环氧合酶-2、核因子-κB在胃癌、癌前病变中的表达及尼美舒利逆转其表达的实验研究

目的探讨环氧合酶（COX）-2、核因子（NF）-κB在胃癌及异型增生中的表达，并研究尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖及COX-2、NF-κB表达的影响。方法采用免疫组化Powervi-sionTM两步法对84例胃癌和54例胃异型增生组织中COX-2、NF-κB的表达进行检测；在体外实验中对人胃癌SGC-7901细胞采用细胞培养，MTT法检测不同浓度尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用，免疫组化、Western blot方法检测药物对COX-2、NF-κB表达的影响。结果COX-2、NF-κB在胃癌中的阳性表达率分别为66．67％、59．52％，均高于异型增生（P〈0．05），COX-2表达与肿瘤的大小、淋巴转移呈正相关（P〈0．05），并与NF-κB的表达相关（P〈0．05），COX-2与肿瘤浸润深度正相关（P〈0．05）。体外实验中结果显示尼美舒利可以抑制人胃癌SGC-7901细胞生长并具有浓度、时间依赖性；与阴性对照组相比，药物作用48h后尼美舒利100、200 μmol／L组COX-2、NF-κB蛋白表达明显减弱并具有剂量依赖性（P〈0．05），COX-2、NF-κB之间正相关（P〈0．05）。结论COX-2、NF-κB与胃癌的发生转移相关，并且NF-κB蛋白作为上游调控因子调节COX-2的表达。尼美舒利可以抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖，抑制COX-2、NF-κB的表达在其抑制肿瘤机制中可能具有一定作用。     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398抑制胃癌细胞P-糖蛋白表达

目的 探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂NS-398对胃癌细胞株SGC-7901 P-糖蛋白（P-gp）表达的影响。方法 胃癌细胞株SGC-7901经浓度分别为0、10、100μmol／L的NS-398处理后，酶联免疫吸附试验检测NS-398对胃癌细胞前列腺素E2（PGF2）分泌的影响，24、48h后用RT-PCR检测多药耐药（mdr）1 mRNA表达，48h后用免疫细胞化学染色法检测P-gp表达。结果 NS-398可显著抑制胃癌细胞株SGC-7901 PGE2分泌，并呈浓度依赖性（P〈0．05）。不同浓度NS-398作用于细胞后，胃癌细胞株SGC-7901的mdr1／P-gp表达受不同程度抑制，100μmol／L的NS-398对mdr1 mRNA表达抑制作用强于10μmol／L（P〈0．01）。不同浓度药物与测量时间为交互作用．作用48h与24h相比，NS-398对mdr1 mRNA表达的抑制作用更强（P〈0．01）。结论 NS-398可抑制SGC-7901的mdr1／Pgp表达，且呈剂量效应关系。NS-398可能通过抑制COX-2活性，抑制COX-2下游产物PGE2表达，从而抑制P-gp表达。选择性COX-2抑制削可能有助于减轻肿瘤细胞对化疗药物的耐药性。     

环氧合酶-2、核因子(-K)_B在胃癌、癌前病变中的表达及尼美舒利逆转其表达的实验研究

目的探讨环氧合酶(COX)-2、核因子(NF)-kB 在胃癌及异型增生中的表达,并研究尼美舒利对人胃癌 SGC-7901细胞增殖及 COX-2、NF-kB 表达的影响。方法采用免疫组化 Power vi-sionTM 两步法对84例胃癌和54例胃异型增生组织中 COX-2、NF-kB 的表达进行检测;在体外实验中对人胃癌 SGC-7901细胞采用细胞培养,MTT 法检测不同浓度尼美舒利对人胃癌 SGC-7901细胞增殖的抑制作用,免疫组化、Western blot 方法检测药物对 COX-2、NF-kB 表达的影响。结果 COX-2、NF-kB 在胃癌中的阳性表达率分别为66.67%、59.52%,均高于异型增生(P<0.05),COX-2表达与肿瘤的大小、淋巴转移呈正相关(P<0.05),并与 NF-kB 的表达相关(P<0.05),COX-2与肿瘤浸润深度正相关(P<0.05)。体外实验中结果显示尼美舒利可以抑制人胃癌 SGC-7901细胞生长并具有浓度、时间依赖性;与阴性对照组相比,药物作用48 h 后尼美舒利100、200μmol/L 组 COX-2、NF-kB 蛋白表达明显减弱并具有剂量依赖性(P<0.05),COX-2、NF-kB 之间正相关(P<0.05)。结论 COX-2、NF-kB与胃癌的发生转移相关,并且 NF-kB 蛋白作为上游调控因子调节 COX-2的表达。尼美舒利可以抑制人胃癌 SGC-7901细胞增殖,抑制 COX-2、NF-kB 的表达在其抑制肿瘤机制中可能具有一定作用。     

尼美舒利和5-氟尿嘧啶联用对胃癌细胞的协同抑制作用及机制

目的 体外研究选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利和5-氯尿嘧啶（5-FU）对胃癌细胞的抑制作用及机制。方法 以胃癌细胞株MKN45、MKN28为研究对象．观察尼美舒利和5-FU单独或联合应用对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。应用MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡（FITC-Annexin-V/PI双标记）和细胞剧期，RT-PCR观察朋药前后COX-2 mRNA在两株细胞中的表达，Western免疫印迹法观察经两种药物单独和联合作用48h后细胞内凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果 在MKN45和MKN28细胞中均可观察到不同水平的COX-2 mRNA表达，尼美舒利和5FU联合应用可明显抑制COX-2 mRNA表达。尼美舒利可抑制两株细胞的增殖并诱导凋亡。尼美舒利和5-FU具有协同抑制细胞增殖及诱导凋亡的作用，该作用与两种药物作用顺序无关，但在联用时作用最强。两药协同抑制增殖的作用主要通过协同杀伤和诱导凋亡而实现。5-FU增强了凋亡诱导蛋白Bax的表达，而尼美舒利则减少凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达。两药联用可明显抑制胃癌细胞株生长。结论 选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利和5-FU通过抑制COX-2 mRNA的表达硬增强Bax／Bcl-2的表达比率诱导胃癌细胞凋亡．从而对胃癌细胞起到协同抑制增殖的作用。     

塞来昔布对人胃癌SGC-7901细胞系VEGF表达的影响

目的探讨选择性环氧合酶2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人胃癌SGC-7901细胞系血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法设置时效组和量效组,利用RT—PCR以及Western blot技术检测塞来昔布对SGC-7901细胞系VEGFmRNA和蛋白表达的影响。结果随着药物浓度的增加和时间的延长,VEGFmRNA和蛋白表达均呈现相应的下降趋势。结论塞来昔布可以在一定程度上有效地抑制人胃癌SGC-7901细胞系VEGF的表达。     

COX-2和VEGF在宫颈癌组织中的表达及临床意义

采用免疫组化法检测45例宫颈癌组织和15例正常宫颈组织标本环氧合酶-2（COX-2）和血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达及其临床意义。结果COX-2和VEGF在宫颈癌组织中阳性表达率（37．8％,60．0％）均明显高于正常宫颈组织（均为0）．P〈0．05;COX-2高表达与患者组织分化、组织学类型及淋巴结转移有关,VEGF表达与患者临床分期及淋巴结转移有关,宫颈癌组织中COX-2和VEGF表达存在显著正相关性（r=0．53,P〈0．05）。提示COX-2及VEGF表达可能与宫颈癌的发生、发展密切相关,抑制或阻断COX-2及VEGF表达对宫颈癌具有防治作用。     

强力霉素对胃癌细胞SGC-7901基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2表达的影响

背景：强力霉素对结肠癌细胞的分化和抑制作用已有报道，但其对胃癌细胞的作用尚未见报道。目的：观察强力霉素对人胃癌细胞SGC-7901的生长抑制作用及其对基质金属蛋白酶（MMP）-2和基质金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）-2表达的影响，探索胃癌治疗的新方法。方法：采用不同浓度的强力霉素作用于胃癌细胞SGC-7901，以噻唑蓝（MIT）法测定其细胞毒作用；逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法半定量测定MMP．2和TIMP-2mRNA的表达；免疫组化法观察MMP-2蛋白的表达。结果：强力霉素可抑制胃癌细胞SGC-7901的生长，具有浓度和时间依赖性（P〈0．01）。强力霉素可下调MMP-2mRNA和MMP-2蛋白的表达，上调TIMP-2mRNA的表达，具有浓度依赖性（P〈0．05）。结论：强力霉素能抑制胃癌细胞SGC-7901的生长，其作用机制可能与下调MMP-2表达、上调TIMP-2表达有关。     

电穿孔法介导环氧合酶-2基因沉默抑制裸鼠移植瘤的研究

大量研究表明,抑制环氧合酶（COX）-2高表达肿瘤中COX-2的表达可抑制新生血管形成,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖.因此,人们希望通过抑制COX-2表达来预防和治疗相关肿瘤.为进一步验证COX-2是否可作为相关肿瘤治疗的靶点,我们采用RNA干扰（RNAi）方法,构建靶向COX-2的短发夹状双链RNA（shRNA）真核表达质粒,在体电穿孔法转染人胃癌细胞系SGC-7901,抑制细胞中COX-2表达,观察裸鼠皮下接种SGC-7901细胞的生长情况.     

利用siRNA抑制环氧合酶-2对人胃癌裸鼠移植瘤的影响

目的 观察环氧合酶2(COX-2)对人胃癌裸鼠移植瘤的影响并探讨其机制.方法 构建靶向COX-2表达质粒和在BALB/c裸鼠皮下建立SGC-7901人胃癌细胞动物模型,用COX-2表达质粒基因转染治疗.结果 构建的COX-2表达质粒在体内、外均可稳定表达.COX-2基因治疗可抑制裸鼠皮下肿瘤的生长和淋巴管的生成.COX-2基因转染下调血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达.结论 通过构建靶向COX-2 siRNA真核表达载体可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长和淋巴管生成,COX-2对抑制胃癌细胞(SGC-7901)治疗有确切效果.     

莪术对SGC7901胃癌细胞COX-1,COX-2,VEGF和PGE2表达的影响

目的:观察莪术对人胃癌SGC7901细胞 COX-1,COX-2,VEGF和PGE2的影响．方法:MTT法观察莪术对胃癌细胞的抑制作用,绘制其抑制率曲线,选取抑制率为25％时的药物浓度作为加药浓度,用RT-PCR以及Western blot方法检测加药后人胃癌细胞 COX-1,COX-2基因及其蛋白表达的变化．用ELISA方法检测加药后培养基中VEGF和 PGE2的表达情况．结果:莪术对胃癌细胞有一定的抑制作用,且随着浓度的增加,其抑制作用加强;将RT-PCR 产物经电泳分析,证实胃癌细胞中有COX-1、 COX-2基因的表达,对各条带进行灰度分析发现:中西药对COX-1和COX-2均有抑制作用,莪术对COX-2的抑制作用大于塞来昔布;Western blot曝光结果可见,COX-1各组在 70 kDa处可见特异性的蛋白条带,COX-2各组在80 kDa处可见特异性的蛋白条带．对各条带进行灰度分析发现:各组中西药对COX-2 均有明显的抑制作用,而对COX-1则无抑制作用,其中,莪术对COX-2的抑制作用要强于celecoxib;西药celecoxib及莪术组可明显降低人胃癌细胞VEGF的表达,与细胞组相比,其差别有统计学意义(91．0±18．2,127．8 ±12．1 ng／L vs162．0±15．1 ng／L,P<0．01);西药celecoxib组PGE2表达低于细胞组,但其差别无统计学意义,莪术可明显降低人胃癌细胞PGE2的表达,与细胞组相比,其差别有统计学意义(67．5±6．9 ng／L vs 78．7±5．6 ng／L, P<0．01)．结论:莪术可能是通过抑制COX-2及其下游 PGE2表达,使VEGF表达下调而抑制肿瘤．     

胃乐散对大鼠溃疡组织TXA2、PGI2 及COX-2含量的影响及意义

目的 观察胃乐散对大鼠实验性溃疡血栓素A2(TXA2)和前列腺素I2( PGI2)及环氧合酶2(COX-2)的影响,并探讨其作用机理.方法 SD大鼠48只,随机分为正常对照组、模型组、胃乐散低剂量组、胃乐散中剂量组、胃乐散高剂量组和雷尼替丁组.采用冰醋酸烧灼法制备大鼠胃溃疡模型,连续用药后第14天处死大鼠,取溃疡部位组织提取蛋白.用ELISA法检测组织中血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)的水平变化,并观察TXB2/6-Keto-PGF1α的比值变化.Western blot检测组织中COX-2的含量.结果 与正常对照组比较,模型组6-Keto-PGF1α、COX-2水平降低(P＜0.05),TXB2及TXB2/6-Keto-PGF1α升高(P＜0.05);胃乐散高剂量组6-Keto-PGF1α的含量高于正常对照组(P＜0.05).与模型组比较,胃乐散中、高剂量组及雷尼替丁组6-Keto-PGF1α、COX-2的含量增加,特别是胃乐散高剂量组增加更为明显(P＜0.01),胃乐散高剂量组及雷尼替丁组TXB2低于模型组(P＜0.05),特别是TXB2/6-Keto-PGF1α降低更为显著(P＜0.01).结论 胃乐散治疗胃溃疡可能是通过促进PGI2分泌,纠正TXA2/PGI2的失衡来实现的.     

去氢骆驼蓬碱通过下调COX-2表达抑制胃癌细胞迁移和侵袭

目的探讨去氢骆驼蓬碱对人胃癌MKN-45细胞环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达、迁移和侵袭的影响。方法 MKN-45细胞接种于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中,常规培养24h后加去氢骆驼蓬碱(2、4、8、16、32μg/ml),同时设置对照组不加药物,空白组只加培养液不含细胞,分别培养24h、48h、72h,MTT法检测细胞增殖率;western blot法检测COX-2表达;划痕损伤愈合实验及Transwell小室基质侵袭实验检测胃癌细胞体外迁移和侵袭。结果去氢骆驼蓬碱剂量依赖性抑制MKN-45细胞COX-2表达(P0.01);与对照组相比,去氢骆驼蓬碱组MKN-45细胞迁移和侵袭能力明显下降(P0.01)。结论去氢骆驼蓬碱可能通过下调COX-2表达抑制胃癌细胞迁移和侵袭。     

胃癌和癌前病变中幽门螺杆菌及环氧化酶-2和p53的表达及相关性研究

[目的]检测慢性胃炎、胃癌前病变及胃癌（GGa）的胃黏膜组织中幽门螺杆菌（Hp）,环氧化酶-2（COX-2）和突变型p53的表达,探讨Hp感染在胃癌发生过程中与COX-2、p53动态表达的相关性.[方法]选择经胃镜检查及病理组织学证实为慢性浅表性胃炎（CSG）、慢性萎缩性胃炎（CAG）、肠上皮化生（IM）、不典型增生（Dys）及GCa患者各100例,快速尿素酶试验（HPUT法）和组织学改良Giemsa染色联合检测Hp,通过免疫组化检测Hp感染组和非感染组患者胃黏膜COX-2、p53.[结果]①Hp、COX-2阳性率随病变进展呈上升趋势,Hp阳性率在CAG、IM、Dys、GCa各组中显著高于CSG组（P＜0.05）;COX-2在IM、Dys、GCa各组中与慢性胃炎比较有统计学意义（P＜0.05）;②Hp感染阳性率和COX-2蛋白表达阳性率在胃癌前病变组织中存在相关性（P＜0.05）;③p53阳性率在GCa与CSG、CAG相比差异有统计学意义（P＜0.01）;④在GCa组中,Hp阳性组p53的阳性表达明显高于Hp阴性组（P＜0.05）.[结论]GCa的形成与Hp感染、突变型p53、COX-2等多种因素及其相互作用有关,可视为GCa发生的危险预警信号之一;在GCa高危人群的追踪观察和随访中,进行Hp、p53、COX-2的联合检测,对发现胃癌前病变和GCa有一定临床意义.     

COX-2在星形细胞瘤中的表达及其与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系

目的探讨环氧化酶-2（COX-2）在脑星形细胞瘤中的表达,及其与肿瘤凋亡和增殖的关系。方法采用免疫组化S-P法检测80例星形细胞瘤患者脑组织（观察组）和10例正常人脑组织（对照组）COX-2和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况,并计算其凋亡指数（AI）和增殖指数（PI）。结果观察组COX-2的阳性表达率明显高于对照组,并与星形细胞瘤的病理分级有关。观察组PI明显高于对照组,且COX-2阳性者高于阴性者;观察组AI明显高于对照组,而COX-2阳性者低于阴性者。结论COX-2的过表达可抑制脑星形细胞瘤细胞的凋亡,促进肿瘤细胞的增殖,在星形细胞瘤的发生和发展中起重要作用。     

Cyclooxygenase-2 Inhibitor Nimesulide Suppresses Telomerase Activity by Blocking Akt/PKB Activation in Gastric Cancer Cell Line

Nonsteroidal antiinflammatory drugs (NSAIDs) have been reported to have antiproliferative effects in neoplastic cells of different origin during the past few decades. We aimed to study the effects of the selective COX-2 inhibitor, nimesulide, on cell viability and telomerase and Akt/PKB activity in the human gastric cancer cell line MKN-45 and to explore the molecular mechanism for the antitumor activity of the selective COX-2 inhibitor. We tested the influence of nimesulide on the gastric cancer cell line MKN-45 in vitro. Trypan blue exclusion was used to determine the cell viability after incubation for 0, 12, 24, and 48 hr in different concentrations of nimesulide 0, 25, 50, 100, 200 microM). After treatment or no treatment with 100 microM nimesulide for 0, 12, 24, or 48 hr in the presence or absence of 300 nM okadaic acid for 2 hr, telomerase and Akt/PKB activity was measured using TRAP PCR-ELISA and nonradioactive IP kinase assays, respectively. In the gastric cancer cell line MKN-45 nimesulide caused a time- and dose-dependent reduction in cell numbers and significantly inhibited telomerase and Akt/PKB activity; the inhibition of telomerase activity was partly associated with the attenuation of Akt/PKB activity. These results demonstrate that the selective COX-2 inhibitor suppresses the telomerase activity of gastric cancer cells, in part by blocking the activation of protein kinase B, which provides a new signaling mechanism responsible for the anticancer effects of the selective COX-2 inhibitor.     

环氧化酶2在大肠癌中的表达及其与大肠癌生物学特性的关系

[目的]通过观察环氧化酶2（Cyclooxygenase-2,COX-2）在大肠腺瘤、大肠癌中的表达及其与大肠癌生物学特性的关系,初步探讨其在大肠癌发生、发展过程中的作用机制。[方法]应用免疫组织化学染色法对78例大肠癌组织、21例大肠腺瘤组织和13例正常大肠黏膜组织进行免疫组化染色;应用它检验分析COX-2的表达情况及其与大肠癌临床病理特征的关系。[结果]大肠癌组织中COX-2阳性表达率为78．21％,明显高于大肠腺瘤的52．38％和正常大肠黏膜组织的7．69％（P〈0．05）;COX-2表达与大肠癌的Duke＇s分期、分化程度、淋巴结转移有相关性（P〈0．05）,而与大肠癌患者的性别、组织学类型无关（P〉0．05）。[结论]COX-2在大肠癌组织中表达率明显高于大肠腺瘤,而正常大肠黏膜中表达率极低或不表达;COX-2表达与大肠癌生物学特性有明显相关性。     

骨肉瘤组织中COX-2、Fas的表达及其临床价值

目的研究环氧合酶-2(COX-2)、F as在骨肉瘤中的表达,探讨其在骨肉瘤发生、发展中的作用。方法应用免疫组化SP法检测38例骨肉瘤组织、20例骨软骨瘤组织中COX-2和F as的表达。结果骨肉瘤组织中COX-2呈阳性表达,表达率(57.9%),明显高于骨软骨瘤组织的表达率(25.0%),P<0.05。骨肉瘤组织的F as阳性表达率(21.1%)与骨软骨瘤(45.0%)有显著差异,P<0.01。COX-2表达上调、F as表达下调与骨肉瘤的临床分期密切相关,COX-2的表达与F as的表达密切相关。结论在骨肉瘤组织中COX-2和F as的表达异常,可能对骨肉瘤的发生、发展起有重要作用。     

Flow cytometry analysis of platelet cyclooxygenase-2 expression: induction of platelet cyclooxygenase-2 in patients undergoing coronary artery bypass grafting

There are conflicting reports about the expression of cyclooxygenase (COX)-2 in human platelets. The present study describes a flow cytometric method for the measurement of platelet COX. Both COX-1 and COX-2 were shown to be expressed in platelets from patients undergoing a coronary artery bypass graft. There was a significant increase in COX-2 expression at day 5 as compared with pre-surgery values (mean fluorescence 12.31 +/- 0.88 versus 9.15 +/- 0.88; means +/- SEM, n = 7, P < 0.05), whereas COX-1 levels did not change (13.45 +/- 1.11 versus 12.38 +/- 1.41; n = 7, P > 0.05).     

COX-2在肺鳞癌及腺癌组织中的表达及其与MVD的相关性

目的探讨环氧化酶-2（COX-2）在肺鳞癌、肺腺癌发生发展中的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法收集临床肺鳞癌、腺癌标本76例,其中包括鳞癌31例、腺癌45例,并用免疫组化法检测标本中COX-2的表达及以CD34衡量的微血管增生情况。结果31例肺鳞癌肿瘤细胞表面COX-2表达阳性率为29%;45例肺腺癌标本COX-2表达阳性率为66.7%。肺鳞癌与腺癌标本以及TNM分期中COX-2表达评分差异均有显著性。MVD与肺癌的TNM分期和淋巴结转移有相关性。COX-2表达与MVD计数正相关。结论COX-2在肺癌发生、发展中具有重要作用,该作用与促进微血管生成具有密切的关系。     

Effect of celecoxib on cyclooxygenase-2 expression and possible variants in a patient with Barrett''s esophagus

Cyclooxygenase-2 (COX-2) expression is increased in metaplastic and dysplastic Barrett's esophageal epithelium and it is thought that selective COX-2 inhibitors could offer hope as chemoprevention therapy. The aim of the study was to investigate the in vivo effect of celecoxib on COX-2 expression in patients with Barrett's esophagus and no recent history of non-steroidal anti-inflammatory drug use. Endoscopic mucosal biopsy specimens were collected at baseline and after 28 days of therapy in a patient treated with celecoxib 200 mg twice daily. Samples were analyzed for COX-2 expression by immunoblot analysis with chemiluminescence detection. COX-2 expression was found to decline 20% and 44% at two different biopsy sites compared to the baseline sample. Longer exposures revealed a number of previously unidentified proteins above and below the 67 kDa COX-2 protein including 38 kDa and 45 kDa proteins which were present only at study completion consistent with up-regulation after celecoxib therapy. Further investigations of the 38 kDa and 45 kDa proteins were undertaken using two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2D-PAGE) with immunoblot and MALDI-TOF (matrix assisted laser desorption ionization - time of flight) analysis but no matches were found and results were inconclusive. Unmatched masses from MALDI-TOF peptide mass fingerprinting were compared with human COX-2 (67 kDa) and COX-2b (39 kDa) using unspecific cleavage. Peptide sequence homology with COX-2 and COX-2b was found for a length of 19 amino acids. Based on immunodetection, molecular weight and equivical MALDI-TOF results, one of these up-regulated proteins may be COX-2b.