海地瓜硫酸软骨素对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

目的研究海地瓜硫酸软骨素(Acaudina Molpadioideschondroitin sulfate,AM-CHS)对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响,并探讨其作用机制。方法采用传统的鸡尾酒诱导剂诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,以MTT法检测AM-CHS对3T3-L1前脂肪细胞及不同分化阶段3T3-L1细胞增殖活性的影响;分别采用油红O染色和甘油三酯(triglycerides,TG)含量测定法评价其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。采用RT-PCR法检测脂肪细胞中过氧化物酶体增殖体激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptors gamma,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer bind-ing protein alpha,C/EBPα)、固醇调节元件结合蛋白-1c(ste-rol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)等分化相关基因的mRNA表达水平。结果 AM-CHS能明显抑制3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞的增殖,抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化过程,以对分化早期的抑制作用最强。RT-PCR结果表明,AM-CHS能明显降低脂肪细胞PPARγ、C/EBPα和SREBP-1c mRNA的表达。结论海地瓜AM-CHS能明显抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖和分化,其作用机制与下调分化相关基因PPARγ、C/EBPα和SREBP-1c的表达有关。     

姜黄素通过减少CREB转录活性抑制前脂肪细胞分化

目的探讨姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响及其作用机制。方法选取3T3-L1前脂肪细胞为研究对象,姜黄素(10、20、40μmol·L~(-1))处理3T3-L1前脂肪细胞并同步诱导细胞分化,采用MTT法检测3T3-L1前脂肪细胞增殖情况,油红O染色方法检测胞质脂质堆积情况,实时荧光定量PCR法及蛋白印迹法检测3T3-L1脂肪细胞环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物体增殖剂活化受体γ(PPARγ)的mRNA及蛋白表达水平。结果 MTT结果显示,姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖具有明显抑制作用,且呈现一定剂量、时间依赖性;油红O染色显示,姜黄素可抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,且呈现一定剂量依赖性;0、20、40μmol·L-1姜黄素处理3T3-L1前脂肪细胞,p-CREB、C/EBPβ、C/EBPα、PPARγmRNA水平及蛋白水平随姜黄素剂量升高均呈现明显下降趋势(P<0.05)。结论姜黄素可有效抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖分化,其机制可能为姜黄素抑制CREB转录活性,从而抑制C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ表达。     

白藜芦醇对小鼠3T3-L1细胞增殖与分化的影响及其机制

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对小鼠3T3-L1细胞增殖、分化的影响及其机制。方法培养3T3-L1前脂肪细胞,添加不同剂量的白藜芦醇,用WST-1法检测细胞的增殖;用油红O染色后以染色比色法分析脂肪细胞的分化程度;采用RealtimePCR技术检测各组脂联素和瘦素的mRNA表达;采用Westernblot技术检测相关位点,包括沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,Sirt1)、过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated re-ceptor γ,PPARγ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(CCTT Aenhan-cerbinding proteinα,C/EBPα)的蛋白质表达。结果Res明显抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,且呈一定的时间-剂量依赖关系;与对照组比较,Res组脂联素和瘦素的mRNA表达水平下降(P<0.01),Res抑制3T3-L1前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化;添加Res导致脂肪细胞中Sirt1蛋白表达水平上升,PPARγ和C/EBPα蛋白表达水平下降。结论白藜芦醇能抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化,其机制可能是通过增加Sirt1表达,抑制脂肪细胞分化相关蛋白PPARγ、C/EBPα的表达。     

川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞的增殖和分化影响

目的研究川续断皂苷Ⅵ(asperosaponinⅥ,ASAⅥ)对3T3-L1前脂肪细胞的增殖及成脂分化影响,以进一步了解其药理作用。方法以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞,通过噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响;不同浓度(0、10、25、50μmol·L-1)川续断皂苷Ⅵ干预3T3-L1细胞的成脂诱导分化,油红O染色检测3T3-L1细胞分化程度;试剂盒测定各组培养液中葡萄糖及游离脂肪酸含量;荧光定量PCR(Q-PCR)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activatedreceptorγ,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT/enhan-cer-binding proteinα,C/EBPα)mRNA表达水平。结果 MTT法测定表明不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响不同,其中10μmol·L-1浓度组作用24 h后促增殖作用最明显,随着川续断皂苷Ⅵ浓度增加,促增殖效应降低;川续断皂苷Ⅵ能够剂量依赖性的抑制3T3-L1细胞成脂,减少细胞内脂滴聚集,抑制细胞对葡萄糖的吸收利用,减少游离脂肪酸形成,下调成脂过程中PPARγ和C/EBPαmRNA表达。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进3T3-L1细胞增殖作用,并通过下调PPARγ和C/EBPα基因抑制3T3-L1细胞成脂分化。     

番石榴叶天然成分抑制3T3-L1细胞成脂分化的研究

目的观察番石榴叶天然成分槲皮素、槲皮素-3-O-(6″-芥子酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-eru-coyl)-β-D-galactopyranoside,QEG)及槲皮素-3-O-(6″-阿魏酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-feruloyl)-β-D-ga-lactopyranoside,QFG)对小鼠3T3-L1细胞成脂分化的影响。方法诱导3T3-L1细胞成脂分化,油红O染色法测定脂滴含量,实时定量PCR(Q-PCR)检测丝氨酸蛋白酶脂肪因子adipsin,CCTTA增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)mRNA表达,Western blot检测C/EBPα和PPARγ的蛋白表达。结果 QFG和槲皮素都能抑制3T3-L1细胞成脂分化,而QEG对此没有作用。QFG能够剂量依赖性地抑制成脂分化,并且降低adipsin、C/EBPα和PPARγmRNA及后两者蛋白表达,而对ERα和ERβmRNA的表达没有影响。结论 QFG抑制细胞成脂分化的能力比槲皮素强,其作用主要是通过抑制C/EBPα和PPARγ的表达而实现的,而且可能与雌激素受体途径无关。     

吡格列酮衍生物CQMUHS-03对3T3-L1细胞增殖分化的影响

目的研究吡格列酮衍生物CQMUHS-03对3T3-L1细胞增殖及诱导分化的影响,为CQMUHS-03的临床应用提供理论基础。方法 (1)不同浓度药物处理细胞,于24、48、72h,MTT法检测CQMUHS-03对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响。(2)建立3T3-L1细胞诱导分化模型,药物处理后经油红O染色,拍照后并测定570 nm处光密度值以确定有效药物干预浓度。(3)Western blot测定药物对PPARγ蛋白表达的影响。(4)Real-time PCR分析PPARγ基因表达。结果(1)经24、48、72 h MTT检测,1×10-6mol·L-1浓度以下的CQMUHS-03对3T3-L1细胞增殖的抑制作用弱,IC50为3.33×10-4mol·L-1,高于吡格列酮(2.91×10-4mol·L-1)。(2)油红O染色测定结果显示吡格列酮促进3T3-L1前脂肪细胞分化,而CQMUHS-03对3T3-L1前脂肪细胞的分化促进作用不明显。(3)Real-time PCR检测显示诱导分化8 d,吡格列酮组PPARγmRNA表达上调5.12倍,CQMUHS-03组PPARγmRNA表达上调2.29倍。(4)Western blot结果显示,CQMUHS-03使PPARγ的表达增高。结论吡格列酮衍生物CQMUHS-03对3T3-L1细胞抑制增殖作用弱于吡格列酮,对细胞分化无明显促进作用,能上调PPARγ基因和蛋白表达。     

胡黄连苷Ⅰ、Ⅱ通过调节C/EBP-PPARγ通路抑制3T3-L1脂肪前体细胞的分化和脂肪合成

目的 探讨胡黄连主要有效成分胡黄连苷I、II对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的影响。方法 采用MTT法检测胡黄连苷I、II对3T3-L1细胞活力的影响,确定给药浓度;使用诱导分化培养基诱导3T3-L1细胞分化为成熟脂肪细胞,通过油红O染色法观察胡黄连苷I、II(20、40μmol·L^-1)对细胞脂肪蓄积的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测3T3-L1细胞脂肪合成相关的乙酰辅酶A羧化酶1(ACACA)、脂肪酸合酶(FASN)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD1)、脂肪酸结合蛋白(FABP4)和调节脂肪合成的转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)的mRNA表达水平;Western blotting实验检测CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)、SCD1和PPARγ的蛋白表达。结果 浓度低于50μmol·L^-1的胡黄连苷I、II处理不会影响细胞的存活率;与对照组比较,模型组在诱导分化后细胞形态变圆,油红O染色显示细胞中有大量脂肪蓄积(P<0.01);与模型组比较,胡黄连苷I、...     

海地瓜硫酸软骨素通过Wnt信号通路抑制3T3-L1前脂肪细胞分化的研究

目的 探究海地瓜硫酸软骨素(Acaudina Molpadioides chondroitin sulfate, AM-CHS)抑制3T3-L1前脂肪细胞分化的分子机制。方法 采用传统的鸡尾酒诱导剂诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,分别采用油红O染色和甘油三酯(Triglycerides, TG)含量测定法评价AM-CHS对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。采用RT-PCR法检测脂肪细胞中Wnt信号通路关键基因和脂肪合成关键基因mRNA的表达水平。结果 AM-CHS能够显著抑制3T3-L1细胞脂滴的形成,拮抗罗格列酮(Rosiglitazone, RSG)的促分化作用,并上调Wnt信号通路中的关键受体Frz和LRP5的mRNA表达,下调分化转录因子PPARγ、C/EBPα和SREBP-1c mRNA的表达,抑制脂质合成基因FAS和GPAT mRNA的表达,不影响脂质分解基因HSL和ATGL mRNA的表达。结论 AM-CHS能够显著抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,抑制成熟脂肪细胞的脂质合成,并拮抗罗格列酮(Rosiglitazone, RSG)的促脂质合成作用,其作用机制与激活Wnt信号通路有关。     

大黄素激活AMPK、PPARγ对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响

目的研究大黄素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响,并探讨其作用机制。方法诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞经LPS干预后分为Control组、大黄素给药组(1、10、50μmol·L~(-1)),检测6-NBDG摄取情况及GLUT4、PPARγ、AMPKα1/2、p-AMPKα1/2、IRS-1、p-IRS-1、Adiponectin、chREBP-α和chREBP-β的表达。用AMPK和PPARγ抑制剂分别干预后,检测6-NBDG的摄取情况。同时,以STZ诱导大鼠2型糖尿病模型,分为Control组和大黄素给药组,检测大鼠内脏脂肪组织的Adiponectin的mRNA表达及GLUT4、AMPKα1/2、p-AMPKα1/2蛋白表达。结果与Control组相比,大黄素可促进GLUT4、Adiponectin、chREBP-α、chREBP-β的mRNA表达及GLUT4、PPARγ、IRS-1、p-IRS-1、AMPKα1/2和p-AMPKα1/2的蛋白表达(P<0.05),可提高3T3-L1脂肪细胞对6-NBDG的摄取,经AMPK及PPARγ抑制剂分别干预后,大黄素对6-NBDG的摄取降低(P<0.05)。同时,大黄素可促进T2DM大鼠内脏脂肪组织Adiponectin的mRNA表达及GLUT4、AMPKα1/2和p-AMPKα1/2的蛋白表达(P<0.05)。结论大黄素可促进3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取功能,其作用机制与激活Adiponectin及IRS-1,进而激活AMPK和PPARγ的信号通路有关。     

胡黄连苷I、II通过调节C/EBP-PPARγ通路抑制3T3-L1脂肪前体细胞的分化和脂肪合成

目的 探讨胡黄连主要有效成分胡黄连苷I、II对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的影响。方法 采用MTT法检测胡黄连苷I、II对3T3-L1细胞活力的影响,确定给药浓度;使用诱导分化培养基诱导3T3-L1细胞分化为成熟脂肪细胞,通过油红O染色法观察胡黄连苷I、II（20、40 μmol·L^-1）对细胞脂肪蓄积的影响;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测3T3-L1细胞脂肪合成相关的乙酰辅酶A羧化酶1（ACACA）、脂肪酸合酶（FASN）、硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD1）、脂肪酸结合蛋白（FABP4）和调节脂肪合成的转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、固醇调节元件结合蛋白1（SREBP1）的mRNA表达水平;Western blotting实验检测CCAAT/增强子结合蛋白β（C/EBPβ）、SCD1和PPARγ的蛋白表达。结果 浓度低于50 μmol·L^-1的胡黄连苷I、II处理不会影响细胞的存活率;与对照组比较,模型组在诱导分化后细胞形态变圆,油红O染色显示细胞中有大量脂肪蓄积（P＜0.01）;与模型组比较,胡黄连苷I、II显著减少了脂肪蓄积（P＜0.01）。与对照组比较,模型组ACACA、FASN、SCD1、FABP4、PPARγ和SREBP1的mRNA表达均显著上调（P＜0.05、0.01）;与模型组比较,胡黄连苷I、II 20、40 μmol·L^-1均显著降低了ACACA、SCD1、FASN、FABP4、SREBP1 mRNA的表达（P＜0.05、0.01）,胡黄连苷I、II仅在40 μmol·L^-1时显著抑制SREBP1 mRNA的表达（P＜0.05、0.01）。Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组PPARγ、C/EBPβ和SCD1的蛋白表达显著上调（P＜0.01）;与模型组比较,胡黄连苷I、II各浓度均显著降低了SCD1蛋白的表达（P＜0.01）,胡黄连苷I 40 μmol·L^-1和胡黄连苷II 20、40 μmol·L^-1组PPARγ、C/EBPβ蛋白的表达显著降低（P＜0.05、0.01）。结论 胡黄连苷I、II均可以显著抑制3T3-L1细胞的脂肪分化,并减少脂肪蓄积,胡黄连苷I表现出更好的剂量相关性,其作用机制可能与抑制C/EBPβ-PPARγ通路有关。     

3',3'-Difluoro-3'-deoxythymidine: comparison of anti-HIV activity to 3'-fluoro-3'-deoxythymidine.

3',3'-Difluoro-3'-deoxythymidine (3) has been synthesized in four steps from thymidine, and characterized by 1H NMR and NOE experiments. The JHF coupling constants support a conformation in solution that is predominantly 2'-endo (S). Although conformationally and sterically nucleoside 3 may resemble other thymidine analogs which are active against HIV-1, 3 is virtually inactive.     

3-二甲胺基-3-苯基丙醇的制备

苯甲醛和丙二酸经Knoevenagel缩合、NaBH4-I2体系还原得3-氨基-3-苯基丙醇，再经Eschweiler-Clark反应制得3-二甲胺基-3-苯基丙醇，总收率29％。     

Analysis of γβ, βγ, γγ, ββ multiple turns in proteins

Abstract: The number of γ‐turns in a representative protein dataset selected from the current Protein Data Bank has increased almost seven times during the past decade. Eighty percent classic γ‐turns and 57% inverse γ‐turns are associated as multiple turns with either another γ‐turn or a β‐turn. We refer to these as multiple turns of the (γβ)_1,2,3 or (βγ)_1,2,3 type, depending upon whether the γ‐turn is before or after the β‐turn along the protein chain, respectively. However, for multiple turns involving only γ‐turns, we follow the nomenclature analogous to that proposed earlier for the multiple (or double) β‐turns. Fifty‐eight per cent β‐turns are associated as multiple turns with another β‐turn. We extracted multiple turns from the protein dataset and classified them on the basis of individual γ‐ or β‐turn types and the number of overlapping residues. Furthermore, we evaluated the amino acid positional potentials and determined the statistically significant amino acid preferences, hydrogen bond/side‐chain interaction preferences in the multiple turns and secondary structure preferences for residues immediately flanking these turns. The results of our analysis would be useful in the modeling, prediction or design of multiple turns in proteins. The amino acid sequence corresponding to the multiple turn, position in the protein chain, PDB Code/chain in which multiple turn is present and the individual turn types constituting the multiple turns are available from our website and this information would also be integrated in our Database of Structural Motifs in Proteins ( http://www.cdfd.org.in/dsmp.html ).     

Analysis of γβ, βγ, γγ, ββ continuous turns in proteins

Abstract: We report the observation of continuous turns in proteins which comprise individual γ‐turns or β‐turns or both that are situated immediately one after the other along the polypeptide chain. The continuous turns were identified from a representative data set of three‐dimensional protein crystal structures. The γβ/βγ, γγ and ββ continuous turns represent peptides of varying amino acid residue lengths and conformations. The continuous turns frequently observed in proteins were: γβ, between a coil and a strand; βγ, between a helix and a strand; γγ, between coils; and ββ, either between a strand and a coil or between strands or coils. We determined the statistically significant amino acid residue preferences at individual positions in the turn, calculated amino acid positional potentials and analyzed main chain hydrogen bonds and side‐chain interactions likely to stabilize the continuous turns. The data on continuous turns have been integrated in the database of structural motifs in proteins (DSMP) on our web server at ( http://www.cdfd.org.in/dsmp.html ). This is useful to make queries on sequences compatible with different continuous turns.     

Synthese von γ,γ'-Dihydroxysulfonen und γ-Hydroxy-γ'-ketosulfonen

Syntheses of γ,γ'-Dihydroxysulfones and γ-Hydroxy-γ'-ketosulfones Reduction of γ,γ'-diketosulfones 1 with dimethylaminoborane leads to γ,γ'-dihydroxysulfones 3 via γ-hydroxy-γ'-ketosulfones 2 . The influence of substituents on the ratio of the yields of 2 and 3 is investigated.     

Mutagenicity of 3-nitrodibenzofuran and 3-aminodibenzofuran

Mutagenicities of 3-nitrodibenzofuran and 3-aminodibenzofuran were examined using Salmonella typhimurium TA98 and TA100. Strong mutagenicity was found in both compounds. The mutagenic potency of 3-nitrodibenzofuran was approximately 3.5-fold stronger in TA98 and twice stronger in TA100 than that of benzo[a]pyrene. Mutagenicity of 3-aminodibenzofuran was observed under metabolic activation and was 10 times stronger in TA98 and about 5 times stronger in TA100 than that of benzo[a]pyrene.