PC12细胞氧糖剥夺不同时间段再灌注后内质网应激及细胞凋亡

目的观察大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤(PC12细胞)细胞氧糖剥夺(OGD)不同时间段再灌注(OGD/R)后内质网应激及凋亡的变化,探讨神经元OGD再灌注所致内质网应激与凋亡的关系。方法利用无糖DMEM及三气培养箱对PC12细胞进行OGD,不同时间段OGD后恢复正常培养24 h,根据不同OGD时间段,将细胞分为五组:control、3 h/24 h、6 h/24 h、9 h/24 h、12 h/24 h,OGD/R相应时间后,采用Western印迹检测内质网相关蛋白分子伴侣葡萄糖调节蛋白(GRP)78、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)及凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达,免疫荧光方法检测GRP78蛋白的表达情况,并利用流式细胞仪检测凋亡率。结果 OGD/R后,与control组相比,6 h/24 h、9 h/24 h、12 h/24 h组细胞中GRP78蛋白及caspase-3蛋白的表达水平明显增加(P<0.01,P<0.05),而PERK蛋白在各组中无明显变化。用Spearman相关性分析结果显示,capase-3蛋白与GRP78蛋白表达水平成呈正相关(R=0.561,P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,与control组相比,各组的凋亡率明显增高(P<0.01)。结论 PC12细胞OGD/R后内质网应激及凋亡呈动态变化,且内质网应激蛋白GRP78与凋亡蛋白caspase-3的表达水平有关,这将对缺血再灌注后神经元损伤的研究具有一定的意义。     

LanCL1过表达对氧糖剥夺诱导PC12细胞凋亡及Sirt3-PGC-1α通路的影响

目的分析硫化双丙氨酸环化酶样蛋白(LanCL)1在氧糖剥夺(OGD)PC12细胞中的表达,并研究LanCL1过表达对OGD诱导PC12细胞凋亡的影响及其对沉默调节蛋白(Sirt)3-过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子(PGC)-1α通路的影响。方法体外培养PC12细胞,并将其分为4组,对照组为正常培养的PC12细胞;OGD组为OGD条件下培养的PC12细胞;pcDNA3.1组为OGD条件下培养转染pcDNA3.1空载体的PC12细胞;pcLanCL1组为OGD条件下培养转染pcDNA3.1-LanCL1的PC12细胞。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中LanCL1 mRNA表达量,采用Western印迹检测细胞中LanCL1、Sirt3、PGC-1α蛋白表达水平,分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测细胞生存率和凋亡率。结果与对照组相比,OGD组细胞中LanCL1 mRNA和蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);OGD组和pcDNA3.1组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与OGD组和pcDNA3.1组相比,pcLanCL1组细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,OGD组和pcDNA3.1组细胞中Sirt3、PGC-1α蛋白水平显著降低(P<0.05);与OGD组和pcDNA3.1组相比,pcLanCL1组细胞中Sirt3、PGC-1α蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论过表达LanCL1能够促进OGD PC12细胞存活,抑制其凋亡,可能通过激活Sirt3-PGC-1α信号通路保护OGD诱导的PC12细胞损伤。     

孤儿核受体NR4A1表达对氧-葡萄糖剥夺诱导培养大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响

目的 探讨孤儿核受体NR4A1表达对氧-葡萄糖剥夺(oxy gen-glucose deprivation,OGD)诱导培养大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响及其可能机制.方法 大鼠小脑颗粒细胞原代培养7～8 d后给予OGD处理.应用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测NR4A1、胱天蛋白酶-3和细胞色素c蛋白表达,实时定量聚合酶链反应检测NR4A1mRNA表达.用编码NR4A1的慢病毒载体转染大鼠小脑颗粒神经元,并检测转染大鼠小脑颗粒神经元OGD后凋亡率以及细胞色素c和胱天蛋白酶-3表达.结果 随着OGD时间的延长,培养大鼠小脑颗粒神经元活性显著性降低,凋亡率显著性增高,NR4A1 mRNA和蛋白以及胱天蛋白酶-3和细胞色素c蛋白表达均显著性上调.转染NR4A1的大鼠小脑颗粒神经元过表达NR4A1,OGD后凋亡率显著性降低,胱天蛋白酶-3和细胞色素c蛋白表达显著性下调.结论 NR4A1过表达能通过下调胱天蛋白酶-3和细胞色素c表达减少OGD诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡.     

siRNA靶向沉默Smad7对PC12细胞氧糖剥夺敏感性的影响

目的探讨siRNA靶向沉默Smad7基因对PC12细胞氧糖剥夺(OGD)损伤的影响及其相关机制。方法体外建立PC12细胞OGD模型,利用RNA干扰技术,沉默Smad7基因表达,实时RT-PCR及Western印迹检测Smad7基因的表达,Hoechst33342染色检测细胞凋亡情况,实时RT-PCR检测Smad3基因mRNA的表达变化。结果 siRNA转染下调Smad7基因mRNA及蛋白的表达,靶向沉默Smad7联合OGD 16 h组细胞凋亡较OGD 16 h组明显减少;Smad7低表达的PC12细胞内Smad3 mRNA的表达明显增加。结论 Smad7基因沉默降低PC12细胞对OGD损伤的敏感性,提高Smad3基因在转录水平上的表达。     

NGF诱导PC12细胞分化早期和晚期结构蛋白的变化

目的 研究神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞分化早期和晚期的细胞结构蛋白质表达的变化.方法 建立NGF诱导PC12细胞分化的模型,比较NGF作用6 h和96 h的细胞蛋白质组学的变化,鉴定出其中差异表达的结构蛋白质.结果 NGF作用96 h的细胞蛋白质组,与对照组及作用6 h的细胞蛋白质组比较,有5种结构蛋白表达增高.结论 NGF诱导PC12细胞分化晚期,微管、徽丝及中间丝蛋白等构成蛋白表达增高;而分化早期的PC12细胞,没有差异表达的结构蛋白被鉴定.验证了细胞形态变化和相应的蛋白质表达有对应关系,蛋白质组学方法 可以用于探索细胞分化的机制.     

自噬及凋亡相关蛋白在PC12细胞缺糖缺氧过程中的表达及其意义

目的 探讨自噬及凋亡相关蛋白在PC12细胞缺糖缺氧(OGD)过程中的表达及其意义.方法 将PC12 细胞分为正常对照组、缺糖缺氧1、4和12 h组.MTT法检测细胞存活率,Western印迹法检测各组PC12细胞中BECN1、Bcl-2及Bax蛋白的表达水平.结果 与正常对照组相比,OGD 1及4 h组PC12细胞存活率下降(均P<0.05),BECN1蛋白表达升高,且Bcl-2/Bax比值升高;而与缺糖缺氧1和4 h组相比,OGD 12 h组细胞存活率明显下降(P<0.01),BECN1蛋白表达及Bcl-2/Bax比值亦明显降低.结论 自噬蛋白BECN1及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax参与了PC12细胞OGD损伤过程.在OGD早期,自噬起主要作用,并对OGD PC12细胞起一定的保护作用,随着OGD时间的延长,凋亡在其中占主导地位,促进凋亡蛋白表达,引起PC12细胞的死亡.     

脑缺血损伤中Notch信号通路活性的非配体依赖性改变及其作用

目的观察脑缺血损伤Notch信号转导通路的非配体依赖性活性变化及其对缺血损伤的影响。方法建立神经元样PC12细胞氧糖剥夺(OGD)模型模拟脑缺血损伤。OGD 12 h行Notch1-siRNA,实时PCR技术检测Notch1 mRNA表达,Western印迹技术检测Notch1、Notch1胞内段NICD蛋白表达,流式细胞仪检测Notch1-siRNA对缺血损伤细胞凋亡率。结果 OGD组Notch1 mRNA表达较正常对照组显著升高,OGD+Notch1-siRNA组较OGD组显著降低(P<0.05);OGD组Notch1及NICD蛋白表达较正常对照组均显著升高,OGD+Notch1-siRNA组较OGD组显著降低(P<0.05);OGD+Notch1-siRNA组细胞凋亡率较OGD组显著升高(P<0.05)。结论缺血性脑损伤可诱导非配体依赖性的Notch1信号转导通路活化,其可能在脑缺血特定时程发挥抗凋亡脑保护作用。     

NGF诱导PC12细胞分化晚期的蛋白质组学研究

目的 研究神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞分化晚期的细胞蛋白质组变化,探索NGF诱导细胞分化的分子机制.方法 50 ng/ml NGF作用于PC12细胞96 h,提取细胞总蛋白,应用荧光差异凝胶电泳(DIGE)获取蛋白点的差异表达信息,运用MALDI-TOF质谱鉴定出差异蛋白质.结果 NGF诱导96 h后,共有58个蛋白点发生变化,质谱鉴定出了10种蛋白.结论 本实验首次应用DIGE技术筛选NGF诱导PC12细胞分化晚期的相关蛋白,其中5种蛋白是首次在NGF诱导的PC12细胞中被报道.这些蛋白可能是NGF信号转导过程的新成员,也可以成为药物治疗的新靶点.     

β淀粉样蛋白_(25～35)对PC12细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨β淀粉样蛋白(Aβ)_(25~35)对PC12细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法采用不同浓度的Aβ_(25~35)与PC12细胞共孵育48 h后,用MTT法检测细胞生长活性,Hoechst33258核染色检测细胞凋亡,通过免疫细胞化学检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达。结果MTT检测显示Aβ_(25~35)抑制PC12细胞生长活性呈浓度依赖性,抑制作用随Aβ_(25~35)浓度的增大而加强;Hoechst33258染色显示Aβ_(25~35)与PC12细胞凋亡呈浓度依赖性关系;免疫细胞化学检测结果显示Bcl-2蛋白表达量随Aβ_(25~35)浓度的增大呈下降趋势,Bax、Caspase-3蛋白表达量随Aβ_(25~35)浓度的增大呈上升趋势。结论 Aβ_(25~35)可剂量依赖性诱导PC12细胞凋亡,使抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax,Caspase-3表达上调。     

外泌体Homer 1a对氧糖剥夺诱导的PC12细胞损伤的保护作用及机制

目的探究外泌体Homer 1a通过Notch信号通路对氧糖剥夺(OGD)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及机制。方法选取胰蛋白酶消化传代PC12细胞分为对照组、模型组、空载体组和Homer 1a组(n=9)。对照组正常培养PC12细胞,模型组建立OGD损伤模型,空载体组和Homer 1a组分别将空载体和过表达Homer 1a载体转染到OGD的PC12细胞。采用实时荧光定量PCR检测Homer 1a mRNA表达,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,试剂盒测定乳酸脱氢酶活性、丙二醛水平、超氧化物歧化酶活性,ELISA检测白细胞介素(IL)6、IL-1β、TNF-α水平,Western blot检测Hormer 1a、Notch1、Notch基因细胞内区(NICD)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组、空载体组和Homer 1a组Homer 1a表达、细胞凋亡率、乳酸脱氢酶活性、丙二醛、IL-6、IL-1β、TNF-α、Notch1、NICD蛋白表达明显升高,细胞活性、超氧化物歧化酶活性明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,Homer 1a组Homer ...     

沉默热休克蛋白70-2基因经线粒体依赖通路介导肝癌细胞凋亡

目的 探讨沉默热休克蛋白(HSP)70-2对肝癌细胞生长、凋亡的影响,以及诱导肝癌细胞凋亡的详细作用机制. 方法 Westem blot、免疫细胞化学法检测HSP70-2在4种肝癌细胞和正常肝细胞中的表达.设计合成针对HSP70-2基因的特异性短发夹状RNA(shRNA),构建真核表达载体HSP70-2 shRNA1和HSP70-2 shRNA2.转染肝癌细胞后,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖,膜联蛋白/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡情况,罗丹明染色检测细胞线粒体跨膜电位变化,Western blot检测多聚ADP-核糖聚合酶、caspase-3、caspase-9蛋白切割情况,以及细胞色素C、Bax,Bcl-2蛋白的表达变化. 结果 HSP70-2在4种肝癌细胞中均高表达,在L02细胞中仅有微量表达.HSP70-2 shRNA1、shRNA2均能有效抑制肝癌细胞中HSP70-2的表达.沉默HSP70-2基因显著抑制肝癌细胞生长,诱导肝癌细胞凋亡,转染48 h后,shRNA1和shRNA2诱导HepG2细胞的凋亡指数分别为55.8%±1.8%和57.1%±1.6%,诱导Huh细胞凋亡指数分别为54.9%±1.1%和60.2%±2.6%,与对照组相比,差异均有统计学意义,P值均＜0.01.转染HSP70-2 shRNA 48 h后,肝癌细胞线粒体跨膜电位显著下降,细胞色素C从线粒体释放到胞质中,caspase-3、caspase-9激活,多聚ADP核糖聚合酶被剪切降解,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bax表达明显增加.结论 沉默HsP70-2能通过激活线粒体凋亡通路导致肝癌细胞凋亡.     

吡格列酮对培养大鼠大脑皮质神经元氧-葡萄糖剥夺/复氧后PPARγ、NF-κB c-Rel和Bcl-xL表达的影响

目的 探讨吡格列酮(pioglitazone,PIO)对Wistar大鼠大脑皮质神经元氧-葡萄糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)后过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptors γ,PPARγ)、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)亚基c-Rel以及抗凋亡因子Bcl-xL表达的影响.方法 大鼠大脑皮质神经元体外原代培养,建立OGD/R模型,分为正常组、OGD4 h/R6 h组、OGD4 h/R12 h、OGD4 h/R6 h+PIO组、OGD4 h/R6 h+PPARγ抑制剂T0070907 (TIO)组、OGD4 h/R12 h+PIO组以及OGD4 h/R12 h+TIO组.采用蛋白质印迹法检测神经元内PPARγ和NF-κB c-Rel蛋白表达,采用逆转录-聚合酶链反应检测神经元内Bcl-xL mRNA表达.结果 蛋白质印迹分析显示,OGD/R后PPARγ和NF-κB c-Rel蛋白表达水平较正常组显著性增高(P＜0.01),给予PIO后PPARγ和NF-κB c-Rel蛋白表达水平进一步增加,显著高于单纯OGD4 h/R6 h组和OGD4 h/R12 h组(P＜0.01),而给予TIO后PPARγ和NF-κB c-Rel蛋白表达减少,显著性低于单纯OGD/R组(P＜0.05)以及相应PIO组(P＜0.01).逆转录-聚合酶链反应分析显示,OGD4 h/R6 h组Bcl-xL mRNA表达水平较正常组显著性增高(P＜0.01),PIO组Bcl-xL mRNA表达水平显著性高于单纯OGD4 h/R6 h组和OGD4 h/R12 h组(P＜0.01),给予TIO后Bcl-xL mRNA表达减少,显著性低于单纯OGD/R组(P＜0.05)以及相应PIO组(P＜0.01).结论 PIO可上调培养大脑皮质神经元OGD/R后PPARγ蛋白表达,进而增加NF-κB亚基c-Rel调控的抗凋亡因子Bcl-xLmRNA表达,这可能是PPARγ神经保护作用的部分机制.     

Bcl-2和Bax在多巴胺诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的探讨多巴胺诱导PC12细胞凋亡的可能机制。方法流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白的表达率。结果多巴胺诱导PC12细胞凋亡,两者间呈明显的量效和时效关系。0.45mmol/L多巴胺作用24h,细胞的凋亡率为53.3%±3.1%。在凋亡过程中,Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达随之增高。诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)抑制剂和半胱氨酸蛋白酶3(CPP32)抑制剂对抗多巴胺诱导PC12细胞的凋亡作用与Bcl-2蛋白增加、Bax蛋白降低有关。结论Bcl-2和Bax蛋白是多巴胺诱导PC12细胞凋亡的重要调节蛋白,iNOS和CPP32在凋亡过程中可能具有重要作用。     

葛根素对缺氧诱导PC12细胞神经损伤及JNK/MAPK信号通路的影响

目的 探讨葛根素对缺氧诱导的大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞PC12细胞神经损伤及c-Jun氨基末端激酶(JNK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法 体外培养PC12细胞，50 ng/ml神经生长因子(NGF)诱导分化，对高分化的PC12细胞进行缺氧处理，再对缺氧诱导的PC12细胞进行不同浓度(0.1、1.0、10.0μmol/L)葛根素处理，将细胞分为对照组，缺氧组，0.1、1.0、10.0μmol/L葛根素组，葛根素+JNK通路激活剂茴香霉素(AC)组。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞活力；流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况；2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测各组PC12细胞活性氧(ROS)水平；试剂盒检测各组细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平；Western印迹检测各组凋亡蛋白JNK/MAPK信号通路相关蛋白表达情况。结果 低分化PC12细胞多呈椭圆形，聚集成小团簇状；高分化PC12细胞长出类似神经元样突起，培养一段时间后，细胞体积增大突起增多增长，形成网络。与对照组比较，缺氧组PC12细胞活力、SOD水平显著降低，细胞...     

远隔缺血预适应血清外泌体增加SH-SY5Y细胞糖氧剥夺耐受的生物信息学分析

目的研究远隔缺血预适应(RIPC)血清外泌体对SH-SY5Y细胞基因表达的影响,探讨差异表达基因对神经细胞在糖氧剥夺(OGD)耐受中的作用。方法RIPC前后分离人血清外泌体,取RIPC前外泌体(Hu E-C)和RIPC后外泌体(Hu E-RIPC)。将SH-SY5Y细胞分为空白组(正常培养细胞),对照组(培养液加入Hu E-C)和RIPC组(培养液加入Hu E-RIPC),采用高通量测序各组细胞基因表达并进行生物信息学分析,将3组细胞置于OGD条件下,检测细胞活力,采用实时定量PCR及Westernblot检测与神经低氧/缺血相关的基因表达。结果生物信息学显示,RIPC组热休克蛋白(HSP)基因差异表达增加。MTS检测发现,OGD条件下,RIPC组细胞活力明显高于空白组(0.673±0.056vs0.481±0.027,P0.01)。实时定量PCR和Westernblot检测显示,OGD条件下,RIPC组HSP70m RNA表达和蛋白表达明显高于空白组和对照组(P0.05)。结论人RIPC血清外泌体可引起众多基因表达变化,其中HSP70表达增加可能是其低氧耐受增加的一个原因。     

朊蛋白106-126肽段对PC12细胞毒性作用的形态学观察

目的研究朊蛋白106-126肽段在细胞水平上的毒性作用。方法PC12细胞常规培养后加入神经生长因子(NGF)诱导成神经元样细胞,再加入朊蛋白106-126肽段,MTT法检测细胞存活率,观察细胞生长和形态变化。结果细胞接触肽段后存活率下降。光镜下可见细胞贴壁不良,胞体缩小,细胞突起断裂缩短;荧光染色可见到突起缩短、胞核固缩并染成橘红色的凋亡细胞;电镜下可见胞质中出现空泡样结构,细胞染色质浓集于核膜内侧并裂解成碎块状,可见凋亡小体。结论利用106-126肽段感染分化的PC12细胞可能是在细胞水平上研究朊蛋白毒性作用的理想模型。     

桑白皮多糖通过调控miR-122表达对氧糖剥夺/再灌注诱导的PC12细胞损伤的影响

目的:探究桑白皮多糖对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)诱导的PC12细胞损伤的影响及可能机制。方法:体外培养PC12细胞,经不同剂量(0.1、0.2、0.4μg/mL)桑白皮多糖干预后,行OGD/R处理(氧糖剥夺2 h,复氧12 h);比色法检测氧化应激指标[乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)],流式细胞术检测凋亡率,蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测活化的半胱天冬酶(Cleaved-Caspase)-3、Cleaved-Caspase-9蛋白表达,逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测微小RNA(miR)-122表达。转染miR-122抑制剂或模拟物至PC12细胞,经0或0.4μg/mL桑白皮多糖干预后,行OGD/R处理,比色法、流式细胞术、Western Blot分别检测氧化应激指标、凋亡率、Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9蛋白表达。结果:桑白皮多糖降低OGD/R诱导的PC12细胞中LDH漏出率、MDA含量,提高SOD活性,同时降低细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、Cle...     

Aβ1-42诱导原代海马神经细胞建立阿尔茨海默病细胞模型

目的 以Aβ1-42诱导原代海马神经细胞建立阿尔茨海默病细胞模型.方法 体外培养原代海马神经细胞,加入不同浓度Aβ1-42诱导并收获细胞,采用MTT法观察细胞活力,流式细胞术观察细胞凋亡及继发性死亡情况.结果 Aβ1-42作用于神经细胞后细胞活力明显下降,细胞存活率呈浓度依赖性降低;流式结果显示细胞凋亡及继发性死亡呈浓度依赖性增加.结论 Aβ1-42诱导后海马神经细胞存活率下降,细胞凋亡,可作为理想的AD细胞模型.     

中药复方筋脉通对高糖培养SD大鼠背根神经元凋亡及NGF表达的影响

目的通过高糖培养大鼠背根神经节神经元(DRGn)细胞模型,探讨中药筋脉通含药血清对DRGn凋亡及NGF表达的影响。方法采用混合酶分步消化法培养DRGn。将体外培养的24 h的DRGn分为正常对照组(Con)、高糖组(HG,45 mmol/L葡萄糖)、筋脉通组(JMT)、牛磺酸组(Tau),加入含药血清(浓度均为10%)干预24 h后,DRGn细胞凋亡率采用TUNEL试剂盒进行检测,NGF的蛋白及mRNA的表达采用免疫印迹法及实时荧光定量聚合酶链式反应法进行检测。结果与HG组比较,JMT组和Tau组的细胞凋亡率均显著降低(P<0. 01);与HG组比较,JMT组NGF蛋白及mRNA的表达显著升高(P<0. 01);与Tau组比较,JMT组NGF蛋白表达显著升高(P<0. 01)。结论筋脉通含药血清可降低高糖培养DRGn细胞凋亡率,增加NGF蛋白及mRNA的表达,且升高NGF蛋白表达的作用优于牛磺酸。     

磷酸化ERK1/2在6-OHDA致PC12细胞损伤中的作用

目的观察细胞外信号调节激酶(ERK1/2)在6-OHDA致PC12细胞损伤的帕金森(PD)细胞模型中所起的作用。方法 6-OHDA处理体外培养的PC12细胞株,建立PD细胞模型。MTT法检测6-OHDA对PC12细胞活力的影响,免疫印迹法研究p-ERK1/2蛋白表达随时间变化的趋势,并检测ERK1/2上游激酶抑制剂PD98059和U0126对6-OHDA诱导ERK1/2磷酸化及凋亡的影响。结果 PC12细胞随6-OHDA作用时间的增加,p-ERK1/2出现表达升高;PD98059和U0126明显抑制6-OHDA所致的ERK1/2磷酸化,明显减低了细胞损伤的程度。结论在6-OHDA介导的多巴胺神经元损伤中呈现ERK1/2磷酸化,抑制ERK1/2可以6-OHDA引起的PC12细胞损伤,该过程可能在调控PD多巴胺能细胞损伤中起重要作用。