抑癌基因PTEN对人结肠癌LoVo细胞生长的影响

目的探讨PTEN基因转染对结肠癌LoVo细胞的抑制作用.方法将人野生型及突变型PTEN cDNA通过脂质体导入结肠癌细胞LoVo中,并用RT-PCR、流式细胞术检测细胞的PTEN mRNA和蛋白质表达.用流式细胞仪和MTT法分析5-Fu对转染前后LoVo细胞抑制周期和诱导凋亡的能力.结果转染野生型PTEN基因可明显增强结肠癌LoVo细胞的PTEN表达,5-Fu对转染后的LoVo细胞抑制细胞周期和诱导凋亡的作用明显增强.突变型在结肠癌细胞LoVo中有表达但无明显抑制作用.结论转染的PTEN基因可显著上调结肠癌LoVo细胞的PTEN表达,促进细胞凋亡;联合应用PTEN基因转染和5-Fu可获得协同的细胞毒作用.     

抑癌基因PTEN对人结肠癌LoVo细胞生长的影响

目的:探讨PTEN基因转染对结肠癌LoVo细胞的抑制作用。方法:将人野生型及突变型PTENcDNA通过脂质体导入结肠癌细胞LoVo中,并用RT-PCR、流式细胞术检测细胞的PTENmRNA和蛋白质表达。用流式细胞仪和MTT法分析5-Fu对转染前后LoVo细胞抑制周期和诱导凋亡的能力。结果:转染野生型PTEN基因可明显增强结肠癌LoVo细胞的PTEN表达,5-Fu对转染后的LoVo细胞抑制细胞周期和诱导凋亡的作用明显增强。突变型在结肠癌细胞LoVo中有表达但无明显抑制作用。结论:转染的PTEN基因可显著上调结肠癌LoVo细胞的PTEN表达,促进细胞凋亡;联合应用PTEN基因转染和5-Fu可获得协同的细胞毒作用。     

结肠癌组织中存活素、PTEN、p53基因表达检测

目的:检测结肠癌组织中存活素(Survivin)、PTEN和p53基因的表达,并分析其与结肠癌发生发展、临床病理特征之间的关系.方法:应用免疫组织化学SP法检测59例结肠癌、20例结肠腺瘤、19例正常结肠组织中Survivin、PTEN和p53基因的表达,并结合患者的临床病理资料进行分析.结果:结肠癌组织中Survivin、PTEN、突变型p53的阳性表达率分别为64.4%、54.2%、66.1%,Survivin和突变型p53在正常结肠组织和结肠腺瘤组织中不表达, PTEN基因在正常结肠黏膜和结肠腺瘤组织中几乎全部呈阳性表达.3项指标在不同组织中的表达阳性率差异均有统计学意义(P均＜0.05).结肠癌组织中Survivin和突变型p53的阳性表达率均显著高于结肠腺瘤以及正常结肠黏膜组织 (P＜0.05).随结肠癌组织学类型的变化、淋巴结的转移, Duck's分期的增加,突变型p53的阳性表达率逐渐升高(P＜0.05), PTEN的阳性表达率逐渐降低(P＜0.05).Survivin蛋白在结肠癌组织中的表达与其临床病理参数无关.在结肠癌组织中Survivin蛋白与突变型p53蛋白的表达呈正相关((r=0.813 5,P＜0.05), 与PTEN蛋白的表达呈负相关(r=-0.773 5, P＜0.05), PTEN蛋白与突变型p53蛋白的表达呈负相关(r=-0.935 0,P＜0.05).结论:Survivin、PTEN和p53蛋白的异常表达与结肠癌的发生、发展和病理学特征有关.     

结肠癌组织中PTEN蛋白表达与PI3K/AKT信号通路的关系

目的 探讨抑癌基因PTEN与结肠癌发生发展的关系及其与PI3K/AKT信号传导通路的相关性.方法 应用Western blot蛋白印迹技术和免疫组织化学方法检测 32例结肠癌及癌旁正常组织中 PTEN和p-AKT蛋白的表达.结果 PTEN蛋白在结肠癌中表达的阳性率 (31.25%)低于癌旁正常组织 (96.87%) (P＜0.01);而p-AKT蛋白在结肠癌中表达的阳性率(87.5%)高于癌旁正常组织 (15.62%) (P＜0.01);两种蛋白的表达呈负相关(r=-0.872,P＜0.01),且表达水平与肿瘤的分化程度、Duke's分期、有无淋巴结转移及远处器官转移有关(P＜0. 05).结论 PTEN蛋白表达缺失导致AKT信号传导通路持续活化可能在结肠癌的发生发展过程中起着重要作用.     

组织芯片结合免疫组化检测人结肠癌组织中PTEN/p-Akt1的表达及其临床意义

目的 研究结肠癌、腺瘤和相应癌旁正常结肠黏膜组织中PTEN、p-Akt1的表达及其临床意义.方法 取85例结肠癌、18例结肠腺瘤和9例癌旁结肠黏膜组织分别制成72点和104点两块组织芯片,采用免疫组化法检测结肠组织芯片中PTEN、p-Akt1的表达.结果 PTEN、p-Akt1在结肠癌、结肠腺瘤和正常结肠黏膜组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05),在不同分化程度的大肠癌组织中PTEN的表达差异有统计学意义(P<0.05).与其他临床病理资料无关;p-Akt1的表达与大肠癌组织学分化程度及淋巴结转移有关(分别P<0.001和<0.05),与其他临床病理资料无关.结论 PTEN、p-Akt1畸变可能未参与正常大肠细胞早期恶性转化的过程,但在结肠癌发生、发展中可能起一定作用.     

人结肠癌组织中PTEN／p—Akt1的表达及其临床意义

目的研究结肠癌、腺瘤和相应癌旁正常结肠黏膜组织中PTEN、P—Akt1表达及其临床意义。方法取85例结肠癌、18例结肠腺瘤和9例癌旁结肠黏膜组织分别制成72点和104点两块组织芯片，采用免疫组织化学法检测结肠组织芯片中PTEN、P—Akt1的表达。结果PTEN、P—Akt1在结肠癌、结肠腺瘤和正常结肠黏膜组织中的表达无显著差异（P〉0.05），在不同分化程度的大肠癌组织中PTEN的表达差异显著（P=0．029），PTEN的表达与其它临床病理资料无关，p-Akt1的表达与大肠癌组织学分化程度以及淋巴结转移有关（P=0.000，P=0.032），与其它临床病理资料无关。结论PTEN、P—Akt1畸变可能没有参与正常大肠细胞早期恶性转化的过程，但在结肠癌发生、发展中可能起一定作用。     

结肠癌原发灶及其淋巴结转移灶中PTEN表达的微阵列研究

[目的]检测结肠癌原发灶及其淋巴结转移灶中PTEN的表达情况。[方法]采用组织芯片技术,应用免疫组化方法对79例结肠癌原发灶及其淋巴结转移灶标本进行PTEN的表达情况检测。[结果]原发灶与其淋巴结转移灶相比:PTEN在粘液腺癌中的表达强度明显降低(P<0．05),而管状腺癌中其表达无明显差别; PTEN的表达与肿瘤分化程度无关。原发灶及其转移灶中PTEN的高表达率在管状腺癌中均显著高于粘液腺癌。[结论]淋巴结中转移的粘液腺癌细胞表达较低水平的PTEN,其低表达可能有助于结肠癌的淋巴道转移。     

结肠癌PTEN基因点突变的PCR-SSCP检测

①目的：探讨PTEN基因突变在结肠癌发病机制中的作用。②方法：采用聚合酶链反应(PCR)、结合单链构象多态性分析(PCR—SSCP)，对34例散发性结肠癌病人的癌组织及其癌旁组织的PTEN基因第5、7、8外显子进行点突变检测。③结果：34例结肠癌组织中有2例检测到PTEN基因突变，突变率为5．88％，其中exon7突变1例，exon8A突变1例，34例癌旁组织未检测到突变，二者差别无显著性(P=0.130)；低分化腺癌及黏液癌组织中PTEN基因突变的发生率为12．5％．中、高分化腺癌中PTEN基因突变的发生率为0，二者比较差异无显著性(P=0.214)。④PTEN基因的突变与结肠癌的发病、发展和恶化无关。     

Livin基因在结直肠癌的表达及其与PTEN、β—Catenin的相关性研究

目的：探讨Livin、PTEN、β—Catenin蛋白的表达与结直肠癌的临床病理学特征的关系,以及它们三者之间的相互关系。方法：采用免疫组织化学染色方法检测42例结直肠癌组织中Livin,PTEN及β—Catenin的表达情况。结果：（1）结直肠癌组织中Livin蛋白的阳性表达率明显高于大肠正常粘膜组织和腺瘤组织;Livin蛋白阳性表达率与结直肠癌分化程度有关,而与大肠癌患者的年龄、性别、Dukes分期及淋巴结转移无关。（2）大肠癌组织中PTEN蛋白的阳性表达率明显低于大肠正常粘膜组织的和腺瘤组织;PTEN阳性表达率与大肠癌Dukes分期及淋巴结转移密切相关,与大肠癌患者的年龄、性别及肿瘤分化程度无统计学意义。（3）正常大肠粘膜上皮β—catenin的异位表达率与大肠腺瘤中异位表达率相比无显著统计学意义,与大肠癌β—catenin蛋白异位表达率相比有显著统计学意义。β—catenin蛋白异位表达与大肠癌患者的性别、年龄无关,与肿瘤的分化程度、Dukes分期及有无淋巴结转移有关。（4）在大肠癌组织中Livin蛋白阳性表达率与PTEN蛋白阳性表达率呈负相关,与β—catenin蛋白异位表达率呈正相关。结论：（1）Livin在结肠癌组织中过表达,它可能是促进结肠癌发生的重要因素之一。（2）PTEN蛋白在结肠癌组织中表达被抑制而降低,且与Livin的表达呈负相关。因此,抑制PTEN蛋白的活性是Livin促进结直肠癌发生的途径之一。（3）β—Catenin在结肠癌的组织分化及淋巴结转移中发挥重要作用。     

miR-21在结肠癌细胞失巢凋亡调节中的作用及机制研究

目的:探讨miR-21在结肠癌细胞失巢凋亡调节中的作用及机制。方法:qRT-PCR检测30例结肠癌组织中的miR-21表达,并评估其与临床病理特征和预后的关系;利用结肠癌HT-29细胞及其失巢凋亡抵抗亚群HT-29/AR细胞探讨miR-21表达水平与失巢凋亡抗性的关系;Western blot检测PDCD4、PTEN蛋白表达水平变化,并利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-21对其3’UTR的直接结合作用。结果:miR-21在结肠癌组织中的表达明显高于癌旁组织,且与肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移状态及TNM分期显著相关,其高表达患者预后较差;与HT-29细胞相比,HT-29/AR细胞miR-21明显上调,且miR-21模拟物转染可以明显提高HT-29细胞的失巢凋亡抗性;Western blot及双荧光素酶报告基因实验证实miR-21可通过抑制PDCD4和PTEN蛋白表达水平增加结肠癌细胞的失巢凋亡抗性。结论:miR-21可通过靶向抑制PDCD4和PTEN表达参与人结肠癌细胞失巢凋亡的调控。     

RNA干扰PTEN基因对HCT-8 细胞增殖能力的影响

 目的:观察小干扰RNA (siRNA)对结肠癌相关基因PTEN表达的抑制作用及其对结肠癌细胞增殖能力的影响。方法：构建携带有针对PTEN基因序列的siRNA真核绿色荧光表达载体重组质粒pGPU6/GFP/Neo-PTEN-1、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-2、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-3和pGPU6/GFP/Neo-PTEN-4,脂质体法转染入结肠癌HCT-8细胞(分别为p1、p2、p3和p4组),同时设转染阴性对照质粒组(p5组)和亲本细胞组(p6组),实时 PCR方法检测PTEN mRNA表达,MTT法分析细胞增殖活性变化。结果：通过荧光显微镜观察计数,细胞转染率为58%。实时PCR方法检测结果显示,siRNA 重组质粒pGPU6/GFP/Neo-PTEN-1、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-2、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-3和pGPU6/GFP/Neo-PTEN-4的抑制率分别为48.3%、76.5%、29.4%和61.2%,与p6组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。MTT结果表明,细胞增殖抑制能力明显增强。结论：PTEN基因在肿瘤的发生发展中可能起到一定的作用。     

PTEN P27 SKp2在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义

目的：探讨PTEN、P27和SKp2在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义。方法：阅读国内外有关文献并进行综述。结果：PTEN、P27和SKp2基因表达异常可能在上皮性卵巢癌的发生、发展过程中起关键作用,PTEN、P27和SKp2基因可作为卵巢癌预后的重要指标。结论：PTEN、P27和SKp2可能参与上皮性卵巢癌的发生、发展,PTEN、P27和SKp2可能是卵巢癌治疗靶点。     

PRL-3调节PI3K信号通路在促进结肠癌细胞增殖侵袭中的作用

【目的】 研究肝再生磷酸酶-3 (PRL-3)的过表达与PI3K信号通路的调节及其与结肠癌细胞增殖侵袭的关系?【方法】 构建稳定转染PRL-3基因和空白对照质粒的结肠癌细胞株LoVo- PRL-3和LoVo-VC,用qRT-PCR和Western blot的方法对miR-21及其靶蛋白PTEN的表达进行检测,在稳转细胞株中转染miR-21或对其进行敲除,用CCK-8?Tanswell实验对细胞的增殖侵袭能力的变化进行研究?【结果】 LoVo- PRL-3细胞的增殖侵袭能力要强于对照组LoVo-VC细胞?在结肠癌细胞株LoVo-PRL-3中miR-21的表达上调而PTEN的表达被下调,在LoVo-VC细胞中过表达miR-21促进了细胞的增殖侵袭并降低PTEN的表达,而在LoVo- PRL-3细胞中敲除miR-21抑制了细胞的增殖侵袭并能部分恢复PTEN的表达?【结论】 PRL-3通过上调miR-21抑制PTEN的表达,调节了PI3K信号通路,从而促进了结肠癌细胞的增殖侵袭?     

肿瘤抑制基因PTEN在食管癌中的表达及意义

目的研究PTEN蛋白表达在食管癌发生发展中的生物学意义。方法采用免疫组织化学S-P法,检测PTEN蛋白在87例食道癌组织中的表达水平。结果87例食管鳞癌中,PTEN阳性占48％。PTEN蛋白表达与TNM分期、肿瘤浸润深度有关。结论PTEN蛋白的表达缺失提示食管癌恶性程度较高,预后较差。PTEN蛋白的表达可作为判断食管癌预后的新指标。     

前列腺癌中PTEN基因突变

目的　分析PTEN基因在前列腺癌中的突变情况。方法　对 80例前列腺癌冰冻组织 ( 60例来自前列腺癌原发部位 ,2 0例来自盆腔淋巴结转移灶 )中PTEN基因进行聚合酶链反应 -单链构象多态性分析(PCR -SSCP) ,检测PTEN基因突变。结果　共有 32例发生PTEN基因突变 ,突变发生率为 4 0 % ( 32 / 80 )。来自前列腺癌原发部位的 60例标本中有 18例发生PTEN基因突变 ,突变发生率为 30 % ( 18/ 60 ) ;来自盆腔淋巴结转移灶的 2 0例标本中共有 14例发生PTEN基因突变 ,突变发生率为 70 % ( 14/ 2 0 )。后者PTEN基因突变发生率显著高于前者 ( χ2 =10 ,P <0 .0 0 5)。结论　PTEN基因突变在前列腺癌发生、发展、转移中起重要作用。PTEN基因可作为完善前列腺癌诊断的指标及前列腺癌联合基因治疗方案中的目的基因     

结肠癌局部免疫模式动物研究进展

结肠癌的癌组织局部免疫状态参与结肠癌的发生、发展以及转移关系密切,但缺乏合适的动物模型制约了结肠癌局部免疫的研究。因此,构建一个能模拟人体结肠癌散发性癌灶的,其肿瘤的发生、发展和转移过程可全程无损伤活体检测的,并方便反复取材的,能同时满足结肠癌原发灶与转移灶局部免疫状态监测的模型将促进结肠癌局部免疫研究进展。所构建的模型不仅可用于结肠癌局部免疫研究,同时可以在结肠癌发生、发展的研究过程中具有重要意义。本研究将对结肠癌局部免疫模式动物研究进展做一综述。     

荷瘤小鼠MDSCs中TRIM25和PTEN的表达

目的: 探讨荷瘤小鼠肿瘤组织来源的髓源抑制性细胞（myeloid derived suppressor cells, MDSCs）中三基序蛋白25（tripartite motif containing 25, TRIM25）和人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten, PTEN）的表达水平及其意义。方法: 构建小鼠CT26结肠癌移植瘤模型,采用实时荧光定量PCR（real time fluorescene quantitative PCR, qRT PCR）技术检测荷瘤小鼠肿瘤组织来源MDSCs和野生型小鼠脾脏来源MDSCs中TRIM25、PTEN的表达情况。结果： 在小鼠CT26结肠癌移植瘤模型中,与野生型小鼠脾脏来源的MDSCs相比,荷瘤小鼠肿瘤组织来源MDSCs中TRIM25表达水平明显升高（P<0.001）,PTEN表达水平显著下降（P<0.001）。结论： 荷瘤小鼠肿瘤组织来源MDSCs中TRIM25的表达升高,PTEN表达下降,提示两者或许参与调控MDSCs。     

抑癌基因PTEN对乳腺癌细胞生长增殖的影响

目的研究PTEN基因表达对乳腺癌细胞生长增殖的影响。方法将分别携带有野生型、突变型PTEN基因的真核表达载体pBP—wt—PTEN以及pBP—G129R—PTEN,以脂质体介导法转人人PTEN表达缺失的乳腺癌细胞ZR-75—1中,嘌呤霉素筛选获得稳定表达PTEN基因的转染细胞,通过细胞活力实验、流式细胞术观察PTEN基因对ZR-75—1细胞生长增殖的影响。结果稳定转染PTEN基因的ZR-75—1细胞中不仅PTEN蛋白稳定表达,而且其生长速度较对照组明显减慢。流式细胞术显示,细胞周期发生G1期阻滞。结论外源性PTEN基因导入ZR-75—1细胞后,可引起ZR-75—1细胞生长阻滞,抑制肿瘤细胞增殖。     

PTEN与肿瘤的相关性研究进展

抑癌基因PTEN是在1997年被发现的,具有双重特异性磷酸酶活性。该基因突变,可导致多种肿瘤的发生。本文就PTEN的研究进展及其与肿瘤的关系进行综述。     

PTEN基因编码产物在胃癌中的表达及意义

目的观察抑癌基因PTEN编码产物在胃癌中的表达,探讨PTEN表达与胃癌发生发展、临床病理特征之间的关系.方法采用SP免疫组化方法检测PTEN在60例胃癌组织、17例异型增生和15例正常胃粘膜中的表达.结果 PTEN蛋白在正常胃粘膜、异型增生和胃癌中的阳性表达率分别为100%、76.47%、46.67%,表达差别均有显著性(P＜0.05);早期胃癌与异型增生组相比阳性率无明显差异性(P＞0.05);进展期胃癌PTEN表达显著低于早期胃癌(36.59%,68.75%,P＜0.05);且随着淋巴转移、分化程度降低、浸润深度加深、器官转移、临床分期,PTEN表达阳性率逐渐降低(P＜0.05).结论 PTEN基因编码产物在胃癌发生发展中进行性下调,PTEN蛋白表达可作为判断胃癌病理生物学行为的客观指标.