EV71-CA16肠道病毒荧光定量RT-PCR诊断试剂盒的研制

目的研制一种能同时检测EV71,CA16肠道病毒的二联实时荧光定量PCR检测试剂盒,主要用于EV71,CA16肠道病毒的快速检测和流行病学监测。方法设计特异度的EV71型、CA16型基因的引物和探针,优化实时荧光定量PCR检测体系,并研究产品的灵敏度、精密度、稳定性和检测线性范围;同时对2014年5月份收集的26份样品进行检测。结果试验得到了阳性重组质粒,线性范围在5*102 copies/μl～105 copies/μl,该范围内检测结果良好;优化后肠道病毒CA16上下游引物和探针浓度分别为0.48,0.24μmol/L,EV71上下游引物和探针浓度分别为0．40,0.20 μmol/L。敏感度达到500 copies/μl,重复性变异系数CV≤5％;该荧光定量PCR检测试剂盒稳定性强,在-20℃下可以保存一年,对EV71,CA16肠道病毒具有良好的特异度。用该方法检测20份临床阳性样品和6份阴性样品,阳性检出率为100％(20/20),阴性检出率为100％(6/6)。结论试验建立的EV71,CA16肠道病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法可用于EV71,CA16肠道病毒的临床诊断。     

ELISA和荧光RT-PCR检测手足口病EV71的比较

手足口病（hand-footandmouthdisease,HFMD）常见于婴幼儿发病,临床主要表现为发热和手足口病疱疹,重症病例出现呼吸、中枢神经系统损害,病情进展迅速而致死亡。手足口病由多种肠道病毒引起,主要是肠道病毒EV71型和柯萨奇病毒A16,研究表明,重症病例多由EV71感染导致。对手足口病尤其是重症患者的早诊断、早治疗十分重要。作者用ELISA法和荧光RT-PCR法检测了221例临床标本,比较两者的灵敏度和特异性,以探讨两种方法的临床应用价值。报道如下。     

荧光RT-PCR同步检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型方法的建立及应用

目的建立快速、灵敏、特异的肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的荧光PCR检测及分型方法。方法针对肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的特异性保守基因vp1基因分别设计一对引物和对应的探针,对荧光RT-PCR反应体系进行优化,验证方法的特异性、灵敏度和重复性,并对临床样品进行检测分析。结果该方法对肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的检测有高度特异性,与甲肝、腮腺炎、风疹、乙型脑炎等病毒均无交叉反应,检测灵敏度可达10拷贝/μl;43例患儿肛拭子标本中肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型检测率分别为37.21%(16/43)和13.95%(6/43)。结论荧光RT-PCR法分型检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的方法具有快速、便捷、特异、灵敏等特点,适用于肠道病毒的早期诊断。     

实时荧光定量PCR检测儿童手足口病肠道病毒EV71

手足口病(HFMD)是因某些不同血清学肠道病毒感染而引起的一种常见急性传染病,患者多为5岁以下的儿童.其传染性强,可致爆发性流行.HFMD本身是一种良性病,发病后临床经过顺利,数日后自愈,不致威胁生命,无后遗症[1-3].     

EV71型重症手足口病84例临床护理

对84例EV71型重症手足口病患儿给予精心护理,做好消毒隔离,密切观察患儿生命体征变化.结果84例患儿全部康复出院,治愈率100%.认为积极救治及精心护理可促进EV71型手足口病患儿康复.     

西安地区2011年儿童手足口病病原学分析

目的 对西安地区2011年手足口病病原学进行分析,为手足口病的临床诊断、治疗及防治提供科学依据.方法 采集2011年1月～6月555例(其中男性347例,女性208例,年龄范围8个月～6岁,平均年龄2.6岁)西安市儿童医院临床诊断为手足口病患儿咽拭子标本,采用实时荧光RT-PCR方法检测肠道病毒通用型(EV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16).结果 56例重症患者其中45例由肠道病毒71型(EV71)引起,占重症病例的80.4％(45/56),4例由柯萨奇病毒A组16型(CA16)引起,占重症病例的7.1％(4/56).肠道病毒71型(EV71)阳性率与柯萨奇病毒A组16型(CA16)阳性率差异有统计学显著性意义(x2=273.4,P＜0.0001).结论 西安地区2011年手足口病病原学以肠道病毒71型(EV71)为主,与2010年相比肠道病毒71型(EV71)感染有上升趋势,且高发于3岁以下儿童组,重症患者与2010年相同,主要由肠道病毒71型(EV71)引起.     

实时荧光定量PCR快速诊断肠道病毒71型感染

目的探寻快速准确早期诊断肠道病毒71型(human enterovirus 71,EV71)感染的方法。方法手足口病患儿871例,采用实时荧光定量PCR检测患儿咽拭子或疱液的EV71感染情况,实时荧光定量PCR检测EV71阳性患儿采用ELISA法检测血清EV71-IgM和EV71-IgG。结果871份标本中,RT-PCR检测EV71感染阳性率为17.91%,其中5月份检测阳性率(24.44%)最高,12月份检测阳性率(4.17%)最低;随机抽取64例RT-PCR检测阳性患儿外周血,EV71-IgM阳性率为51.56%,EV71-IgG阳性率为14.06%。结论 RT-PCR能快速准确诊断EV71早期感染。     

荧光定量RT—PCR检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型

手足口病及相关临床综合征是危害儿童健康的重要疾病。自20世纪60年代逐渐明确其病原体以来,手足口病已在全世界范围内引起多次暴发或流行,累及地域广泛、人口众多。Cox．A4、A5、A9、A10、A16,Cox．B5和EV71型等多种肠道病毒均可引起手足口病,但EV71和Cox．A16是引起手足口病的主要的病原体,常相伴造成手足口病的暴发或流行。及时检测EV71和Cox．A16,为临床医生提供必要的实验诊断依据。用荧光定量RT-PCR进行检测了我院收治的儿童手足口病患者标本中EV71和Cox．A16。     

肠道病毒EV71手足口病病原学及免疫功能改变研究现状

手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是以手、足、口多发疱疹为主要特征的一类自限性疾病,5岁以下儿童多发,是由多种肠道病毒引起的儿童常见的急性传染性疾病.肠道病毒EV71是手足口病主要病原体,具有噬神经性,可引起患儿神经症状甚至死亡.本文将对EV71病原学特征、发病机制、感染后机体免疫功能改变进行讨论,以便更加深入了解EV71特征,为手足口病的防治提供依据.     

EV71型手足口病患儿的临床护理

目的 探讨EV71型手足口病的临床观察及护理体会.方法 收集我院2009年2～6月收治住院的77例经病原学及血清学检测确诊的手足口病(EV71型)患儿完整的临床资料,总结其临床观察及护理方面的初步经验.结果 77例手足口病患儿中,71例轻症患儿痊愈出院.6例重症患儿,4例转送上级医院治疗(2例死亡),2例在本院抢救治疗14 d治愈.结论 对手足口病(EV71型)患儿护理重点在于病情的密切观察,早期治疗有可能阻断或延缓病情进展.     

2011-2012年杭州市手足口病的病原构成及肠道病毒71型的分子流行病学特征

目的 探讨杭州市手足口病病原谱构成及其肠道病毒71型(human enterovirus 71,EV71)的分子特征。 方法 采集210例疑似手足口病感染者的粪便标本及其相关临床资料,采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)方法进行初步检测,利用RT-PCR扩增部分EV71和柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16, Cox A16)阳性样本VP1基因区并测序分析。 结果 荧光定量RT-PCR检测表明,210例疑似感染者的粪便中, EV71、Cox A16 和其他肠道病毒的阳性率分别为60.95%(128/210)、21.43%(45/210)和9.05%(19/210)。10株EV71病毒VP1区核酸序列与JX509922、JX509924、JX509926、JX509927、 JX509928和 JX509929的同源性最高为95.7%~98.0%,且均属于EV71中 C4a亚型。 结论 EV71和Cox A16是杭州市儿童手足口病的主要病原体。因此加强EV71和Cox A16的监测特别是EV71的检测,有助于更好地预防和控制手足口病。     

水通道蛋白4在肠道病毒71引起的手足口病患儿口腔黏膜中的表达及临床价值

目的探讨水通道蛋白4(AQP-4)在肠道病毒71引起的手足口病患儿口腔黏膜中的表达及临床价值。方法选取2016年1月-2019年1月收治的100例肠道病毒71引起的手足口病患儿为病例组,同期入院体检的100例健康儿童为对照组,比较两组受试儿童血清C反应蛋白(CRP)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平以及口腔黏膜中AQP-4表达水平。根据中国手足口病防治指南,对病例组患儿病程进行临床分期,比较临床1期、2期、3期患儿口腔黏膜中AQP-4、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)表达水平。结果病例组患儿血清CRP、CK、CK-MB水平均高于对照组(P<0.05)。病例组患儿血清、口腔黏膜中的AQP-4表达水平均高于对照组(P<0.05)。治疗前,不同疾病分期患儿口腔黏膜中AQP-4表达水平由低到高依次为临床1期、2期、3期(P<0.05);治疗后,不同疾病分期患儿口腔黏膜中AQP-4表达水平均低于治疗前相应各期,且由低到高仍依次为临床1期、2期、3期(P <0.05)。治疗前,不同疾病分期患儿口腔黏膜中NSE表达水平由低到高依次为临床1期、2期、3期(P<0.05);治疗后,不同疾病分期患儿口腔黏膜中NSE表达水平均低于治疗前相应各期,且由低到高依次为临床1期、2期、3期(P <0.05)。结论口腔黏膜中AQP-4表达与肠道病毒71引起的手足口病发生、发展以及预后相关。     

肠道病毒71型致重症手足口病的临床分析

手足口病（HFMD）具有传染性强、发病率高的特点。2008年,我国局部地区爆发HFMD疫情,重症患儿的致死致残率高,引起全社会的高度关注。流行病学调查显示病原体主要为肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇A16病毒,尤其是感染EV71后危害更重。     

Update of enterovirus 71 infection: epidemiology,pathogenesis and vaccine

Enterovirus 71 (EV71) is a neurotropic human pathogen that is the causative agent of hand foot and mouth disease (HFMD), herpangina and brain stem encephalitis. Recurrent EV71 epidemics of various scales have occurred in the Asia-Pacific region. Several specific cell surface molecules serve as the receptors for EV71. Identification of the receptors is an important step to understand EV71 disease. Cytokines, lymphocytes and monocytes contribute significantly to EV71 pathogenesis. The interaction of EV71 and receptors may be associated with the cytokines immunopathogenesis. Some animal models have been established and aim to explore the pathogenesis of EV71 infections. EV71 antibodies can neutralize or enhance infection at subneutralizing levels. These results are important for EV71 vaccine and therapeutics design. Several clinical trials of human inactivated EV71 vaccine have recently been completed. The purpose of this review is to summarize recent discoveries about the epidemiology and pathogenesis of EV71 and provide insights into human vaccine development.     

单管多重RT-PCR检测肠道病毒核酸及其临床应用

目的建立一种快速检测肠道病毒通用型(EV)、科萨奇病毒A16(CA16)和肠道病毒71(EV71)核酸的单管多重反转录聚合酶链反应(RT-PCR),并探讨其临床应用价值。方法建立单管多重RT-PCR检测EV、CA16和EV71的反应体系,并优化退火温度、各引物比例和循环参数等反应条件;采用自建RT-PCR体系检测136例手足口病患儿大便标本的肠道病毒核酸。结果单管多重RT-PCR检测体系的最佳反应条件:退火温度为54℃;EV、CA16和EV71引物比例为2∶1∶1;循环参数为35。采用自建单管多重RT-PCR从136例标本中检出EV阳性46例(33.82%),CA16阳性14例(10.29%),EV71阳性14例(10.29%),其中CA16、EV71同时阳性2例。结论成功建立检测EV、CA16和EV71核酸的单管多重RT-PCR,并应用于手足口病患儿的病原学检测。     

广西壮族自治区南宁市50例非手足口病幼儿肠道病毒感染状况分析

目的了解肠道病毒在非手足口病幼儿中的感染情况,为预防控制手足口病在儿童中的流行提供依据。方法采用实时荧光定量PCR方法,对50例≤3岁儿童的肛拭子标本共50份进行肠道病毒、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CoxA16)核酸检测。结果共检出17份肠道病毒核酸阳性,阳性率为34%,均为其他肠道病毒。结论健康儿童中存在其他肠道病毒的隐性感染。开展手足口病流行病学和病原学研究,将有助于提出更好的预防和控制措施。     

儿童危重肠道病毒71型脑炎及神经源性肺水肿的临床特征与救治

目的 探讨儿童重症手足口病合并中枢神经系统感染及神经源性肺水肿(NPE)的临床特征、救治经验和转归.方法 总结2008年5月至6月收入安徽省阜阳市级医院儿童重症监护病房(PICU)手足口病合并巾枢神经系统感染及NPE救治资料.结果 36例患儿中,平均年龄15.8个月(4月至4岁),死亡7例,病死率为19.4%.出现危重症状平均病程2.1 d(0.5～5.0 d).12例(33.3%)无皮疹.神经系统表现为脑干脑炎27例(75%)、脑干脑炎伴脊髓炎6例(16.7%)、腩炎3例(8.3%).NPE突出表现是突然呼吸急促、粉红色或血性泡沫液(痰)、非对称性肺水肿或肺出血,是最直接死亡原因.主要救治措施为机械通气、甘露醇、甲基强的松龙、静脉丙种球蛋白、血管活性药物,其中9例患儿(25%)进行容量复苏.结论 EV71脑炎合并NPE,发病年龄小,进展快,病死率较高.早期诊断、及时呼吸支持、积极降颅压、维护循环功能是救治成功的关键.     

Hand,foot, and mouth disease associated with coxsackievirus A10: more serious than it seems

Introduction: Hand, foot, and mouth disease (HFMD) is a common viral childhood illness, that has been a severe public health concern worldwide, particularly in the Asia-Pacific region. According to epidemiological data of HFMD during the past decade, the most prevalent causal viruses were enterovirus (EV)-A71, coxsackievirus (CV)-A16, CV-A6, and CV-A10. The public health burden of CV-A10-related diseases has been underestimated as their incidence was lower than that of EV-A71 and CV-A16 in most HFMD outbreaks. However, cases of CV-A10 infection are more severe, and its genome is more variable, which has alerted the research community worldwide.

Areas covered: In this paper, studies on the epidemiology, laboratory diagnosis, clinical manifestations, molecular epidemiology, seroepidemiology, animal models of CV-A10, and vaccines and antiviral strategies against this genotype are reviewed. In addition, the genetic evolution of circulating strains was analyzed.

Expert opinion: Multivalent vaccines against EV-A71, CV-A16, CV-A6, and CV-A10 should be a next-step HFMD vaccine strategy.     

一步法实时RT-PCR快速检测手足口病肠道病毒

目的探讨实时荧光RT-PCR在手足口病(HFMD)肠道病毒快速检测中的应用价值。方法以实时荧光RT-PCR检测64例临床初诊为HFMD患儿标本中总肠道病毒(EV)、柯萨奇病毒A组16型(CA16)和肠道病毒71型(EV71),用RD细胞、Vero细胞和Hep-2细胞进行病毒分离培养,以免疫荧光法鉴别分离培养的EV71。结果64例标本中,EV(+)/EV71(+)为23.4%(15/64)、EV(+)/CA16(+)为48.4%(31/64)、EV(+)/EV71(-)/CA16(-)为10.9%(7/64)、EV(-)/EV71(-)/CA16(-)为17.2%(11/64)。实时荧光RT-PCR检测为EV71且病毒分离培养出现细胞病变效应的培养细胞经抗EV71单克隆抗体免疫荧光检测均为阳性,未发生细胞病变效应或非EV71的培养细胞均为阴性。结论实时荧光RT-PCR检测HFMD病原具有特异和快速等优点,与病毒分离培养具有较高的一致性,可用于手足口病的早期诊断和鉴别诊断。