体外扩增核酸技术进展及其应用

<正> 新近诞生的聚合酶链锁反应(Polymerase ChainReaction,PCR)及改进的Q-beta复制酶反应(Q-betaReplicase Reaction,QBRR)等系列相关技术,是一种高效能的分子生物学技术,对核酸序列进行体外酶扩增,这一指数扩增效能可达10~7一10~9甚至能检测到一个单独的核酸分子,堪称生命科学史上的一场新技术革命。 一、PCR技术进展 它是一种模拟天然DNA复制过程,以耐热DNA聚合酶(Tag酶)催化多轮次链延伸反应为基础的体外扩增特异性DNA片段的一种方     

聚合酶链反应DNA扩增对活动性肺结核的诊断价值

为探讨聚合酶链反应(PCR)DNA扩增对诊断活动性肺结核的临床价值,本文用PCR技术扩增结核杆菌特有的MPB64蛋白基因序列,对121例病人临床标本进行检测。发现34例活动性肺结核中有28例PCR阳性;疑诊为肺结核者33例中有18例阳性;非结核肺疾患54例中有10例阳性,其中有肺结核既往史者阳性6例,有结核接触史者阳性3例。提示PCR阳性并非为活动性肺结核所特有。     

血吸虫病核酸诊断技术的研究进展

血吸虫病是一种危害严重的重要人兽共患寄生虫病.由于多年积极有效的防治,血吸虫的感染率和感染度明显下降,传统的病原学和免疫学诊断方法已无法满足疫区查病的需要.近年来,国内外研究者们发展了一些针对血吸虫来源DNA的核酸诊断技术,显示了很好的应用前景.该文就核酸检测在血吸虫病诊断中的最新进展进行综述,主要包括靶DNA片段的选...     

聚合酶链反应诊断结核性腹膜为的评价

评价聚合酶链反应方法对结核性腹膜炎的诊断价值。方法 用ＰＣＲ技术检测３０例结核腹水中结核分支村菌ＤＮＡ。并与腹水涂片抗酸染色及酶联免疫吸附试验检测腹水中抗ＰＰＤ抗体进行比较。结果 ＰＣＲ的阳性率为６０％，特异性９４．４％，ＥＬＩＳＡ法阳生率６３．３％，特异性７２．２％涂片镜检均为阴性。     

聚合酶链反应快速诊断结核性胸腔积液的研究

聚合酶链反应快速诊断结核性胸腔积液的研究赵瑞贞，袁淑平，李冀文对７８例胸水标本行聚合酶链反应（ＰＣＲ）结核菌检测，以探明其诊断价值。结核性胸液组共５４例，男３９例，女１５例，年龄６～７８岁。诊断符合下列之一标准：（１）胸液、痰涂片和（或）结核菌培养（...     

聚合酶链反应在淋巴结结核诊断中的应用

聚合酶链反应在淋巴结结核诊断中的应用梁树旗李江珍李明吾对象７３例颈部包块患者中男２４例，女４９例。年龄３～７９岁。淋巴结结核组３５例。根据病史、临床表现、体征、实验室检查及其他检查结果诊断。包括结核纯蛋白衍生物（ＰＰＤ）皮试阳性、血沉加快、胸片检查发...     

链置换扩增技术在结核病诊断中的应用

目的探讨链置换扩增（SDA）技术检测结核分枝杆菌复合群（MTBC）的临床意义和可信性。方法应用SDA技术与荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR），直接检测了453份结核性样本，其中痰标本332份、胸腔积液78份、脑脊液43份。结果332份痰标本培养阳性131份，其中110株（涂阳88份）为MTBC，21株（涂阳20份）为非结核分枝杆菌。在110份证实有MTBC、21份证实有非结核分枝杆菌生长的样本中，SDA和FQ-PCR的敏感性分别为99．1％和95．2％，特异性分别为94．6％和95．2％。在311例结核分枝杆菌感染的患者中，SDA和FQ-PCR的阳性率分别为55．3％（172／311）和47.0％（146／311）。121份结核性胸腔积液、脑脊液样本中，分枝杆菌阳性20例，经鉴定其中19例为结核分枝杆菌，1例为非结核分枝杆菌，SDA和FQ—PCR检测的阳性率分别为43．4％（52／120）和33．4％（40／120）。SDA技术设立的内扩增质量控制（IAC）可确保检测结果的准确性。结论自动检测分析系统能快速、特异地检测临床样本中MTBC，设立IAC可提高结果的可信性。     

耻骨联合、坐骨结核1例

耻骨联合结核属于少见的骨关节结核类型。据国外统计，其发病率仅占骨关节结核的0．09％～0．53％。现将我院门诊诊治的耻骨联合、坐骨结核1例报告如下。     

Clinical study of polymerase chain reaction technique in the diagnosis of bone tuberculosis]

OBJECTIVE: To evaluate the clinical value of polymerase chain reaction (PCR) technique in diagnosis of bone tuberculosis. METHODS: PCR, standard light-microscopy and standard culture technique were used to detect Mycobacterium tuberculosis in samples obtained from 60 patients with bone tuberculosis and 20 patients without bone tuberculosis. In the meantime, some factors affecting PCR result were analysed and methods to deal with them were discussed. RESULTS: In the group of 60 patients with bone tuberculosis, the positive rate was 83% in PCR technique, 3% in standard light-microscope technique and 7% in the standard culture technique. A statistically obvious difference was seen (P < 0.005). In the group of 20 patients without bone tuberculosis, 2 cases showed positive in PCR technique, none in the other methods. Specificity of PCR technique in a blind comparison study indicated 100%. The whole process of PCR amplification is fully automatic and can be finished within several hours, and the detection time is considerably reduced. CONCLUSIONS: PCR technique is a rapid, specific, sensitive and simple method for detection of mycobacterium tuberculosis in sample of bone tuberculosis, and it is of great value in the diagnosis of bone tuberculosis and differentiating bone tuberculosis from other bone diseases.     

结核分支杆菌DNA的单管巢式聚合酶链反应检测

目的探讨单管巢式聚合酶链反应（ＳＮＰＣＲ）检测石蜡包埋组织结核分支杆菌ＤＮＡ的特异性和敏感性。方法应用普通ＰＣＲ（ＧＰＣＲ）、双管巢式ＰＣＲ（ＤＮＰＣＲ）和ＳＮＰＣＲ对结核分支杆菌ＢＣＧ和３０例结核性淋巴结炎石蜡包埋组织进行结核分支杆菌复合群ＩＳ６１１０特异插入序列片段ＤＮＡ检测。结果ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ检测ＢＣＧＤＮＡ均于１５ｆｇ以上呈现阳性结果，其敏感性明显优于ＧＰＣＲ（４８０ｆｇ）。ＧＰＣＲ、ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ检测３０例结核性淋巴结炎阳性率分别为４３％、１００％和１００％，抗酸染色阳性率（１０％）与３种ＰＣＲ法相比差异有非常显著意义（均Ｐ＜０．０１）。ＧＰＣＲ阳性率与ＤＮＰＣＲ和ＳＮＰＣＲ相比差异亦具非常显著意义（均Ｐ＜０．０１）。ＳＮＰＣＲ阳性率与ＤＮＰＣＲ相同。结论巢式ＰＣＲ检测淋巴结石蜡包埋组织结核分支杆菌的敏感性显著高于ＧＰＣＲ，其中ＳＮＰＣＲ具有与ＤＮＰＣＲ相同的特异性和敏感性，并具有更大的实用价值。     

聚合酶链反应检测肺结核患者外周血单个核细胞中结核分 …

探讨外周血单个核细胞中结核分支杆菌ＤＮＡ检测在肺结核诊断中的价值。方法采用改良Ｔｒｉｔｏｎ－ｘ－１００法分离，制备单个核细胞中模板，ＤＮＡ，聚合酶链反应扩增结核分支杆菌２４０ｂｐ基因片段，同时分析了影响ＰＣＲ结果的有关因素。结果８９例肺结核患者的血标本，８４例肺结核患者的痰标本中，结核分支杆菌ＤＮＡ阳性率分别为７３％和５７％；８４例肺结核患者外周血，痰标本配对检测总阳性率可达８７％。     

巢式聚合酶链反应检测支气管内膜结核患者活检组织中结核 …

目的 了解巢式聚合酶链反应（ＮＰＣＲ）技术对支气管内膜结核的诊断价值。方法 应用巢式聚合酶链反应（ＮＰＣＲ）对６７份支气管内膜活检组织进行结核分支杆菌ＤＮＡ检测。并与病理检查,刷检涂片,支气管镜检后痰涂片和痰培养结果比较,对照为４３例支气管肺癌患者,结果６７例支气管内膜结核活检组织病理检查,刷检涂片,支气管镜检“激惹”后痰涂片,镜检术后痰培养及ＮＰＣＲ检测阳性率分别为１３％,１９％,２２％,１５％     

实时定量聚合酶链反应技术在鉴别结节病与增殖性结核病中的应用

目的利用实时定量聚合酶链反应（PCR）方法检测结节病和结核病病理组织中结核分枝杆菌DNA，以探讨结核分枝杆菌在结节病发病中的作用及本方法在结节病与增殖性结核病鉴别中的应用价值。方法以上海市肺科医院1998年1月至2003年12月住院患者76例为研究对象，其中结核病组30例、结节病组31例和正常对照组（其他疾病）15例，利用定量PCR检测用石蜡包埋的淋巴结或肺组织中结核分枝杆菌DNA，并以胎鼠肺组织作为阴性对照。结果结核病组结核分枝杆菌DNA检出的阳性率（30／30）明显高于结节病组（6／31）和正常对照组（2／15），结节病组与正常对照组结核分枝杆菌DNA检出的阳性率无明显差别。结核病组结核分枝杆菌DNA检出的绝对和相对拷贝数明显高于结节病组和正常对照组，结节病组与正常对照组无明显差别，而胎鼠肺组织中未检出结核分枝杆菌DNA。结论本研究结果不支持结核分枝杆菌感染与结节病的相关性。实时定量PCR法检测石蜡包埋病理组织中结核分枝杆菌DNA可作为鉴别增殖性结核和结节病的方法之一。     

Use of polymerase chain reaction in the diagnosis of abdominal tuberculosis

BACKGROUND: Early diagnosis and prompt treatment of abdominal tuberculosis is vitally important as it greatly reduces disease and treatment related morbidity and even mortality in extreme cases. A polymerase chain reaction (PCR) test was evaluated for its feasibility as a diagnostic tool in abdominal tuberculosis (TB) in the Indian scenario. METHODS: PCR for the identification of M. tuberculosis amplified a 340 bp nucleotide sequence located within the 38 kDa protein gene of M. tuberculosis. Tissues for processing were obtained from patients suspected to have abdominal TB. These were from various sources such as abdominal lymph nodes, segments of intestine and bowel obtained at various times and in different ways such as laparoscopy, colectomy, bowel and lymph node resection. Fifty such patients had their tissues sent for PCR. RESULTS: PCR results were compared with histopathology (HP). Of the 50 samples, 31 were positive for abdominal TB by HP whereas 30 were positive by PCR. Twenty-four of these were positive for both HP and PCR while of the seven samples positive for HP, five were negative and two gave inhibition by PCR. Six samples negative by HP were positive by PCR. CONCLUSION: This study demonstrates that PCR can be used as an effective tool to diagnose abdominal TB.     

聚合酶链反应对菌阳肺结核治疗的监测

目的探讨痰菌阳性肺结核患者在治疗期及停药２年内痰结核分支杆菌及其ＤＮＡ阴转情况与复发的关系以及聚合酶链反应（ＰＣＲ）对菌阳肺结核患者治疗的监测价值。方法用ＰＣＲ技术、涂片及培养法对８７例菌阳肺结核于治疗期每月检测１次，停药期继续随访２年。结果痰结核分支杆菌ＰＣＲ转阴时间通常比涂片和培养迟１～３个月，痰含菌量越多，ＰＣＲ持续阳性时间越长。８７例中１０例（１１％）ＰＣＲ持续阳性１年以上，其中３例（３０％）分别于停药后８、１２、１６个月时复发，１例ＰＣＲ已转阴病例于１８个月时复发。此４例均有痰菌复阳，胸片示病灶增多而再次接受治疗。结论ＰＣＲ用于临床疗效观察比涂片、培养实用，对估计有可能复发的病例有一定帮助。     

快速免疫色谱测定法在骨关节结核诊断及鉴别诊断中的价值

目的探讨快速免疫色谱法对活动性骨关节结核的诊断价值。方法采用ＩＣＴ快速免疫色谱法检测７５例活动性骨关节结核、６９例以肿瘤为主的骨病患者及７２名正常人血清中的抗体。结果骨关节结核组阳性率为８０％，其中脊柱结核阳性率为９０％，脊柱以外的关节结核阳性率为６１％，合并其它部位结核阳性率为７６％；骨病组３例阳性，正常组２例阳性，假阳性率分别为４％和３％。结论ＩＣＴ快速免疫色谱法是骨关节结核诊断和鉴别诊断的一项有用的辅助手段     

血结核抗体和PPD试验对肺结核的临床诊断价值

目的 对血结核抗体和PPD试验用于肺结核诊断的价值进行评估。方法 100例肺结核患100例肺癌对照组患的血清用“TB－CHECK－1”精材料法检测血结核抗体，同时进行PPD测试。结果 100例肺结核患结核抗体的敏感性力为88％，PPD试验的敏感性为84％，特异性分别为92％，57％。结论 血结核抗体对肺结核的诊断是快速、方便、敏感及特异的，可用作菌阴肺结核的辅助诊断方法，与PPD试验联合应用则效果更佳。