HBV核心蛋白与A3C融合蛋白HBV载体质粒的构建

目的:构建HBV核心蛋白与人类载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3C(A3C)融合蛋白HBV载体质粒.方法:构建表达HBV核心蛋白的乙肝病毒载体质粒PdssX;以质粒PC-A3C为模板扩增A3C,将扩增的A3C及PdssX分别用Aor13H Ⅰ和BSEⅡ酶切双酶切,以T4连接酶连接转化TOP10感受态细胞,然后PCR和双酶切鉴定及测序鉴定.结果:酶切所获载体片段和目的基因片段的大小均与预期的相一致,经测序证实为pCH-CoreA3c基因,表明CoreA3c基因HBV载体质粒pCH-CoreA3c构建成功.结论:成功构建HBV核心蛋白与A3C融合蛋白HBV载体质粒pCH-CoreA3c,为下一步CoreA3c融合蛋白的原核表达及其抗病毒作用研究奠定了基础.     

湖北鄂州地区HBV基因分型与α-干扰素抗病毒的疗效关系

<正>目前乙肝病毒基因型分为8个,不同基因型间有8%以上的差异,基因型有明显的地理区域性分布[1-2]。为明确本地区HBV基因型分布以及HBV基因变异及抗病毒疗效之间的关系,本研究拟采用PCR微板核酸杂交EL1SA技术探讨鄂州地区乙型肝炎病毒基因分型与应用α-干扰素     

干扰素抗病毒蛋白MxA和2'''',5''''-OAS在肝胚瘤细胞株中的差异表达

目的了解α干扰素（interferom-α，IFN—α）诱导的抗病毒蛋白MxA和2′，5′-寡腺苷酸合成酶（2′-,5′-OAS）在人肝胚瘤细胞株HepG2和HBV稳定转染的HepG2．2．15细胞中的表达情况。方法将培养的HepG2和HepG2．2．15细胞用IFNα刺激6h，分离细胞总RNA，经逆转录32P标记后与尼龙膜上的探针微矩阵（macroarray法）进行分子杂交；并以此来分析HepG2和HepG2．2．15细胞IFN抗病毒基因表达谱。用免疫印迹分析IFN抗病毒蛋白；如，MxA、2′，5′-OAS等在肝胚瘤细胞中的表达。结果分析发现在HepG2和HepG2．2．15细胞仅有部分IFN诱导基因表达，多数IFN诱导基因呈低表达或不表达。比较HepG2和HepG2．2．15细胞，发现两者表达IFN诱导基因有差异，即对IFN应答有差异。研究中发现，MxA蛋白在HepG2．2．15细胞中不表达，而在HepG2细胞中却能正常表达。另一种重要的IFN抗病毒蛋白2′，5′-OAS，在HepG2．2．15和HepG2细胞中均能表达；在拉米夫啶处理下，HepG2．2．15细胞甚至比HepG2细胞能更好地表达。结论IFN抗病毒蛋白MxA和2′，5′-OAS在人肝胚瘤细胞株HepG2和HBV稳定转染的HepG2．2．15细胞中表现出差异的表达模式；HBV及其抗原成分影响人肝胚瘤细胞株的IFN抗病毒基因表达。     

α-干扰素治疗HGV与HBV和HCV联合或重叠感染

庚肝病毒是单股正链的ＲＮＡ病毒 ,属黄病毒科 ,临床上单独感染时一般表现为症状轻 ,恢复快 ,干扰素治疗有一定的效果。临床多见ＨＧＶ重叠或联合ＨＢＶ、ＨＣＶ感染的病例 ,它们对于干扰素的应答如何 ?本文就我院在开展α -干扰素抗病毒治疗情况分析如下。1　临床资料所有病例均是我院 1 996～ 1 999年住院的患者 ,其中男 1 80例 ,女 78例 ,年龄 1 8～ 50岁 ,诊断依据按照 1 995年全国流行病寄生虫会议修订的标准。所有患者分成Ａ组ＨＢＶ -ＤＮＡ( ) (慢性肝炎患者 1 0 0例 ) ;Ｂ组ＨＣＶ -ＲＮＡ( ) ,59例 ;Ｃ组ＨＧＶ -ＲＮＡ( ) …     

上海地区145例慢性乙型肝炎患者HBV基因型与α-2b干扰素疗效关系的初步探讨

目的调查上海地区慢性乙型肝炎患乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布状况，研究α-2b干扰素疗效与患HBV基因型的关系。方法用特异性引物PCR的方法鉴定上海地区145例乙型肝炎患的HBV基因型。对其中符合抗病毒治疗标准的22例患以α-2b干扰素进行治疗并观察疗效，疗程24周。分别在治疗前、治疗后12、24周进行血清生化学和病毒学的检测。结果145例乙型肝炎患中HBV基因型B型占60％，C型占36．6％，B、C混合型仅占3．4％。接受α-2b干扰素治疗的22例患中，感染HBV基因型B型的患33％取得了治疗联合应答，而C型仅为7％。结论上海地区HBV基因型流行以B型为主，其次为C型，B、C混合型较少见。本研究发现B基因型接受α-2b干扰素的应答率比C型为高，与献报道相仿，但经统计学检验差异无显性，值得进一步加以研究证实。     

血清干扰素α与乙肝病毒相关肾炎的实验性研究

目的　探讨乙型肝炎病毒相关肾炎(HBV GN)与血清干扰素α(IFN -α)量的相关性,及IFN -α治疗HBV GN的必要性。方法　将5 6份受检血清分4组,通过ELISA法,分别检测血清IFN -α浓度。结果　实验组Ⅰ血清IFN -α浓度明显低于对照组Ⅰ(P <0 .0 1) ,并明显低于对照组Ⅱ(P <0 .0 1) ;实验组Ⅱ血清IFN- α浓度明显低于对照组Ⅰ(P <0 .0 1) ,并低于对照组Ⅱ。结论　乙型肝炎患者是否伴有肾脏损伤,与患者内源性IFN- α浓度有关,当机体IFN -α浓度降低时,HBV就有可能引起肾脏损伤,所以有应用外源性IFN -α治疗的必要性。     

乙型肝炎病毒抵抗α-干扰素治疗研究进展

乙型肝炎是当今全球最严重的传染病之一,中国是乙型肝炎病毒(HBV)感染的高发地区,乙肝表面抗原(HBsAg)携带者约有1.2亿,有效预防和治疗HBV感染是中国公共健康的一个重要目标。α-干扰素(IFN-α)是目前临床治疗慢性乙型肝炎最常用的药物之一。IFN-α可以抑制HBV复制,促使     

两种HBV DNA检测法对干扰素治疗慢性乙肝的疗效评估

〖目的〗以斑点杂交法及PCR定量检测法评价干扰素抗HBV的疗效.〖方法〗90例慢性乙肝患者干扰素治疗前后均同时用两种方法检测血清HBVDNA.〖结果〗HBV DNA定量在总体上呈下降趋势.治疗后2个月末与4个月末其病毒拷贝数分别为5.83±1.05,5.75±1.21,与治疗前6.74±1.68相比差异均有显著性(P＜0.05).HBV DNA定量PCR较斑点杂交更能反映干扰素治疗过程中患者外围血内病毒拷贝数的增长.〖结论〗两种方法均能灵敏地反映干扰素抗HBV的疗效,但在实际中定量PCR更灵敏.     

PCR-RFLP分析HBV核心启动子基因突变的临床意义

目的建立聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测HBV核心启动子(BCP)基因突变的方法,并探讨其临床意义。方法PCR扩增HBVBCP区(nt1642-nt2027)基因片段,经限制性内切酶Mb0Ⅰ酶切,琼脂糖凝胶电泳分析BCP(nt1762／nt1764)基因突变情况,同时应用定量PCR测定了HBVDNA含量。结果149例临床样本的检测结果显示:BCP基因突变在HBeAb( )慢性乙型肝炎患者(CHB)和HBV无症状携带者(ASC)中的检出率显著高于相应的HBeAg( )组患者(P<0.01);在HBeAb( )和HBeAg( )重症乙型肝炎(SeverehepatitisB,SHB)组中差异无显著性(P>0.05);BCP变异患者血清中HBV-DNA含量比相同模式的野毒株感染高(P<0.05)。结论PCR-RFLP检测HBVBCP基因突变方法简单方便,结果与测序分析一致,具有较好的特异性,适合临床应用;BCP区基因突变可能是HBeAb( )患者HBV感染的重要原因之一;BCP变异可能与乙型肝炎重症化有一定关系。     

α-防御素抑制HepG2.2.15细胞HBV表达的初步研究

目的α-防御素抑制HepG2.2.15细胞HBV表达的体外初步探讨。方法不同浓度α-防御素于体外作用于HBV转染的HepG2.2.15细胞株模型,不同时间用免疫荧光法测定细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg的量及HBV-DNA含量,并作出比较。结果作用24h后,α-防御素对HepG2.2.15细胞株HBV抑制更明显,且呈药物剂量依赖性。结论α-防御素在体外能有效地抑制HBV的表达,提示它在抗乙型肝炎病毒中有较大的应用前景。     

干扰素治疗丙型肝炎的临床及抗病毒效应研究

１５例急性、５２例慢性丙肝在干扰素治疗２４周后，血清ＡＬＴ复常率为８０％与７５％，ＨＣＶ ＲＮＡ阴转率为８０％与６９．２％，停药后追踪２４周，持续ＡＬＴ正常并ＨＣＶ－ＲＮＡ阴转（称为完全反应、ＣＲ）者有５３．３％与４２．３％，均明显高于急、慢性对照组的疗效（治疗结束时ＡＬＴ复常率急性对照组为３６．４％，慢性对照组为０。ＨＣＶ－ＲＮＡ阴转为２／１１及３／２０，停药后全部对照组均无１例呈ＣＲ者），统计     

HBV前S1蛋白的临床应用

目的了解前S1蛋白(preS1)与乙型肝炎病毒(HBV)复制的关系,以及诊断乙型肝炎的价值,判断预后中的作用。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,对164例携带乙型肝炎不同病毒标志物的慢性乙型肝炎患者血清,进行preS1测定,并与HBV DNA做对比分析。检测21例急性乙型肝炎患者血清,分析preS1和HBV DNA与丙氨酸氨基转移酶(ALT)间关系。结果HBsAg、HBeAg和抗-HBc阳性组74例,HBV DNA和preS1的检出率分别是100%和96%,慢性乙型肝炎患者血清preS1、HBeAg和HBV DNA检出率高度符合(P>0.05)。HBsAg和抗-HBe、抗-HBc阳性组80例,HBV DNA与preS1蛋白的检出率分别为35%和32.5%,说明部分HBeAg阴性抗HBc阳性患者仍有病毒在复制。不同病程的急性乙型肝炎患者血清prS1和HBVDNA与ALT之间的关系,preS1与ALT相比符合率高(P>0.05)。HBV DNA与ALT相比符合率较低(P<0.05)。结论preS1能够敏感地反映乙型肝炎病毒复制的情况,尤其可以反映HBeAg阴性的乙型肝炎患者病毒复制的情况。在急性乙型肝炎患者中,preS1先于HBV DNA转阴,提示疾病预后良好。     

拉米夫定单独和与α干扰素序贯处理的人肝胚瘤细胞株HepG2.2.15HBV差异复制的研究

目的 研究LAM单独和与IFN-序贯处理对人肝胚瘤细胞株HepG2.2.15细胞的HBV复制的影响,探讨LAM与IFN-α在体外抑制HBV复制的差异.方法 以未处理的HepG2.2.15细胞作为对照组;以1 000 IU/ml浓度IFN-α连续处理HepG2.2.15细胞10 d为单独IFN-α处理组;以0.2、1、5、20、100 μmol/L的LAM处理HepG2.2.15细胞为单独LAM处理组;序贯处理组则以浓度为0.04、0.2、5、25、125、200μmoL/L的LAM连续处理HepG2.2.15细胞7 d,再补充1 000 IU/ml IFN-α与LAM联合处理3 d,然后停止LAM处理,再单独以1 000 IU/ml IFN-α连续处理细胞10 d;分别用ELISA法、点杂交和Southern杂交分析不同处理时期、不同处理组HepG2.2.15细胞分泌的HBV抗原、细胞外HBV DNA、细胞内HBV复制中间体DNA以判断HepG2.2.15细胞内HBV复制情况.结果 LAM连续处理至10 d时,单独LAM处理组HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg分别是1.77±0.22、1.65±0.25、1.95±0.19、1.34±0.11、1.07±0.05,分泌的HBeAg是1.41±0.13、1.37±0.09、1.63±0.07、1.26±0.12、1.05 ±0.09,对照组分泌的HBsAg和HBeAg分别是3.34±0.15和3.33±0.05,单独LAM处理组与对照组相比分泌的HBsAg和HBeAg下降,差异有统计学意义(HBsAg的t值为10.21、10.04、9.94、18.62、24.86,HBeAg的t值为23.87、32.97、34.22、27.57和38.35,P均＜0.05).点杂交、Southern杂交分析显示LAM连续处理10 d后,单独LAM处理组的细胞外HBV DNA和细胞内HBV复制中间体DNA不能被检测到.停止LAM处理并代之以1 000 IU/ml IFN-α序贯处理10 d,序贯处理组均有细胞内HBV复制中间体DNA的出现,且细胞外HBV抗原和HBV DNA恢复表达;即HBV颗粒在HepG2.2.15细胞内又重新恢复复制状态并分泌至细胞外.结论 LAM与IFN-α在体外细胞模型中具有不同的抗病毒效应,导致HepG2.2.15细胞内HBV复制的差异性.

Abstract：

Objective To investigate the characteristics of HBV replication in HepG2.2. 15 cells treated with LAM alone or sequentially treated with LAM and IFN-α, and to further explore the different suppressive effect on HBV replication by LAM and IFN-α in vitro. Methods Untreated HepG2. 2. 15 cells were used as control group, HepG2. 2. 15 cells treated with 1 000 IU/ml of IFN-α alone for 10 d were served as IFN-α group. The HepG2.2. 15 cells treated with 0.2,1,5,20,100 μmol/L of LAM were used as LAM groups. HepG2. 2. 15 cells treated with 0. 04,0. 2,5,25,125,200 μmol/L of LAM for 7 d, then combined with 1 000 IU/ml of IFN-α for another 3 d. Afterwards, the cells were treated with 1 000 IU/ml of IFN-α only for another 10 d. These cells were served as LAM/IFN-α sequential treatment group. The ELISA was used for analyzing the secreted HBV antigens, while the Dot blot, Southern blot were applied for analyzing the extracellular HBV DNA and intracellular HBV replicative intermediate DNA in HepG2. 2. 15 cells of different treatment groups. Results The secreted HBsAg in the LAM group were 1. 77 ± 0. 22, 1.65 ±0.25, 1.95 ±0. 19, 1.34 ±0. 11, 1.07 ±0.05, respectively, and the secretion of HBeAg were 1.41 ±0. 13, 1.37 ± 0. 09, 1.63 ± 0. 07, 1.26 ± 0. 12, 1.05 ± 0. 09. The secreted HBsAg and HBeAg in control group were 3. 34 ± 0. 15 and 3.33 ± 0. 05. Statistical analysis showed that HBsAg and HBeAg secretion in the LAM group were significantly reduced by treatment with LAM. The t values of HBsAg were 10. 21,10.04, 9.94, 18.62, 24.86, and the t values of HBeAg were 23.87, 32.97, 34.22, 27.57, 38.35,respectively, all P values were ＜ 0.05. Dot blot, Northern blot hybridization analysis indicated that the extracellular HBV DNA and intracellular HBV replicative intermediate DNA could not be detected in the LAM group after cells treated by LAM for 10 days. When LAM was replaced with treatment of 1 000 IU/ml of IFN-α alone, it could not suppress the HBV replication effectively. Moreover, the intracellular HBV replicative intermediate DNA still existed in almost all groups, accompanied with the recovered expression of HBV antigens as well as extracellular HBV DNA, which suggested that the HBV particles restored replication again and secreted extracellular in HepG2. 2. 15 cells, although the sequential treatment lasted for 10 days.Conclusion The effect of viral suppression by LAM and IFN-α in vitro were different, which attributed to the different HBV replicative characteristcs in HepG2. 2. 15 cells.     

慢性HBV感染者甘露糖结合蛋白基因多态性与HBV基因型的关系

目的探讨甘露糖结合蛋白(MBP)基因多态性及HBV基因型与慢性乙型肝炎(HBV)进展的关系。方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法和实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术对360例慢性HBV感染者[其中66例无症状HBV携带者组(ASC组)、182例慢性乙型肝炎患者组(CH组)、112例肝硬化患者组(LC组)和65例对照组]的MBP基因第54号密码子多态性和HBV基因分型进行检测。结果 ASC组和轻、中型CH组均以B基因型占优势,MBP基因GGC/GAC基因型频率和GAC等位基因频率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);重型CH组、代偿期LC组、失代偿期LC组均以C基因型占优势,MBP基因GGC/GAC基因型频率和GAC等位基因频率显著高于对照组(P<0.05),其中失代偿期LC组突变率最高(37.7%)。结论该地区乙型肝炎人群以B和C基因型为主;MBP基因第54号密码子突变与HBV感染的慢性化无明显关系,而与HBV C基因型及慢性HBV感染者的肝病进展有关。     

乙型肝炎病毒基因型与干扰素抗病毒治疗相关性的探讨

乙型肝炎病毒是严重危害人类健康的病毒之一,是引起肝脏疾病的主要致病因子之一。目前全世界慢性HBV感染者至少有3．5亿,我国占其中的1／3左右,我国是乙型病毒肝炎的高发区,人群中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）携带率高达约8％-10％。慢陛乙型肝炎病毒感染者中50％-70％有活跃的病毒复制和炎症活动,其感染的自然病程漫长,包括无症状携带状态,急、慢性肝炎和肝硬化等,严重可能发展为原发性肝癌（HCC）。     

乙肝病毒大蛋白用于抗病毒治疗效果监测的临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒大蛋白(LHBs)的检测用于抗病毒治疗效果监测的临床意义。方法选取我院54例进行拉米夫定抗病毒治疗患者进行随访观察,定期检测乙型肝炎病毒大蛋白(LHBs)、乙肝两对半模式(HBV M)以及HBV DNA水平的变化,通过统计分析研究LHBs的应用意义。结果①HBeAg阳性组的乙肝患者中,HBV DNA的阳性检出率与LHBs的阳性率无显著性差异(χ2=0.04,P>0.05);HBeAg阴性组的乙肝患者中,HBV DNA的阳性检出率与LHBs的阳性率均无显著性差异(χ2=1.48,P>0.05);②抗病毒治疗患者HBV DNA和LHBs均呈下降趋势,但是LHBs的消减晚于HBV DNA。结论抗病毒治疗过程中LHBs和HBV DNA下降的趋势一致,但是晚于HBV DNA的消减;联合检测LHBs和HBV DNA对抗病毒治疗监测具有重要临床意义。     

慢性乙型肝炎的抗病毒治疗

慢性乙型病毒性肝炎(CHB)一直是一个全球性健康问题，全球大约3．5亿人感染乙肝病毒(HBV)。在慢性HBV感染的病程中，约15％～40％将产生并发症，如重症肝炎、肝硬化、肝功能衰竭及肝细胞肝癌(HCC)。目前，CHB的治疗目的仅在于抑制乙型肝炎病毒(HBV)的复制，缓解肝脏病变，本综述总结α-干扰素和拉米夫定在治疗慢性乙肝有效性和安全性的资料，不同临床状态下的治疗策略和未来的治病方向。     

未经抗病毒治疗慢性乙肝患者HBV DNA的动态观察

FQ-PCR法检测血清HBV-DNA水平是反映HBV复制的可靠指标.一般认为HBV-DNA载量高低对病情的临床严重程度没有影响[1].     

未经抗病毒治疗慢性乙肝患者HBV DNA的动态观察

FQ-PCR法检测血清HBV-DNA水平是反映HBV复制的可靠指标。一般认为HBV—DNA载量高低对病情的临床严重程度没有影响。也有文献报道，慢性乙肝轻中度患者的HBV—DNA显著高于慢性乙肝重度和慢性重型乙肝患者；