纳米雄黄混悬液对人宫颈癌细胞RCAS1表达的影响

目的:研究RCAS1在纳米雄黄混悬液诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡中的表达,探讨其在细胞凋亡中的作用.方法:HeLa细胞经不同浓度纳米雄黄混悬液作用一定时间后,MTT法检测细胞生长、增殖状态,光镜及透射电镜下观察细胞形态及凋亡情况,ELlSA检测RCAS1蛋白量的表达,并进行图像分析.结果:纳米雄黄混悬液对HeLa细胞生长增殖有时间剂量依赖性抑制作用;25～50mg·L-1纳米雄黄混悬液作用48～72 h后,HeLa细胞出现凋亡细胞的形态学改变;ELISA检测表明HeLa细胞高表达RCAS1蛋白,A值为(1.47±0.05),空白对照A值(0.139±0.015);25～50 mg·L-1纳米雄黄混悬液作用48 h后,RCAS1蛋白的表达量A值分别降低为(0.423±0.021)和(0.146±0.018)(P<0.01).结论:纳米雄黄混悬液可抑制HeLa细胞的生长、增殖和诱导凋亡,并使RCAS1蛋白表达下降.     

纳米雄黄对MCF-7乳腺癌干细胞的体外抑制作用

目的 研究纳米雄黄对乳腺癌干细胞的体外抑制作用.方法 以人乳腺癌MCF-7亲本细胞为对象,采用无血清培养法培养获得乳腺癌干细胞.以阿霉素(1 mg/L)为阳性对照,以相同质量浓度的水飞雄黄为参照,采用CCK-8法检测纳米雄黄对MCF-7亲本细胞及干细胞增殖的影响;借助悬浮球形成及分化实验、划痕实验、Transwell侵...     

恶性淋巴瘤NF-kB活化与化疗药物诱导细胞凋亡的关系及地塞米松的影响作用

目的研究化疗药物诱导Raji恶性淋巴瘤细胞核因子-kB(NF-kB)活化与凋亡关系,并探讨地塞米松(DXM)对其的影响作用。方法采用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测细胞NF-kB活化水平;采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(Tuned)检测细胞凋亡。结果化疗药物诱导Raji恶性淋巴瘤细胞NF-kB活化与化疗药物诱导细胞凋亡明显相关,lμmol/LDXM能显著抑制阿糖胞苷(Ara-C)lμmol/L或鬼臼乙叉甙(VP-16)lμmol/L诱导的Raji细胞NF-kB活化,抑制率分别为48.68%和44.39%,并增强它们诱导Raji细胞凋亡的作用,凋亡增加率分别为57.8%和37.5%。Raji细胞在接触化疗药物前,NF-kB亦有一定程度的活化。结论化疗药物在诱导Raji恶性淋巴瘤细胞凋亡的同时活化NF-kB,DXM可通过抑制NF-kB活化以增强化疗药物诱导恶性淋巴瘤细胞凋亡的作用。     

复方黄黛对NB4细胞生长抑制及促凋亡作用的研究*

目的:研究纳米雄黄、青黛、复方黄黛对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞系NB4细胞的生长抑制和促凋亡作用。方法:以APL细胞系NB4细胞为体外模型,用四噻唑蓝(MTT)法检测药物处理NB4细胞后细胞的生长抑制率,并用光学显微镜和透射电子显微镜观察药物处理NB4细胞后细胞的形态学变化。结果:纳米雄黄和复方黄黛对NB4细胞均表现浓度依赖性的的生长抑制作用,纳米雄黄的IC50为8.683 mg.L-1,青黛的IC50为3 818mg.L-1,复方黄黛的IC50为5.203 mg.L-1。复方黄黛对APL细胞系NB4细胞的抑制作用最强,青黛几乎无抑制作用。结论:复方黄黛中主要是君药纳米雄黄抑制APL细胞株NB4细胞的增殖,臣药青黛抑制APL细胞系NB4细胞增殖的作用极小。     

纯化纳米雄黄制备方法探讨

目的探讨纯化纳米雄黄的制备方法,以制备高纯度、高生物利用度、低毒副作用的纯化纳米雄黄颗粒。方法①天然雄黄经去离子水和不同浓度的HCl、NaOH纯化处理后得到纯化雄黄,测定As2S2含量;②天然雄黄、纯化雄黄经高能球磨法制备得到天然纳米雄黄、纯化纳米雄黄,颗粒经扫描电镜、纳米粒度分析仪测定纳米颗粒形貌、粒径,测定As2S2含量;③天然纳米雄黄、纯化纳米雄黄经2.0 mol·L-1的HCl纯化处理得到天然纳米雄黄(纯化组)、纯化纳米雄黄(纯化组),扫描电镜、纳米粒度分析仪测定纳米颗粒形貌、粒径;测定As2S2含量。结果①去离子水;0.5、1.0、2.0、4.0 mol·L-1的HCl与NaOH纯化处理后颗粒As2S2含量均有所提高,各处理组之间差异有统计学意义(P<0.05);纯化效果:HCl组>NaOH组>去离子水组,随着HCl、NaOH浓度的提高,As2S2的含量亦随之提高;以4.0 mol·L-1 HCl组纯化效果最显著,其次为2.0 mol·L-1HCl组。②天然雄黄、纯化雄黄、天然纳米雄黄(纯化组)、纯化纳米雄黄(纯化组)经高能球磨法可制备得到纳米级雄黄颗粒,扫描电镜可见近似圆球形的纳米级颗粒,粒度分布均匀,纳米粒度分析仪测定其平均粒度分别为(135.13±9.19)、(134.39±4.57)、(135.88±2.68)、(133.73±4.36)nm;As2S2含量分别为(92.09±0.83)%、(97.07±0.47)%、(97.42±0.11)%、(98.33±0.08)%。纳米雄黄组与纳米雄黄(纯化组)粒度差异无统计学意义(P>0.05),纯度差异有统计学意义(P<0.05)。结论①去离子水、HCl、NaOH均可对雄黄进行纯化处理,以HCl纯化效果为最好;②高能球磨法可制备纳米雄黄颗粒;③球磨前后分别对雄黄颗粒进行纯化处理,可得到As2S2含量更高的纯化纳米雄黄颗粒。     

隐丹参酮PEG-PE纳米胶束的制备、细胞摄取及诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的研究

目的制备隐丹参酮PEG-PE纳米胶束,并进行体外评价、细胞摄取及诱导乳腺癌细胞凋亡研究。方法采用薄膜水化法制备隐丹参酮PEG-PE纳米胶束,从体外释药、细胞摄取和细胞凋亡等方面对该药物载体进行系统评价。结果隐丹参酮PEG-PE纳米胶束粒径为(16.5±1.1)nm,Zeta电势为-(21.6±0.8)mV,包封率为(85.4±4.9)%,载药量为(5.4±0.3)%。TEM电镜可直观显示隐丹参酮PEG-PE纳米胶束呈形态规则的圆球形结构;采用芘测定法表明PEG-PE纳米胶束的临界胶束浓度(CMC)约为6.1μg·mL~(-1);细胞摄取试验结果表明,PEG-PE纳米胶束可以增强药物细胞摄取量,细胞外残留量减少;MTT肿瘤细胞毒性试验结果显示,隐丹参酮PEG-PE纳米胶束对乳腺癌MDAMB-231细胞的增殖抑制率明显优于隐丹参酮。隐丹参酮PEG-PE纳米胶束可以明显促进肿瘤细胞凋亡,提高促凋亡Caspase 3活性和促凋亡蛋白Bax的表达,减少抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,这些结果与游离隐丹参酮的结果比较,差异具有统计学意义。结论隐丹参酮PEG-PE纳米胶束粒径小,释药缓慢,可很大程度地提高隐丹参酮在肿瘤细胞内的摄取量,增强药物的诱导乳腺癌细胞凋亡作用。     

雄黄诱导白血病细胞凋亡的研究

目的：检测雄黄诱导白血病细胞凋亡能力，探讨分子机制。方法：应用形态学观察检测细胞凋亡，免疫组化方法检测白血病细胞bcl-2蛋白表达。结果：雄黄可诱导白细胞病细胞发生典型的凋亡，同时雄黄可使白血病细胞bcl-2蛋白表达呈时间依赖性下降。结论：雄黄通过影响白血病细胞bcl-2蛋白的表达，从而导致白血病细胞发生凋亡，这是其治疗白血病的重要分子机制。     

胡桃醌及其与顺铂联用对宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的影响

目的探讨胡桃醌及其与顺铂联合用药对宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞,加入胡桃醌10～200μmo.lL-1或者胡桃醌20μmo.lL-1+顺铂20μmo.lL-1继续培养8 h或24 h,用倒置显微镜观察细胞形态的变化,用MTT法测定细胞存活率,用流式细胞仪检测细胞周期和细胞早期凋亡率。结果胡桃醌10,20,50,100和200μmo.lL-1与HeLa细胞作用24 h,随着胡桃醌浓度的增加,光镜下HeLa细胞逐渐变小、变圆;HeLa细胞存活率明显降低,分别由对照组的(100.0±0.0)%降低至(87.2±5.6)%,(66.2±4.8)%,(54.5±4.9)%,(42.5±6.4)%和(32.0±2.2)%(P<0.05,P<0.01);HeLa细胞G2/M期百分率逐渐增加,分别由对照组的(7.5±1.2)%增加到(12.9±1.2)%,(16.2±2.8)%,(23.6±3.9)%,(34.2±4.2)%和(52.6±7.8)%(P<0.05,P<0.01)。胡桃醌联合顺铂作用24 h,光镜下脱壁细胞增加,细胞形态变圆,较胡桃醌和顺铂单用组更加明显;联合用药组细胞存活率为(35.0±6.1)%,较胡桃醌和顺铂单用组〔(78.2±12.5)%和(58.5±10.9)%〕明显降低(P<0.01)。胡桃醌联合顺铂作用8 h,HeLa细胞早期凋亡率为(24.6±5.7)%,高于胡桃醌和顺铂单用组〔(6.7±1.5)%和(0.4±2.8)%〕(P<0.01)。结论胡桃醌可抑制HeLa细胞存活,促进HeLa细胞凋亡,与顺铂联合使用具有协同作用。     

铅对体外培养HK-2细胞毒性及碘化钾的拮抗作用

目的 研究醋酸铅对人肾小管上皮细胞系HK-2细胞毒性剂量-反应关系及碘化钾(KI)的拮抗作用.方法 体外培养HK-2细胞分为不同剂量染铅组:分别加入浓度为0.2.5,5,10,20和40 μmol/L,的醋酸铅;KI干预组:加入终浓度为40 mg/L的KI、37℃孵育30 min后加入上述不同剂量的醋酸铅.染毒72 h后,利用噻唑蓝法(MTT)测定各组细胞的存活率;用相差显微镜观察细胞形态改变;Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡并用Hoechst33258染色、荧光显微镜观察细胞凋亡形态.结果 细胞存活率与醋酸铅浓度存在剂量-反应关系(r=-0.878,P＜0.01),其IC50为15.68 μmol/L;低剂量铅组部分细胞形态拉长呈长梭形,随着铅剂量增加,细胞变小、变圆,直至无完整细胞形态、细胞成团,脱壁漂浮;与对照组(0 μmol/L铅)比较,各种剂量铅染毒组HK-2细胞凋亡率明显增加(P＜0.05),凋亡细胞核染色加深呈高亮蓝色、模糊、核明显固缩和碎裂;各剂量铅组加40mg/L的KI,可使细胞存活率增加,IC50上升了3.33倍,细胞凋亡率下降,细胞形态改变明显改善.结论 醋酸铅对HK-2细胞毒性存在明显剂量-反应关系,KI可部分拮抗铅的细胞毒性.     

丁酸钠诱导Raji细胞表达DAPK的研究

目的探讨丁酸钠(SB)对人淋巴瘤Raji细胞生长和DAPK表达变化的影响。方法用丁酸钠作用于Raji细胞株,观察形态、增殖情况、细胞周期分布变化、死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化的变化及该酶表达的变化。结果成团悬浮生长的Raji细胞呈现贴壁生长,细胞增殖速度明显被抑制,细胞阻滞在G0/G1期;DAPK启动子去甲基化,DAPK表达量增加,细胞凋亡增加。结论丁酸钠具有诱导Raji细胞DAPK基因启动子去甲基化,使DAPK重新表达,诱导细胞凋亡的作用。