生存素基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长、凋亡和放射敏感性的影响

背景与目的：生存素基因是近年来肿瘤研究的焦点之一,本研究旨在观察生存素基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长、凋亡和放射敏感性的影响。方法：随机选择雌性BALB／c—nu／nu裸小鼠24只,细胞接种法建立4组人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,每天观察裸鼠一般状况及肿瘤生长情况,通过绘制肿瘤生长曲线并计算肿瘤生长抑制率,观察生存素基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响;通过免疫组化SP法检测各组移植瘤组织中生存素蛋白表达情况,Ⅷ因子相关抗原（factor Ⅷ related antigen,FⅧRAg）表达情况并计算微血管密度（MVD）,HE染色及TUNEL染色观察生存素基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤凋亡的影响;当肿瘤体积达0．2cm^3时予X线放射治疗观察生存素基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤放疗敏感性的影响。结果：成功建立4组人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤体积在每个检测点均明显小于接种HeLa组。观察结束时,接种HeLa—s2组裸鼠瘤重明显小于接种HeLa组,分别为（0．369±0．043）g和（1．150±0．136）g（P〈0．05）;接种HeLa—s2组裸鼠肿瘤生长抑制率为67．9％。免疫组化结果显示：接种HeLa-s2组裸鼠生存素蛋白表达显著下降;接种HeLa—s2组裸鼠FⅧRag表达亦显著下降,MVD值降至23．4±3．1。HE染色、TUNEL染色结果显示：接种HeLa—s2组裸鼠细胞凋亡明显增多,AI值达（22．7±1．4）％。X线放疗后不同检测点接种HeLa—s2组裸鼠肿瘤体积明显小于接种HeLa组,肿瘤生长明显受抑。观察结束后,接种HeLa～s2组裸鼠瘤重明显小于接种HeLa组,分别为（0．41±0．06）g和（1．38±0．29）g（P〈0．05）。接种HeLa—s2组裸鼠肿瘤细胞凋亡明显增多,与接种HeLa组AI比较,接种HeLa—s2组AI明显升高,分别为（30．06±0．98）％和（4．17±0．64）％（P〈0．05）。结论：生存素基因RNAi可通过下调移植瘤组织生存素蛋白表达降低其MVD,从而抑制移植瘤生长并促进其凋亡,并通过增加X线放射治疗诱导的细胞凋亡,增强放射治疗对移植瘤的生长抑制,进而提高移植瘤的放射敏感性。     

Survivin基因沉默抑制结肠癌生长的动物实验研究

目的 探究survivin基因沉默对人结肠癌Lovo细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 构建靶向survivin的shRNA载体SUR和阴性对照质粒Neg,并将其转染人结肠癌Lovo细胞,分别种植到裸鼠皮下建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型.随后观察各组裸鼠移植瘤生长情况,免疫组化方法检测移植瘤survivin蛋白的表达,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 移植转染细胞8周,与空白对照组比较,SUR组移植瘤的体积和质量均有显著缩小(P<0.05),体积和质量抑瘤率分别为48.9%和51.2%.与空白对照组比较,SUR组移植瘤survivin表达显著下调,表达指数为31.9%;SUR组肿瘤细胞凋亡显著增加,凋亡指数18.47%(P<0.05).阴性对照Neg组的上述指标与空白对照组比较,差异均无统计学意义.结论 Survivin基因沉默能够抑制人结肠癌Lovo细胞裸鼠移植瘤的生长.     

香加皮三萜类化合物抑制食管癌Eca109细胞裸鼠成瘤及其机制

目的： 研究香加皮三萜类化合物（triterpenes compound extracted from cortex periplocae,TCCP）对荧光素酶（luciferase）标记的人食管鳞癌细胞株Eca109（Eca109-luc细胞）在裸鼠体内成瘤的作用及其机制。 方法： Eca109-luc细胞经皮下接种裸鼠,构建Eca109-luc细胞裸鼠移植瘤模型,观察TCPP治疗后移植瘤体积和质量的变化,应用活体成像系统观察移植瘤生长情况,H-E染色观察移植瘤组织形态学变化,流式细胞仪检测移植瘤细胞的凋亡,Western blotting检测移植瘤组织中survivin的表达。 结果： TCPP在体内能明显抑制裸鼠Eca109-luc移植瘤的生长,移植瘤体积和质量明显减少,抑瘤率为40.7%。TCPP 治疗组小鼠移植瘤组织出现明显炎性细胞浸润及肿瘤细胞坏死,移植瘤细胞的凋亡率明显高于大豆油对照组（P<005）,移植瘤组织中survivin蛋白表达水平明显下降（P<0.05）。 结论： TCCP在体内能抑制人食管癌Eca109细胞的生长,其作用机制可能与下调survivin的表达诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

白桦脂酸对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用及机制

目的 探讨白桦脂酸（BA）对人宫颈癌HeLa细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及其机制。方法 将4×10⁶个HeLa细胞接种于裸鼠右肩背部皮下,建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,24只荷瘤裸鼠随机分为BA高剂量（80mg／kg）、中剂量（40mg／kg）、低剂量（20mg／kg）组及空白对照组（含溶剂）,每组6只,隔日腹腔注射连续给药21d,停药24 h后处死裸鼠,测量裸鼠体重、移植瘤体积、瘤重,计算抑瘤率;光镜下观察移植瘤组织形态学变化;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数;免疫组化法检测瘤组织内caspase-3、CytoC蛋白表达。结果 裸鼠处死后,BA处理组的移植瘤体积均明显小于空白对照组（P＜0.01）,其中高、中、低剂量组抑瘤率分别为56.2％、40.4％和24.6％ （P＜0.01）;HE染色法显示BA处理组小鼠的移植瘤组织出现明显凋亡及坏死改变;TUNEL检测对照组和BA低、中、高剂量组的凋亡指数分别为（8.36±2.78）％、（20.98±3.01）％、（28.74±4.77）％和（39.34±6.15）％（P＜0.05）;免疫组化法示BA处理组的肿瘤组织caspase-3、CytoC蛋白表达水平较空白对照组明显升高（P＜0.01）。结论 BA对人宫颈癌HeLa细胞移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与上调caspase-3、CytoC蛋白的表达及诱导细胞凋亡有关。     

靶向survivin的siRNA对骨肉瘤细胞MG63的抑制作用

目的：探讨针对人survivin基因的siRNA对骨肉瘤细胞MG63的体内外抑制作用。方法：合成survivin基因的RNA干涉（RNA interferance,RNAi）特异性片段,构建survivin特异性的RNA干涉载体pSiS,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。细胞计数检测细胞生长情况;Western blotting检测细胞中survivin蛋白表达的变化;通过Annexin V法染色和流式细胞术检测细胞凋亡;观察裸鼠皮下MG63移植瘤的形成。结果：成功构建了survivin基因siRNA真核表达载体pSiS,获得了稳定转染的细胞MG63/pSiS。与MG63、MG63/pSi（空质粒对照细胞）相比,MG63/pSiS细胞生长曲线十分平缓,差异有统计学意义（P〈0.01）;Western blotting显示,MG63/pSiS细胞中survivin蛋白表达减少,细胞凋亡率增加（P〈0.01）。MG63/pSiS移植瘤形成明显受到抑制。结论：Survivin特异性siRNA可明显促进骨肉瘤细胞MG63的凋亡,抑制该肿瘤细胞体外生长和体内移植成瘤。     

mda-7/IL-24对裸鼠肝癌移植瘤的生长抑制和促凋亡作用

目的:探讨mda7/IL24对裸鼠肝癌细胞移植瘤的生长抑制和促凋亡作用及其相关机制。方法：构建携带mda7基因的重组腺病毒载体Admda7。以HepG2细胞皮下接种建立裸鼠肝癌移植瘤模型,采用瘤内单点注射的方法分别给予AdGFP、Admda7和ALLN（毒胡萝卜素,NAcLLnorleucinal）+Admda7,观察瘤质量和瘤体积的变化,通过免疫组化和TUNEL法检测肿瘤组织内凋亡相关蛋白caspase3活化、细胞增殖相关抗原ki67和微血管密度、细胞凋亡率,并通过Western blotting检测caspase12、caspase3和Bax的表达。结果： Ad.mda7治疗组和Ad.GFP对照组肿瘤体积分别为（312.6±30.2）mm3和（520.6±30.0）mm3（P<0.01）,两组的肿瘤质量分别为（0.321±0.031）g和（0.534±0.030）g（P<001）;Ad.mda7治疗后瘤细胞的凋亡率显著高于对照组（P<0.01）;Ad.mda7可抑制肝癌组织ki67表达、微血管密度和促进caspase3的表达。 经 ALLN 处理的裸鼠,明显抑制Ad.mda7对肝癌细胞的致凋亡作用（P<0.05）,并且下调Ad.mda7诱导的caspase12、caspase3和Bax的表达。结论： Ad.mda7可显著抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长和新生血管的形成,并通过内质网应激通路显著诱导肿瘤细胞的凋亡。     

慢病毒介导的USP9X基因RNA干扰对人胰腺癌细胞株裸鼠移植瘤生长的影响

目的研究慢病毒介导的连锁的泛素特异肽酶9(USP9X)基因RNA干扰对人胰腺癌细胞系裸鼠皮下移植瘤的影响。方法将靶向USP9X基因的干扰小RNA(siRNA)慢病毒(LV-siRNA-USP9X)和阴性对照慢病毒(LV-siRNA-NC)转染至SW1990细胞,并分别作为siUSP9X组和siNC组,未转染细胞作为对照组,分别将3组细胞系接种至裸鼠皮下,比较3组裸鼠接种第30天的移植瘤生长情况和瘤体重量。蛋白质印记(Western blot)法和免疫组织化染色检测3组裸鼠皮下移植瘤中survivin蛋白的表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡指数(AI)。结果siUSP9X组USP9X蛋白的相对表达量均明显低于siNC组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.01),干扰效率约为90%。siUSP9X组裸鼠的肿瘤体积明显小于siNC组和对照组裸鼠,且随着接种时间的延长,差异越来越明显。在接种第30天时,siUSP9X组裸鼠瘤体重量均小于siNC组和对照组裸鼠,抑瘤率为52%。siUSP9X组survivin蛋白的相对表达量和阳性表达率均低于siNC组和对照组,AI均高于siNC组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论慢病毒介导的USP9X基因沉默可明显抑制人胰腺癌细胞系裸鼠皮下移植瘤的生长,该现象可能与其下调survivin蛋白的表达并促进细胞凋亡有关,USP9X有可能成为胰腺癌基因治疗的一个新靶点。     

反义端粒酶RNA基因对裸鼠肝癌移植瘤的抑制作用

目的:研究反义人端粒酶RNA基因(human telomerase RNA ,hTR)在裸鼠体内对肝癌移植瘤的抑制作用。方法： BALB/c裸鼠前肢腋窝皮下注射HepG2肝癌细胞构建移植瘤模型,以携反义hTR逆转录病毒质粒PLXSNhTRBamHⅠ瘤体内注射治疗（每次0.2 ml,共5次）,以注射正义hTR逆转录病毒质粒PLXSNhTREcoRⅠ和生理盐水为对照,测量肿瘤体积,计算抑瘤率;HE染色观察瘤组织病理变化; TUNEL法检测肿瘤组织细胞的凋亡。结果：反义hTR治疗组肿瘤生长较正义hTR治疗组及生理盐水组明显减慢,反义hTR组抑瘤率为26.78%,明显高于正义hTR组的1.93%（P< 0.01）。反义hTR治疗组较正义hTR治疗组及生理盐水组瘤组织坏死面积、肿瘤细胞凋亡率均明显增加（均P< 0.01）。结论：反义hTR在裸鼠体内能够显著抑制肝癌移植瘤的生长,促进肿瘤细胞的凋亡。     

靶向XIAP的siRNA抑制结肠癌LoVo细胞体内外的增殖

目的：研究siRNA干扰X连锁凋亡抑制蛋白（Xlinked inhibitor of apoptosis protein, XIAP）基因表达对结肠癌细胞LoVo体内外增殖的影响。方法：构建XIAP真核表达干扰载体pSil2.1shXIAP1和pSil2.1shXIAP2,脂质体转染结肠癌细胞株LoVo,G418筛选出稳定转染LoVoshXIAP2细胞。RTPCR和Western blotting方法检测XIAP mRNA和蛋白的表达。MTT法和平板克隆形成实验检测LoVo细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞的凋亡;裸鼠移植瘤模型观察XIAP表达下调对结肠癌体内增殖活性的影响。结果：LoVoshXIAP2细胞中XIAP mRNA和蛋白表达水平均显著下调。相对于对照组细胞,LoVoshXIAP2细胞的增殖和克隆形成率显著降低(P<0.01）,凋亡率显著增加（P<0.01）。 LoVoshXIAP2移植瘤组织中XIAP蛋白表达明显下调,LoVoshXIAP2移植瘤生长显著抑制（均P<0.05）。结论：pSil2.1shXIAP2能够抑制结肠癌LoVo细胞中XIAP蛋白的表达,抑制LoVo细胞体内外的增殖,有望成为结肠癌免疫治疗的新手段。     

HIF-1α基因沉默对人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤生长及survivin表达的影响

目的观察缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因沉默对肺癌的抑瘤效应和survivin表达的影响。方法将实验用肺腺癌A549细胞分为空白对照组、无意义序列转染组和实验组,接种裸鼠,建立裸鼠荷瘤模型,观测HIF-1α-MiRNA对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用和对survivin表达的影响。采用免疫组化SP法,检测HIF-1α和survivin蛋白在裸鼠移植瘤中的表达。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测HIF-1α和survivin mRNA的表达。采用原位末端标记（TUNEL）法检测肿瘤组织中细胞凋亡。结果实验组裸鼠肿瘤的生长速度较空白对照组、无意义序列转染组明显减慢（P〈0.05）。接种60 d后处死裸鼠,实验组裸鼠的肿瘤重量为（0.59±0.28）g,明显轻于空白对照组[（1.90±0.18）g]和无意义序列转染组[（1.66±0.24）g,P〈0.01]。实验组肿瘤组织中HIF-1αmRNA和蛋白的相对表达量分别为（0.45±0.04）%和（24.56±5.83）%,survivin mRNA和蛋白的相对表达量分别为（0.32±0.02）%和（29.08±3.99）%,均明显低于空白对照组、无意义序列转染组（P均〈0.05）。但实验组肿瘤组织中凋亡细胞的数量显著高于对照组。结论以HIF-1α为靶点的基因治疗,可能通过下调靶基因survivin的表达促进肺癌细胞凋亡,发挥抑制肿瘤生长的作用。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Management of intracranial metastases of differentiated carcinoma of thyroid

Summary Brain metastases in differentiated carinoma of the thyroid is a rare occurrence. We treated five documented cases of carcinoma of thyroid with brain metastases out of 400 cases of thyroid cancer treated between 1972 to 1993. 4 were females out of which one was pregnant during the appearance of brain metastases. All cases were treated with thyroidectomy, and radioiodine as primary therapy. Brain metastases developed 6 months to 11 years following treatment of the primary and were treated with radiotherapy and suppressive levothyroxine. We observed the beneficial effect of suppressive thyroxine and the poor prognosis associated with pregnancy and withdrawl of thyroid replacement therapy. 3 of the 5 patients are alive 12–23 months after treatment for brain metastases, while 2 patients died at 4 months and 7 years post brain metastases due to pulmonary and hepatic failure, respectively.     

Clinico-Pathological Study of 50 Cases of Tumours of Larynx

Otoacoustic emissions have been advocated in the management of otitis media with effusion. However, otoacoustic emissions cannot differentiate different types of hearing loss. This study was conducted to find factor that can differentiate otitis media with effusion from other common causes of hearing loss in children. Children were enrolled in the study and divided in four groups consisting of 25 ears each after pure tone and impedance audiometry: (1) Otitis media with effusion group, (2) Normal ear group, (3) Sensory-neural hearing loss group, (4) Chronic suppurative otitis media group. Otoacoustic emissions were recorded and results were analyzed statistically. The normal hearing group had significant difference from other groups but total band reproducibility of transient evoked otoacoustic emissions did not show any statistical difference in the cases groups. In distortion product otoacoustic emissions, group 1 showed significant difference from group 3 and group 1 had significant difference from all other groups at 4 kHz. The study did not find any factor that differentiates otitis media with effusion from other diseases. Although, distortion product otoacoustic emissions can indicate otitis media with effusion but impedance audiometry should be the main tool in the management of otitis media with effusion.     

乳腺叶状囊肉瘤320例诊治分析

目的探讨乳腺叶状囊肉瘤临床诊断和治疗方法。方法回顾分析经手术病理确诊为乳腺叶状囊肉瘤的320例患者的诊断和治疗情况。结果行乳腺X片检查121例,B超检查25例,近红外检查21例,针吸细胞学检查42例;15例(12.4%)乳腺X片检查及3例(14.3%)近红外检查诊断为乳腺叶状囊肉瘤。临床诊断正确率为17.5%(56/320),误诊率为82.5%(264/320)。随访253例患者,其中局部复发45例(17.8%),远处转移死亡13例(5.1%)。结论乳腺叶状囊肉瘤诊断需常规病理检查,治疗宜行局部广泛切除或全乳切除。     

胆囊腺瘤癌变的相关因素分析

目的:探讨胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性。方法:应用ROC曲线,计算胆囊腺瘤癌变的肿瘤大小临界值。应用χ2独立性检验,计算胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性、临床表现与肿瘤位置的相关性。结果:肿瘤良恶性临界值为2.27 cm。胆囊腺瘤癌变与患者的性别、年龄、是否合并结石无明显相关性（P＞0.05）,而与肿瘤大小、肿瘤数目、形态、超声下是否有血流(P＜0.05)等临床病理特征有明显相关性。临床症状与肿瘤是否位于胆囊颈部有明显相关性(P＜0.05)。结论:胆囊腺瘤在超声扫描下表现为单发、无蒂、有血流、直径大于2.27 cm,应高度怀疑已有恶变。肿瘤位于胆囊颈部可引起右上腹胀痛、疼痛向右背部放射、恶心呕吐等临床表现。