内源性硫化氢在糖尿病大鼠肾脏的变化及作用

新型内源性气体信号分子-硫化氢(内源性H₂S)具有类似氧化亚氮(nitric oxide,NO)的某些特征,如松弛血管、抑制血管平滑肌细胞增生、调节血管平滑肌细胞张力等作用.本系列研究观察了糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)大鼠肾脏内源性H₂S的变化以及与H₂S合成酶-半胱氨酸胱硫醚2β2合成酶(cystathionine 2β2 synthase, CBS)、胱硫醚2γ2裂解酶(cystathionine 2γ2 lyase, CSE)的关系,对DN大鼠肾脏病理改变的影响,对成肌纤维细胞特征性标志物-a平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin, α-SMA)和细胞外基质成分-纤维粘连蛋白(fibronectin, FN)在大鼠肾组织分布和表达的影响,来探讨内源性H₂S在糖尿病肾病发病机制中的作用.结果显示:1DN大鼠内源性H₂S量明显减少,肾脏CSE的表达亦明显减少.2内源性H₂S的减少与DN大鼠临床表现和肾脏病理改变密切相关.3DN组大鼠肾组织中α-SMA 和肾小球基质中FN均增加,分布增多,补充外源性H₂S后,α-SMA和 FN明显下降.DN大鼠肾脏内源性H₂S降低.肾脏CSE的减少可能是导致DN大鼠肾脏内源性H₂S降低的直接因素.外源性补充H₂S可抑制糖尿病肾病大鼠肾脏中成肌纤维细胞的生成和细胞外基质的过度积聚.提示,内源性H₂S的减少与糖尿病肾病的发生有关.     

内源性H_2S对糖尿病肾病细胞外基质积聚的作用

目的观察糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾组织中纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)分布及含量变化,探讨内源性硫化氢(H2S)对糖尿病肾病细胞外基质积聚的作用。方法雄性SD大鼠28只用数字表法随机分为对照组、DN组、H2S干预组和胱硫醚-γ裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)阻断剂组,每组7只。用免疫组织化学法及Western blotting免疫印迹法检测各组大鼠肾组织中FN分布及含量。结果1)对照组大鼠FN主要分布于系膜基质和肾小囊壁;DN组和CSE阻断剂组大鼠肾小球基质中FN的分布增加;与DN组及CSE阻断剂组比较,H2S组大鼠FN的分布明显减少。2)与对照组比较,DN组大鼠FN的含量增加,Western blotting检测结果显示,DN组(48896±779)与对照组(38531±902)比较差异有统计学意义(P<0.01);与DN组、CSE阻断剂组比较,H2S组中FN的含量下降,Western blotting结果显示,H2S干预组(42737±1196)与DN组(48896±779)、CSE阻断剂组(48252±1068)比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论内源性H2S可抑制DN大鼠肾脏中细胞外基质的过度积聚,延缓糖尿病肾病的病理改变。     

糖尿病大鼠肾脏胱硫醚-β-合成酶和胱硫醚-γ-裂解酶mRNA表达初步研究

目的研究糖尿病大鼠肾脏内源性硫化氢(H2S)的两种合成酶胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase CSE)mRNA表达.方法采用腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病模型,大鼠随机分为两组:正常对照组(C组)和糖尿病组(D组).建模后第8周,测定24 h尿蛋白、血糖及肌酐清除率[1],应用RT-PCR技术检测大鼠肾皮质CBS、CSE mRNA表达.结果糖尿病组大鼠尿蛋白、血糖及肌酐清除率均较正常对照组明显升高(P＜0.05),但肾皮质CBS、CSE mRNA表达较正常对照组无显著性差异(P＞0.05).结论CBS、CSE/H2S系统不能通过两种合成酶mRNA水平的改变而参与糖尿病肾病中血流动力学紊乱发生,其作用通路中的其他环节改变是否参与糖尿病肾病的发生发展尚需进一步证实.     

BrdU标记法探讨糖尿病大鼠H2S与细胞外基质积聚的关系

目的 探讨硫化氢（hydrogen sulfide,H₂S）与糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠肾细胞外基质过度积聚的关系。方法 21只SD大鼠随机分成正常对照组（对照组）、糖尿病肾病组（DN组）、硫化氢干预组（DN+H₂S组）。链脲佐菌素（STZ）法建立糖尿病大鼠模型,DN+H₂S组给予NaHS治疗8周,其他组给予同等剂量的0.9%生理盐水治疗。观察3组大鼠肾脏病理改变、BrdU阳性细胞和α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）分布差异。结果 与对照组比较,DN组大鼠尿蛋白量、相对肾重均明显增多,病理呈典型的DN改变,BrdU阳性细胞比值、肾小球α-SMA表达和分布显著增多（P<0.01）;应用NaHS治疗后,大鼠肾脏DN改变明显减轻（P<0.01）,BrdU阳性细胞比值、肾小球α-SMA表达和分布与正常对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 H₂S可以抑制DN大鼠肌性成纤维细胞增殖,减少α-SMA表达和分布,减缓DN大鼠的肾小球细胞外基质积聚。     

厄贝沙坦对2型糖尿病大鼠肾小管上皮细胞MMP-2/TIMP-2和α-SMA表达关系的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体拮抗剂(ARB)厄贝沙坦对2型糖尿病(T2DM)大鼠肾小管上皮细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)/基质金属蛋白酶组织抑制物-2(TIMP-2)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达关系的影响及其肾脏功能保护的可能机制。方法将实验大鼠随机分成正常对照组(A组)、糖尿病组(B组)、厄贝沙坦治疗组(C组),8周时用免疫组织化学法检测肾脏α-SMA、MMP-2、TIMP-2表达并进行相关分析。结果 (1)与A组比较,B组大鼠肾脏α-SMA、TIMP-2表达明显增强,MMP-2表达减弱(P<0.05);(2)α-SMA蛋白含量与肌酐清除率(Ccr)、MMP-2呈明显的负相关;与TIMP-2蛋白含量之间呈正相关。结论糖尿病肾病(DN)存在肾小管间质纤维化的病理变化,且与肾功能密切相关;MMP-2/TIMP-2与肾小管纤维化密切相关;厄贝沙坦具有延缓肾小管纤维化进展的作用。     

内源性硫化氢与阴茎勃起

内源性硫化氢(H2S)是继一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)之后发现的第3种气体信号分子,通过胱硫醚-β-合成酶(CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)途径合成或产生。它通过直接作用于KATP通道、减少细胞外Ca2+的内流及与睾酮、NO、CO协同作用等方式来舒张阴茎海绵体血管平滑肌,改善血管舒张功能;还可抑制血管平滑肌细胞增殖,促进其凋亡,改善血管重构。因此,深入研究H2S在阴茎勃起调节中的作用,可为治疗勃起功能障碍(ED)提供新的途径。     

黄芪对IgA肾病大鼠肾组织α-SMA和FN的影响

目的：探讨黄芪对IgA肾病大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）表达的影响,以观察黄芪对对IgA肾病的治疗作用及抗肾间质纤维化的机理。方法：复制IgA肾病大鼠模型,并给予黄芪治疗,分析肾脏病理改变,采用免疫组织化学技术检测各组大鼠肾组织中α-SMA、FN的表达情况。结果：IgA肾病模型组大鼠肾小球系膜区、肾小管、肾间质病理损害较正常对照组和黄芪治疗组明显加重,模型组大鼠肾小球系膜区IgA免疫荧光明显增强,与正常对照组（P〈0．001）和黄芪治疗组（P〈0．001）比较均有统计学意义。正常组肾组织有少量α-SMA和FN的表达,而IgA肾病模型组大鼠肾组织中α-SMA和FN表达明显增强,与正常对照组和黄芪治疗组α-SMA（P〈0．05）和FN（P〈0．05）比较差别有统计学意义。结论：黄芪可以抑制IgA肾病大鼠肾组织中α-SMA和FN的表达,从而干预肾间质纤维化,减轻肾脏病理改变,延缓IgA肾病的发生发展。     

厄贝沙坦对糖尿病大鼠肾脏MMP-2／TIMP-2基因表达的影响

目的 观察厄贝沙坦对糖尿病大鼠肾脏基质金属蛋白酶-2和组织金属蛋白酶抑制因子-2表达的影响。方法 SPF级成年雄性SD大鼠随机分为正常对照(N)组(n=8)、糖尿病肾病(DN)组(n=9)和厄贝沙坦(hb)治疗组(DNI)组(n=10)。8周后RT-PCR法观察其在肾组织的表达。结果 二者在N组大鼠有微弱表达，DN组的表达较N组明显增加，DNI组二者的表达较DN组减弱。二者的比值在DN组减少，DNI组升高。结论 早期使用Irb能够调节二者平衡，减少细胞外基质(ECM)聚积，从而发挥肾脏保护作用。     

β-连环蛋白在糖尿病大鼠肾小管中的表达及意义

目的 观察β-连环蛋白(β-catenin)在糖尿病大鼠肾小管中的表达,初步探讨其与糖尿病肾病(DN)发生发展的关系.方法 雄性SD大鼠72只,随机分为正常对照组(C组)和糖尿病组(D组),分别观察2、4、8、12、16和24周.生化方法检测血糖、血肌酐和尿蛋白水平.PAS染色观察肾小管-间质损伤程度.免疫组织化学法检测β-catenin、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤连蛋白(FN)表达,RT-PCR法检测β-catenin mRNA水平.结果 D组各时点血糖、血肌酐和尿蛋白明显高于C组.与C组相比,D组肾皮质β-catenin蛋白和mRNA表达量无明显变化,胞核内蛋白表达明显增强(P＜0.01).C组α-SMA仅在血管壁表达,D组从2周开始,随病程进展闻质细胞胞浆阳性染色逐渐增多,第16周和24周可见少数肾小管表达.FN在D组大鼠肾小管-间质表达从2周开始逐渐增多,与C组比较差异有显著性(P＜0.05).结论 DM大鼠β-catenin蛋白肾小管上皮细胞胞核内表达增强,肾间质α-SMA、FN蛋白表达增多,提示β-catenin可能由于降解减少后胞浆内增多而转移入核,参与了肾小管上皮细胞的转分化过程,促进了DN的发生发展.     

蛋白酶体抑制剂对糖尿病肾病大鼠的治疗作用

目的 糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是一种高糖刺激的炎症性疾病,泛素蛋白酶体是调节炎症细胞因子关键转录因子NF-kB的上游信号系统,拟探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠DN的治疗作用.方法 54只成年SD雄性大鼠随机分为正常对照(normal control, NC)组、糖尿病肾病模型(diabetic nephropathy, DN)组、MG-132治疗组.分别在药物干预的4、8、12周时测定大鼠体重(body weight, BW)、肾重(kidney weight, KW)及体重/肾重指数(kidney weight/body weight index, KI)、血糖(glucose, Glu)、三酰甘油(triglycerides, TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、24h尿蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate, UAER),同时观察肾脏病理学改变.结果 ①与NC组比较,DN大鼠的Glu、TG、TC、24hUAER均明显升高(P<0.05).MG-132治疗可显著降低大鼠的Glu水平、显著减少24hUAER(P<0.05),TG、TC也显著降低(P<0.05).②与NC组大鼠比较,DN组大鼠KW明显增加,KI显著增大(P<0.05).MG-132治疗后KI明显下降(P<0.05).③MG-132治疗DN大鼠的肾脏病理表现,如肾小球基底膜增厚,系膜细胞增生、系膜基质积聚,得以减轻.系膜细胞和肾小管上皮细胞表达α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)明显减少.结论 泛素蛋白酶体途径(ubiquitin proteasome pathway, UPP)可能是治疗DN的有效药物靶点.     

M(E)CANISMES MOL(E)CULAIRES IMPLIQU(E)S DANS L''''ALT(E)RATION DU PH(E)NOTYPE DES CELLULES (E)PITHELIAL(E)S TUBULAIRES PAR LES CALPA(I)NES EXTRACELLULAIRES

Objectif Rechercher les mécanismes moléculaires par lesquels des calpaines extracellulaires af-fectent l'adhérence et la mobilité des cellules épithéliales HK-2 dérivées du tubule proximal humain. Méthodes Western blot pour détecter le clivage des chaines α des intégrines; dosage radioimmunologique pour mesurer l' AMP cyclique intracellulaire; fluorescence-activated cell sorting (FACS) pour tester l' apoptose cellulaire. La morpholo-gie des cellules HK-2 a été observée et photographiée. Résultats (1) L ' exposition des cellules HK-2 à la calpaine μ n'a pas entrainé de clivage des chaines o3 et αV des intégrines; (2)l' exposition des cellules HK-2 à la calpaine μ entrainait une augmentation progressive de l' accumulation intracellulaire d' AMP cyclique (P<0.05) qui était associée une résistance cellulaire à l'apoptose(P <0. 05 ) ; (3)l'addition d'un inhibiteur pharmacologique de la protéine kinase A(PKA) prévenait totalement les modifications d'adhérence et de mobilité cellulaires induites par calpaine μ Conclusion Les calpaines externalisées peuvent modifier l' adherence et la mobilité cellulaires via un mécanisme qui implique l'accumulation d' AMP cyclique et l' activation de la PKA. Par ces mécanismes, les calpaines externalisées pourraient jouer un role dans l'induction de la réparation au cours de l'insuffucance rénale aiguё.     

树枝状聚L-丙交酯-dendron-聚乙二醇-dendron-聚L-丙交酯的降解性能

根据对某化纤企业中水的水质监测,分析了化纤中水的水质特点和应用于循环冷却水所面临的问题,提出了系统水质稳定处理中的缓蚀阻垢要求,研制了针对化纤中水水质特点的高效缓蚀阻垢剂,测试了其在不同条件下的缓蚀阻垢性能,并在实际应用中取得良好的效果,解决了化纤中水回用于循环冷却水系统的腐蚀和结垢问题。     

喷雾(冰冻)干燥法制备钠、锂快离子导体

对两种性能较好的快离子导体Na_3Zr_2Si_2P_3O_(12)(Nasicon)和Li_(1.8)Ti_(1.2)·Cr_(0.8)P_3O_(12)用喷雾干燥法和冰冻干燥法制备粉料和陶瓷烧结,并对样品进行了X射线衍射分析,形貌和显微结构观察以及阻抗谱测量等。实验结果表明:两种方法制备的粉料具有颗粒细,均匀性好,合成温度低等优点。在300℃时,两种样品的电阻半分别为10.05 Ω.cm和94.8 Ω.cm。激活能分别为0.25 eV和0.27ev。     

n-C_(10)H_(22)和n-C_(12)H_(26)的热压力系数及内压

本文测定了n-C_(10)H_(22)和n-C_(12)H_(26)在20—55℃的热压力系数。这些系数可用修正的van der Waals模型来描述式中A和B是液体的特性常数。对于n-C_(10)H_(22):A=339.40×10~(-6)m~3mol~(-1),B=29822×10~(-12)m~6mol~(-2)。对于n-C_(12)H_(26):A=403.06×10~(-6)m~3mol~(-1),B=41818×10~(-12)m~6mol~(-2)。与一般小分子液体和少于八个碳的正构烷不同,它们的B/A~2不再等于0.2610,而是随着碳链的增长而逐渐减小。     

DETECTION DE LA MUTATION DU GENE HMLH1 DANS LE CANCER COLO-RECTAL PARELECTROPHORESE CAPILAILRE ASSOCIEE A LA FLUORESCENCE LASER-INDUITE

Objectif L'objectif de ce travail est d'etablir une methode d'analyse du polymorphisms de la conformation monochaine (PCMC) , capable de detecter la mutation ponctuelle du gene hMLHI dans le cancer colique en utilisant l'l ctrophor se capillaire associee a la fluorescence laser-induite (FLJ-EC). Methodes Les exons 12 du gene hMLHl du sang peripherique de 42 patients de cancer colo-rectal sporadique et 20 sujets sains temoins sont amplifies par la PCR. Le PCMC des produits du PCR est analyse par FLJ-EC. Les echantillons anor-maux ont ete confirmes par sequen age EC. Les effets de la concentration du milieu (LPA) , de la temperature de separationcet du voltage de separation sur le comportement de EC ont ete aussi studies. Resultats L'analyse de PCMC par la methode FLJ-EC a retrouve une mutation heterozygote chez 4 des 42 patients. La mutation ponctuelle de T1151A a ete objectivee par la sequen age EC de ces echantillons, aucune mutation n'a ete retrouvee chez les 20 sujets sains temoins. La separation des pics d'ADN monochainaux a ete facilitee par une legere augmentation de la concentration de LPA (4%-6% ) , une legere baisse de la temperature de separation (20℃) et une legere elevation du voltage de separation (9kV). Conclusion Une concentration adequate de LPA, une temperature de separation appropriee et un voltage de separation bien approprie ameliorent considerablement l'efficacite du FLJ-EC. L'application de cette methode pour detecter la mutation ponctuelle du gene hMLHl est d'une rapidite, d'une efficacite, et d'uneereproductivit consid rabies. Cette methode de realisation facile reste tres prometteur pour le depistage rapide et massive des mutations genetiques.     

急性胰腺炎时XOD和GSH的变化及栀子的影响

以去氧胆酸钠诱发大鼠(200-250g)急性胰腺炎,随机分为三组:正常组,胰炎+盐水组,胰炎+栀子组。观察了急性胰腺炎时黄嘌呤氧化酶(XOD)和还原型谷胱甘(GSH)的变化及栀子的影响。结果显示如下:(1)胰炎时,胰腺组织中 XOD 明显高于栀子组和正常组(P<0.01),而血清中 XOD无显著差异。(2)胰炎+盐水组的胰腺和血清中 GSH 均明显降低(P<0.01)。(3)用栀子治疗后,XOD 和 GSH 与正常相近,表明栀子可能是通过抗自由基产生与清除增强而保护胰腺的。     

绝经后阴道出血45例剖析

目的 :分析绝经后阴道出血 (PostmenopausalbleadingPMB)的原因并探讨其对策。方法 :回顾性病例分析。结果 :2 0 0 0 %的绝经后阴道出血为子宫良性病变 ,但有 2 0 0 0 %为恶性病变 ,应引起高度重视。结论 :绝经后阴道出血患者的年龄和绝经年限与恶性肿瘤发生率间有较明显的正相关关系 ,因此绝经后阴道出血可视为一种危险信号 ,尤其是绝经时间超过 6年者 ,更要提高警惕 ,采取必要的检查手段 ,积极治疗良性疾病 ,预防发生恶性肿瘤 ,做到早期发现 ,早期治疗。