荧光免疫吸附法定量检测单核细胞增生李斯特菌

目的研制荧光免疫吸附法定量检测单核细胞增生李斯特菌。方法采用双抗夹心免疫吸附法筛选7株抗单核细胞增生李斯特菌的单克隆抗体,获得最佳配对抗体10E7H6和10A11。以生物素化的10A11为检测抗体,10E7H6为捕获抗体,建立了基于链霉亲和素标记荧光微球为检测探针的荧光免疫吸附法检测单核细胞增生李斯特菌。结果该方法中最佳捕获抗体浓度为10μg/mL,最佳检测抗体浓度为5μg/mL,反应最佳pH为7.4;在该条件下,单核细胞增生李斯特菌最低检测限为10~5 CFU/mL,比传统酶联免疫吸附法提高了两个数量级;与李斯特菌属内其他几种主要李斯特菌有一定的交叉反应,与其他非李斯特菌属的主要致病菌无显著交叉反应。结论该方法可用于纯培养液中单核细胞增生李斯特菌的检测,也可用于李斯特菌属内其他几种主要李斯特菌的免疫学快速筛查检测。     

食品中单增李斯特菌PCR检测方法建立与评价

目的建立单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，LM）快速、敏感、特异的PCR诊断方法。方法采用聚合酶链式反应技术（PCR）特异性扩增单核细胞增生李斯特菌溶血素基因（hlyA），并评价该方法的特异性与敏感性。结果在706bp处出现nuc基因的目的片断，只有单增李斯特菌的目的片段获得扩增，其他菌种扩增均呈阴性；该方法可以检测到3．3ng／L的DNA。结论PCR方法比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便。为食品中单增李斯特菌的快速检测提供了新的手段。     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌快速检测方法研究

[目的 ]　建立一种快速准确检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的方法。　 [方法 ]　以miniVIDAS仪结合API系统 ,将该法与传统方法进行比较。　 [结果 ]　该方法能检出 <10个 /mL模拟样品中的单核细胞增生李斯特氏菌 ,与食品中常见的细菌无交叉反应 ,能对非单核细胞增生李斯特氏菌作出正确鉴定。在 4天内能作完全鉴定结果。对 2 2 6份实样的检测 ,检出率为 11.5 %。　 [结论 ]　以miniVIDAS仪结合API系统建立的方法具有特异性好、灵敏度高、快速简便的特点 ,是一种较好的检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法     

2020—2022年河南省开封市食品中单核细胞增生李斯特菌污染状况分析

目的 调查2020—2022年河南省开封市部分食品受单核细胞增生李斯特菌污染的状况,为单核细胞增生李斯特菌引起的食源性疾病的防控提供科学依据。方法 按照GB 4789.30—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特菌检验》的方法对采集的8类276份食品样品进行单核细胞增生李斯特菌的分离和鉴定。结果 2020—2022年共检出单核细胞增生李斯特菌33株,检出率为11.96%,其中2020年检出率最高（18.57%）;不同类别食品中,调理肉检出率最高（37.50%）,其次是生禽肉（15.71%）;调理肉中冻样品检出率最高（40.74%）,生禽肉中鲜样品检出率最高（20.69%）;不同采样地点中,超市检出率最高（27.45%）,其次为农贸市场（16.13%）。结论 开封市部分食品及餐饮流通环节存在一定程度的单核细胞增生李斯特菌的污染,存在卫生安全隐患,建议加强对污染风险高的食品及餐饮流通环节的污染监测与监管工作,以降低食品食用安全风险。     

黑龙江省食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染监测

目的为掌握黑龙江省食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染状况，构建食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染数据库。方法在黑龙江省选取6个具有代表性城市建立监测哨点，定期对6类食品进行采样，检验采用增菌液（LB1、LB2）增菌后，用科玛嘉显色培养基分离，再做相应的生化及API Listeria快速反应板鉴定。结果检测6类760份食品样品，检出单核细胞增生李斯特氏菌（L．m）43株，检出率为5．66％。结论黑龙江省食品均不同程度受到L．m的污染，尤以生畜禽肉、非定型包装熟肉污染严重，淡水产品次之，生食蔬菜少见。     

2002～2004年广西食品中单核细胞增生李斯特氏菌的监测

目的了解广西食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染状况,构建食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染数据库。方法在广西6个城市建立监测点,定期对6类食品进行采样,食品检验采用中国疾病预防控制中心营养与食品安全所统一的单核细胞增生李斯特氏菌检验方法进行检验。结果检测6类1276份食品样品,检出单核细胞增生李斯特氏菌(L．m)51株,检出率为4．00％。结论在广西食品中均不同程度受到L．m污染,尤以淡水产品、生畜禽肉、非定型包装熟肉污染严重。     

利用胶体金免疫层析技术快速定量检测单增李斯特菌方法的建立

〔目的〕建立胶体金免疫层析技术快速定量检测单增李斯特菌方法。〔方法〕利用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析技术,建立单增李斯特菌的快速检测方法,评价其特异性和敏感性,并拟合标准曲线进行定量检测;在牛奶、橙汁、果冻等即食食品样品中添加单增李斯特菌模拟污染样品,评价该方法对半固体、液体等即食食品、可疑生物恐怖样品的检测能力。〔结果〕该法可在10min内完成定性和半定量检测,定量检测灵敏度为3.5×103cfu/ml,线性范围3.5×105～3.5×108cfu/ml,回收率在99%～101.7%之间。〔结论〕建立的检测单增李斯特菌的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地对样品中的单增李斯特菌进行定性、定量检测。     

2005年河北省食品中单核细胞增生李斯特菌的主动监测

目的旨在监测河北省食品中单核细胞增生李斯特菌的污染状况。方法中国疾病预防控制中心营养与食品安全所建立的全国食品污染物监测网的食源性致病菌监测部分,2005年在河北省6个市设点采样并检测了4大类食品(生肉、熟肉制品、水产品和蔬菜)共530份样品。结果单核细胞增生李斯特菌总检出率为6.4%,其中生肉10.6%,熟肉制品5.6%,蔬菜2.2%,水产品未检出,共分离出单核细胞增生李斯特菌34株。结论在河北省食品中均不同程度受到单核细胞增生李斯特菌的污染,尤以生畜禽肉、非定型包装熟肉制品污染严重。     

PCR检测食品中单核细胞增生性李斯特菌毒力基因

目的 检测食品中分离的单核细胞增生性李斯特茵毒力基因携带率。方法 应用GB4789．30-94单核细胞增生性李斯特菌的检验方法分离菌株，采用PCR检测李斯特菌的两种致病因子。结果 从2000．2001年我省采集的272份食品中分离出35株单核细胞增生性李斯特菌。其中11株含有内化素基因(Internalin，Inl)和李斯特菌溶血素O基因(Listerialysin0，Hly)，1株仅含有内化素基因；其它23株两种基因均为阴性。结论 我省存在发生李斯特菌食物中毒的潜在危险。建立PCR方法检测李斯特菌毒力基因对快速诊断单核细胞增生性李斯特菌有现实意义。     

快速检测产单核李斯特菌免疫胶体金层析法的研究

目的：为产单核李斯特菌提供了一个方便快捷切实有效的检测技术。方法：采用胶体金标记产单核李斯特菌抗体制备免疫层析检测试剂，通过免疫层析作用对产单核李斯特菌进行检测。结果：通过选用柠檬酸钠改良法制备胶体金，测定其最适结合蛋白浓度为28μg／ml，构建起免疫层析检测试剂和检测方法，检测了冷冻猪肉、牛奶、冰激凌以及不同稀释度的产单核李斯特菌标准样品，灵敏度达87．5％，具有良好的重现性。结论：免疫胶体金层析法用于快速检测产单核李斯特菌是可行的。     

一种快速检测甲型流感病毒方法的建立

目的 建立一种用于甲型流感病毒抗原检测的基于胶体金免疫层析法的快速、简便试剂盒。方法 以柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记一种抗甲型流感病毒单克隆抗体。硝酸纤维素膜上包被另一种抗甲型流感病毒单克隆抗体,制成免疫层析试纸。待测样品中的甲型流感病毒首先与胶体金标记抗体结合,然后移动至硝酸纤维素膜上与固定的单克隆抗体发生反应,形成肉眼可见的红色带。结果 本试纸与不同浓度甲型流感病毒培养液均能发生特异性反应,与乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒等16种病原体无交叉反应。用甲型流感病毒培养液不同浓度标本与美国同类产品比较,灵敏度相同。稳定性检测显示42 ℃和37 ℃热破坏放置结果均优于美国同类产品。临床比对结果评价kappa值为0.976,一致性非常高。结论 试纸条灵敏度和特异性能够达到临床使用的要求,并具有简便快速、无需特殊仪器设备等优点,对甲型流感的诊断和流行病学调查具有十分重要的应用价值。     

The role of apoptosis in Listeria monocytogenes neural infection: listeriolysin O interaction with neuroblastoma Neuro-2a cells.

Listeria monocytogenes is the etiological agent of meningitis that affects individuals at high risk such as pregnant women, neonates, the elderly and immunocompromised individuals. Infection by this intracellular pathogen can be lethal if not diagnosed and treated. Mouse neuroblastoma Neuro-2a cells, a neuron-like cell line, were infected with L. monocytogenes. In this study apoptotic changes of neuroblastoma Neuro-2a cells infected with strains of Listeria producing different listeriolysin O levels are investigated by cytotoxicity assay, cellular viability assay, DAPI staining, intranucleosomal DNA fragmentation test, and monoclonal antibodies against ss-DNA. Results show that after internalization, the bacteria induced morphological, functional and genetic changes in the cells characteristic of apoptosis, which was dose-and time-dependent on listeriolysin O. Neuroblastoma Neuro-2a cells represent an interesting model cell line to further the understanding of Listeria pathogenesis within the central nervous system.     

抗微囊藻毒素单克隆抗体胶体金标记物的制备及鉴定

目的制备抗微囊藻毒素(MC-LR)单克隆抗体胶体金标记物,并利用光谱分析来探讨结合物的合成机理。方法用杂交瘤技术生产并纯化的抗MC-LR的单克隆抗体,利用胶体金标记技术合成20nm粒径的胶体金与抗MC-LR单克隆抗体的结合物,通过光谱分析对偶联物中单克隆抗体的构象进行分析,ELISA法检测偶联物中抗体的免疫性。结果抗MC-LR单克隆抗体的效价达108,IC50抑制浓度为3ng/ml,为IgG2a亚型,分子量为1·5×105,与MC-LW、MC-LF无明显交叉反应。胶体金与抗体偶联物的颗粒圆整,光谱分析结果显示抗体蛋白的特征官能团没有发生明显变化,与胶体金粒子作用后结构略加紧密。ELISA结果显示偶联物仍然保持免疫原性。结论抗MC-LR单克隆抗体胶体金标记偶联物中抗体蛋白结构和抗原决定簇的位点没有改变,仍具有免疫原性,偶联物的稳定性良好。     

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）胶体金试剂的研制

目的：研制乙型肝炎表面抗原（HBsAg)胶体金试剂,方法：用未加氢氧化铝佐剂的乙型肝炎血源疫苗原材料免疫BALB/c小鼠制备抗－HBs单克隆抗体,应用胶体金标记抗－HBs单克隆抗体,测定HBsAg胶体金剂试的稳定性,对该试剂进行临床考核及检定等,结果,经中国药品生物制品检定所检定,其灵敏度达到1ng/ml, 特异度为100％（20／20）,精密度为100％（10／10）,符合国家对HBsAg试剂僵的要求,临床考核合格,已通过国家药品监督管理局的新药评审,获国家新药证书,结论,HBsAg胶体金试剂可用于献血员HBsAg筛选,健康人群体检,乙型肝炎病毒（HBV）感染的流行病学调查和临床诊断。     

抗人血白蛋白单克隆抗体的制备及其免疫金标试纸条的研制

目的:制备抗人血白蛋白单克隆抗体并对其抗体特性进行鉴定,将其标记胶体金,研制一种快速准确检测尿中人血白蛋白试纸条的方法。方法:用99.8%纯度的人血白蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体,并对其单克隆抗体的相关性质进行鉴定,制备胶体金,并标记所制备的单克隆抗体,按竞争法制备试纸条。结果:得到两株能够稳定分泌抗体,效价高的杂交瘤细胞系4C2,2F10。结论:建立的免疫层析试纸条,简便、可靠,有望通过进一步改进应用于临床检验。     

单增李斯特菌PCR-ELISA快速检测技术研究

目的建立快速检测单增李斯特菌的PCR-ELISA方法,将其应用于人工污染的食物样品检测。方法根据GenBank数据库资料,应用分子生物学软件DNAMAN6.0和Primer Premier5.0,以单增李斯特菌的致病基因hlyA为基础,选用PCR引物,应用地高辛标记试剂盒,获得单增李斯特菌特异的地高辛标记片段。根据PCR目的片段序列,设计特异性捕获探针,建立了单增李斯特菌PCR-ELISA快速检测方法。应用该方法对不同血清型的单增李斯特菌食品分离株进行了检测,并将PCR方法与PCR-ELISA方法对人工污染单增李斯特菌的牛奶样品的检测敏感性进行了比较。结果应用单增李斯特菌特异的PCR-ELISA方法完成检测约需6h。该方法对单增李斯特菌分离株检测的结果,与国家食源性疾病检测网的鉴定结果100%符合。经过12h的增菌培养,PCR-ELISA方法最低可从25ml样品中检出1CFU,检测敏感性为传统PCR方法的10～100倍。结论建立了单增李斯特菌PCR-ELISA快速检测方法。该方法敏感性高、特异性强、可靠性好,对于提高食源性疾病预警、预测能力,增强检测的时效性和准确性,具有推广应用价值。     

Development of Listeria monocytogenes-specific immunomagnetic beads using a single-chain antibody fragment

A method for coupling single-chain antibody fragments (scFvs) to immunomagnetic beads (IMBs) was developed and evaluated using scFvs specific for Listeria monocytogenes. A plasmid vector, pBAD380, was constructed that allowed the expression of histidine-tagged biotinylated scFvs in Escherichia coli. The gene encoding a scFv specific for L. monocytogenes was cloned into pBAD380 and the 6-histidine-tagged biotinylated anti-L. monocytogenes scFvs were coupled to streptavidin-coated IMBs. The ability of the anti-L. monocytogenes scFv-IMBs to capture L. monocytogenes and other Listeria species was evaluated in comparison to commercially available anti-Listeria IMBs. The anti-L. monocytogenes scFv-IMBs displayed higher efficiencies of capture (1.38-19.04%) for most strains of L. monocytogenes than were observed for the anti-Listeria IMBs (0.05-3.35%); also, the anti-L. monocytogenes scFv-IMBs exhibited improved specificity for L. monocytogenes as determined by cell capture efficiency in pure and mixed cultures.     

2016-2018年湖南省含乳冷冻饮品生产加工过程肠杆菌科和单核细胞增生李斯特菌监测

目的 了解含乳冷冻饮品生产加工过程中肠杆菌科和单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌)的分布,分析其污染的来源. 方法 对湖南省4家含乳冷冻饮品生产企业生产加工过程各个环节的样品进行监测,采用国家标准检测方法对肠杆菌科和单增李斯特菌进行检验,利用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophores...     

Interaction of Listeria monocytogenes and influenza in an animal model.

This study was designed to investigate the effects of viruses in the pathogenesis of Listeria monocytogenes. The organisms used in this study were: Listeria monocytogenes Type 1 isolated from a local fatal case; Mouse adapted influenza A/PR8/34 (HONI); Streptococcus pneumoniae Group B (U.M. Med. Ctr.) and poliovirus Type 2 MEF--G3M2. Balb-C mice were inoculated intraperitoneally with one LD50 of Listeria monocytogenes. Ten days later, the survivors were challenged intransally with 10 LD50 of influenza virus and observed for 14 days. Another set of Balb-C mice was inoculated intranasally with one LD50 of influenza virus and the survivors challenged 14 days later intraperitoneally with 10 LD50 of Listeria monocytogenes.Controls consisted of similar inoculation and challenge methods in mice using Streptococcus pneumoniae and polio virus with Listeria monocytogenes and influenza virus. Cross protection was observed only between Listeria monocytogenes and influenza virus. Cellular immunity may play a role in this interaction. This findings seem to agree with reports from others who showed cross protection between Listeria monocytogenes and other intracellular bacteria and parasites.