EFFECT OF INTERLEUKIN-1β ON GROWTH HORMONE GENE EXPRESSION AND ITS POSSIBLE MOLECULAR MECHANISM IN RAT MtT/S SOMATOTROPH CELLS

Objective To elucidate the effect of interleukin-1β (IL-1β) on human growth hormone (hGH) gene expression in a rat somatotropic pituitary cell line MtT/S. Methods Stably transfected MtT/S cells were firstly established by transfecting 484-Luc1 plasmid which contained hGH gene promoter -484 to 30 bp and luciferase reporter gene. The effect of IL-1β on hGH gene expression was determined by assaying the luciferase activities. RT-PCR method was also used to determine whether IL-1 recepor mRNA was expressed in MtT/S cells. Results The 103 U/mL IL-1β stimulated secretion and synthesis of GH, and promoted the 5’-promoter activity of GH gene in stably transfected MtT/SGL cells with the action of 1.38 times above the control. Among inhibitors of signaling transduction pathways, mitogen-activated protein kinase kinase (MAPKK/MEK) inhibitor PD98059 (40 μmol/L) and p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) inhibitor SB203580 (5 μmol/L) completely blocked the stimulatory effect of IL-1β, and phosphatidylinositol-3-kinase (PI3-K) inhibitor LY294002 partly abolished the effect of IL-1β. Western blot analysis further confirmed the activation of phosphorylated MEK and p38 MAPK in MtT/SGL cells. Neither over-expression of Pit-1 nor inhibition of Pit-1 expression affected induction of hGH promoter activity by IL-1β. A series of deletion constructs of hGH promoter were created to identify the DNA sequence that mediated the effect of IL-1β, and results showed that the stimulatory effect of IL-1β was abolished following deletion of the -196 to -132 bp fragment. Conclusions IL-1β promotes GH secretion and synthesis in rat MtT/S somatotroph cells. The stimulatory effect of IL-1β on hGH gene promoter appears to require the activation of MEK, p38 MAPK, PI3-K, and a fragment of promoter sequence that spans the –196 to –132 bp of the gene, but it may be unlinked with Pit-1 protein.     

MEK AND p38 MAPK-DEPENDANT PATHWAYS ARE INVOLOVED IN THE POSITIVE EFFECT OF INTERLEUKIN-6 ON HUMAN GROWTH HORMONE GENE EXPRESSION IN RAT MtT/S SOMATOTROPH CELLS

Objective To investigate the effect of interleukin-6（IL-6） on the human growth hormone （hGH） gene expression in a rat somatotropic pituitary cell line MtT/S. Methods The plasmids containing various lengths of hGH gene 5＇-promoter fragments were constructed. Stably transfected MtT/S cells were created by cotransfecting the above plasmids and pcDNA3.1 （＋） with DMRIE-C transfection reagent. After the administration of these cells with IL-6 and/or various inhibitors of signaling transduction path-ways, the luciferase activities in MtT/S cells lysis were assayed to demonstrate the effects of IL-6 on hGH gene promoter activity and possibly involved mechanism. Results The 10^3U/mL IL-6 stimulated GH secretion and synthesis, and promoted the 5＇-promoter activity of GH gene in stably transfected MtT/SGL cells with the action of 1.69 times above the control. Among inhibitors of signaling transduction pathways, mitogen-activated protein kinase kinase （MAPKK/MEK） inhibitor PD98059 （40μmol/L） and p38 mitogen-activated protein kinase （MAPK） inhibitor SB203580 （5μmol/L） completely blocked the stimulatory effect of IL-6. Western blot analysis further confirmed the activation of phosphorylated MEK and p38 MAPK in MtT/SGL cells. Neither over-expression of Pit-1 nor inhibition of Pit-1 expression affected IL-6 induction of hGH promoter activity. A series of deletion constructs of hGH promoter were created to identify the DNA sequence that mediated the effect of IL-6. The results showed that the stimulatory effect of IL-6 was abolished following deletion of the - 196 to - 132 bp fragment. Conclusions IL-6 promotes GH secretion and synthesis by rat MtT/S somatotroph cells. The stimulatory effect of IL-6 on hGH gene promoter appears to require the activation of MEK and p38 MAPK, and a fragment of promoter se- quence that spans the - 196 to - 132 bp of the gene, but may be unlinked with Pit-1 protein.     

喉癌患者外周血树突状细胞的体外培养

目的探讨从喉癌患者外周血大量诱导树突状细胞(Dendritic cells,DCs)的有效方法。方法直接从喉癌患者外周血分离DCs;用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)刺激喉癌患者外周血贴壁单核细胞(PBMCs);检测培养前后DCs表面HLA-DR、B7-2表达水平及DCs诱导T细胞增殖能力。结果联合应用GM-CSF及IL-4可以从PBMCs中诱导大量高免疫活性的DCs,并通过增加其表面HLA-DR、B7-2表达而增强DCs免疫功能。结论用GM-CSF及IL-4可以从喉癌患者外周血中诱导出大量高免疫活力DCs。     

人外周血树突状细胞的体外培养及其影响因素的研究

目的探讨人外周血树突状细胞(Dendritic cells,DCs)的体外培养方法及其影响因素。方法取健康人外周血贴壁单核细胞,加入不同浓度的粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和不同种类的血清,培养7天后用CD83M cAb标记DCs,SP法检测纯度,比较各组DCs的数量。此外,MTT法检测DCs激发T细胞增殖。结果贴壁单核细胞在细胞因子诱导七天后,获得高纯度的能强烈激发T细胞的DCs,而且其培养受细胞因子浓度及血清种类的影响。结论用GM-CSF及IL-4可诱导人外周血贴壁单核细胞生成DCs,其培养受细胞因子浓度及血清种类的影响。     

子宫颈癌患者树突状细胞体内外诱导抗肿瘤免疫

目的探讨子宫颈癌患者的树突状细胞(dendritic cells,DCs)在体内外能否诱导出高效而特异的抗肿瘤免疫应答。方法应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-4(IL-4)从子宫颈癌患者外周血诱导DCs,Hela子宫颈癌抗原致敏,MTT法检测DCs激活的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)对肿瘤细胞的细胞毒作用。皮下接种Hela子宫颈癌建立荷瘤鼠,给予抗原致敏的DCs回输;或先给予DCs免疫,后用癌细胞攻击,观察其抑制肿瘤的效果。结果从子宫颈癌患者外周血诱导的DCs高表达CD86、CD12、HLA-DR、CD54和CD83,激活的CTLs在体外特异性杀伤子宫颈癌细胞。DCs回输小鼠具有免疫保护作用,减低成瘤率;又能引起免疫治疗作用,有效抑制肿瘤的生长。结论用GM-CSF及IL-4从子宫颈癌患者诱导的DCs能有效提呈Hela子宫颈癌抗原给T淋巴细胞,并且在体内外诱导出高效而特异的抗肿瘤免疫,有望成为有效的肿瘤特异性免疫治疗新途径。     

S180克隆细胞株的选择及其细胞特性研究

目的 对北京市肿瘤研究所及本实验动物学部保存的S180进行了克隆培养，根据克隆细胞的腹水生长特性，从中选出8株克隆，对不同克隆S180细胞的特性进行研究。方法 免疫组化法测不同克隆细胞的蛋白质分布，流式细胞仪测定不同克隆细胞的DNA含量，扫描电镜观察克隆细胞表面结构，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测克隆细胞的电泳图谱。结果 其中3株克隆从可见腹水之日起，腹水即为血性；1株微显血性；4株在接种腹腔7日内腹水无血性。扫描电镜观察6株克隆细胞表面结构，各具特点，有所不同。流式细胞仪测定6株不同S180克隆细胞DNA含量，分别为8.5, 9.3，7.9，8.5，8.6，8.3pg。免疫组化染色显示不同克隆与11种抗体反应有所不同，一旦与某抗体反应阳性，则阳性细胞比率均在97%以上。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定克隆细胞S1H10及S2D9的电泳图谱，S1H10克隆细胞有33条带，S2D9克隆细胞有30条带。 结论 8株克隆细胞各具特点。     

树突状细胞抗原提呈活化T细胞的机制研究

树突状细胞(Dendritic cells DCs)是一种重要的抗原提呈细胞,关于DCs抗原提呈如何活化T细胞,目前尚不十分清楚。本文应用小鼠脾脏分离到的树突状细胞和腹腔巨噬细胞(MΦ),在LPS的刺激下,观察了DCs和MΦ产生IL-1、TNF的能力,结果表明MΦ可以产生IL-1、TNF,而DCs可产生低浓度IL-1,但不产生TNF;DCs和T细胞共育的上清,观察到在低浓度的IL-2的共同作用下可以明显地促进CTLL-2细胞的增殖活性,提出了DCs对T细胞的活化可能是DCs产生低浓度IL-1触发T细胞,DC-T细胞聚集可以产生白细胞介素2增强因子(IL-2EF),增强T细胞对IL-2的反应性进而活化T细胞,据此提出了DCs活化T细胞的可能机制。     

低氧对大鼠大脑皮质细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的影响

目的 观察低氧环境对大鼠大脑皮质细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的影响.方法 原代培养新生SD大鼠大脑皮质细胞,设1％、4％两个低氧浓度和3h、6h两个低氧处理时间,处理结束后采用ELISA方法检测各组细胞培养液中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量.结果 与相应的常氧(20％氧)对照组相比,1％氧浓度环境处理细胞3h和6h,IL-6含量均下降(P＜0.01,P＜0.05),IL-1β和TNF-α含量变化无统计学意义(P＞0.05).与相应的常氧(20％氧)对照组相比,4％氧浓度环境处理细胞3h,IL-1β、IL-6和TNF-α含量变化均无统计学意义(P＞0.05);处理细胞6h时,IL-1β (P＜0.01)和IL-6 (P＜0.05)均显著下降,TNF-α含量变化无统计学意义(P＞0.05).结论 1％氧浓度环境虽对大脑皮质细胞分泌IL-1β和TNF-α无影响,但可抑制细胞分泌IL-6. 4％氧浓度环境虽对细胞分泌TNF-α无影响,但对细胞分泌IL-1β和IL-6具有抑制作用.     

蛋白S缺乏与脑梗死

目的探讨蛋白S在脑梗死中的改变.方法脑梗死患者42例,健康体检者40例作为对照.使用自动凝血仪检测蛋白S活性,ELISA法检测总和游离蛋白S抗原含量.结果42例脑梗死患者中检出7例蛋白S活性缺乏,其中仅有2例伴有游离蛋白S抗原严重下降.结论脑梗死中存在蛋白S活性缺乏,但并不与游离蛋白S抗原下降相平行.     

甲亢患者~(131)碘治疗前后细胞因子水平的变化分析

目的:探讨甲亢患者131I治疗前后血清细胞因子水平。方法:用放射免疫分析法检测48例131I治疗的甲亢患者治疗前及治疗后3个月外周血白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化。结果:甲亢131I治疗的患者治疗后血清IL-1与对照组及治疗前有差异但无统计学意义;血清IL-6和TNF-α治疗前水平明显高于对照组,治疗后高于对照组;IL-6治疗前水平明显高于治疗后,而TNF-α治疗前水平高于治疗后。结论:131I治疗可影响血清细胞因子的水平。     

生长激素释放多肽通过与生长激素释放因子不同的受体起作用

用固相法合成了生长激素释放因子(GRF),生长激素释放多肤(GHRP)和生长激素释放抑制因子(GRF-AN,D-Arg2-GRF44),并检测了多肽的生物学活性。结果表明1.GRF和GHRP在体内外均可刺激人垂体生长激素(GH)分泌。2.GRF和GHRP体外灌流时均可刺激牛垂体GH分泌。3.GHRP可促进大鼠生长发育。4.GRF-AN可抑制由GRF兴奋的人和动物垂体GH释放,但有较强的选择性,GRF-AN不抑制由GHRP兴奋的GH释放。表明,GRF和GHRP均可兴奋垂体GH分泌,但二者的机制有本质上的区别。     

急性胰腺炎63例血浆炎性因子的变化特点及临床意义

目的:探讨急性胰腺炎患者血浆炎性因子的变化特点及其临床意义。方法:将63例急性胰腺炎患者分为重症急性胰腺炎30例与轻症急性胰腺炎33例两组,同时入选体检中心健康体检人员35例作为对照组,测定三组血浆炎性因子水平,并行三组间血浆炎性因子水平比较。结果:白介素-6、肿瘤坏死因子-α、高敏C反应蛋白水平在重症急性胰腺炎组明显高于轻症急性胰腺炎组及对照组(P<0.05),三种炎性因子水平在轻症急性胰腺炎组明显高于对照组(P<0.05);白介素-6、肿瘤坏死因子-α、高敏C反应蛋白均与APACHEⅡ积分呈显著正相关(P<0.05)。结论:检测血浆炎性因子水平变化对全面及时掌握急性胰腺炎病情及探讨发病机制有重要意义。     

牛初乳复合细胞营养因子对免疫功能的影响

牛初乳复合细胞营养因子（ＣＨＦ,２．５,５．０,１０．０,２０．０μｇ／ｍｌ）可促进ＣｏｎＡ活化的小鼠脾淋巴细胞ＤＮＡ生物合成。小剂量（２０ｍｇ／ｋｇ）口服对２,４,６－三硝基氯苯所致小鼠迟发型变态反应（ＰＣ－ＤＴＨ）有增加作用,２０和４０ｍｇ／ｋｇ给药组对氢化泼尼松所致ＰＣ－ＤＴＨ的抑制可使其恢复至正常水平。ＣＨＦ（２０和４０ｍｇ／ｋｇ口服）对正常小鼠血清溶血素含量有增强作用,对于环磷酰胺所致的抗体产生抑制作用也有一定的恢复作用;大剂量（８０ｍｇ／ｋｇ）还可增加小鼠的碳粒廓清速率,表明ＣＨＦ对细胞免疫有促进作用,能减轻或防止糖皮质激素类药物的免疫抑制作用;对体液免疫和巨噬细胞吞噬功能也有促进作用。     

P物质对大鼠脾细胞免疫功能的影响

目的：研究Ｐ物质（ＳＰ）对脾细胞免疫功能的调节作用。方法：采用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法、放射免疫测定和流式细胞仪等方法,检测了ＳＰ对体外培养的大鼠脾细胞的增殖和分泌ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＴＮＦ功能及Ｔ细胞表型表达的影响。结果：ＳＰ能明显刺激脾细胞的增殖,其中浓度为１×１０－ ４ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ时作用最强;ＳＰ能促进Ｔ细胞ＣＤ分子的表达,使ＣＤ４＋ ／ＣＤ８＋ 升高;ＳＰ能显著促进脾细胞分泌ＩＬ－２,对脾细胞分泌ＩＬ－６具有抑制作用,而对分泌ＴＮＦ无作用。结论：证实了ＳＰ是具有广泛的免疫调节作用的一种神经肽。     

树突细胞在喉鳞癌中的浸润及其临床意义

目的 :定量分析喉鳞癌组织中浸润性树突细胞的密度 ,探讨树突细胞 (DC)在喉鳞癌患者临床分级、分期、淋巴结转移、预后中的作用。方法 :重新制备 4 0例喉鳞癌及 10例喉正常黏膜的石蜡标本 ,应用免疫组织化学LSAB法检测S10 0阳性树突细胞的浸润密度 ,并与临床因素进行统计学分析。结果 :喉鳞癌中S10 0DC细胞的阳性率为 77.5 % ,正常黏膜的阳性率为 10 % ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;S10 0阳性DC浸润程度与喉鳞癌分化程度及分期差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;与淋巴结转移、预后差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :浸润性树突细胞的密度反映了喉鳞癌患者的抗肿瘤免疫状况 ,是判断临床分级、分期的重要指标。     

高原急性重症脑功能损伤患者S-100蛋白的监测及临床意义

目的:探讨急性重症脑功能损伤患者血浆神经系统特异性蛋白S-100(S-100蛋白)动态变化及意义。方法:应用酶联免疫吸附双抗体夹心法对35例高原急性重症脑功能损伤患者发病第1、2、3天血浆S-100蛋白含量进行动态监测,同时测定20例正常对照组的相应变化。将发病第1天血浆S-100蛋白的含量与脑损伤的程度及预后进行相关性分析。结果:1高原急性重症脑功能损伤患者发病第1、2天的血浆S-100蛋白水平均高于对照组(P<0.05),而发病第3天的血浆S-100蛋白水平与对照组无明显差异(P>0.05)。2高原急性重症脑功能损伤组发病第1天血浆S-100蛋白与脑损伤程度及临床预后呈显著正相关(P<0.05)。3S-100蛋白的浓度超过1.0μg/L提示预后不良。结论:S-100蛋白可作为判断高原急性重症脑功能损伤程度、预测临床预后的指标。     

RCS大鼠视网膜色素变性过程中相关细胞因子表达

目的 观察视网膜色素变性过程中,视网膜外节层内组织细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、神经组织蛋白S-100、细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)的表达情况,探讨其在视网膜色素变性过程中的作用及意义.方法 出生后25 d的RCS大鼠10只,雌雄不限,12 h光照-12 h黑暗循环条件下饲养;以同龄SD大鼠10只作正常对照.苏木精-伊红染色和免疫组化法检测视网膜外节等范围内组织细胞TNF-α、S-100、ICAM-1等细胞因子的表达情况.结果 RCS大鼠视网膜组织中TNF-α阳性表达强于SD大鼠,ICAM-1和S100阳性表达弱于SD大鼠.结论 上述细胞因子的变化可能与视网膜色素上皮细胞对视细胞外节盘膜的吞噬、消化功能的改变有关.     

HBV Pre S1蛋白质在酵母细胞中具有转录激活功能

为探讨应用双杂交体系克隆与ＨＢＶＰｒｅＳ１蛋白质结合的肝细胞受体的可行性，我们构建了ＨＢＶＰｒｅＳ１蛋白质与酵母ＧＡＬ４ＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎ融合蛋白质教母表达质粒。通过应用该质粒转化酵母菌ＳＦＹ５２６，检测报道基因产物β－半乳糖苷酶活性，结果表明ＨＢＶｐｒｅＳ１蛋白质在酵母细胞中具有转录激活功能，能否去除ＰｒｅＳ１蛋白质激活动能区域但却保留其与肝细胞受体的结合区域用于酵母功能，能否去除     

阿尔茨海默病患者外周血中性粒细胞/淋巴细胞比值、血清C反应蛋白及白介素6水平变化及其临床意义

目的 探讨阿尔茨海默病(AD)患者外周血中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、血清C反应蛋白(CRP)及白介素6(IL-6)水平变化及其临床意义。方法 选取2016年1月～2018年12月我院收治的AD患者68例作为研究对象(AD组),同期选取血管性痴呆患者30例作为对照组(VD组),同时选取在本院体检健康老年人30例作为健康对照组。根据临床痴呆量表将AD患者分为轻度组、中度组和重度组。比较各组NLR、CRP及IL-6水平,并对结果进行Pearson相关性分析。结果 AD组患者CRP及IL-6水平显著高于VD组和健康对照组,差异有统计学意义(P0.05),AD组与VD组患者外周血NLR水平显著高于健康对照组(P0.05),但两组间NLR水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。不同病情的AD亚组CRP及IL-6水平比较,重度组中度组轻度组,差异均有统计学意义(P0.05);NLR各组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。Pearson相关性分析表明,AD患者NLR与CRP和IL-6呈正相关(r=0.457、0.762,P0.05)。结论 AD患者NLR、血清CRP及IL-6水平升高,且随着疾病的发展血清CRP及IL-6水平出现异常升高,三者可能参与了AD的发病过程,检测NLR与CRP和IL-6水平对评估及治疗AD具有一定参考价值。     

失血性休克患者白介素1、白介素6和肿瘤坏死因子变化与分析

目的阐明失血性休克白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)活性变化,探讨失血性休克免疫调节机制.方法采用放射免疫分析法对9例失血休克和12例普通失血对照进行血清IL-1、IL-6和TNF-α活性检测.结果失血休克组IL-1、IL-6和TNF-α活性较对照组明显增高(P＜0.001),IL-1、IL-6与TNF-α活性正相关(r=0.78,P＜0.01).结论休克过程有免疫因素介导,IL-1、IL-6和TNF-α活性变化可作为判断病情和疗效的一种手段.