木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶对小鼠巨噬细胞RAW264.7的抗炎作用研究

目的:研究木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶的抗炎作用及机制。方法:以正常小鼠巨噬细胞RAW264.7为对照,以脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞为炎症模型,采用MTT法检测不同浓度(10、20、40、80μmol/L)的木犀草素、4,4′-联吡啶和木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶作用细胞2 h后的细胞活性;荧光定量聚合酶链式反应法测定40μmol/L浓度时细胞中诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧合酶2(COX-2)m RNA的表达,酶联免疫吸附法测定40μmol/L浓度时细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)蛋白表达,Western blot法测定40μmol/L浓度时细胞中核转录因子p65(NF-κB p65)蛋白表达。结果:与正常细胞比较,LPS诱导后RAW264.7细胞活性明显降低(P<0.01),i NOS和COX-2 m RNA表达水平及TNF-α、IL-6、NF-κB p65蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。木犀草素和木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶均能增强LPS诱导后RAW264.7细胞活性(P<0.05或P<0.01),且呈浓度依赖性;4,4′-联吡啶对LPS诱导后RAW264.7细胞活性无明显影响;40μmol/L浓度下,木犀草素和木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶可使LPS诱导后细胞中i NOS和COX-2 m RNA表达水平及TNF-α、IL-6、NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),其中木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶降低效果强于木犀草素(P<0.05或P<0.01)。结论:木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶可能通过下调NF-κB信号来抑制炎症相关因子产生,其抗炎作用优于木犀草素。     

瑞舒伐他汀对心肌肥厚大鼠TLR4信号通路的影响

目的研究瑞舒伐他汀(rosuvastatin,RSV)对压力负荷诱导心肌肥厚大鼠心肌中toll样受体4(TLR4)及其下游核转录因子NF-κB p65、IκBα、炎症因子TNF-α表达的影响。方法采用腹主动脉缩窄大鼠模型,♂Wistar大鼠随机分为假手术组(S)、模型组(M)、RSV给药组(R,10 mg·kg~(-1)·d~(-1))每组10只。行心脏超声学检查,采用RT-PCR、Western blot、免疫组化、ELISA等方法检测心肌组织中心肌肥大基因ANP及TLR4、NF-κB p65、IκBα、TNF-α的表达。将TLR4蛋白水平分别与ANP、NF-κB p65、TNF-α水平进行相关性分析。结果 M组与S组相比,心脏体积和心肌细胞横截面直径、ANP mRNA水平均明显增加(P<0.01),伴TLR4mRNA和蛋白、NF-κB p65及TNF-α的水平明显增加及IκBα蛋白水平减少(P<0.05)。RSV抑制心肌肥厚,下调心肌组织中TLR4mRNA和蛋白、NF-κB p65及TNF-α的表达及上调IκBα蛋白水平(P<0.05)。在M组和R组,TLR4蛋白水平分别与ANP、NF-κB p65、TNF-α水平呈正相关。结论 RSV抑制心脏压力负荷诱导的心肌肥厚的作用可能与其抑制TLR4信号系统有关。     

淫羊藿次苷Ⅱ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞炎症反应

目的研究ICSⅡ对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞炎症反应的作用。方法体外分离新生SD大鼠脑皮质组织提取原代星形胶质细胞并进行培养。将星形胶质细胞分为空白组、空白+ICSⅡ高浓度组、模型组、模型+ICSⅡ低浓度组、模型+ICSⅡ中浓度组、模型+ICSⅡ高浓度组、模型+地塞米松组。ICSⅡ(5,10,20μmol·L-1)或DSMX(1μmol·L-1)预处理星形胶质细胞1 h后,继续与LPS共同作用24 h。采用MTT法检测ICSⅡ作用于星形胶质细胞的安全浓度范围,确定安全浓度后再观察ICSⅡ对LPS诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响;采用ELISA法检测星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β,NO,Aβ1-40和Aβ1-42的水平;采用Western蛋白免疫印迹技术检测COX-2,i NOS,IκB-α,NF-κB(p65)(胞核),NF-κB(p65)(胞质)和BACE1的蛋白表达,以及NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β磷酸化水平;采用分子对接技术模拟ICSⅡ与BACE1蛋白的结合。结果 ICSⅡ(0～50μmol·L-1)对星形胶质细胞无毒性作用。模型组较空白组星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β和NO水平均显著上升(P<0.05);细胞炎症通路蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(p65)(胞核)及BACE1表达升高(P<0.05);IκB-α和NF-κB(p65)(胞质)表达显著降低(P<0.05);NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平明显上升(P<0.05)。给予ICSⅡ能够明显降低TNF-α,IL-1β和NO水平(P<0.05)。此外,ICSⅡ显著下调炎症相关蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(胞核)及BACE1的表达(P<0.05),明显上调NF-κB(胞质)和IκB-α蛋白表达(P<0.05)。同时,明显降低NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平(P<0.05),对LPS诱导的IκB-α降解、NF-κB活化及细胞核易位均具有显著的抑制作用。结论本研究条件下,ICSⅡ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路发挥其对LPS诱导的星形胶质细胞炎症损伤的保护作用。     

以调节硫化氢为策略的抗阿尔茨海默病研究

目的炎症在中枢神经系统退行性变疾病如阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)等的发病机制中起重要作用。硫化氢(H2S)是近年来在继一氧化氮、一氧化碳后被认为是第3个气体信号分子。本研究旨在首先观察外源性H2S供体硫氢化钠(Na HS)对双侧脑室注射脂多糖(LPS)诱导的大鼠神经炎症模型的影响,再观察内源性H2S供体炔丙基半胱氨酸(SPRC)对该模型的影响,最后观察SPRC对右侧脑室注射淀粉样蛋白(Aβ)神经毒性的影响,并分别探索其可能的作用机制,旨在研究有效的AD治疗药物。方法 (1)双侧脑室注射LPS诱导大鼠的神经炎症模型,以布洛芬(IBU)灌胃为阳性对照,Morris水迷宫观察腹腔注射Na HS对大鼠学习记忆功能的影响;行为学检测结束后,测定大鼠海马的H2S水平;透射电镜观察大鼠海马CA1区神经元的超微结构;实时RT-PCR法测定大鼠海马肿瘤坏死因子α(TNF-α)及TNF-α受体1(TNFR1)m RNA表达;Western蛋白印迹法检测大鼠海马TNF-α及TNFR1蛋白表达、IκB-α的降解以及NF-κB p65的磷酸化;(2)双侧脑室注射LPS诱导大鼠的神经炎症模型,以IBU灌胃为阳性对照,Morris水迷宫观察腹腔注射不同剂量的SPRC对大鼠学习记忆功能的影响;行为学检测结束后,测定大鼠海马的H2S水平;透射电镜观察大鼠海马CA1区神经元的超微结构;实时RT-PCR法测定大鼠海马TNF-α,TNFR1及淀粉样前体蛋白(AβPP)m RNA表达;Western蛋白印迹法检测大鼠海马TNF-α,TNFR1及AβPP蛋白表达、IκB-α的降解以及NF-κB p65的磷酸化;(3)通过右侧脑室注射Aβ25-35的大鼠神经毒性模型,以多奈哌齐(DON)灌胃为阳性对照,Morris水迷宫观察腹腔注射不同剂量的SPRC对大鼠学习记忆功能的影响;行为学检测结束后,透射电镜观察大鼠海马CA1区神经元的超微结构;实时RT-PCR法测定大鼠海马TNF-α、AβPP及环氧合酶-2(COX-2)m RNA表达;Western蛋白印迹法检测大鼠海马TNF-α,AβPP和COX-2蛋白表达、IκB-α的降解以及NF-κB p65,ERK和AKT的磷酸化。结果 (1)双侧脑室注射LPS可引起大鼠的学习记忆功能减退及海马CA1区神经元的超微结构损伤,海马的H2S水平明显降低,且海马TNF-α,TNFR1和AβPP的m RNA及其蛋白表达明显增加,海马IκB-α的降解增多并加重NF-κB p65的磷酸化;(2)腹腔注射Na HS明显减轻LPS诱导的大鼠的学习记忆功能减退及海马CA1区神经元的超微结构损伤,增加海马的H2S水平,降低海马TNF-α和TNFR1的m RNA及其蛋白表达,阻遏海马IκB-α的降解及NF-κB p65的磷酸化,对假手术大鼠未见明显影响;(3)腹腔注射SPRC(40和80 mg·kg~(-1))明显减轻LPS诱导的大鼠的学习记忆功能减退及海马CA1区神经元的超微结构损伤,增加海马的H2S水平,降低海马TNF-α,TNFR1和AβPP的m RNA及其蛋白表达,阻遏海马IκB-α的降解及NF-κB p65的磷酸化;(4)右侧脑室注射Aβ25-35引起了大鼠的学习记忆功能减退及海马CA1区神经元的超微结构损伤,增加TNF-α,AβPP和COX-2的m RNA表达及其蛋白表达,促进ERK的磷酸化,增加IκB-α的降解以及NF-κB p65的激活,降低AKT的磷酸化;然而,腹腔注射SPRC(40和80 mg·kg~(-1))明显减轻Aβ25-35诱导的大鼠的学习记忆功能减退及海马CA1区神经元的超微结构损伤,降低TNF-α,AβPP和COX-2的m RNA及其蛋白表达,抑制ERK的磷酸化,抑制IκB-α的降解以及NF-κB p65的激活,增加了AKT的磷酸化水平。结论 (1) H2S可减轻LPS诱导的大鼠学习记忆功能减退及海马CA1区神经元的超微结构损伤,其机制至少与抑制NF-κB信号通路而抑制促炎介质的产生有关;(2) SPRC可减轻LPS诱导的大鼠学习记忆功能减退及神经元的超微结构损伤,其机制至少与调节内源性H2S生成,抑制NF-κB信号通路而抑制促炎介质及AβPP的产生有关;(3) SPRC可减轻Aβ25-35诱导的大鼠学习记忆功能减退及神经元的超微结构损伤,其机制与抑制海马TNF-α,AβPP和COX-2的m RNA及其蛋白表达,抑制ERK的磷酸化水平,抑制IκB-α的降解以及NF-κB p65的激活,增加AKT的磷酸化等有关。     

蒙药五味沙棘散对吸烟致小鼠肺部炎症的改善作用及机制研究

目的:研究蒙药五味沙棘散(WSP)对吸烟所致小鼠肺部炎症的改善作用及其机制。方法:将30只ICR小鼠随机分为空白组(生理盐水)、模型组(生理盐水)和WSP组(2 g/kg)。模型组和WSP组小鼠采用被动吸烟法复制肺部炎症损伤模型,并于造模的同时每天ig相应药物1次,连续28 d。给药结束后,采用酶联免疫吸附法检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10水平;苏木精-伊红染色后光镜下观察小鼠肺组织病理变化;Western blot法检测小鼠肺组织中细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、核因子κB p65(NF-κB p65)和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显升高(P<0.01),肺组织发生明显炎症病变,肺组织中p-ERK1/2、p-p38 MAPK、pNF-κB p65蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,WSP组大鼠BALF中TNF-α、IL-1β水平明显降低(P<0.05),肺组织炎症损伤明显改善,肺组织中p-p38 MAPK和p-NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:WSP可能通过阻断p38MAPK、NF-κB p65蛋白的磷酸化来抑制炎症因子TNF-α和IL-6的高表达,从而发挥其对吸烟所致小鼠肺部炎症损伤的改善作用。     

新型PDE4抑制剂Roflupram改善阿尔茨海默病大鼠的认知障碍及神经炎症

目的验证新型PDE4抑制剂罗氟普兰(roflupram)能否改善Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病大鼠的学习记忆障碍,及可能的机制是否与缓解小胶质细胞激活引起的炎症相关。方法 SD大鼠双侧海马CA1区微量注射Aβ25-35(10μg)造模。动物分组包括:假手术对照组、Aβ25-35注射组、Aβ25-35注射+盐酸多奈哌齐组、Aβ25-35注射+Rolipram组、Aβ25-35注射+Roflupram低、中、高剂量。连续灌胃给药14 d后,进行Morris水迷宫实验,20 d后进行避暗实验。采用Western blot法检测海马c AMP下游信号分子(p-PKA、p-CREB),前致炎因子(i NOS、COX-2、TNF-α、IL-1β),胶质细胞激活标记物(GFAP、Iba-1),炎症相关蛋白(p-p38、核内NF-κB p65)的蛋白水平变化,并用PCR的方法分析海马内i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1βmRNA水平的变化。结果行为学结果显示,Roflupram能明显改善由Aβ25-35造成大鼠的空间学习记忆能力和被动回避学习记忆能力障碍。分子生物学分析的结果如下:与Aβ25-35注射组比较,各药物处理后均可以使海马内p-CREB、p-PKA蛋白表达水平不同程度的升高,使NF-κB p65(核内)、p-p38、i NOS、COX-2、TNF-α、IL-1β、GFAP和Iba-1的蛋白水平不同程度的降低,i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1βmRNA水平下降。结论 Roflupram能够改善Aβ25-35诱导痴呆大鼠的学习记忆功能障碍,该效应与抑制小胶质细胞的活化、减少炎性因子的表达,从而缓解神经炎症有关。     

丹皮酚对脂多糖诱导的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响

目的观察丹皮酚对体外培养的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法采用神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色法鉴定星形胶质细胞;实验分为对照组,模型组和2.5、5、10μmol·L-1丹皮酚组,0.5 mg·L-1脂多糖(LPS)诱导炎症反应。采用ELISA法测定培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用Western blot检测细胞IκBα蛋白表达和磷酸化水平及胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著增加(P<0.01),胞浆IκBα蛋白表达受抑(P<0.01),IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平上调(P<0.01);5、10μmol·L-1丹皮酚能减少LPS活化的星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平(P<0.05或P<0.01),增加胞浆IκBα蛋白表达(P<0.05或P<0.01),抑制LPS上调的IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论丹皮酚能抑制LPS诱导的星形胶质细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,IκBα/NF-κB信号通路可能参与了丹皮酚对星形胶质细胞炎症反应的抑制作用。     

辛伐他汀对脂多糖诱导的小鼠抑郁行为及神经炎症的影响

目的探讨辛伐他汀对脂多糖(LPS)诱导小鼠抑郁行为的影响及其机制。方法给予ICR小鼠单剂量腹腔注射脂多糖0.5 mg·kg~(-1)建立抑郁小鼠模型。在给予小鼠LPS前每天灌胃给予辛伐他汀,连续给药1周。采用强迫游泳实验、悬尾试验、糖水偏好度实验检测小鼠抑郁样行为;采用Western blot检测小鼠前额叶皮层NF-κB p65、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白水平。结果悬尾试验和强迫游泳实验结果显示,与正常对照组相比,LPS组小鼠不动时间明显延长,给予辛伐他汀10和20 mg·kg~(-1)能明显减少抑郁小鼠不动时间;糖水偏好度检测结果显示,与正常对照组相比,LPS组小鼠糖水偏好度明显降低,而给予辛伐他汀10和20 mg·kg~(-1)能增加抑郁小鼠糖水偏好度;Western blot结果显示,LPS组小鼠前额叶皮层NF-κB p65,IL-1β和TNF-α明显升高,给予辛伐他汀10和20 mg·kg~(-1)能抑制抑郁小鼠炎性蛋白表达升高。结论辛伐他汀能够改善LPS诱导的小鼠抑郁样行为和神经炎症。     

参蓉补脑胶囊对老年痴呆模型小鼠学习记忆能力的改善作用及机制研究

目的:研究参蓉补脑胶囊对老年痴呆(AD)模型小鼠学习记忆能力的改善作用,并探讨其作用机制。方法:将72只小鼠随机分为空白对照组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、吡拉西坦片组(阳性对照,0.80 g/kg)和参蓉补脑胶囊高、中、低剂量组(1.92、0.96、0.48 g/kg),每组12只;除空白对照组小鼠皮下注射等量生理盐水外,其余各组小鼠均每日皮下注射D-半乳糖(150 mg/kg)和腹腔注射亚硝酸钠(50 mg/kg)复制AD小鼠模型;并于造模同时灌胃相应药物,每天1次,连续60 d。末次给药1 h后,设计水迷宫实验测定小鼠逃避潜伏期和90 s内穿越平台位置的次数,苏木精-伊红(HE)染色后观察小鼠大脑皮层病理变化,并采用免疫组织化学法检测小鼠大脑皮层肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核转录因子кB p65(NF-кB p65)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化蛋白激酶(Akt)蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.01),90 s内穿越平台次数显著减少(P<0.01);大脑皮层神经细胞明显损伤,完整神经细胞数显著减少(P<0.01);大脑皮层TNF-α、NF-кB p65、PI3K、Akt蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,除参蓉补脑胶囊低剂量小鼠的逃避潜伏期和大脑皮层TNF-α、NF-кB p65、PI3K、Akt蛋白表达水平差异无统计学意义外(P>0.05),其余各给药组小鼠上述指标均明显改善(P<0.05或P<0.01)。结论:参蓉补脑胶囊能改善AD模型小鼠的学习记忆能力;其机制可能与其抑制小鼠大脑皮层TNF-α、NF-кB p65、PI3K、Akt蛋白的表达,减轻炎症损伤有关。     

普仑司特对链佐星诱导的1型糖尿病小鼠记忆损害和神经损伤的影响

目的研究半胱氨酰白三烯受体1(Cys LT1R)拮抗剂普仑司特对链佐星(STZ)诱导的1型糖尿病小鼠记忆损害及神经炎症和凋亡的影响。方法选用雄性ICR小鼠,尾静脉注射STZ 150 mg·kg-1制备1型糖尿病小鼠模型。糖尿病小鼠每天ig给予普仑司特,连续给药4周。Morris水迷宫检测小鼠隐藏平台潜伏期、穿台次数及目标象限停留时间;Western蛋白印迹法检测小鼠脑海马和前额叶皮质Cys LT1R,NF-κB p65,白细胞介素1β(IL-1β),肿瘤坏死因子α(TNF-α),剪切胱天蛋白酶3,Bax和Bcl-2蛋白表达水平;测定小鼠的空腹血糖、血清胰岛素含量以及甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。结果 Morris水迷宫结果显示,与正常对照组比,模型组小鼠逃避潜伏期显著延长,穿台次数和目标象限探索时间均显著降低(P<0.05);给予普仑司特0.6和1.2 mg·kg-1组小鼠逃避潜伏期均显著缩短(P<0.05),穿台次数和目标象限探索时间均显著增加(P<0.05)。Western蛋白印迹结果显示,模型组小鼠海马和前额叶皮质Cys LT1R,NF-κB p65,IL-1β,TNF-α和剪切胱天蛋白酶3蛋白表达以及Bax/Bcl-2比值显著升高(P<0.05);给予普仑司特0.6和1.2 mg·kg-1能显著抑制糖尿病小鼠脑内上述蛋白表达的变化(P<0.05)。但普仑司特对糖尿病小鼠高血糖、低血清胰岛素和脂质代谢紊乱无明显影响。结论普仑司特能够改善STZ诱导的1型糖尿病小鼠学习记忆损害和神经损伤。     

氯胺酮减轻小鼠脑缺血再灌注损伤的炎性反应与NF-κB信号通路相关性研究

摘要：目的:探讨氯胺酮减轻小鼠脑缺血再灌注损伤的炎性反应与核转录因子κB（NF-κB）信号通路相关性。方法:将75只昆明小鼠随机分为5组:假手术（Sham）组、脑缺血再灌注损伤（I/R）组、氯胺酮低(50 mg·kg-1ketamine-L)、高(100 mg·kg-1,ketamine-H)剂量组和尼莫地平(15 mg·kg-1,nimodipine)组,每组15只。除Sham组外,其余各组小鼠建立脑缺血再灌注模型。术后第3天,ketamine-L、ketamine-H和nimodipine组小鼠分别按相应剂量连续腹腔注射给药14 d,1次/d,Sham组和I/R组给予等体积生理盐水。各组小鼠在第1,7,14天进行神经功能缺失体征评分;水迷宫实验检测各组小鼠学习记忆能力; TTC染色法测定各组小鼠脑梗死体积;苏木精-伊红染色（HE）染色观察各组小鼠脑组织病理变化;酶联免疫法检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-10（IL-10）的含量;蛋白质印迹法（Western Blot）检测各组小鼠脑组织中NF-κB p65的表达;免疫组化法测定各组小鼠脑组织中NF-κB p65阳性细胞的表达情况。结果:与I/R组比较,ketamine-L组、ketamine-H组和nimodipine组小鼠各时间点的Longa评分显著降低（P<0.05或P<0.01）;学习时间和记忆时间显著缩短（P<0.05或P<0.01）;脑梗死体积显著减小（P<0.01）;血清中TNF-α、IL-6含量显著降低,IL-10的含量显著增加（P<0.05或P<0.01）; NF-κB p65蛋白表达明显降低（P<0.05或P<0.01）; ketamine-H组和nimodipine组小鼠脑组织中NF-κB p65阳性细胞表达明显降低（P<0.05或P<0.01）。nimodipine组、ketamine-H组与ketamine-L组相比,以上各指标差异均有统计学意义（P<0.05）。Sham组小鼠海马区神经元细胞排列整齐,细胞结构完整,层次分明,无细胞核固缩现象; I/R组小鼠海马区神经元细胞排列紊乱,细胞体积明显缩小,大量细胞有核固缩现象,且胞浆减少; ketamine-L组、ketamine-H组和nimodipine组小鼠海马区神经元细胞排列较规则,细胞损伤程度较轻,部分细胞有体积缩小、细胞核固缩等现象。结论:氯胺酮通过影响NF-κB信号通路、降低TNF-α、IL-6及升高IL-10的含量来实现内源性保护作用,这可能与减轻炎症反应有关。     

黄芩素对2,4,6-三硝基苯磺酸诱导的小鼠实验性肠炎的作用和机制

目的探讨黄芩素对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠肠炎实验模型的作用及机制。方法将BALB/c小鼠随机分成3组(n=10):正常对照组、模型组(TNBS)和黄芩素组(TNBS+黄芩素20 mg·kg-1)。黄芩素组于造模前2 d ig给予黄芩素,每天1次,共9 d。测量结肠长度,并取结肠组织进行HE染色,进行组织损伤和炎症细胞浸润评分;ELISA测定结肠组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。体外制备细菌脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7炎症细胞模型,黄芩素(10,25和50 mmol·L-1)给药干预,Griess试剂法测定上清中一氧化氮(NO)含量;荧光定量PCR检测炎症介质TNF-α、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、诱导型NO合酶(i NOS)、环氧合酶2(COX-2)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)m RNA表达;Western蛋白印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/NF-κB(PI3K/AKT/NF-κB)通路磷酸化蛋白(p-PI3K,p-AKT,p-p65和p-IκBa)表达。结果与正常对照组相比,模型组小鼠结肠缩短,组织病理损伤,炎症细胞浸润,组织TNF-α含量增高;黄芩素给药组上述症状得到显著改善(P<0.05)。与细胞对照组相比,LPS模型组细胞NO分泌、炎症介质(TNF-α,IL-6,IL-1β,i NOS,COX-2和MCP-1)m RNA表达及PI3K/AKT/NF-κB通路磷酸化蛋白表达均增高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,黄芩素给药组上述指标均降低(P<0.05,P<0.01)。结论黄芩素可减轻TNBS诱导的小鼠实验性肠炎的症状,作用机制可能与抑制PI3K/AKT/NF-κB通路的激活从而抑制炎症介质的表达和减少炎症因子释放有关。     

白杨素对TNF-α诱导慢性暴露TGF-β卵巢癌OVCAR-3细胞系球形成的影响

目的研究白杨素对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导慢性暴露转化生长因子-β(TGF-β)卵巢癌OVCAR-3细胞系球形成的影响,并探讨其作用机制是否涉及下调NF-κB(p65)蛋白表达。方法 TNF-α(10μg·L~(-1))处理TGF-β(5μg·L~(-1))预暴露12 d的卵巢癌OVCAR-3细胞24 h,球形成率测定法检测不同浓度(5.0、10.0、20.0μmol·L~(-1))白杨素对球形成率的影响;Western blot检测NF-κB(p65)蛋白表达;NF-κB(p65)siRNA转染探讨作用机制。结果 TNF-α(10μg·L~(-1))联合慢性暴露TGF-β(5μg·L~(-1))处理增高OVCAR-3细胞系球形成率。白杨素能有效地拮抗致炎因子诱导卵巢癌细胞自我更新作用,呈剂量依赖性(P<0.05),并伴随着NF-κB(p65)蛋白表达下调。与对照siRNA相比,NF-κB(p65)siRNA转染OVCAR-3细胞NF-κB(p65)蛋白表达下调,并明显增强白杨素抑制球形成作用。结论下调NF-κB(p65)蛋白表达参与白杨素抑制TNF-α(10μg·L~(-1))联合慢性暴露TGF-β(5μg·L~(-1))处理诱导卵巢癌OVCAR-3细胞系球形成作用。     

知母皂苷通过调节NF-κB-iNOS-NO信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞功能

目的研究知母皂苷(SAaB)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞功能的影响,以及对NF-κB-诱导型一氧化氮合酶(iNOS)-NO信号通路的调节。方法以LPS刺激RAW264.7细胞构建体外炎症细胞模型,采用Griess法和ELISA法分别检测SAaB干预下,RAW264.7炎症细胞中的NO、iNOS、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的含量;Western blot检测RAW264.7细胞NF-κB p65蛋白的表达水平。结果 RAW264.7细胞在LPS(10 mg·L~(-1))诱导下,NO、iNOS、TNF-α、IL-6的含量以及NF-κB p65蛋白表达水平与正常对照组比较均明显增高。SAaB(0.3、3、30 mg·L~(-1))可明显降低RAW264.7炎症细胞中NO、iNOS、TNF-α和IL-6的含量(P<0.01),且明显下调NF-κB p65的蛋白表达水平(P<0.01)。结论 SAaB可通过调节NF-κB-iNOS-NO信号通路,抑制LPS诱导的RAW264.7细胞功能。     

米诺环素对人脐静脉内皮细胞-单核细胞黏附的抑制作用及其机制研究

目的:研究米诺环素(MC)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导内皮细胞-单核细胞黏附的抑制作用及其机制。方法:通过酶消化法从人脐带中获得原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)。将HUVECs细胞分为空白对照组、模型组和MC低、中、高剂量(1、10、100μmol/L)组,药物作用2 h后,除空白对照组外其余各组均加入10 ng/ml TNF-α诱导HUVECs与单核THP-1细胞的黏附,复制内皮细胞-单核细胞黏附模型。荧光显微镜观察黏附细胞数,荧光酶标仪测定其荧光强度;流式细胞仪检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)的表达;Western blot法检测细胞核及细胞浆转录因子(NF)-κB p65蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,模型组黏附细胞数及其荧光强度、ICAM-1表达、细胞核NF-κB p65蛋白表达均增加,细胞浆NF-κB p65蛋白表达减弱,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,MC低、中、高剂量组黏附细胞数及其荧光强度、ICAM-1表达均降低;MC中、高剂量组细胞核NF-κB p65蛋白表达减弱,细胞浆NF-κB p65蛋白表达增强,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:MC能显著地减少TNF-α诱导的内皮细胞-单核细胞的黏附,其机制可能与降低HUVECs细胞表面ICAM-1的表达、抑制NF-κB p65蛋白的表达有关。     

姜黄素对脂多糖诱导小鼠早产的防治作用研究

目的了解感染性早产小鼠胎盘核转录因子-kappa Bp65(nuclear factor-kappa Bp65,NF-κBp65)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)mRNA的表达以及姜黄素的干预影响,探讨未来预防感染性早产的新措施。方法建立感染性早产小鼠模型,15d孕鼠被随机分成3组:NS组,LPS组,CUR+LPS组,每组18只。利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测姜黄素干预后的各组小鼠胎盘NF-κBp65和TNF-αmRNA的表达变化。结果LPS组孕鼠的早产率为87.5%,明显高于对照组(P=0.001);CUR+LPS组与LPS组相比早产率差异有统计学意义(P=0.041)。NS组有NF-κBp65和TNF-αmRNA的少量表达,LPS组与NS组相比,二者表达显著升高(P<0.05);CUR+LPS组和LPS组相比,二者表达差异均有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素对于感染性早产有防治作用,并且降低了早产小鼠胎盘NF-κBp65和TNF-αmRNA的表达。     

豆蔻明对TLR4/MyD88/NF-κB/iNOS信号通路的调节作用

目的探讨豆蔻明(cardamonin,CDN)对RAW264.7小鼠巨噬细胞Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/My D88/NF-κB/i NOS信号通路的调节作用。方法利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理RAW264.7细胞建立炎性细胞模型并分组:正常对照组(Vehicle组)、模型组(LPS组)和药物处理组(LPS+CDN组);CCK-8方法检测细胞活力,Griess法检测细胞培养上清一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,RT-PCR检测诱导型NO合成酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-ɑ、白介素(interleukin,IL)-1β和IL-6的mRNA表达,Western blot检测i NOS、TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)、核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)phosphorylated(p)-p65、inhibitorκBα(IκBα)和p-IκBα的蛋白表达。结果1~50μmol·L~(-1)豆蔻明对RAW264.7细胞没有毒性,但可以剂量依赖性抑制LPS诱导的NO分泌和i NOS、COX-2、MCP-1、TNF-α、IL-1β及IL-6的mRNA表达,25μmol·L-1豆蔻明可下调LPS诱导的i NOS、TLR4、My D88、p-NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达及抑制IκBα降解。结论豆蔻明通过抑制TLR4/My D88/NF-κB/i NOS信号通路从而抑制NO的产生。     

双氢青蒿素通过抑制炎症反应在血管重塑中的作用机制研究

目的 探究双氢青蒿素通过抑制炎症反应对血管重塑的抑制作用。方法 采用贴块法培养小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)，以TNF-α诱导建立体外平滑肌细胞增殖模型，通过手术剥夺动脉方式建立小鼠股动脉损伤模型，并采用双氢青蒿素干预细胞及股动脉损伤小鼠。采用CCK-8法检测细胞增殖；H&E染色评价股动脉组织病理变化情况并测量中膜厚度；ELISA法检测细胞中IL-1β、TNF-α、IL-6、CCR8及小鼠股动脉组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、TGF-β1的含量；免疫组织化学法检测股动脉组织NF-κB p65、CCR8表达；qRT-PCR分析细胞及股动脉组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、CCR8、NF-κB p65、TGF-β1、MCP-1 mRNA表达；Western blotting分析细胞及股动脉组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8、p-NF-κB p65、NF-κB p65、CCR8、TGF-β1、MCP-1蛋白表达。结果 在TNF-α诱导的VSMCs增殖及股动脉损伤小鼠模型中，VSMCs增殖及TNF-α、IL-6含量明显升高，IL-1β、IL-6、IL-8 mRNA表达明显升高，IL-6、CCR8、NF-κB p65蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01)；双氢青蒿素可明显降低TNF-α诱导的VSMCs中IL-1β、IL-8 mRNA及股动脉损伤小鼠IL-1β mRNA表达和IL-1β、p-NF-κB p65蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论 双氢青蒿素能降低血管炎症，延缓损伤血管的重塑，表明其为经皮冠状动脉介入治疗(如支架植入)的潜在治疗药物。     

铃兰毒苷通过PPARγ/NF-κκB信号通路抑制葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠实验性结肠炎

目的研究铃兰毒苷(CNT)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠实验性结肠炎的保护作用及其对PPARγ/NF-κB信号通路的影响。方法 40只雄性C57BL/6小鼠分为正常对照组、模型组、CNT(50和150μg·kg~(-1))组和阳性药(柳氮磺胺嘧啶,200 mg·kg~(-1))组。除正常对照组外,各组分别给予4%DSS饮用水建立实验性结肠炎模型,各组小鼠连续7 d每天灌胃给予不同剂量的药物或生理盐水。观察小鼠体质量,结肠长度、大肠和脾重和疾病活性指数;Western印迹和免疫组化实验检测结肠组织中P65和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)蛋白表达;ELISA法检测小鼠血清和结肠组织肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β的含量。结果与正常对照组相比,模型组小鼠体质量下降(P<0.01),结肠长度缩短(P<0.05),小鼠大肠和脾质量增加(P<0.05),疾病活性指数增加(P<0.01),结肠组织中P65和PPARγ表达水平升高(P<0.01),同时,血清和结肠中TNF-α,IL-6和IL-1β的含量升高(P<0.01)。与模型组相比,不同剂量CNT组小鼠体质量、结肠长度、大肠和脾重及疾病活动指数均有所改善(P<0.05),血清和结肠中TNF-α,IL-6和IL-1β的含量降低(P<0.05,P<0.01),结肠组织中上述炎症相关蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论 CNT对DSS诱导的小鼠实验性结肠炎具有保护作用,其机制可能与PPARγ/NF-κB信号通路有关。