干细胞的定向分化及中药干预的研究现况

干细胞是一种具有无限自我复制能力和向多种细胞分化潜能的细胞。现在被广泛研究的有胚胎干细胞和骨髓干细胞，前者指早期胚胎的多能干细胞（pluripotent cell），后者指存在于骨髓中的具有多向分化潜能和自我更新能力的干细胞。目前认为骨髓中至少含有两种干细胞：造血干细胞（hematopietic stem cell，Hsc）和间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）。近几年来将干细胞定向分化的神经细胞或神经前体细胞移植治疗神经系统疾病受到了广泛的关注，成为临床和实验研究的热点之一。因此如何将胚胎干细胞和骨髓干细胞定向分化为神经细胞或神经前体细胞是研究的关键所在。现主要就干细胞定向分化为神经细胞及中药干预的研究现况作一综述。     

自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑卒中的疗效

脑卒中治疗后多数病人都会遗留不同程度的后遗症,包括深浅感觉障碍、肢体功能障碍以及言语功能缺失等,甚至长期昏迷呈植物状态.目前康复治疗是改善恢复期后遗症的主要手段,但并不理想.近年来,国内外学者提出了神经干细胞移植,并且在临床研究与基础研究方面取得一些成果.为了证实人骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞的体外定向诱导分化,本文拟探讨自体BMSCs经蛛网膜下腔移植治疗脑卒中的临床疗效和安全性.     

大鼠骨髓间充质干细胞培养、鉴定及神经样细胞分化

目的建立稳定的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外培养、纯化、扩增的实验体系,并进行细胞表面抗原的鉴定及定向诱导分化检测。方法采用全骨髓贴壁培养法分离、纯化大鼠BMSCs;观察细胞形态,采用细胞免疫化学染色及流式细胞术检测细胞表面CD90、CD29、CD34和CD45表达;分别使用β-巯基乙醇及碱性成纤维细胞生长因子诱导细胞向神经样细胞分化,采用Western印迹法检测诱导后神经标志蛋白[神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)]表达。结果培养至第3代的BMSCs,CD90、CD29表达阳性,CD34和CD45表达阴性;经诱导后,神经标志蛋白表达显著增高(P<0.05)。结论全骨髓贴壁培养法可分离、培养得到高纯度、具备相关生物学特性的BMSCs,且经诱导可定向分化为神经样细胞。     

三七皂甙诱导骨髓基质细胞分化为心肌样细胞的实验研究

目的探讨三七皂甙对体外定向诱导猪骨髓基质细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的影响。方法用穿刺方法抽取猪骨髓,分离并培养骨髓基质细胞,中药三七皂甙定向诱导分化为心肌样细胞。倒置显微镜下观察细胞形态,免疫细胞化学法鉴定心肌细胞特异性抗原标志物肌钙蛋白T,用RT-PCR对心肌肌球蛋白重链(β-MHC)进行鉴定。取培养的猪心肌细胞作为阳性对照,未经三七皂甙诱导正常培养的骨髓基质细胞作为阴性对照。结果猪MSCs经三七皂甙诱导2h后,大部分MSCs可分化为心肌样细胞,免疫细胞化学检测细胞中的肌钙蛋白T呈阳性,RT-PCR显示能表达β-MHC。结论MSCs是骨髓来源的具有多向分化潜能的干细胞,在三七皂甙的定向诱导下,可以向心肌样细胞分化,有望成为心衰及心肌梗死等心肌损伤时干细胞移植治疗的理想细胞材料。     

骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为心肌样细胞的实验研究

目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养及向心肌样细胞转化的条件。方法 获取成年大鼠胫骨干骨髓，采用贴壁法进行间充质干细胞的培养、传代，观察经5-氮胞苷诱导后骨髓间充质干细胞的生长和分化。结果 大鼠骨髓基质细胞贴壁旱集落生长，5-氮胞苷诱导骨髓基质细胞转化为心肌样细胞，结论 骨髓基质细胞能够在体外被诱导分化为心肌样细胞，为自体心肌细胞移植提供了一种良好的来源。     

自体造血干细胞移植能够治疗糖尿病吗？

国内外学者在动物实验和体外培养研究中发现,骨髓来源的干细胞在特定的条件下可定向分化为胰岛素分泌细胞等组织细胞;与此同时,虽然胰岛移植在治疗1型糖尿病患者中取得了一定的成绩,但胰岛组织的供体来源匮乏成为制约其进一步发展的主要障碍。因此,有关胚胎干细胞、胰腺干细胞、骨髓干细胞等各种来源的干细胞在体外定向诱导分化为胰岛素分泌细胞方面的研究,近年来成为热点课题。最近一段时间,国内不少医院开展了自体造血干细胞移植治疗糖尿病及其并发症方面的试验性研究,在媒体的大力宣传下,大有愈炒愈热的趋势。     

骨髓基质干细胞向神经细胞诱导分化的形态学研究

骨髓基质干细胞(BMSCs)是骨髓内的一种多潜能的干细胞,具有多向分化及自我更新的能力,参与组织细胞的替代及修复。在一定条件下,BMSCs可分化为中胚层以外的组织。2004年5月～8月,我们通过研究体外人胚向神经细胞诱导分化过程的形态学变化规律,旨在为BMSCs的开发应用提供实验依据。     

骨髓间充质干细胞治疗缺血性脑卒中的多重作用机制

<正>骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗缺血性脑卒中已得到动物实验和临床研究的证实,但其复杂的作用机制尚待进一步研究。本文就BMSCs治疗缺血性脑卒中的移植途径,向脑缺血区域的定向迁移、免疫调制功能、抑制细胞凋亡、增强脑缺血区的血管发生、神经营养因子的分泌、分化替代及重建神经环路等多个方面进行文献综述。1 BMSCs移植途径BMSCs可通过颅内和血管内两种移植途径接种〔1〕。颅内     

BMSCs的分离培养、纯化与鉴定

目的 建立一种持续、稳定的可多向分化的骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外分离培养体系.方法 运用密度梯度离心法从1月龄新西兰兔骨髓中分离培养BMSCs,利用相差显微镜观察其形态及生长情况,扫描电镜观察其细胞结构,运用流式细胞术分析分离细胞群所处细胞周期和细胞活力,用MTT比色法绘制细胞生长曲线,并用特定诱导液将分离的BMSCs向成骨细胞和成脂肪细胞定向诱导分化,利用ALP和油红O进行染色鉴定.结果 所分离的BMSCs细胞在形态学观察与生长动力学上均符合BMSCs特征,分离培养的BMSCs细胞在第3天进入对数生长期,第10天进入平台期;在成骨、成脂肪的诱导培养条件下,分别出现成骨、成脂肪表型特征,可进一步定向分化,结论所收获的细胞具有BMSCs的特异性.     

Wnt信号系统对骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的作用

骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病、慢性心力衰竭等已经成为心脏病治疗学的热门课题,但细胞疗法依赖于干细胞向心肌细胞的定向分化,目前对BMSCs分化为心肌细胞的分子机制了解不多。Wnt信号系统与器官的分化和形成密切相关,大量研究表明,Wnt信号系统对干细胞向心肌细胞的定向分化有重要作用,对该信号系统的控制,在心脏病的细胞疗法中显得尤其重要。本文将就Wnt信号系统在BMSCs的增殖、迁移及心肌定向分化中的调控作用展开论述。     

骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌细胞的研究进展

<正>骨髓间充质干细胞(BMSCs)又称骨髓基质干细胞,是骨髓内的一类非造血干细胞,它能够分化为多种中胚层来源的间质细胞。心肌细胞不具备再生能力,故损伤的心肌细胞无法通过自身的增殖和分化来修复,心肌梗死、心衰、心肌重构等均为传统医学方法难以医治的顽疾。近年研究发现,BMSCs在一定的诱导条件下,可以分化为心肌细胞。BMSCs具备易获得性、多     

骨髓间充质干细胞提高老年性痴呆大鼠学习记忆能力的研究

目的观察定向神经诱导的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对老年性痴呆大鼠学习记忆能力的影响。方法选用24月龄健康雄性W istar大鼠制备自然衰老痴呆模型,将模型大鼠随机分为3组,每组10只。对照组大鼠双侧海马注射生理盐水;干细胞移植组大鼠注射BMSCs;分化移植组大鼠注射定向神经细胞诱导的BMSCs。大鼠的学习能力在移植前及实验后4 w通过Y迷宫试验测定,记忆能力测定在学习能力测定48h后进行;采用免疫荧光组织化学染色法观察大鼠海马区胆碱乙酰化酶(ChAT)阳性细胞。结果对照组大鼠学习记忆成绩均下降,与术前相比,差异无显著性意义(P>0.05);干细胞移植组大鼠学习记忆成绩均提高,与移植前相比差异无显著性意义(P>0.05);分化移植组大鼠学习记忆成绩均较移植前提高(P<0.01);与对照组相比,其他两组大鼠学习记忆成绩均提高(P<0.05)。分化移植组大鼠海马区可观察到ChAT阳性细胞。结论 BMSCs移植可以提高老年性痴呆大鼠的学习记忆能力,且定向神经诱导分化的BMSCs移植治疗效果优于未分化的BMSCs,提示BMSCs移植对痴呆大鼠的认知功能障碍具有一定的治疗作用。     

骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死的机制

干细胞移植是目前心肌梗死治疗方法的进展,而骨髓间充质干细胞（BMSCs）是其中有临床应用前景的细胞之一。本文通过介绍BMSCs向心肌样细胞的分化;BMSCs的促血管新生作用;BMSCs对心肌细胞保护和抗凋亡作用;改善心室重构等总结了骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的机制。     

脂肪源性基质细胞特性及其向神经细胞分化的研究进展

干细胞移植治疗中枢神经系统损伤和变性疾病已成为研究热点，广泛应用于基础研究及临床治疗。其中研究较多的是骨髓基质细胞（bonemar—row stromal cells，BMSC），但骨髓基质细胞的获取给病人带来一定的痛苦，且数量有限，不利于大规模的实验研究及临床应用。近年来发现脂肪组织中存在一些类似于骨髓基质细胞的细胞，此类细胞具有干细胞特征，可自我复制，高度增殖，并具备多向分化潜能。     

川芎嗪联合脑源性神经营养因子诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)、川芎嗪定向诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经样细胞的潜能。方法分离并培养大鼠股骨的BMSCs,细胞分4组进行药物诱导,对照组、BDNF组、川芎嗪组及BDNF联合川芎嗪组。诱导过程中用倒置显微镜观察细胞的形态变化,并应用实时荧光定量PCR技术和免疫细胞化学方法鉴定诱导后细胞内巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)mRNA和蛋白表达量的变化。结果川芎嗪联合BDNF组诱导BMSCs向神经细胞分化的效率明显高于其他诱导组。结论川芎嗪联合BDNF可以明显提高BMSCs向神经细胞分化的效率和存活率。     

骨髓源性肝细胞的研究进展

经典发育生物学认为,成体干细胞的分化能力有限,并具有器官特异性,主要用于维持细胞功能的稳态[1],一般不能分化为其他细胞类型.但在1997年,Eglitis等[2]用亚致死剂量放射性核素照射雌性小鼠,破坏其骨髓系统,然后将雄性小鼠的骨髓干细胞移植给雌鼠,结果发现这些细胞在受体内重新分化为神经胶质细胞,表明骨髓干细胞在一定条件下可以跨胚层分化成其他类型的细胞,这种现象被称为横向分化(transdifferentiation).近5年来,有关骨髓干细胞横向分化为肝细胞的研究已成为国际上干细胞研究的热点之一,这些研究发现了骨髓干细胞的新特性,有学者乐观地认为将来可以移植患者自身骨髓干细胞治疗急、慢性肝衰竭.     

骨髓间充质干细胞体外诱导神经干细胞分化的观察

来源于人胚脑组织的神经干细胞及来源于16岁非造血系统疾病患者的胸骨骨髓间充质干细胞(BMSCs),采用Transwell培养板在体外共同培养(共培养组),观察神经干细胞的形态变化,在共培养第7天用免疫荧光染色检测神经干细胞中神经元细胞特异性标志物特异性烯醇化酶(NSE),并与单纯低糖DMEM培养基培养的神经干细胞(对照组)进行比较.结果显示,共培养组中的NSE阳性细胞达32.7%±11. 5%,而对照组未见NSE阳性细胞,两组相比,P＜0.05.认为BMSCs在体外可诱导神经干细胞分化为神经元.     

细胞外基质与神经干细胞的增殖、分化和迁移

细胞外基质可影响细胞的分化，增殖，黏附，形态发生和表型表达等生物学过程。神经干细胞具有益特异性的分化潜能，其增殖，分化和迁移与细胞外基质有非常密切的关系。细胞外基质通过多种细胞因子，蛋白多糖和糖蛋白等调控神经干细胞的增殖。分化和迁移；同时，神经干细胞也可分泌相应的细胞外基质组分控制自身及其功能细胞的数量和定位。了解神经干细胞与细胞外基质的相互作用。对于掌握神经干细胞的增殖，分化和迁移具有重要意义。     

骨髓干细胞移植再生心肌的质疑

骨髓干细胞具有多向分化潜能,可横向分化为心肌细胞,现已开展骨髓干细胞移植再生心肌治疗研究。但也有一些研究对此提出质疑,认为骨髓干细胞移植入心肌内并不能分化为心肌细胞,初步观察到的有益作用可能是促进了新生血管形成,改善心肌供血的结果。移植过程可能影响冠脉循环,而且可能具有致心律失常。     

犬骨髓间叶干细胞的多向分化潜力

目的观察犬骨髓间叶干细胞的体外多向分化潜力,为损伤组织的干细胞移植修复提供理论基础.方法利用梯度-贴壁筛选法分离、培养与扩增骨髓间叶干细胞.利用化学诱导剂5-氮胞苷(20μmol/L),血管内皮细胞生长因子(VEGF 10ng/ml),成骨细胞诱导剂(地塞米松10nMol/L,抗坏血酸0.05mMol,β甘油磷酸钠10mMol/L)以及成脂肪细胞诱导剂(1-甲基3-异丁基黄嘌呤0.5mmol/L,地塞米松1μmol/L,胰岛素10mg/L,消炎痛100mmol/L),分别定向诱导骨髓间叶干细胞分化为心肌细胞、血管内皮细胞、成骨细胞与脂肪细胞.再应用细胞形态观察、免疫细胞化学染色及电镜对分化细胞进行鉴定.结果利用梯度-贴壁筛选法可以分离培养与扩增骨髓间叶干细胞.5-氮胞苷可诱导干细胞呈现肌管、肌丝、心房颗粒,且肌细胞特异性蛋白α-actinin,Myosin,α-Actin,Troponin Ⅰ免疫染色阳性;VEGF可诱导骨髓间叶干细胞出现管网状、血管样及鹅卵石样结构,vWF免疫染色阳性;成骨细胞诱导剂可诱导分化细胞碱性磷酸酶阳性;成脂肪细胞诱导剂使分化细胞内出现脂肪滴,油红O染色示脂滴为橙红色.结论成年犬骨髓间叶干细胞在体外具备多向分化潜力.在化学或生物诱导剂的作用下,犬骨髓间叶干细胞能够定向分化为心肌细胞、血管内皮细胞、成骨细胞、脂肪细胞等多种间叶组织类型细胞.