钙磷涂层镁合金CaP-AZ31B对小鼠前成骨细胞生物学性能的影响

目的研究钙磷涂层镁合金Ca P-AZ31B对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1生物学性能的影响。方法实验分为镁合金(AZ31B)组、钛合金组和Ca P-AZ31B组,观察MC3T3-E1细胞在3组材料表面2、6、24 h的细胞黏附率;倒置显微镜观察MC3T3-E1细胞与3组材料浸提液共培养1、3、5、7 d的细胞形态,同时采用CCK法和BCA法检测其细胞增殖活力和细胞内总蛋白。结果随着培养时间的延长,3组材料的细胞黏附率、细胞增殖活力、细胞内总蛋白量均显著增加(P0.05)。其中Ca P-AZ31B组2、6、24 h细胞黏附率钛合金组AZ31B组(P0.05);MC3T3-E1细胞在3组材料浸提液中贴壁均良好,大多呈长梭形;Ca P-AZ31B组各时相点细胞增殖活力均优于AZ31B组(P0.05);细胞内总蛋白量比较,Ca P-AZ31B组钛合金组AZ31B组(P0.05)。结论与镁合金、钛合金相比,钙磷涂层镁合金材料可明显增强小鼠成骨细胞的黏附能力和增殖能力,促进细胞内总蛋白的表达,具有良好的生物相容性。     

微弧氧化镁合金对兔骨骼肌细胞黏附和增殖的影响

目的观察微弧氧化(MAO)镁合金对兔骨骼肌细胞黏附和增殖的影响.方法实验分为对照组(钛合金)、镁合金组(镁合金AZ31B)和MAO组(MAO镁合金AZ31B);将兔骨骼肌细胞与材料试件直接接触培养,计算细胞黏附率;浸提液培养细胞,计算细胞相对增殖率;流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果直接接触培养2、6、24 h,MAO组细胞黏附率高于对照组和镁合金组(P <0.05),细胞黏附率呈时间依赖性增加(P <0.05).浸提液培养1、3、5、7 d,MAO组细胞相对增殖率较镁合金组高(P<0.05);毒性评级为1级,低于镁合金组的2级毒性.镁合金组细胞相对增殖率呈时间依赖性下降(P<0.05),而不同时相点的MAO组细胞相对增殖率比较,差异无统计学意义(P>0.05).MAO组未见明显细胞凋亡.结论MAO镁合金可促进兔骨骼肌细胞的早期黏附,对细胞增殖无明显影响,具有良好的生物相容性.     

含SrCaP涂层镁合金ZK60对小鼠前成骨细胞功能的影响

目的探讨含锶钙磷（SrCaP）涂层镁合金ZK60对小鼠前成骨细胞黏附、增殖和成骨分化等功能的影响。方法制备含SrCaP涂层的镁合金ZK60材料,以不含SrCaP涂层的ZK60和钛合金材料作为对照,扫描电镜观察材料表面的超微结构;以小鼠MC3T3-E1细胞为对象,扫描电镜、荧光显微镜、MTT法、p-NPP法等观察上述材料对细胞黏附、增殖和成骨分化的影响。结果扫描电镜可见含SrCaP涂层镁合金ZK60表面的粗糙多孔结构。与ZK60组相比,前成骨细胞在该材料上铺展面积更大,黏附更好;死活细胞染色显示培养24 h时SrCaP-ZK60组活细胞数最多;浸提液培养5 d时SrCaP涂层镁合金组细胞增殖显著高于钛合金组（P＜0.05）;培养7 d后,SrCaP涂层镁合金表面成骨细胞碱性磷酸酶表达显著高于ZK60组及钛合金组（P＜0.05）。结论含SrCaP涂层镁合金ZK60具有良好的促成骨细胞黏附、增殖和成骨分化作用。     

镁合金AZ31B对兔骨骼肌细胞的生物学行为的影响

目的研究镁合金AZ31B对兔骨骼肌细胞生物学行为的影响。方法采用浸提液培养兔骨骼肌细胞,倒置显微镜观察细胞生长形态,CCK法研究其1、3、5、7 d的细胞增殖活性,荧光染色研究细胞活力,胞内总蛋白测定研究细胞蛋白表达情况。以钛合金浸提液为对照(对照组),设置镁合金浸提液组(镁合金组)及其pH值调节组。结果 3组骨骼肌细胞贴壁良好,随着培养时间的延长,细胞增殖活性逐渐增加,镁合金组细胞毒性为2级,pH值调节组未见细胞毒性,且可以促进骨骼肌细胞的增殖;荧光染色可见镁合金组存在部分细胞红染,提示镁合金组存在部分细胞毒性;蛋白检测提示镁合金组蛋白含量显著下降,pH值调节组蛋白含量则较正常升高。结论镁合金AZ31B对于兔骨骼肌细胞具有良好的生物相容性,且能促进兔骨骼肌细胞的增殖及蛋白含量的增加,为镁合金AZ31B用于骨科置入材料提供了理论支持。     

镁合金对骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响研究

目的：探讨镁合金对人骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖及成骨分化的影响。方法抽取人骨BMSCs并予以鉴定;采用AZ31B镁合金浸提液培养人BMSCs 1、3、5、7 d,以普通培养基为对照组,CCK-8法检测细胞增殖活性;应用浸提液培养人BMSCs,诱导分化后检测成骨分化相关基因（COLⅠ、ALP、OPN）的表达。另设置调节pH值AZ31B组（pH-AZ31B组）,以观察pH值变化对实验结果的影响。结果 BMSCs表达CD34（-）、CD45（-）、CD44（＋）、CD73（＋）、CD90（＋）、CD105（＋）。浸提液培养1、3、5、7 d,AZ31B组细胞相对增殖率低于对照组（P＜0.05）,毒性评级为2级;对照组和pH-AZ31B组细胞活性较好,两组细胞相对增殖率比较,差异无统计学意义（P ＞0.05）。AZ31B组COLⅠ基因表达量与对照组比较,差异无统计学意义（P ＞0.05）;AZ31B组ALP基因表达量较低（P＜0.05）,pH-AZ31B组与对照组无显著差异（P＞0.05）;AZ31B组OPN基因表达量在诱导分化后6 d、12 d显著高于对照组（P＜0.05）,pH-AZ31B组与对照组无显著差异（P＞0.05）。结论镁合金对BMSCs增殖及成骨分化无不良影响,其影响可能与浸提液pH值的变化有关。     

镁合金AZ31B对骨骼肌细胞黏附及增殖的影响

[目的]研究镁合金AZ31B对骨骼肌细胞黏附及增殖的影响.[方法]用扫描电镜明确镁合金AZ31B的表面形态,采用兔骨骼肌细胞与合金直接接触培养,研究其黏附率,采用扫描电镜研究其黏附情况.采用浸提液培养细胞,研究其1、3、5、7d的细胞相对增殖率,并采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.[结果]镁合金表面形态粗糙,有利于细胞的黏附,结果提示骨骼肌细胞在合金表面具有良好的黏附率,且随着培养时间的延长,黏附率逐渐增高,扫描电镜见到骨骼肌细胞在镁合金表面黏附良好.细胞增殖率结果提示镁合金促进骨骼肌细胞增殖,且未见明显细胞凋亡.[结论]镁合金AZ31B具有良好的生物相容性,适合于骨骼肌细胞的早期黏附,且促进骨骼肌细胞的增殖,为镁合金AZ31B适用于骨科置入材料提供了理论支持.     

羟基磷灰石涂层镁铝合金的体外生物相容性研究

目的：评价羟基磷灰石（HA）涂层镁铝合金（AZ31B）的体外生物相容性。方法实验分为3组：HA涂层AZ31B浸提液组（H组）、阳性对照组（P组）和空白对照组（N组）。将L929细胞与各组混合液培养3、5和7 d,采用WST-1法检测细胞活力并进行细胞毒性分级。各组混合液与稀释兔血混匀,测定吸光度（OD）并计算溶血率。采用各组混合液对白化豚鼠分别进行皮内诱导、局部诱导和激发,观察去除贴敷片24、48、72 h动物激发部位皮肤情况。结果3、5和7dN组和H组细胞毒性反应分级为0级,P组部分细胞毒性反应分级为3级;各时间点H组、N组细胞活力均高于P组,差异有统计学意义（P ＜0.05）。H组、P组和N组OD值分别为（0.004±0.001）、（0.648±0.050）和（0.008±0.003）;H组溶血率为-0.6%,无溶血反应。去除贴敷片24、48、72 h H组皮肤无明显改变,P组可见中度至重度融合性红斑。结论体外实验提示HA涂层镁铝合金具有良好的体外生物相容性。     

高钙培养促进人表皮角质细胞间的黏附和聚集

目的观察细胞外钙浓度变化对表皮角质细胞黏附聚集的影响，并探讨其可能的调控机制。方法本实验分为两组：低钙培养组（60μmol／L）；高钙（2mmol／L）培养组。培养3d后，镜下观察细胞的黏附和聚集现象；然后利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）的方法测定E-钙调素和P-钙调素mRNA的表达水平；最后借助免疫荧光法检测E-钙调素和P-钙调素蛋白在细胞内的表达和分布。结果高钙培养3d后细胞分层并出现明显的黏附和聚集，E-钙调素也在高钙培养的条件下表达明显增加（P〈0．01），而P-钙调素的表达没有明显的变化。结论高钙培养促进人表皮角质细胞的黏附和聚集，E-钙调素的表达可能在其中发挥重要作用。     

慢性肾脏病患者血清胎球蛋白A水平的测定和意义

目的：测定慢性肾脏病（CKD）患者血清中胎球蛋白A（FA）的水平,探讨FA在CKD患者中的表达,为CKD患者早期血管钙化的临床干预提供思路.方法：实验组：选择2013年1月～2013年12月在定西市人民医院肾内科治疗的CKD未透析患者90例,肾小球滤过率（glomeruarfiltrationrate,GFR）计算参照MDRD公式并依据CKD分期,将90例患者分为3个组,A组：eGFR≥60ml·min-1· 1.73 m-2（CKD1、2期）、B组：eGFR 30～59 ml·min-1· 1.73 m-2（CKD3期）、C组：eGFR≤29 ml·min-1·1.73 m-2（CKD4、5期）.对照组：同期在定西市人民医院体检中心选取30例年龄、性别相匹配的健康体检者.两组均抽取空腹静脉血,用ELISA法测定血清FA水平;同时测定血清白蛋白（Alb）,血清钙（Ca）,血清磷（P）,血iPTH等.采用SPSS 17.0统计软件对得出的数据进行处理.结果：（1）实验组与对照组比较：B组与对照组比较,FA水平低于对照组（P＜0.05）;C组与对照组比较,FA水平低于对照组（P＜0.05）,血磷水平高于对照组（P＜0.05）;（2）实验组组间进行比较：A组与B组：B组FA水平低于A组（P＜0.05）;C组与B组：C组FA水平低于B组（P＜0.05）.C组血磷水平高于B组（P＜0.05）;实验A组与实验C组：实验C组FA水平低于实验A组（P＜0.05）.实验C组血磷水平高于实验A组（P＜0.05）;（3）相关性分析结果显示,血清胎球蛋白A与血磷、钙磷乘积负相关（P＜0.05）.与白蛋白水平正相关（P＜0.05）.结论：（1）随着肾功能的下降,FA水平也下降,eGFR 30～59 ml/min（CKD3期）时,FA水平下降明显.（2）在CKD患者中,FA水平与血白蛋白成正相关,与血磷、钙磷乘积成负相关.     

神经束植入联合甲钴胺治疗失神经骨骼肌的实验研究

目的研究神经束植入治疗失神经支配骨骼肌．并比较靶肌肉局部用药与全身性用药的疗效,探讨神经营养药物应用的最佳给药方法。方法选用雄性大鼠60只随机等分5组．每组12只,制作左侧胫神经切断动物模型。A组：神经束植入组;B纽：神经束植入＋左侧腓肠肌注射甲钴胺;C组：神经束植入＋腹腔注射甲钴胺;D组：胫神经切断：E组：胫神经切断＋左侧腓肠肌注射生理盐水。术后当日开始,B组隔日左侧腓肠肌注射甲钴胺300μg／kg;C组隔日腹腔注射甲钴胺300μg／kg;E组隔日左侧腓肠肌注射等渗盐水0．02ml。分别于术后4周和8周测量左小腿腓肠肌电生理、肌纤维横截面积和肌细胞TUNEL染色。结果术后4周及8周,A,B,C三组腓肠肌电位波幅组间比较差异均有显著性（P〈0．05）;D组与E组腓肠肌纤颤电位波幅差异无显著性（P〉0．05）。术后4周及术后8周,肌纤维横截面积和肌细胞TUNEL阳性细胞数A,B,C组间差异均有显著性（P〈0,05）,D,E组间差异无显著性（P〉0．05）,A,B,C组与D,E组差异有显著性（P〈0．05）。B组明显优于其他组。结论神经柬植入能有效防治失神经骨骼肌萎缩,靶肌肉给药效果优于全身用药。     

3D打印PLA-HA复合材料与骨髓基质细胞的相容性研究

目的 探讨骨髓基质细胞与3D打印聚乳酸-羟基磷灰石(Three-dimensional printed polylactic acid-hydroxyapatite,3D printed PLA-HA)复合支架材料的相容性,为骨组织工程选择合适的支架材料提供理论依据。方法将标记绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)的骨髓基质细胞分别与3D打印PLA-HA复合材料和β-磷酸三钙(betatricalcium phosphate,β-TCP)材料体外复合培养,采用荧光显微镜观察细胞在支架材料上的生长黏附情况,并通过扫描电镜观察细胞在支架中的形态变化;CCK8(Cell Counting Kit8)法检测细胞于不同时间点在材料上的黏附率以及增殖情况;碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性测定法检测3 d、7 d、14 d的碱性磷酸酶活性变化。结果 骨髓基质细胞能够在3D打印PLA-HA复合材料和β-TCP材料上黏附生长;β-TCP组细胞黏附率高于3D打印PLA-HA组(P<0.05),但3D打印PLA-HA组在12 h细胞黏附率可达到60%以上;细胞增殖实验显示,3D打印PLA-HA组在体外培养第4天和第7天的细胞增殖量(OD值)均高于β-TCP组与对照组(P<0.05);3D打印PLA-HA组以及β-TCP组在第3天、第7天和第14天的ALP含量均高于对照组,且3D打印PLA-HA组第7天ALP含量较β-TCP组增多(P<0.05)。结论 3D打印PLA-HA复合材料具有良好的细胞相容性,可作为骨组织工程的支架材料。     

骨水泥聚合反应与冷却对骨骼肌热损伤的关系

目的模拟骨水泥外溢在周围骨骼肌中的固化放热过程,研究其聚合放热对骨骼肌的损伤作用及加予4℃生理盐水局部灌注冷却对损伤的影响。方法选取健康清洁级SD大鼠12只,雌雄不限,体重220~250 g,采用左右侧对照,分别在左右侧臀大肌注入现配骨水泥1 mL,同时右侧加予4℃生理盐水局部灌注冷却。采用针式温度计连续测量两组骨水泥固化过程中骨水泥-肌肉界面的温度变化情况。分别于术后1 d、4 d、7 d各处死4只,切取与骨水泥接触部位的肌肉,行常规石蜡切片,HE染色镜检。对比两组局部温度的变化情况以及肉眼、镜下观察骨水泥-肌肉界面的肌肉组织形态学的改变。结果两组局部最高温度分别为(61.58±2.75)℃和(44.73±2.03)℃,40℃以上持续时间分别为(227.83±22.21)s和(53.33±15.79)s,均P0.01,有显著统计学意义。混匀至最高温度时间分别为(571.67±7.92)s和(575.00±8.00)s,P0.05,无统计学意义。组织学上,与骨水泥组相比,骨水泥+4℃水组的局部肌肉组织细胞形态改变较轻,炎性细胞浸润少,组织修复时间短。结论骨水泥聚合反应可对周围骨骼肌造成热损伤,加于4℃水局部冷却可明显降低局部最高温度及缩短40℃以上持续时间,有效减少炎症反应和缩短修复时间。若能合理地应用于临床,将对预防术后感染有一定的参考价值。     

坏死细胞释放IL-1对血管平滑肌细胞增殖及炎性反应的影响

目的 研究坏死血管平滑肌细胞对周围正常细胞增殖及炎性因子分泌的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 无血清低糖低氧条件下培养细胞,建立细胞坏死模型,收集坏死细胞培养上清液,用于干预正常血管平滑肌细胞.实验设坏死上清组、IL-1组、坏死上清+IL-1RA组和对照组.MTT法检测各组细胞增殖情况;RT-PCR检测各组MCP-1、IL-6和IL-8 mRNA的表达;ELISA检测各组MCP-1、IL-6和IL-8的分泌;Western blot检测各组NF-kB的激活情况.结果 NCS组和IL-1组细胞增殖能力均显著高于对照组(P＜0.01),NCS+IL-1 β组细胞增殖能力显著低于NCS组和IL-1组(P＜0.01);NCS组和IL-1 β组MCP-1、IL-6、IL-8 mRNA的表达均显著高于对照组(P＜0.05),NCS+IL-1RA组MCP-1、IL-6、IL-8 mRNA的表达均显著低于NCS组和IL-1组(P＜0.05);NCS组和IL-1 β组的MCP-1、IL-6及IL-8蛋白的分泌均显著高于对照组(P＜0.05),NCS+IL-1RA组MCP-1、IL-6和IL-8蛋白的分泌显著低于NCS组及IL-1组(P＜0.05);NCS组和IL-1组NF-kB的活性显著高于对照组(P＜0.05),与NCS组和IL-1组相比NCS+IL-1RA组NF-kB的活性显著降低(P＜0.05).结论 坏死血管平滑肌细胞能够促进正常细胞的增殖,诱导NF-kB的激活以及炎性因子的释放,并且这种促进作用可能与IL-1的大量释放有关.     

葡萄籽提取物对前列腺癌LNCaP与PC-3细胞VEGF和三种性激素的影响

目的：研究葡萄籽提取物（GSE）对雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞和雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞血管内皮生长因子（VEGF）和三种性激素睾酮（T）、孕酮（P）、雌二醇（E2）的影响.方法：实验分为四组：A1组：LNPCa细胞应用正常细胞培养液培养;A2组：LNCaP细胞应用含30μg/ml GSE的培养液培养;B1组：PC-3细胞应用正常细胞培养液培养;B2组：PC-3细胞应用含300 μg/ml GSE的培养液培养.常规培养48 h后收集四组细胞的上清液,用定量酶联榆测法和化学发光酶免疫检测法检测VEGF和三种性激素T、P、E2的浓度变化.结果：与A1组相比,A2组VEGF含量降低（P〈0.05）,T含量升高（P＜0.05）,E2含量无明显变化（P〉0.05）,P未检测到;与B1组相比,B2组VEGF含量显著降低（P〈0.01）,E2含量升高（P〈0.05）,T和P含量无明显变化（P〉0.05）.结论：GSE在体外能降低前列腺癌LNCaP与PC-3细胞VEGF的含量,提示其可能具有抑制前列腺癌侵袭转移的作用.     

姜黄素与LY294002联合应用对前列腺癌PC-3细胞体外生长的影响

【摘要】 目的〓探讨姜黄素与PI3K/Akt抑制剂LY294002联合应用对前列腺癌PC-3细胞体外生长的影响。方法〓根据给药不同将实验分为对照组、姜黄素组、LY294002组和姜黄素组+LY294002联合组,分别加入等量的培养基、25 μmoL/L姜黄素、25 μmoL/L的LY294002和两种混合液。采用MTS法检测各组细胞的增殖情况、流式细胞仪术检测各组细胞凋亡情况、q-PCR测定各组细胞中NF-κB、P53及caspase-9的表达情况。结果〓姜黄素组、LY组和联合组的细胞增值率均较对照组明显降低,且联合组明显低于两个单独用药组(P<0.05)。姜黄素与LY294002联合作用前列腺癌PC-3细胞后,细胞总凋亡率较姜黄素及LY294002单独使用后明显增加(P值均<0.05)。联合用药组的NF-κB表达量明显低于两单独用药组(P<0.05),而P53和caspase-9的表达量均明显高于两单独用药组(P<0.05)。结论〓姜黄素与LY294002联合使用较两种药物单独使用更能有效抑制前列腺癌PC-3细胞的体外生长,作用机制可能是通过抑制NF-κB的表达从而抑制细胞增殖,并增加P53和caspase-9的表达从而促进细胞凋亡来实现的。