脐带间充质干细胞向汗腺样细胞分化后的表型变化

目的：比较人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）向汗腺样细胞诱导前后表型特征的变化.方法：对hUC-MSCs进行分离、培养、鉴定,通过显微镜观察、免疫细胞化学、流式细胞术等方法比较hUC-MSCs经汗腺分化诱导培养液培养前后细胞形态变化及癌胚抗原（CEA）、角蛋白7（CK7）、CK8、CK14、CK18、CK19表达的差异.结果：hUC-MSCs向汗腺样细胞诱导前呈梭形,呈成纤维细胞样;流式细胞仪检测发现CD29、CD90表达阳性;而CD34、CEA、CK14、CK19表达阴性.经汗腺诱导培养基诱导后hUC-MSCs分化为外形肥大、不规则、类似铺路石样的细胞,聚集性增殖;免疫细胞化学检测显示CK7、CK8、CK18抗原表达阳性;流式细胞仪检测结果显示CEA、CK14、CK19的阳性表达率分别为77.98%,48.47%,20.85%.结论：hUC-MSCs经过汗腺分化诱导培养基培养后能够分化为表达汗腺细胞标记物抗原的汗腺样细胞.     

体外分离培养兔阴茎海绵体平滑肌细胞的纯度分析

目的比较和评价不同条件下体外培养兔阴茎海绵体平滑肌细胞的纯度。方法应用胶原酶消化法和组织贴块法分离培养幼兔海绵体平滑肌细胞。差速贴壁法纯化海绵体平滑肌细胞。采用α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)和肌球蛋白(Myosin)免疫荧光鉴定海绵体平滑肌细胞,波形蛋白(Vimentin)衬染检测成纤维细胞。流式细胞仪检测海绵体细胞表达α-SM-actin的阳性率,比较不同培养条件下海绵体平滑肌细胞的纯度。结果体外培养的海绵体来源细胞在荧光显微镜下对α-SM-actin和Myosin仅有少量表达,随传代次数的增加,细胞表达α-SM-actin和Myosin的阳性率进一步降低。流式细胞仪检测酶消化法和贴块法原代培养的海绵体平滑肌细胞的纯度分别为16.91%和11.13%。经差速贴壁纯化后第1代海绵体平滑肌细胞的纯度分别提高到26.88%和21.98%。Vimentin免疫荧光检测到大量阳性表达。结论目前常规方法体外分离、培养的海绵体平滑肌细胞纯度较低,大量海绵体间质来源的成纤维细胞混杂生长,差速贴壁法可在一定范围内提高海绵体平滑肌细胞的纯度。     

组织工程皮肤种子细胞的同期快速分离

目的 寻找一种快速可行的同期分离组织工程皮肤种子细胞——表皮细胞及成纤维细胞的方法。方法 取手术切除包皮，利用Ⅰ型胶原酶结合胰蛋白酶消化法，同期分离表皮细胞及成纤维细胞，观察细胞形态。对表皮细胞及表皮干细胞行PAN—FITC、K19-FITC荧光免疫染色及K19流式细胞仪鉴定；对成纤维细胞行波形蛋白FITC免疫荧光鉴定。并分别对两种细胞培养7d，观察其生长情况。结果 应用Ⅰ型胶原酶结合胰蛋白酶，在3h内快速分离得到表皮细胞及成纤维细胞，免疫荧光染色表皮细胞PAN—FITC染色均为阳性、K19-FITC染色部分阳性，流式细胞仪鉴定其K19阳性表达的细胞接近17％。表皮细胞培养48h开始呈克隆样增长，至7d生长停滞，向终末的角细胞分化。成纤维细胞体外培养7d可扩增100倍，波形蛋白FITC免疫荧光染色呈阳性。结论 利用胶原酶结合胰蛋白酶消化法可在3h内同期分离到用于构建复合型组织工程皮肤的种子细胞，为复合组织工程皮肤的快速构建提供了可能。     

婴幼儿血管瘤间充质干细胞的分离鉴定及其在血管瘤组织中的定位观察

目的 探索周细胞是否是血管瘤间充质干细胞的来源,及间充质干细胞与婴幼儿血管瘤消退过程中的脂肪组织增生的关系.方法 采用贴壁筛选法从增生期血管瘤中分离间充质干细胞,应用流式细胞仪和免疫荧光染色检测细胞抗原表型.免疫组化染色观察CD133和PPAR-γ在增生期血管瘤组织中的表达,并以CD31和α-SMA行共染色.结果 血管瘤间充质干细胞为成纤维细胞样,表达CD133、PPAR-γ、CD105、CD90、CD29和Vimentin,不表达CD45、CD34、CD31和flt-1.部分细胞表达α-SMA.大部分细胞表达PDGFR-β.NG2、Desmin和RGS-5无表达.免疫组化染色证实CD133、PPAR-γ和α-SMA共表达于血管瘤组织的微血管周围.结论 细胞形态和抗原表型初步证实,本研究分离的细胞为间充质干细胞,免疫组化染色证实间充质干细胞存在于血管瘤组织的微血管周围.研究结果提示,周细胞是血管瘤间充质干细胞的来源.     

脂肪干细胞向表皮细胞表型转分化的研究

目的探讨脂肪干细胞(adipose-derivedstemcells,ADSCs)跨胚层向表皮细胞表型转分化的可能性。方法取大鼠脂肪组织,用酶消化法分离、培养ADSCs,用免疫细胞化学法、流式细胞仪法鉴定ADSCs。实验分为皮肤匀浆条件培养基诱导7d组;皮肤匀浆条件培养基加入EGF(20ng/ml)诱导7d组;皮肤匀浆条件培养基诱导4d,撤条件培养基,改10?S/DMEM培养3d组;10?S/DMEM为对照组。诱导后经流式细胞仪检测CK19、CK10的表达。结果①免疫细胞化学分析表明ADSCs表达CD49d,而不表达CD106、CD34、CK19、CK10;流式细胞仪检测CD49d、CD44的阳性率分别为94.32%、90.38%。②各诱导实验组细胞CK19阳性率分别为45.32%、26.58%、23.37%,CK10阳性率分别为43.56%、25.54%、18.20%,较对照组CK19阳性率18.53%、CK10阳性率2.46%,明显增高(P<0.01),差异有统计学意义。结论皮肤匀浆液可以诱导ADSCs向表皮细胞表型转分化。     

人脂肪干细胞的培养及鉴定

目的:探讨人脂肪干细胞的分离、培养并鉴定。方法:采用胶原酶法消化人脂肪组织,培养原代脂肪干细胞,通过多种方法检测鉴定。结果:细胞贴壁生长,形态呈梭形,并呈旋涡状或放射状排列;细胞生长曲线为典型的"S"形,细胞倍增时间为26h。流式细胞仪检测结果显示CD29、CD105、CD44为阳性;CD45为阴性;成脂诱导分化的细胞经油红O染色为阳性,成骨诱导分化后茜素红染色亦为阳染。结论:通过获取人腹部脂肪组织进体外分离培养及鉴定,证实其为脂肪干细胞。     

人脐血中血管内皮祖细胞体外扩增和鉴定的实验研究

目的：探讨从人脐血中分离、培养、体外扩增血管内皮祖细胞(EPC)的方法及体外进行EPC的鉴定。方法：采用密度梯度离心法从脐血中分离EPC，体外分别培养在包被有FN和不包被FN的培养皿中，采用免疫组织化学技术(SABC法)鉴定培养贴壁细胞表面标志CD31、CD34及KDR的表达；流式细胞仪检测细胞表面标志CD133及表达CD133细胞比例。结果：包被FN的培养皿中细胞贴壁及增殖均比未包被的多，免疫组化染色CD31、CD34及KDR均呈阳性，培养第4天流式细胞仪检测CD133^ 占21．3％。结论：密度梯度离心法可用于体外分离脐血中EPC进行实验研究，FN对于体外培养EPC有非常重要的作用。     

分离培养汗腺导管部细胞的新方法

目的 探讨建立汗腺导管部细胞分离的新技术.方法 成人仞厚皮片和薄中厚皮片标本(n=10)剪碎后用Ⅱ型胶原酶消化12 h,吸取并转移汗腺导管到培养皿中贴壁培养.应用流式细胞仪、免疫组织化学染色和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)以及蛋白印迹(Western Blot)分析检测培养细胞的汗腺特异标志CEA、CK8、CK18、CK19抗原表达,并用膜片钳技术检测培养细胞膜上阿米洛利(amiloride)敏感Na~+离子通道,用t检验比较分析两组间实验数据.结果 汗腺导管贴壁48 h后,围绕汗腺导管出现单层扁平的上皮细胞,生长2～4周融合成片.流式细胞学检查示原代培养汗腺导管细胞与原代培养汗腺细胞在癌胚抗原(CEA)阳性率[(90.26±1.12)%vs.(89.70±1.43)%]和细胞角蛋白8(CK8)阳性率[(94.41±1.84)%vs.(93.65±1.63)%]上,差异无统计学意义(P>0.05).形态学染色汗腺导管细胞抗CEA、CK8、CK18、CK19染色均为阳性.RT-PCR表明原代培养汗腺导管细胞表达CEA、CK8、CK18、CK19基因,Western Blot清晰显示CEA条带,CK8、CK18、CK19蛋白条带.膜片钳检测表明原代培养汗腺导管细胞膜上存在amiloride敏感Na~+离子通道.无血清表皮细胞EpiLife培养基在汗腺导管细胞生长过程中抑制成纤维细胞生长.结论 从仞厚皮片和中厚皮片分离培养汗腺导管部细胞的方法较传统的分离方法具有简便快速的优点,EpiLife培养基可抑制培养过程中成纤维细胞的生长,可以在体外建立最佳汗腺导管细胞模型.     

CD34和α-SMA在乳腺良恶性病变间质成纤维细胞中的表达及临床意义

目的探讨CD34和α-SMA在乳腺良恶性病变间质成纤维细胞中的表达及其意义。方法采用免疫组化法检测100例乳腺良性病变、32例导管原位癌和150例乳腺癌的间质成纤维细胞中CD3 4和α-SMA的表达情况,分析CD3 4与α-SMA的关系。结果 CD3 4和α-SMA在乳腺良性病变、导管原位癌和乳腺癌间质成纤维细胞中的表达率分别为90%(90/100)和49%(49/100),91%(29/3 2)和8 1%(2 6/3 2),4%(6/1 5 0)和9 9%(1 4 8/1 5 0)。其中CD3 4在乳腺癌中的表达明显低于乳腺良性病变和导管原位癌中的表达(均P<0.05),而其表达在乳腺良性病变与乳腺原位癌之间无明显差异(P>0.05);α-SMA的表达在3种组织中的差异均有统计学意义(均P<0.05)。CD34与α-SMA在3种组织中的表达均无明显相关性(均P>0.05)。结论 CD34和α-SMA是乳腺间质成纤维细胞改变的敏感指标,两者联用有助于判断乳腺良恶性病变。     

双向差速法制备高纯度雪旺细胞的实验研究

[目的]利用乳鼠的雪旺细胞与成纤维细胞贴壁及复合酶消化分离速度不同的特点,建立简单而快速提取和纯化雪旺细胞的方法。[方法]取3 d SD大鼠双侧坐骨神经,在解剖镜下剥离去除神经外膜,剪碎后用0.2%复合胶原酶(Collagenase NB4)消化,细胞悬液接种于预先用多聚赖氨酸包被的培养瓶差速贴壁30 min,然后将细胞悬液移入一新的培养瓶培养48 h;用0.05%复合胶原酶37℃消化30 min,振荡分离雪旺细胞与成纤维细胞,培养48 h后在相差显微镜下观察细胞形态;计数、纯度测定;免疫细胞化学鉴定和流式细胞仪检测所得的雪旺细胞的纯度。[结果]经过2次纯化后,每25 cm2培养瓶可获取约(117.2±3.4)×104个细胞;第一轮纯化后雪旺细胞纯度达86.99%±1.53%,经2次纯化后纯度为98.32%±0.12%,两轮纯化之间有显著性差异,P<0.001;P75NTR免疫细胞化学鉴定细胞为阳性,流式细胞仪检测雪旺细胞纯度达97.9%。[结论]双向差速复合胶原酶消化法是一种高效、快捷的雪旺细胞纯化方法。     

Data,information, knowledge,wisdom, and understanding

The digital age commenced in the mid-20th century and since we have seen approximately exponential growth in information. This period has also seen the rapid growth of computer technology that has facilitated, for instance, the derivation of whole genomes and automated drug discovery. Data, information, knowledge and wisdom lay the foundations for understanding how experience is formed from evidence and observations. When data are put into context, the resultant information can drive growth and further contribute to increased knowledge. Appreciating the source of data enables us to recognize and hopefully correct for inherent error and bias. Ultimately knowledge discovery can be automated to gain information from data and so on, enhancing our understanding of a given subject and expanding collective wisdom.     

骨密度没量中精密度的重要性

骨密度测定,不论采取何特殊技术,即使严格地按照厂家建议的操作程序,也常常不能达到完美的重复性.必须确定每台骨密度仪不同骨骼部位的精确度.精密度,如标准差平均方根或变异系数平均方根,被用来确定骨密度的变化,即精密度决定最小显著性变化值和随访需要的至少时间间隔.除非确定了精密度,否则就不能确定任何水平的统计可信度最小显著性变化值,使得随访的研究结果难以解释.     

MRSA: Resistenzmechanismen,Epidemiologie, Risikofaktoren,Prophylaxe, Therapie

Zusammenfassung Methicillin-resistente Staphylococcus aureus-Stämme (MRSA) sind inzwischen in vielen Ländern verbreitete Erreger, denen eine besondere Aufmerksamkeit geschenkt wird. In der vorliegenden Übersichtsarbeit werden der Resistenzmechanismus, die Epidemiologie der Verbreitung im Krankenhaus (H-MRSA) bzw. in Einrichtungen des Gesundheitswesens (HCA-MRSA) und außerhalb des Krankenhauses (C-MRSA), Ursachen der Zunahme des Nachweises, Besiedlungsdynamik, Erkrankungsrisiko und Letalität, das Vorgehen bei MRSA-Nachweis, Methoden zur Dekolonisierung, Überwachungskulturen sowie therapeutische Optionen diskutiert.     

Leak,fistula, sepsis,sinus, portal vein thrombosis

The creation of an ileal pelvic pouch is a complex procedure. While many perioperative complications are possible, surgery specific complications may include a pouch leak, fistula, abscess with sepsis, anastomotic sinus, and portal vein thrombosis. In this chapter, each of these are individually discussed along with evaluation and treatment options.