N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸抑制大鼠肾间质纤维化的研究

目的观察N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾间质纤维化的的改善作用并探讨其机制。方法将雄性Wistar大鼠36只随机分为假手术组,UUO组,处理组(AcSDKP+UUO),每组各12只。于造模第3、14d各处死大鼠6只,取其梗阻侧肾脏组织行HE染色,光镜下观察肾组织病理改变,计算肾间质纤维化指数。免疫组织化学方法检测其各组肾脏组织转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及a平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,a-SMA)表达,RT-PCR方法检测TGF-β1及a-SMA mRNA含量。结果与假手术组相比,各时间点UUO组大鼠肾脏病理损害进行性加重,AcSDKP处理后可明显减轻UUO组大鼠肾间质纤维化程度(P0.05);免疫组化染色及RT-PCR显示:TGF-β1、a-SMA的蛋白及mRNA表达UUO组和处理组明显多于假手术组,但处理组较UUO组明显减轻(P0.05)。结论 N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)可通过抑制TGF-β1及a-SMA表达,进而抑制大鼠肾间质纤维化,减缓肾纤维化的病程进展。     

洛伐他丁对心肌细胞外信号调节激酶信号传导水平及心脏营养素-1表达的影响

目的：探讨细胞外信号调节激酶（ERK）通路与甲基戊二酰辅酶A（HGM-CoA）还原酶抑制剂的关系。方法：体外培养的大鼠心肌细胞株H9c2（2-1）经洛伐他丁处理24h和5d,然后以免疫印迹杂交检测p-44ERK1、p-42ERK2和总ERK蛋白水平,同时检测心脏营养素-1蛋白水平的变化。结果：洛伐他丁处理24h后,ERK1、ERK2的磷酸化水平分别升高125%（P=0.041）和89%（P=0.034）;处理5d后检测ERK1、ERK2的磷酸化水平分别升高93%（P=0.021）和80%（P=0.046）。培养中的大鼠心肌细胞H9c2（2-1）经过洛伐他丁处理24h或5d后,作为重要炎性细胞因子的心脏营养素-1水平均显著增高,其中,处理24h后增高79.3%（P=0.004）,处理5d后增高34.8%（P=0.014）。选择性抑制ERK之后,洛伐他丁处理导致心脏营养素-1水平的变化显著减弱。结论：洛伐他丁除了具有已知的降脂作用外,亦可能参与心肌细胞炎性反应的调节机制。     

凝血酶信号传导过程中P13-K与MLCK激酶的作用

本研究比较凝血酶受体活化过程中不同浓度的wortmannin对血小板聚集率以及血小板膜表面活化标记物糖蛋白GPIb表达的影响,探讨脂酰肌醇-3-激酶（P13-K）与肌球蛋白轻链激酶（MLCK）在凝血酶信号传递机制中的作用。分别以凝血酶受体活化肽PAR1-AP（SFLLRN）与PAR4-AP（AYPGKF）诱导血小板活化。检测100nmol／Lwortmannin（抑制P13-K）与10μmol／Lwortmannin（抑制MLCK）作用过程中血小板聚集与血小板膜表面糖蛋白GPIb的改变。结果显示：wortmannin作用对两类凝血酶受体诱导血小板活化的过程均有不同程度的影响。100nmol／L的wortmannin部分抑制PAR1-AP引起的血小板聚集,对PAR4-AP诱导的聚集过程没有影响;10μmol／Lwortmannin明显抑制两类PAR肽引起的血小板活化,抑制程度达到60％-80％,仅出现少部分聚集。流式细胞仪检测显示,GPIba的动态分布过程中100nmot／Lwortmannin能部份抑制GPIbα向胞内移动,PAR1—AP刺激后5分钟内wortmannjn起效明显（1、2、5分钟P〈0．05）,对PAR4-AP的反应则稍延迟,在2到10分钟有意义（2、5、10分钟P〈0．05）。10μmol／Lwortmannin对整个PAR活化过程中的GPIba逆转没有任何影响,只对PAR1刺激过程中GPIbcL的恢复起作用,延缓GPIbα重返血小板膜表面的进程;而PAR4-AP作用后各时间段GPIba的动态分布不受10μmol／Lwortmannin任何影响。结论：P13-K与MLCK在凝血酶受体的活化过程中作用不同,P13-K在GPIbat内转的短暂过程中起着重要作用;而MLCK磷酸化仅仅对PAR1受体介导的GPIbα回复起促进作用。     

机械通气患者营养支持中丙氨酰-谷氨酰胺的临床应用

目的 通过给机械通气患者营养支持中添加丙氨酰-谷氨酰胺，研究其对此类患者治疗效果的影响。方法将65例机械通气患者，随机分为两组，给予等热量、等氮量的营养支持，A组加入丙氨酰-谷氨酰胺，B组作对照，测定两组的转铁蛋白、氮平衡、血清白蛋白、总淋巴细胞计数、感染发生率等指标。结果两组的转铁蛋白、氮平衡、血清白蛋白、总淋巴细胞计数相比，差异无统计学意义（P〉0．05），但A组感染发生率较B组低，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论 机械通气患者营养支持中添加丙氨酰-谷氨酰胺能降低其感染的发生率。     

精氨酰琥珀酸尿症家系ASL基因内含子突变

目的对1个MS/MS检测表现为瓜氨酸(Cit)增高的遗传代谢性疾病家系进行基因检测和基因的突变分析。方法采集家系成员外周血,提取基因组DNA,用全外显子测序方法进行基因诊断。对未见报道的新突变构建pcDNA3.1(+)真核表达载体,并在体外培养细胞中用Mini-gene工具验证该突变的致病性。结果先证者精氨酰琥珀酸尿症临床诊断明确,在ASL基因上检测到2个致病突变c.281GT(P.R94L丨p.Arg94Leu)和c.208-15 TA,该2个突变均未见报道;Mini-gene体外表达证实c.208-15 TA可造成剪切异常,导致2号内含子13 bp碱基滞留。结论在1个精氨酰琥珀酸尿症家系中发现了ASL基因2个新的致病突变c.208-15 TA和c.281GT,丰富了ASL基因的突变谱;Mini-gene对内含子突变研究是一种简单有效的工具。     

血小板对人肺癌细胞株A549凋亡的影响及机制初探

目的探讨血小板(PLT)对肺癌细胞株A549的影响及其可能的机制。方法通过流式细胞术检测PLT对A549细胞的凋亡作用;Westernblot检测PLT和A549细胞共培养后A549细胞中ERK1/2、JNK、p-ERK、p-JNK、MMP–2、M M P–9、 B c l–2、 B a x蛋白的表达情况。结果应用流式细胞术的检测结果发现,血小板抑制A 549细胞的凋亡并能阻止化疗药物吉西他滨诱导的A549细胞凋亡。Westernblot结果显示PLT和A549细胞共培养48h后,A549细胞中ERK1/2、JNK、p-E R K、 p-J N K、 M M P-2、 M M P-9、 B c l-2蛋白表达明显增加, B a x蛋白表达明显降低。结论血小板可增加A 549细胞中ERK1/2、JNK、p-ERK、p-JNK磷酸化,增加MMP-2、MMP-9和Bcl-2蛋白的表达;降低Bax蛋白表达,并抑制肺癌细胞株A549的凋亡。血小板可抑制A549细胞的凋亡,且与血小板的浓度呈正相关。     

益活清下法早期联用丙氨酰-谷氨酰胺二肽治疗重症急性胰腺炎临床研究

目的：探讨益活清下法早期联用用丙氨酰-谷氨酰胺二肽治疗重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）的疗效。方法：依据纳入和排除标准,选取我院中西医结合科收治的SAP80例,按1？1随机分成早期组（40例）和晚期组（40例）,早期组入院时便应用丙氨酰-谷氨酰胺二肽治疗;晚期组入院5d后加用丙氨酰-谷氨酰胺二肽治疗。结果：两组入院时Ranson评分、CT评分、APACHEⅡ评分无统计学差异（P〉0.05）,治疗15d后早期组A-PACHEⅡ评分（4.97±2.39分）明显低于晚期组（8.63±3.57分）（P〈0.01）;两组并发ARDS、肾功能衰竭、休克、肝功能不全、心功能衰竭、脑病及肠麻痹的发生率无统计学差异（P〉0.05）;早期组ARDS、肾功能衰竭、休克、肝功能不全、脑病及肠麻痹持续时间及住院病程短于晚期组（P〈0.05）;早期组感染率、手术中转率及病死率低于晚期组（P〈0.05）。结论：益活清下法早期应用丙氨酰-谷氨酰胺二肽治疗SAP,可缩短并发症的持续时间及病程,降低病死率和手术中转率。     

ERKl／2信号通路在高糖诱导的HK-2上皮间质转分化中的作用

目的：观察高糖诱导的细胞外信号调节激酶（ERK1/2）信号通路活化在上皮间质转分化中的作用,从而探讨延缓糖尿病肾病肾间质纤维化的发生机制。方法体外培养HK-2细胞,随机分为正常对照组、高糖组、ERK1/2通路抑制剂PD98059＋高糖组和高渗组,处理72 h后收集细胞,应用免疫细胞化学方法检测α-SMA、CK18的表达;应用Western blot法检测磷酸化ERK1/2、总ERK1/2表达水平的变化。结果（1）正常对照组胞质有大量CK18蛋白阳性表达,而α-SMA蛋白表达呈阴性;高糖组胞质中可见大量α-SMA蛋白强阳性染色,而CK18蛋白呈阴性表达;经PD98059处理后,CK18表达较高糖组染色深,而α-SMA表达较高糖组染色浅;高渗组胞质中CK18呈阳性表达,α-SMA表达呈阴性。（2）正常对照组可见少量总ERK1/2表达,p-ERK1/2蛋白仅有微量表达;经高糖刺激48 h后,总ERK1/2表达较正常对照组无明显差异,p-ERK1/2蛋白表达明显增加（P＜0.05）;而使用PD98059处理后,总ERK1/2的变化不大,但p-ERK1/2蛋白的表达却显著降低（P＜0.05）;高渗组与正常对照组无显著差异。结论 ERK1/2信号通路可能参与了高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞（HK-2）转分化过程,阻断 ERKl/2可部分抑制人近端肾小管上皮细胞的转分化,进而延缓肾小管间质纤维化的发生和发展。     

高密度脂蛋白中的1-磷酸鞘氨醇对心肌细胞生存信号通路的影响

目的:观察高密度脂蛋白(HDL)不同组分中1-磷酸鞘氨醇(S1P)的含量对心肌细胞AKT和ERK1/2信号转导通路的影响,探讨HDL对心肌细胞的保护作用。方法:应用超速离心法和层析法,分离不同组分HDL;应用地高辛核素标记法检测各组分中S1P含量。给予小鼠心肌细胞不同S1P含量的HDL组分和S1P1、S1P3受体抑制剂VPC23019刺激后,用蛋白印迹法检测AKT和ERK1/2转导通路磷酸化水平的变化。结果 :与对照组比较,受不同HDL组分刺激后,成年小鼠心肌细胞AKT和ERK1/2磷酸化水平升高,且随着各组分中S1P含量升高,磷酸化水平呈上升趋势,而S1P1及S1P 3受体抑制剂VPC23019能明显阻断此种作用。结论:不同HDL组分通过细胞膜上的S1P受体,激活PI3K-AKT和MEK-ERK1/2信号通路,该作用通过S1P1和S1P3受体介导;HDL可能通过S1P发挥心肌保护作用。     

松萝酸通过调节SphK1/S1P信号通路减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨松萝酸（UA）对缺氧/复氧（H/R）诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法 构建H9c2细胞H/R模型,使用0.5～64μmol/L UA分别预处理H9c2细胞,MTT法筛选UA浓度;H9c2细胞随机分为对照组、模型组、UA低剂量组（1μmol/L）、UA中剂量组（4μmol/L）、UA高剂量组（16μmol/L）和UA高剂量+Benzyl butyl phthalate(BBP)组（16μmol/L UA+100 nmol/L BBP）,检测各组细胞增殖活力、细胞凋亡情况,白介素（IL）-1β、IL-6、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）、鞘氨醇激酶1(SphK1)、鞘氨醇-1-磷酸受体1(S1PR1)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达水平。结果 1μmol/L以上浓度UA可以显著提高H/R H9c2细胞增殖活力。与对照组相比,模型组细胞增殖能力和ATP、SOD含量下降,细胞凋亡率和IL-1β、IL-6、MDA、SphK1、S1PR1、ERK1/2表达增加（P<0.05）;与模型组相比,UA低、中、高剂量组细胞增...     

丙氨酰谷氨酰胺辅助治疗脓毒症效果分析

目的：研究丙氨酰谷氨酰胺对脓毒症的辅助治疗效果。方法以2010年8月至2013年2月清远市人民医院重症医学科（IC U ）收治的120脓毒症患者为研究对象,将其随机分为实验组和对照组,对照组采用常规治疗,实验组在常规治疗的基础上静脉滴注丙氨酰谷氨酰胺,剂量为0．4g/（kg·d）,每日最大剂量为20g。比较两组患者治疗期间的胰岛素使用剂量、血糖水平、院内感染发生率、IC U住院时间、总住院时间及6月生存率。结果实验组与对照组胰岛素使用剂量分别为（3．8±3．1）、（4．5±3．5）IU/h ,血糖水平分别为（8．9±2．0）、（10．8±3．1）mol/L ,院内感染发生率分别为1．2‰及3．0‰,组间比较差异有统计学意义（P＜0．05）。但ICU住院时间、总住院时间、6月生存率组间比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论对于脓毒症患者,每日静脉滴注丙氨酰谷氨酰胺,可能有助于控制血糖水平、改善胰岛素抵抗、降低院内感染发生风险,但对患者预后无显著改善效果。     

鞘氨醇-1-磷酸对人耐受型树突状细胞功能影响的初步研究

目的探讨鞘氨醇-1-磷酸(S1P)对外周血单核细胞诱生的人耐受型树突状细胞(tDC)免疫学功能的调控作用。方法 RT-PCR和流式检测细胞表型以及S1P受体(S1PR s)的表达;加入S1P处理tDC,检测其对tDC表型、细胞因子表达以及信号蛋白细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化的影响。结果 tDC高表达DC标志CD209、共刺激分子CD80、CD86和成熟标志CD83;炎性细胞因子mRNA的表达低于未成熟DC,而抑炎性细胞因子、Fas-L和IDOmRNA的表达均高于iDC;tDC表达S1P的受体,S1P与受体相互作用后可引起信号蛋白ERK的磷酸化,上调tDC抑炎性细胞因子以及Fas-L mRNA的表达,对炎性细胞因子的表达无影响。结论 tDC表达S1P受体1、2、5,S1P信号活化后可上调抑炎性细胞因子mRNA的表达,而其表型和炎性细胞因子的分泌无明显变化,有利于tDC免疫耐受功能的发挥。     

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶在肝胆疾病诊断中的价值

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶（Slycylprolinedipeptidy laminopeptidase,GPDA），有色特异地水解肽链末端第2位为脯氨酸所形成的肽键（对其他肽键无作用）。用人工合成的X-脯氨酰对硝基苯胺作底物来检测此酶活性发现，以甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺为底物时酶活性最强，Km值最小，故称此酶为甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶或甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺酶（glycylproline—p—nitmanilidase）。又由于它也能水解甘氨酰脯氨酰-β-萘胺，故又称为甘氨酰脯氨酰-β萘胺酶（Slycylproly--β-naphthvlamidase）。。     

静滴丙氨酰-谷氨酰胺致定向力障碍1例

丙氨酰-谷氨酰胺注射液可在体内分解为谷氨酰胺和丙氨酸,为肠外营养的一个组成部分［1］。临床上丙氨酰-谷氨酰胺注射液适用于需要补充谷氨酰胺的患者,包括处于分解代谢和高代谢状况的患者［2］。本品在临床使用中具有良好的安全性。但文献检索仍有个别文献报道输入丙氨酰-谷氨酰胺注射液后发生过敏性休克1例［3］,肝损害1例［4］,本院1例患者输入丙氨酰-谷氨酰胺后致定向力障碍,现报道如下。     

丙氨酰-谷氨酰胺双肽在重症急性胰腺炎中的应用

目的观察丙氨酰-谷氨酰胺双肽强化的全肠外营养治疗对重症急性胰腺炎(SAP)患者营养状况及免疫功能的影响。方法将48例SAP患者随机分为对照组和治疗组,两组患者在常规治疗的基础上均采取等热量、等氮量的肠外营养治疗,但治疗组在肠外营养配方里使用丙氨酰-谷氨酰胺双肽。观察两组治疗后营养状况、免疫功能及APACHEⅡ评分等指标的变化。结果经治疗两组患者血清白蛋白、免疫球蛋白浓度均升高,但治疗组的增高幅度显著高于对照组(P0.05),且治疗组C反应蛋白(CRP)浓度及APACHEⅡ评分均较对照组明显降低(P0.05)。结论丙氨酰-谷氨酰胺双肽强化的全肠外营养治疗能改善SAP患者的营养状况,提高免疫功能,降低APACHEⅡ评分,改善预后。     

苯甲酰芍药甙对冠心病模型大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨苯甲酰芍药甙对冠心病模型大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法高脂饲料饮食制备冠心病大鼠动物模型,给予苯甲酰芍药甙灌胃治疗4周,采用免疫组化方法检测心肌组织中Bc1-2、Bax的蛋白表达。结果同正常组比较,模型组大鼠Bc1-2显著降低而Bax表达增高（P〈0.05）;治疗后,治疗组大鼠Bcl-2表达增高、Bax表达降低,与模型组对比差异显著（P〈0.05）,同正常组比较无显著差异性（P〉0.05）。结论苯甲酰芍药甙可显著提高冠心病大鼠Bcl-2蛋白的表达（P〈0.05）、抑制Bax蛋白表达、增加Bcl-2/Bax比值,从而抑制心肌细胞凋亡。提示苯甲酰芍药甙可能通过抑制心肌细胞的凋亡而治疗冠心病。     

1-磷酸鞘氨醇对血小板贮存损伤的影响

目的探讨1-磷酸鞘氨醇对手工浓缩血小板的贮存损伤(活化率、凋亡率和细胞内游离Ca2+)的影响。方法向手工浓缩血小板中分别加入0.1、0.5和1.0μmol/L 3个浓度的S1P,采用流式细胞术检测血小板22℃保存2、3、5、7 d的活化率、凋亡率和细胞内游离Ca2+。结果 0.5和1.0μmol/L的外源性S1P可以降低血小板内游离Ca2+的浓度,降低其活化率和凋亡率。结论 1-磷酸鞘氨醇对血小板的贮存损伤起到一定的抑制作用。     

注射用丙氨酰谷氨酰胺的临床应用分析与探讨

目的 针对我院丙氨酰谷氨酰胺的临床应用情况进行专项点评分析,促进临床医师合理用药。方法 通过合理用药监测系统（PASS）随机抽取我院2020年1月至12月使用丙氨酰谷氨酰胺的出院患者2 071例,对其进行用药合理性评价及分析。结果 2 071例患者中,使用丙氨酰谷氨酰胺病例数排在前5位的科室主要有肝胆胰脾外科病区、胃肠外科病区、神经外科一病区、消化内科病区、腺体血管腹壁外科病区;丙氨酰谷氨酰胺不合理使用共1 387例,占比66.97%,主要包括无适应证用药（占比35.25%）、溶媒选择不适宜（占比12.99%）、溶媒浓度不适宜（占比11.83%）、疗程不适宜（占比3.48%）等。结论 本院丙氨酰谷氨酰胺使用存在不合理现象,临床药师需展开药学服务及培训,以提高临床医师合理用药水平,确保患者用药安全、经济、有效。     

卵巢子宫内膜异位症患者血清磷脂酰胆碱、苯丙氨酰- 异亮氨酸表达水平及临床价值研究

目的 探讨卵巢子宫内膜异位症（ovary endometriosis,OEM）患者血清磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine, PC）、苯丙氨酰 -异亮氨酸（phenylalanyl-isoleucine, PheIL）表达水平及临床价值。方法 选取 2020年 1月～2022年 1月期间亳州市人民医院诊治的 OEM患者 163例为研究对象（OEM组）,根据患者术后复发情况分为复发组（n=35）和未复发组（n=128）。以同期因卵巢良性疾病诊治的 60例女性患者为对照组。应用高效液相色谱 -串联质谱法（high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS）检测各组血清 PC和 PheIL水平。比较不同美国生殖医学会（American Society of Reproductive Medicine,ASRM）分期、痛经程度 OEM患者血清 PC和 PheIL水平差异。单因素及多因素 COX回归分析影响 OEM复发的危险因素。受试者工作曲线评价血清 PC,PheIL及联合检测对 OEM复发的诊断价值。结果 OEM组患者血清 PC（34∶3）（18.01±3.66μg/ml）,PheIL（64.38±7.75 ng/ml）均高于对照组（1.66±0.47μg/ml,42.66±6.50ng/ml）,差异具有统计学意义 (t=34.388,18.145,均 P <0.05)。ASRM分期Ⅲ～Ⅳ期的 OEM患者血清 PC（34∶3）（21.74±3.71μg/ml）,PheIL水平（71.22±7.89ng/ml）高于Ⅰ～Ⅱ期患者（14.41±3.50μg/ml,57.79±7.60ng/ml）,差异具有统计学意义 (t=12.979,11.069,均 P<0.05)。ASRM分期Ⅲ～Ⅳ期（OR=1.510, P<0.001）,PC（34∶3）升高（OR=1.446, P<0.001）,PheIL升高（OR=1.706,P<0.001）是影响 OEM患者术后复发的独立危险因素,术后妊娠（OR=0.736,P<0.001）和术后用药（OR=0.749,P<0.001）是影响 OEM患者术后复发的保护因素。血清 PC（34∶3）和 PheIL联合检测对 OEM复发诊断的曲线下面积（95%CI）为 0.864(0.840～0.879),大于血清 PC（34∶3）和 PheIL单一指标检测 0.772(0.735～0.808),0.727(0.683～0.770),差异具有统计学意义 (Z=4.252,5.640,均 P <0.001)。结论 OEM患者血清 PC和 PheIL水平升高 ,两者与 ASRM分期有关,两者联合检测有助于预测 OEM复发。     

丙氨酰谷氨酰胺联合肠内营养在急性重症胰腺炎中的应用

目的：分析丙氨酰谷氨酰胺注射液联合早期肠内营养在急性重症胰腺炎患者中的应用效果。方法：回顾性分析2019年1月~2020年12月收治的83例急性重症胰腺炎患者临床资料,根据治疗方案不同分为对照组和观察组。将接受早期肠内营养支持和常规治疗的40例患者纳入对照组,将在对照组基础上接受丙氨酰谷氨酰胺注射液治疗的43例患者纳入观察组,比较两组疗效、血清丙氨酸氨基转移酶、血肌酐、炎症介质水平。结果：与对照组67.50%（27/40）相比,观察组总有效率93.02%（40/43）明显较高（P＜0.05）;治疗后,与对照组对比,观察组血清丙氨酸氨基转移酶、血肌酐、白细胞介素-6水平较低,血清白细胞介素-10水平较高（P＜0.05）。结论：急性重症胰腺炎患者接受丙氨酰谷氨酰胺注射液联合早期肠内营养治疗,效果显著,能有效改善肝肾功能,调节炎症介质水平。