肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体对肝细胞肝癌的抑制作用

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体(TRAIL)对肝细胞肝癌的抑制作用。方法 构建绿色荧光蛋白融合TRAIL质粒,转染肝癌细胞株HepG2、SMMC7721细胞后,分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测 TRAIL的表达,采用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;体内实验建立裸鼠肝癌皮下模型,pIRES-EGFP-TRAIL直接瘤体注射,并观察TRAIL的抑癌作用。结果 真核表达质粒TRAIL体外转染肝癌细胞后,RT-PCR和 Western blot证实了肝癌细胞中有 TRAIL的表达,但对肝癌细胞的生长无显著性的抑制作用。体内直接瘤体注射 pIRES-EGFP-TRAIL 2周,RT-PCR证实瘤体有 TRAIL mRNA强表达,癌旁组织 TRAIL mRNA呈弱表达,正常肝无 TRAIL mRNA表达,但两组间肿瘤大小差异无显著性(P>0.05)。结论 肝细胞肝癌对TRAIL诱导的凋亡有耐药现象,提示HCC中存在抑制TRAIL诱导凋亡的因素,单一的TRAIL治疗HCC疗效有限。     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导膀胱癌EJ细胞凋亡的研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是能够较特异性诱导肿瘤细胞凋亡的肿瘤坏死因子超家族成员 ,由于对正常组织不表现毒性[1] ,在肿瘤治疗方面得到广泛研究。我们对TRAIL诱导膀胱癌细胞EJ凋亡的作用进行了研究 ,现报告如下。材料与方法　重组人TRAIL(rhTRAIL)由KamiyaBiomedical公司制备和纯化 ,浓度设置为 10 0、5 0、2 0和 10ng/ml。Annexin V FluosStainingKit试剂盒购自罗氏公司。人膀胱癌EJ细胞用含 10 %小牛血清 ,10 0U/ml青霉素和10 0 μg/ml链霉素的RPMI 16 4 0 37℃、5 0ml/LCO2 、饱和湿度下培养。细胞按 5× …     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与胰腺癌及相关药物研究

自肿瘤坏死因子家族的新成员肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体被发现以来,它一直是近些年来在肿瘤研究方面的热点.本文综述了近些年肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在胰腺癌方面的相关研究进展,从肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导胰腺癌肿瘤细胞凋亡机制人手,简要介绍胰腺癌对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的耐药机制.并根据目前已认同的耐药机制...     

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体联合化疗药物治疗膀胱癌的研究

目的　探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 (TRAIL)治疗膀胱肿瘤的作用 ,以及与化疗药物的协同作用。方法　将T2 4及 5 63 7膀胱肿瘤细胞接种至 96孔培养板后分别加入浓度为1、10、10 0 μg/L的TRAIL ,0 .1、1.0、10 .0mg/L的阿霉素 (ADM )和丝裂霉素 (MMC) ,不同浓度的TRAIL、ADM、TRAIL和MMC ,噻唑蓝比色 (MTT)法分别检测肿瘤细胞的生存率。将膀胱肿瘤细胞接种至 12孔板 ,培育 2 4h后加入不同浓度的TRAIL、ADM、MMC、TRAIL联合ADM、MMC。用流式细胞术检测不同处理组肿瘤细胞的凋亡率和死亡率。结果　 10 0 μg/LTRAIL引起T2 4、5 63 7细胞的凋亡率分别为 2 0 .1%、45 .3 % ,与无药物组 1.1%、3 .5 %的凋亡率比较差异有非常显著性(P <0 .0 1)。单独运用 10mg/LMMC、ADM对T2 4、5 63 7的抑制率分别为 3 6.0 %、44 .1%、2 6.7%、3 0 .2 % ;而 10 0 μg/LTRAIL和 10mg/LMMC、ADM联合后对T2 4、5 63 7的抑制率分别达到 5 8.4%、73 .7%、90 .7%、88.2 % ,两者有明显的协同作用 (P <0 .0 5 )。结论　在体外实验中 ,TRAIL可通过诱导肿瘤细胞的凋亡而产生抗膀胱肿瘤的作用 ;TRAIL与化疗药物ADM、MMC有协同抗肿瘤作用     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体治疗肿瘤存在的问题及策略

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是近几年发现的TNF超家族成员 ,为Ⅱ型跨膜蛋白 ,能与其受体(TRAILR)结合 ,启动细胞内的信号转导 ,激活Caspase级联反应诱导细胞凋亡。这种新发现的凋亡诱导途径有重要的生物学意义 ,尤其是在抗肿瘤方面具有选择性杀伤肿瘤细胞同时赦免正常细胞的作用 ,因而引起了人们的高度重视 ,认为有望找到一个全新的肿瘤治疗方法。然而 ,随着对TRAIL研究的深入 ,TRAIL治疗肿瘤可能存在的障碍不断出现 ,人们对TRAIL能否成为一个理想的抗癌新药提出质疑 ,现从TRAIL治疗肿瘤可能存在的问题作一综述 ,并…     

槐耳清膏联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肝癌细胞生长的影响

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）联合中药槐耳清膏对肝癌细胞株HepG2及肝癌耐阿霉素（ADM）细胞株（HepG,．ADM）的作用。方法通过培养液中ADM的浓度梯度递增法筛选培养,建立肝癌细胞HepG2-ADM耐药细胞株;TRAIL,TRAIL＋ADM,TRAIL＋槐耳清膏分别处理肝癌细胞株HepG2、HepG,-ADM及正常肝细胞株L02,噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果联合用TRAIL（100ng／L）和槐耳清膏（1．0g／L）处理肝癌细胞株HepG2-ADM及肝细胞株L02,MTT显示对前者增殖有明显抑制作用,而对后者无明显作用;流式细胞仪检测TRAIL联合槐耳清膏处理HepG2、HepG2-ADM,可诱导细胞凋亡,与其他组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论槐耳清膏可显著增强TRAIL对HepG2及HepG2-ADM的杀伤作用,而对正常胎肝细胞株L02杀伤作用轻微,TRAIL和槐耳清膏联合应用可望克服肿瘤细胞中存在的化学治疗药物耐药和TRAIL耐受问题。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体与抗肿瘤治疗

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｒｅｌａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｉｎｇｌｉｇａｎｄ ,ＴＲＡＩＬ)是近几年发现的肿瘤坏死因子 (ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ,ＴＮＦ)超家族成员 ,为Ⅱ型跨膜蛋白 ,能与其受体 (ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｒｅｌａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｉｎｇｌｉｇａｎｄｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＴＲＡＩＬＲ)结合 ,启动细胞内的信号转导 ,激活半胱—天冬氨酸蛋白酶 (ｃｙｓｔｅｉｎｅｃｏｎｔａｉｎｉｎｇａｓｐａｒａｔｅｓｐｅｃｉ…     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体介导脓毒症免疫抑制的研究进展

背景 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis induced ligand,TRAIL)是肿瘤坏死因子超家族成员之一,其与受体DR4/DR5结合可以诱导肿瘤细胞的凋亡,而备受关注. 目的 总结TRAIL通路在脓毒症中的可能机制,探讨其在脓毒症疾病过程中的调控作用. 内容 脓毒症动物模型的研究发现,TRAIL可以加快活化的中性粒细胞发生凋亡并参与脓毒症免疫耐受的形成. 趋势 TRAIL受体在肿瘤、自身免疫性疾病、感染、心血管疾病、器官移植等领域的研究越来越多,作用机制也在不断地阐明.TRAIL及其受体在脓毒症疾病过程中发挥重要调节作用.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对裸鼠胃癌移植瘤的生长抑制作用与死亡相关蛋白3的关系

目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对裸鼠胃癌移植瘤的生长抑制作用,探讨死亡相关蛋白3(DAP3)与其的关系。方法建立人胃癌细胞株BGC-823裸鼠移植瘤模型；观察不同剂量的TRAIL(0、1、5、10mg/kg体重)对移植瘤的生长抑制作用；流式细胞仪测定细胞周期及凋亡情况；Western blot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测DAP3蛋白和DAP3 mR- NA表达情况。结果5 mg/kg体重和10 mg/kg体重两组的瘤重分别为(2．57±0．35)g和(2．49±0．26)g,均低于1 mg/kg体重组(3．23±0．32)g和对照组(3．57±0．47)g,前两组的细胞增殖指数分别为(36．69±5．16)%和(39．69±6．13)%,低于对照组(48 06±6．99)%；Western blot和RT- PCR法分别测得前两组中DAP3蛋白和mRNA的表达高于1 mg/kg体重组和对照组。结论TRAIL可有效抑制裸鼠胃癌移植瘤的生长,其作用机制可能与诱导DAP3表达有关。     

肿瘤坏死因子相关诱导配体受体在前列腺癌组织中的表达

目的：研究肿瘤坏死因子相关诱导配体受体在前列腺癌组织中的表达情况。方法：应用RT—PCR检测20例良性前列腺增生和20例前列腺癌组织中的死亡受体DR4、DR5、假受体DcRl、DcR2的mRNA表达。结果：良性前列腺增生组织中DR4、DR5、DcR1均为85％(17／20)；DcR2为75％(15／20)。前列腺癌组织中死亡受体DR41、DR5为80％(16／20)；DcR1阳性表达率为15％(3／20)；假受体DcR2于前列腺癌组织中未见表达。结论：前列腺癌组织中的DcR1、DcR2受体缺乏表达，DcR1、DcR2在前列腺癌的凋亡调控途径中可能有重要作用。     

TRAIL受体在人骨肉瘤组织中的表达

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体在骨肉瘤细胞中的表达情况。方法 应用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)对22例骨肉瘤组织标本、MG—63骨肉瘤细胞株、U251脑胶质瘤细胞株以及正常人外周血淋巴细胞TRAILR1—R4 mRNA表达进行检测。结果 22例骨肉瘤组织标本中15例同时表达TRAILR1、-R2和-R3，4例同时表达TRAIL-R1和-R2，只表达TRAIL-R1或-R2者3例，所有标本中均未检测到TRAIL，-R4表达；MG-63骨肉瘤细胞株、U251脑胶质瘤细胞株以及正常人外周血淋巴细胞则均检测到TRAILR1、-R2和-R3的联合表达。结论 死亡受体TRAIL-R1，R2在骨肉瘤中的普遍表达，是TRAIL诱导骨肉瘤细胞凋亡的分子基础；死亡受体和诱骗受体的差异性分布，并非TRAIL对选择性杀伤肿瘤细胞的关键性因素，可能还受其它因子调控。     

赫赛汀联合丝裂霉素C对人膀胱癌T24细胞生长的抑制作用

目的 探讨赫赛汀(Herceptin,HER)联合丝裂霉素C(MMC)对HER-2/neu基因高表达人膀胱癌细胞株生长的抑制作用.方法 应用免疫细胞化学法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测膀胱癌T24细胞株HER-2/neu的表达;采用噻唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度HER(10、20、40、80、160μg/L)、MMC(4、8、16、32、64μg/L)及联合用药对人膀胱癌T24细胞株体外生长的抑制率并进行比较.结果 应用免疫细胞化学方法及RT-PCR法检测证实HER-2/neu在膀胱尿路上皮癌T24细胞株高表达;单用HER于72 h出现细胞抑制(72 h时各浓度组分别与48 h时比较,均P<0.05);HER和MMC联用在24、48、72 h基本上均表现为协同作用(q值1.264～3.473),在96 h呈相加作用(q值0.913～1.138).结论 HER-2/neu在膀胱尿路上皮癌T24细胞株高表达;HER单药对T24细胞有轻度抑制作用,且起效慢(72 h);与MMC联合应用能协同抑制T24细胞生长.     

白细胞介素12通过抑制survivin表达加强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导的肝癌细胞凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对肝细胞癌(HCC)的治疗作用,以及TRAIL耐药的可能机制和逆转耐药方案。方法 采用原位杂交方法观察HCC与正常肝组织中TRAIL的表达差异。采用不同浓度的sTRAIL(可溶性)处理HCC细胞株及真核表达质粒pIRES-EGFP-sTRAIL转染HCC细胞株,观察sTRAIL的抑癌疗效。建立裸鼠肝癌模型,观察sTRAIL的体内抑癌作用。进一步,检测HCC中survivin的表达并采用反义寡核苷酸封闭治疗。最后,观测sTRAIL和IL-12联合抗癌效果。结果 肝癌组织DR表达量显著强于正常肝组织DR表达量。60例肝癌组织中54例不表达诱捕受体DcRl,25例不表达DcR2,而20例正常肝组织均表达DcR。两种．HCC细胞株中DcR1表达缺失。经sTRAIL(100ng/ml)处理24h,HCC细胞凋亡发生率约10％,而Jurkat细胞凋亡率达70％以上。体外pIRES-EGFP-sTRAIL转染对肝癌细胞杀伤作用不敏感。体内直接瘤体注射pIRES-EGFP-sTRAIL可对裸鼠肝癌无明显抑制作用。HCC高表达survivin,反义寡核苷酸封闭可部分逆转TRAIL耐药。IL-12使survivin表达明显下调,显著加强TRAIL对HCC细胞的杀伤作用。结论 HCC对TRAIL诱导的凋亡有耐药现象。survivin参与HCC对TRAIL的耐药机制,反义寡核苷酸封闭可部分逆转TRAIL耐药。IL-12可通过抑制siurvivin表达增强TRAIL对HCC杀癌作用。联合基因治疗(如TRAIL和IL-12基因)可能成为一种有前途HCC治疗方案。     

脂质体介导的HSV-TK基因治疗人膀胱癌

目的探讨HSV－TK基因/GCV系统对人膀胱癌细胞的杀伤作用．方法以潮霉素磷酸转移酶和HSV-HK的融合基因（HyTK）作为目的基因,利用阳离子脂质体将其转入膀胱癌细胞株,检测其表达及GCV对转基因细胞的杀伤作用。结果RT-PCR检测证实HyTK在转基因细胞的表达,MTT法测定示GCV对EJ／HyTK细胞有明显的杀伤作用;其IC50值为2.4mg／L,而对其亲代EJ细胞无明显毒性（P＜005）。按不同比例混合EJ／HyTK细胞和亲代EJ细胞,发现GCV不仅能杀伤转入TK基因的细胞,而且对其周围未转基因的膀胱细胞存在旁观者效应。结论HSV－TK基因／GCV系统可作为膀胱癌基因治疗的一种有效方法。     

TRAIL受体在膀胱癌中的表达及意义

目的：了解肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）受体在膀胱癌组织中的表达及意义。方法：采用RT－PCR及Northern blot方法检测TRAIL受体在膀胱癌组织及正常膀胱粘膜中的表达。结果：死亡受体DR4、DR5在膀胱癌组织及正常膀胱粘膜中呈强表达,候受体DcR-1在正常膀胱粘膜呈强表达,假受体DcR-2未见表达。结论：TRAIL基因在膀胱移行上皮细胞癌凋亡机制中可能发挥重要作用。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体联合丁酸纳诱导肝癌HepG-2细胞凋亡研究

目的 观察肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)与丁酸纳(NaB)联合应用对肝癌细胞HepG-2的抑制作用.方法 将HepG-2细胞悬液接种于96孔培养板后,分别或联合加入不同浓度的NaB(1.0、2.5、5.0 mmol/L)和TRAIL(10、100、500、1000μg/L),应用噻唑蓝(MTT)比色法检测其对HepG-2细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内DR4和DR5 mRNA的表达水平.结果经不同浓度的TRAIL处理后,HepG-2细胞生长抑制率和凋亡率分别为(4.5±1.3)%和3.2±0.7)%,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).NaB对HepG-2细胞生长有明显抑制作用,且随着NaB浓度从1.0mmol/L升高到5.0mmol/L时,抑制率从(37.6±2.6)%升高到(58.4±3.0)%,各浓度组间差异有统计学意义(P<0.05),NaB浓度为2.5 mmol/L时的凋亡率为(26.7 5.2)%.联合应用NaB和TRAIL能够明显的提高HepG-2细胞的生长抑制率和凋亡率,与同等浓度的NaB或TRAIL单独应用比较,差异有统计学意义(P<0.05).HepG-2细胞经过NaB作用后,其DR5 mRNA的表达水平明显的高于对照组.结论 HepG-2细胞对单独应用TRAIL诱导的凋亡不敏感,NaB可通过上调HepG-2细胞内DR5 mRNA的表达而增强HepG-2对TRAIL的敏感性.     

携带人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因的腺病毒载体的构建及体外抗肿瘤活性的研究

目的　构建携带人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL)基因的腺病毒载体 ,评价TRAIL对人肺癌、肝癌细胞的基因治疗功效。方法　构建携带人TRAIL基因的腺病毒Ad hTRAIL ,感染人肺癌细胞株H 460、A5 49,人肝癌细胞株Hep3B、HepGII以及人正常肝细胞株WRL 68,人正常成纤维细胞株MRC 5 ,通过酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测hTRAIL的表达 ,并进行四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测其杀伤肿瘤细胞的效能。结果　成功构建携带人TRAIL基因的增殖缺陷型腺病毒载体Ad hTRAIL ,感染H 460、A5 49、Hep3B、HepGII、WRL 68细胞 ,72h后上清中TRAIL表达量分别为 3 2 .75、2 4.5 3、3 4.0 2、3 2 .89、17.0 8μg/L。在MOI =1时 ,Ad hTRAIL即可引起肿瘤细胞明显凋亡 ,而在MOI =10 0时对正常细胞WRL 68、MRC 5也没有明显杀伤作用。结论　腺病毒载体携带人TRAIL基因在肿瘤基因治疗方面有非常广阔的应用前景。     

逆转录病毒介导HyTK基因治疗膀胱癌的实验研究

目的 了解逆洋病毒介导的潮霉素磷酸转移酶和ＨＳＶ－ＴＫ的融合基因（ＨｙＴＫ）的基因转移移联合更昔洛韦（ＧＣＶ）对膀胱癌细胞的杀伤作用。方法 构建重组质粒ＰＬ（ＨｙＴＫ）ＳＮ,应用非脂质体基因转导系统ＦｕＧＥＮＥ＾ＴＭ６及“乒乓效应”（ｐｉｎｇ－ｐｏｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ）,获 滴度重组病毒并转染膀胱朱ＥＪ／ＨｙＴＫ的杀伤作用。结果 本文实验逆转录病毒的效率为３５％左右,Ｓｏｕｔｈｅｍ Ｂｌｏｔ、     

肿瘤坏死因子与可溶性肿瘤坏死因子受体在膀胱肿瘤中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子（TNF）和可溶性肿瘤坏死因子受体（STNFR）与膀胱肿瘤生物学行为的关系。方法测定26例膀优移行细胞癌患者和20例正常对照者血清中TNF和STNFR水平。结果发现膀胱肿瘤患者血TNF水平与对照组相比差异无显著性（P＞0．05）,而STNFR水平显著高于对照组（P＜0．001）,并随着临床分期的增加而升高,巨术后2周时显著下降（P＜001）;TNF与STNFR水平之间无显著相关关系。结论STNFR抑制了TNF生物学活性而降低了机体的免疫功能,并可作为评估病情严重程度和预后的指标。