染色效果得到很大改善,现将此法介绍如下。1材料和方法活检骨及钙化组织,锯成1.2cm×1.2cm×0.3cm薄片;10%中性福尔马林固定;10%硝酸脱钙过度,然后水洗流水冲洗30min;梯度乙醇脱水、浸蜡、包埋、…     

骨髓活检组织前脱钙法与后脱钙法的体会

鉴于骨髓组织含有大量的钙盐而非常坚硬致密,不能直接进行石蜡制片.需经过脱钙处理后,才能进行切片、HE染色、特殊染色和免疫组化染色[1].一种好的脱钙方法能够提高骨髓活检组织的制片质量,提高HE染色和免疫组化染色的效果,更好地满足临床病理的精准诊断.目前常用的方法是前脱钙法即传统脱钙法:在脱水前采用4％盐酸甲醛溶液先行脱...     

人脱钙骨基质粉诱导大鼠异位骨髓形成的初步研究

目的 :建立诱导性骨髓形成的模型 ,探讨骨髓形成及调控机理。方法 :将异种 (人 )脱钙骨基质粉植入Spraque -Dawley大鼠腹壁皮下。结果 :在诱导 3～ 10d ,可见间充质细胞增殖 ,分化成幼稚软骨细胞并形成软骨组织。诱导11～ 2 1d即见到初级骨髓组织形成。诱导 2 2～ 3 4d出现典型骨髓组织 ,大量造血细胞产生。诱导 40～ 60d生成的造血组织未见明显萎缩。结论 :人鼠骨诱导活性因子具有同源性 ,无种的特异性 ,该模型建立可为临床血液学基础研究骨髓构形的发生学及其调控机理提供一个新的研究方向     

骨髓活检标本脱钙及除酸方法的改良

许多单位都采用石蜡切片技术制作骨髓活检组织切片,因骨髓组织富含钙盐,所以制片前一定要先脱钙。过去我们一直用14%硝酸脱钙液脱钙,脱钙后流水冲洗,但此法制作组织切片时常出现组织切片破碎、组织形态和细胞结构严重     

介绍一种改良的Neutral EDTA脱钙液

脱钙是制作骨组织切片的重要环节,尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织,如何达到骨组织既充分脱钙,又保护骨组织的抗原不受破坏的目的,我们参考有关文献[1,2],配制了一种改良的Neutral脱钙液,用于骨组织脱钙,并进行相应的免疫组化染色。该方法既不损害组织结构也不影响染色效果,简化了步骤,保证了质量。1材料与方法1·1材料24例来自大段同种异体骨愈合实验研究之兔骨。改良的Neutral脱钙液配制方法:将乙烯二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)250 g,溶于1 750 ml蒸溜水中,此时溶液呈灰白色浑浊状,不停摇晃使溶液彻底溶解。加入氢氧化钠25 g,继续摇…     

骨肿瘤组织在冷冻切片制片技术中的应用

<正>在日常病理技术工作中,技术员经常遇到骨肿瘤组织的制片。如果带有骨组织的话,因其含大量钙盐,硬度高,直接切片难度较大,致使无法连续切出完整组织,严重影响判断。而冷冻切片则是借助低温环境在短时间内使组织快速冷却,达到一定固定硬度连续切片的方法。该过程操作快,时间短,染色简便,很好的保存了组织内可溶性物质的完整性,尽可能减少了组织内部成分不丢失,具有保护组织内蛋白质以及酶的活性。在实践中,本科室运用超声波快速组织处理仪,     

人脱钙骨基质粉诱导大鼠异位骨髓形成的初步研究

目的：建立诱导性骨髓形成的模型,探讨骨髓形成及调控机理。方法：将异种（人）脱钙骨基质粉植入Ｓｐｒａｑｕｅ－Ｄａｗｌｉｙ大鼠腹壁皮下。结果：在诱导３～１０ｄ,可见间充质细胞增殖,分化成幼稚软骨细胞并形成软骨组织。诱导１１～２１ｄ即见到初级骨髓组织形成,诱导２２～３４ｄ出现典型骨髓组织大量造血细胞产生,诱导４０～６０ｄ生成的造血组织未生学及其调控机理提供一个新的研究方向。     

多元羧酸和磷酸对牙本质脱钙作用的比较

目的：酸性较弱的多元羧酸对牙体硬组织具有化学吸附作用，故部分牙体黏接材料采用多元羧酸及其衍生物作为预处理剂。比较苹果酸、酒石酸、柠檬酸和传统酸蚀剂磷酸对牙本质的脱钙作用，分析多元羧酸的酸蚀能力。方法：实验于2006-10／2007-04在上海交通大学医学院附属第九人民医院和浙江大学医学院附属第一医院口腔科完成。采用150g／L苹果酸、150g／L酒石酸、150g／L柠檬酸溶液分别酸蚀牙本质60s，360g／L磷酸酸蚀牙本质15s，扫描电镜下观察牙本质处理前后表面形貌及牙本质小管直径，方差分析比较不同酸处理对牙本质小管直径大小的影响差异。结果：①扫描电镜下见未酸蚀样本的牙本质小管开口狭小。酸蚀处理后牙本质表面平坦、清晰，覆盖的玷污层基本去除，管周牙本质脱矿明显，牙质小管开口扩大、敞开。②不同种类酸溶液处理后牙本质脱矿，牙本质小管直径明显增大（P〈0．01）。磷酸酸蚀15s、柠檬酸、酒石酸酸蚀60s的牙本质小管直径大小无差异（P〉0．05），明显大于苹果酸酸蚀60s的小管直径（P〈0．01）。结论：苹果酸的脱矿作用较弱，适当延长酒石酸、柠檬酸的处理时间可获得与磷酸酸蚀相当的牙本质脱矿效果。