空肠弯曲菌多重聚合酶链反应基因鉴定及其毒力相关基因分析

目的建立空肠弯曲菌、结肠弯曲菌多重聚合酶链反应（m-PCR）鉴定方法,并对菌株毒力相关基因cadF、virB11、flaA、cdtA、cdtB、cdtC的分布进行初步分析。方法利用m-PCR的方法对经过传统生物化学方法鉴定的65株弯曲菌进行鉴定,并通过空肠弯曲菌特异基因hipO、结肠弯曲菌glyA基因特异片段的PCR扩增对鉴定的结果进一步验证;利用特异引物PCR方法初步分析其毒力、毒素相关基因cadF、virB11、flaA、cdtA、cdtB和cdtC的分布。结果m-PCR扩增结果发现65株不同来源的弯曲菌,42株为空肠弯曲菌,23株为结肠弯曲菌。hipO、glyA基因PCR扩增结果与m-PCR扩增结果一致。16．9%菌株PCR鉴定结果与传统的生物化学鉴定结果不一致。100%（65/ 65）菌株cadF、flaA基因阳性,并且PCR扩增片段大小一致。virB的阳性率为10．8%（7/65）,其中空肠弯曲菌阳性率11．9%（5/42）,结肠弯曲菌阳性率为8．7%（2/23）。空肠弯曲菌、结肠弯曲菌cdtA的阳性率分别为100%（42/42）和78%（18/23）;空肠弯曲菌cdtB扩增的的阳性率为97．6%（41/42）。而23株结肠弯曲菌扩增结果均为阴性;空肠弯曲菌、结肠弯曲菌cdtC的阳性率皆为100%,但PCR扩增产物大小不一致,空肠弯曲菌为555 bp,结肠弯曲菌约为465 bp。结论m-PCR的方法可以有效的对空肠弯曲菌和结肠弯曲菌进行属内分型。中国菌株细胞溶涨毒素基因簇cdt基因的特征与文献报道国外菌株存在差异。     

空肠弯曲菌、结肠弯曲菌检验方法团体标准解读

空肠弯曲菌和结肠弯曲菌是重要的食源性病原菌，是导致人类弯曲菌病的重要菌种。病原菌的培养、鉴定是食品污染以及人和动物感染诊断的“金标准”。中国CDC传染病预防控制所和国家食品安全风险评估中心等单位撰写了《空肠弯曲菌、结肠弯曲菌检验方法（T/CPMA 006－2019）》团体标准。标准以“科学性、规范性、适用性和可行性”为基本原则，提出从不同种类的标本、样品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的分离培养以及鉴定的方法，用于指导和规范我国不同种类的标本以及样本中两种弯曲菌的检测过程、检测步骤和鉴定方法，提高空肠弯曲菌、结肠弯曲菌的检测水平。     

应用多重PCR快速检测空肠弯曲菌

目的:建立能快速、特异检测空肠弯曲菌的多重PCR技术。方法:选用针对空肠弯曲菌外膜蛋白A(mapA)基因和马尿酸酶(hipO)基因的2对引物,在同一扩增体系中进行PCR,优化反应体系,测定特异性和灵敏度,并进行了鸡肉模拟样品检测。结果:该方法扩增目的基因片段分别为589 bp和323 bp,特异性和灵敏度均高。细菌纯培养物的检测灵敏度为105 cfu/ml,鸡肉模拟样品42℃预增菌36 h后检测灵敏度能达到101 cfu/ml。结论:初步建立能快速、灵敏、特异地测定空肠弯曲菌的多重PCR检测技术。     

空肠弯曲菌多重PCR快速检测方法建立的研究

[目的]建立一种能够快速检测鉴别样品中的空肠弯曲菌的多重PCR方法。[方法]根据空肠弯曲菌hipO、mapA、23S等基因序列,利用Primer Premier 5.0和Oligo 6软件设计了多对特异性引物,经过优化筛选出最佳引物组合,再对引物的浓度、Mg2 浓度、退火温度等条件进行优化后,建立了从样品中快速检测鉴别空肠弯曲菌的多重PCR方法。[结果]实验结果显示本方法的特异性较强,灵敏度高,达到15 cfu/ml。[结论]多重PCR方法对于样品中空肠弯曲菌的检测实验周期短,灵敏度高,操作简便,适宜推广应用于各卫生单位日常对样品中空肠弯曲菌污染的快速检测。     

滤膜驱动分离培养法在一起空肠弯曲菌腹泻疫情中的应用

目的应用滤膜驱动分离培养法对一起腹泻疫情的系列样本进行空肠弯曲菌的检测和培养,并对该方法及其增菌效果进行评价。方法收集一起腹泻疫情的18份粪便标本,采用实时荧光PCR方法为疫情定性为空肠弯曲菌感染,应用滤膜驱动分离培养法对粪便标本进行空肠弯曲菌增菌和分离培养,并对增菌效果进行比较分析。结果采用荧光PCR方法检测到18份标本中有11份空肠弯曲菌核酸阳性,阳性率为61.11%(11/18);应用滤膜驱动分离培养法,对18份标本进行空肠弯曲菌的分离和鉴定,共分到8株菌,分离率为44.44%(8/18);其中3份核酸阳性标本,由于菌液含量低,无法用培养方法检出。11份核酸阳性粪便标本经增菌培养后,Ct平均值由原来的27.44变为23.50,增菌效果显著(P0.05)。结论采用滤膜驱动分离培养法对粪便标本尤其是冻融粪便进行空肠弯曲菌的增菌和分离培养,能有效提高菌株的分离率,避免资源浪费,可做为常规监测或大规模样本筛检的可行性检测方法。     

PCR技术在流脑监测中的应用研究

目的建立脑膜炎奈瑟菌种属及群的快速检出方法。方法应用PCR法扩增标准菌株及标本中脑膜炎奈瑟菌种属及各群的特异性DNA片段，通过电泳后对产物进行分析。结果11份标本中检出4份脑膜炎奈瑟菌CrgA基因片段，其中扩增出2份含有NmA群Off-2基因片段，2份含有NmC群siaD（C）片段。结论PCR技术可用于临床标本中脑膜炎奈瑟菌种属及各群的特异性检测。     

广西南宁市腹泻人群空肠弯曲菌流行状况调查

目的了解南宁市腹泻人群中空肠弯曲菌的感染流行状况。方法在南宁市对腹泻病例进行流行病学调查并采集粪便标本,进行实验室空弯菌的分离培养、PCR鉴定以及脉冲场凝胶电泳分型（PFGE）分析。结果在775份粪便样品中,3份空肠弯曲菌阳性,平均阳性率0.39%。所有生化结果阳性的菌株其PCR复核鉴定结果均为阳性。3株空肠弯曲菌经Cluster分析后得到3个PFGE带型。结论南宁市存在空肠弯曲菌感染病例,本研究结果为正确评价南宁市腹泻人群弯曲菌的流行状况和制定防控措施提供了科学依据。     

环介导等温扩增法检测空肠弯曲菌

目的 空肠弯曲菌是重要的食源性疾病病例标本的病原菌检测项目,用环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的方法,对食源性致病菌空肠弯曲菌进行快速检测。方法 以空肠弯曲菌 mapA 基因序列为检测靶基因,建立了空肠弯曲菌的LAMP 快速检测方法。空肠弯曲菌的LAMP反应由DNA扩增试剂盒提供的反应体系加入引物和模板进行。做了空肠弯曲菌DNA模板灵敏度的检测、菌液灵敏度的检测和特异性检测。结果 我们方法对空肠弯曲菌DNA 的检测灵敏度为84.5fg/反应管;对空肠弯曲菌菌液检测灵敏度为0.8 CFU/反应管;特异性100%。结论 对食源性疾病腹泻样本的空肠弯曲菌检测项目,可以采用mapA-LAMP方法进行等温扩增初筛,初筛阳性的样品再有针对性地进行后续的传统培养。     

南通市鸡源空肠弯曲菌监测结果及耐药性分析

目的了解南通市鸡源空肠弯曲菌流行及耐药性状况,为制定鸡空肠弯曲菌病防治措施提供基础数据。方法采用荧光定量PCR技术检测标本中的空肠弯曲菌,参照GB/T 4789.9—2008的方法进行空肠弯曲菌分离鉴定,运用琼脂扩散法检测分离株的耐药性。结果 415份粪便样品中,57份空肠弯曲菌阳性,总阳性率为13.73%。其中苗鸡粪便、成年鸡肛拭子、鸡场环境样本的阳性率分别为6.49%、21.24%、7.35%,成年鸡肛拭子空肠弯曲菌的阳性率显著高于苗鸡粪便和鸡场环境样品,差异有统计学意义(P0.01)。46株空肠弯曲菌分离株对临床常用8大类19种抗生素耐药率在80%以上的有10种,分别为头孢拉定、头孢哌酮、头孢克罗、诺氟沙星、环丙沙星、左旋氧氟沙星、萘啶酸、复方新诺明、四环素、强力霉素。耐药菌株的耐药谱主要集中在10耐、11耐、12耐和14耐,达86.96%。结论南通市鸡源空肠弯曲菌检测阳性率较高,存在鸡源空肠弯曲菌病流行隐患;空肠弯曲菌分离株对多种抗生素产生了显著的耐药性,应引起社会各部门的高度重视。     

一起空肠弯曲菌引起的食源性疾病事件的病原学检测结果分析

目的 对绍兴市某学校一起空肠弯曲菌引起的食源性疾病事件进行病原学研究，为食源性疾病突发事件的应急处置提供依据。方法 采集该事件患者肛拭子、食堂工作人员肛拭子、留样食品样品和环境样品共46份，采用快速多重病原基因检测系统筛查病原体，锁定目标病原后，将病原菌分离鉴定与实时荧光PCR同步检测，采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)探究菌株同源性，采用琼脂稀释法检测菌株耐药情况。结果 采集的46份样品中，分离鉴定出空肠弯曲菌4份，均来自患者。PFGE聚类分析结果显示，4株空肠弯曲菌同源性为100.0%。药敏结果显示，4株菌对萘啶酸、环丙沙星、氟苯尼考和四环素4种抗生素均耐药。结论 这是绍兴市首次由空肠弯曲菌感染引起的食源性聚集疫情，建议加强学校食堂卫生管理、在校学生和教职员工的健康教育，养成良好的卫生习惯。     

Specific identification, grouping and differentiation of Campylobacter jejuni among thermophilic campylobacters using multiplex PCR

Campylobacter species such as C. jejuni and C. coli are recognized as major causes of acute gastroenteritis world-wide. Although C. jejuni and C. coli are usually non-pathogenic in birds and animals, they cause enteric disease in humans and the source of infection is often the consumption of contaminated foodstuffs. In this paper we report on the development and use of a multiplex PCR of C. jejuni genomic DNA which yielded a PCR product with a unique polymorphic site that can be used to quickly and accurately identify and group C. Jejuni isolates from any source including DNA, cell culture, skin washings and faecal samples. The test is simple and sensitive and can detect purified DNA from a single bacterium 10(2) cells from crude lysates, 10(3) cells in seeded faeces and 120 cells/ml of washing of 1 cm2 skin fragments of chicken skin.     

Molecular-based detection of non-culturable and emerging campylobacteria in patients presenting with gastroenteritis

From January 2009 to May 2010, 436 faecal samples from patients with diarrhoeal illness in Southern Ireland were identified as Campylobacter genus-positive by an automated multiplex PCR; however, 204 (46·8%) of these samples were culture-negative for campylobacters. A combination of Campylobacter-specific uniplex PCR and 16S rRNA sequencing confirmed the presence of Campylobacter DNA in 191 (93·6%) of the culture-negative samples. Species-specific PCR identified C. jejuni (50·7%) C. ureolyticus (41%) and C. coli (5·7%) as the most prevalent species while C. fetus, C. upsaliensis, C. hyointestinalis and C. lari accounted for 10% of culture-negative samples; mixed Campylobacter spp. were detected in 11% of samples. We conclude that non-culturable Campylobacter spp. are responsible for a considerable proportion of human enteritis and the true incidence of infection is likely to be significantly underestimated where conventional Campylobacter culture methods are used in isolation.     

应用PCR方法对生鸡肉中分离到的空肠弯曲菌进行鉴定

目的：对北京市市场销售的肉制品的空肠弯曲菌污染的状况进行调查,并建立快速的弯曲菌PCR鉴定的方法。方法：采用中国疾病预防控制中心下发的监测方法对北京市超市和集贸市场销售的鸡肉采集100件并进行检测,生化鉴定采用API Campy系统进行鉴定,同时采用针对空肠弯曲菌h ipO设计的引物对分离的弯曲菌进行鉴定。结果：共有4件检出空肠弯曲菌,采用PCR方法进行鉴定的结果与生化方法鉴定的结果一致。结论：在北京销售的鸡肉中存在空肠弯曲菌的污染,带菌率为4%,针对h ipO设计的引物可以对空肠弯曲菌进行快速鉴定。     

16SrRNA甲基化酶在肺炎克雷伯菌中流行情况调查

目的了解台州地区肺炎克雷伯菌临床分离株中16SrRNA甲基化酶流行情况,为临床感染的预防和治疗提供参考资料。方法收集台州地区2010年1月~2012年12月住院患者标本中分离的肺炎克雷伯菌共计859株,所有菌株均为非重复株。采用PCR及测序方法检测16SrRNA甲基化酶基因。结果 2010-2012年肺炎克雷伯菌对耐氨基糖苷类药物的耐药率逐年升高,经PCR扩增和DNA测序检出16SrRNA甲基化酶基因阳性株分别为2010年（14株,阳性率5.51%）、2011年（18株,阳性率6.22%）、2012年（21株,阳性率6.65%）,检测出的基因型为armA、rmtB两种类型且以rmtB为主,rmtA、rmtC、rmtD、npmA型均阴性。所有16SrRNA甲基化酶基因阳性肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物高度耐药（MIC≥256mg/L）。结论肺炎克雷伯菌耐氨基糖苷类耐药率不断增加,16SrRNA甲基化酶在肺炎克雷伯菌中所占比重呈逐年升高的趋势,且16SrRNA甲基化酶基因阳性菌株对氨基糖苷类抗生素高度耐药。检测到16SrRNA甲基化酶基因型rmtB和armA,以rmtB为主。     

Incidence and antimicrobial resistance profiling of Campylobacter in retail chicken livers and gizzards

Campylobacter species are one of the leading causes of foodborne disease in the United States. Campylobacter jejuni and Campylobacter coli are the two main species that are of concern to human health, and they cause approximately 95% of human infections. The number of studies investigating Campylobacter in chicken livers and gizzards is very limited in the literature. The objective of this study was to determine the prevalence of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli in retail chicken livers and gizzards purchased from grocery stores in the Tulsa, Oklahoma, area and to further characterize the isolates obtained through antimicrobial susceptibility testing. A total of 202 retail chilled chicken livers and gizzards (159 livers and 43 gizzards) were purchased on a weekly basis from several grocery stores. The overall prevalence of Campylobacter in chicken livers and gizzards was 136/202 (67%), where 69/202 (34%) of the samples were contaminated with Campylobacter jejuni and 66/202 (33%) with Campylobacter coli. While the prevalence of Campylobacter in chicken livers was 77%, its prevalence in chicken gizzards was lower at 33%. The prevalence of Campylobacter jejuni was slightly higher in chicken livers (36%) than gizzards (26%), while the prevalence of Campylobacter coli was significantly higher in the chicken livers (40%) than chicken gizzards (7%). The prevalence of resistance among C. jejuni and C. coli isolates recovered against 16 antimicrobials were as follows: amoxicillin (98%, 99%), ampicillin (32%, 55%), azithromycin (10%, 25%), cephalothin (92%, 99%), chloramphenicol (4%, 12%), ciprofloxacin (58%, 48%), clindamycin (5%, 19%), doxycycline (39%, 66%), erythromycin (6%, 32%), gentamicin (9%, 43%), kanamycin (11%, 43%), nalidixic acid (50%, 43%), oxytetracycline (99%, 100%), streptomycin (3%, 18%), tetracycline (37%, 60%), and tilmicosin (9%, 16%). Multidrug resistance was higher among Campylobacter coli than Campylobacter jejuni isolates.     

Culture-based indicators of fecal contamination and molecular microbial indicators rarely correlate with Campylobacter spp. in recreational waters

Campylobacter spp. are the leading cause of gastroenteritis worldwide. Most human infections result from contaminated food; however, infections are also caused by recreational waterway contamination. Campylobacter culture is technically challenging and enumeration by culture-based methods is onerous. Thus, we employed qPCR to quantify Campylobacter spp. in fresh- and marine-water samples, raw sewage and animal feces. Multiplex PCR determined whether Campylobacter jejuni or C. coli, most commonly associated with human disease, were present in qPCR-positive samples. Campylobacters were detected in raw sewage, and in feces of all avian and mammalian species tested. Campylobacter-positive concentrations ranged from 68 to 2.3 × 10? cells per 500 mL. Although C. jejuni and C. coli were rare in waterways, they were prevalent in sewage and feces. Campylobacter-specific qPCR screening of environmental waters did not correlate with the regulatory EPA method 1600 (Enterococcus culture), nor with culture-independent, molecular-based microbial source tracking indicators, such as human polyomavirus, human Bacteroidales and Methanobrevibacter smithii. Our results suggest that neither the standard EPA method nor the newly proposed culture-independent methods are appropriate surrogates for Campylobacter contamination in water. Thus, assays for specific pathogens may be necessary to protect human health, especially in waters that are contaminated with sewage and animal feces.     

2016—2020年上海市闵行区食源性疾病主动监测病原学及流行病学特征分析

【目的】分析上海市闵行区食源性疾病病例的流行特征,为制定食源性疾病防控措施提供科学依据。【方法】对2016—2020年闵行区食源性疾病病例数据进行分析,对病例粪便或肛拭样本开展沙门菌、副溶血性弧菌、志贺菌、致泻性大肠埃希菌、空肠弯曲菌、诺如病毒检测。【结果】2016—2020年闵行区食源性疾病就诊病例数15 951例,采集样本11 176例,阳性检出率为12.03%。腹泻占99.90%,发热占14.70%;粪便性状以水样便为主(89.70%)。发病主要集中在5—10月(79.78%);以30～39岁年龄组和职业为干部的检出率最高(13.53%,13.49%)。病原体检出情况：副溶血性弧菌5.39%、沙门菌3.25%、诺如病毒1.44%、大肠埃希菌1.06%、空肠弯曲菌0.56%、混合感染0.34%、志贺菌无。5年中副溶血性弧菌检出率显著下降(χ²=97.39,P<0.01)。检出率显著上升的有沙门菌(χ²=49.48,P<0.01)、致泻性大肠埃希氏菌(χ²=230.40,P<0.01)、空肠弯曲菌(χ...     

禽肉流通环节空肠弯曲菌污染及婴幼儿感染的研究

摘要：目的　了解深圳市家禽肉流通各环节的空肠弯曲菌污染情况,探讨空肠弯曲菌的分子分型特征。方
法　采集活家禽肛拭子、宰杀环境拭子、零售禽肉样本, 婴幼儿腹泻患者粪便样本。依据ＧＢ／Ｔ４７８９．９
２００８ 《食品卫生微生物学检验》进行检验。分离的菌株利用ＰＦＧＥ 进行分型。结果　６０份鸡肛拭子共检出
空肠弯曲菌２２株,阳性率为３６．６７％;３０份鸭肛拭子共检出空肠弯曲菌３株,阳性率为１０．００％;４０份鹅
肛拭子共检出空肠弯曲菌７株,阳性率为１７．５０％。１２ 份脱毛机内壁拭子、６ 份案板拭子、１２ 份工作人员
手拭子,分别检出空肠弯曲菌２、１、１ 株。采集市场现宰新鲜禽肉４０ 份,检出空肠弯曲菌７株,阳性率
为１７．５０％;超市采集冷冻禽肉３６ 份,未检出空肠弯曲杆菌。婴幼儿腹泻样本１６３份,检出空肠弯曲菌４
株,检出率为２．４５％。脉冲场凝胶电泳分析结果显示,分离得到的２４株菌可分为２４个型别。结论　深圳
地区禽肉食品各流通环节存在较普遍的空肠弯曲菌污染,婴幼儿感染空肠弯曲菌的状况也较常见。
关键词：空肠弯曲菌;污染;禽类;腹泻
中图分类号：Ｒ５１２．５　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１４）０４ ０３５３ ０４     

邯郸市2005—2009年食品食源性致病菌污染状况调查

目的了解邯郸市食品中致病菌污染状况,防止食源性疾病的发生。方法按照国标方法和2005—2009年全国食源性致病菌检测方法,对11类食品中的沙门菌、副溶血性弧菌、单增李斯特菌、大肠埃希菌0157∶H7、金黄色葡萄球菌、空肠弯曲菌进行了回顾性分析。结果380份样品中共检出46株致病菌,总检出率为12.11%。其中沙门菌4株,检出率1.05%;单增李斯特菌16株,检出率4.21%;副溶血性弧菌20株,检出率5.26%;金黄色葡萄球菌1株,检出率0.26%;大肠埃希菌O157∶H75株,检出率1.32%,空肠弯曲菌未检出。结论邯郸市食品中食源性致病菌污染比较严重,其中鲜冻水产品污染最严重。提醒卫生行政部门应加大对食品经营者经营销售行业的卫生监管力度,提高从业人员的卫生素质,保证上市食品的安全,防止食源性疾病的发生。