红景天化学成分的研究及其对低氧诱导因子-1α表达的影响

目的 研究红景天的化学成分及其对低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响.方法 采用硅胶柱色谱法对红景天 中的化学成分进行分离纯化,运用现代波谱方法进行结构鉴定;采用RT-PCR法,检测化合物对缺氧状态下乳鼠心肌细胞HIF-1α mRNA表达的影响.结果 从红景天中分得到5个化合物,经鉴定为Rhodiolin(Ⅰ)、德钦红景天苷(Ⅱ)、没食子酸(Ⅲ)、酪醇(Ⅳ)、红景天苷(Ⅴ),化合物Ⅳ,Ⅴ 111.11 μg·ml-1与缺氧对照组相比,可促进HIF-1αt的表达(P<0.01).结论 采用二维核磁共振和质谱的方法确认了化合物Ⅰ的结构.化合物Ⅳ,Ⅴ能够增强心肌细胞HIF-1α mRNA的表达.     

红景天苷激活HIF-1α信号通路促进成骨细胞增殖的机制

目的以小鼠原代成骨细胞(mouse primary osteoblasts, MOB)作为研究对象,探索红景天苷(salidroside, SAL)对成骨细胞增殖的作用及分子机制。方法采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色法对提取的原代细胞进行鉴定,MTT法检测不同浓度SAL对MOB的增殖作用,RTPCR、Western blot、ELISA技术,研究SAL作用MOB的分子机制。结果将提取的细胞进行ALP染色后出现黑褐色沉淀,表明确为成骨细胞。SAL能够促进MOB的增殖,并上调缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like protein 4,ANGPTL4)及白介素6(interleukin 6,IL-6)的mRNA和蛋白表达水平,在加入HIF-1α阻断剂YC-1后蛋白表达下调。结论 SAL通过激活HIF-1α/VEGF、ANGPTL4、IL-6信号通路促进成骨细胞的增殖。     

羟基红花黄色素A上调低氧状态下血管内皮细胞中缺氧诱导因子-1α的表达

羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)是从菊科植物红花中提取的查尔酮类化合物。本实验观察HSYA对低氧状态(1% O₂)下人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)增殖的促进作用及其调节Eahy 926细胞中林希氏基因(von Hippel-Lindau gene，VHL)，抑癌基因p53(tumor suppressor gene p53，p53)和降解缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α)的作用。采用MTT法测定低氧状态下HSYA(100、 10和1 μmol·L^-1)对Eahy 926细胞增殖率的影响。免疫组织化学方法测定VHL与p53蛋白表达数量和定位。RT-PCR方法检测细胞中VHL、 p53和HIF-1α的转录水平。Western blotting方法检测VHL、 p53和HIF-1α的蛋白表达。与低氧模型对照组相比，HSYA(100 μmol·L^-1)促使细胞增殖率升高，HIF-1α转录和蛋白表达水平显著增强，呈时间依赖性。给药8 h后，VHL与p53的蛋白表达和转录水平均明显降低。HSYA诱导HIF-1α表达增加并提高低氧状态下细胞增殖率的作用，可能通过抑制VHL和p53两种HIF-1α的降解调节因子实现。     

人参皂苷Rg3对低氧条件诱导的Hep-2细胞作用机制的初步研究

目的:研究人参皂苷Rg3对低氧条件下人喉鳞癌细胞Hep-2中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:通过体外低氧培养Hep-2人喉鳞癌细胞株,同时设立阴性对照组和阳性对照组(顺铂).人参皂苷Rg3作用24 h后,应用免疫细胞化学技术和流式细胞技术检测Hep-2细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达的变化;应用RT-PCR技术检测HIF-1α和VEGF mRNA表达的变化.结果:在低氧条件下,Rg3组和顺铂对照组的Hep-2细胞中的HIF-1α和VEGF蛋白表达低于阴性对照组(P<0.05);Rg3组的HIF-1α和VEGF mRNA水平明显低于阴性对照组(P<0.05),顺铂组的HIF-1α和VEGFmRNA水平无明显变化.结论:低氧条件下,人参皂苷Rg3抑制Hep-2细胞中的HIF-1α和VEGF蛋白和mRNA的表达,这可能是Rg3抗肿瘤作用的机制之一.     

红景天苷对CoCl_2诱导PC12细胞低氧损伤的神经保护作用

目的研究红景天苷对CoCl_2诱导PC12细胞低氧损伤的神经保护作用,进一步探讨红景天苷抑制补体成分,以及对神经保护的作用机制。方法 CoCl_2诱导PC12细胞低氧损伤模型,经不同浓度红景天苷作用后,利用caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性;qPCR检测Egr1、Egr4、C3等mRNA表达;Western blot检测Egr1、Egr4、C3等蛋白表达。PC12细胞低氧损伤后,C3a受体拮抗剂作用并同时给药,检测caspase-3活性、Egr1、Egr4的表达水平;siRNA干扰Egr4表达后,检测caspase-3活性及Bax、Bcl-xl、C3的表达水平。结果红景天苷能明显降低CoCl_2诱导PC12细胞低氧损伤模型的caspase-3活性及Bax、C3的蛋白表达,促进Bcl-xl、Egr1、Egr4的蛋白表达;C3a受体拮抗剂作用后,能够抑制caspase-3活性及Egr1、Egr4的表达;siRNA干扰Egr4表达后,能逆转caspase-3活性及Bax、Bcl-xl的表达水平,但对C3作用不明显。结论红景天苷对CoCl_2诱导PC12细胞低氧损伤模型具有神经保护作用,与红景天苷抑制补体成分C3,促进Egr4的表达水平,进而抑制细胞凋亡有关。     

川续断皂苷Ⅵ诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化的研究

目的探讨川续断皂苷Ⅵ(akebia saponin D)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的影响。方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,选择合适的培养基,传代扩增。采用不同浓度的川续断皂苷Ⅵ对大鼠MSCs定向诱导分化,MTT法观察各组对MSCs的增殖作用并绘制细胞生长曲线;观察MSCs诱导分化过程中成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaliphosphatase,ALP)活性;采用ELISA法检测MSCs诱导分化过程中骨钙素(Osteo-calcin,OC)的含量;RT-PCR方法检测MSCs诱导分化过程中核心结合因子α-1(Cbfα1)mRNA表达。结果细胞生长曲线显示各组MSCs数量均随时间延长而增加,中、高浓度的川续断皂苷Ⅵ能明显提高MSCs分化为成骨细胞的ALP活性和骨钙素的含量,且使Cbfα1 mRNA的表达升高。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进大鼠体外MSCs向成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高Cbfα1 mRNA的表达有关。     

田蓟苷对A549细胞的抑制作用及其机制研究

目的研究田蓟苷对人非小细胞肺癌细胞系(A549)的抑制作用及其作用机制。方法对照组和10,20,40,80,160μmol·L^-1实验组分别用0,10,20,40,80,160μmol·L^-1田蓟苷处理A549细胞24 h,用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK8)观察各组A549细胞增殖情况;用流式细胞仪检测各组A549的凋亡情况。低氧模型组将A549在低氧培养箱中培养4 h,10,20,40μmol·L^-1低氧实验组将A549在普通培养箱中用10,20,40μmol·L^-1的田蓟苷预处理4 h,再放入低氧培养箱中继续培养4 h,用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞内血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的表达情况;用Western blot法检测细胞内VEGF、HIF-1α及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达情况。结果与对照组比较,田蓟苷对A549增殖有显著抑制作用,呈剂量依赖性。10,20,40,80,160μmol·L^-1实验组的增殖抑制率分别为(5.83±1.67)%,(6.77±0.87)%,(12.26±0.23)%,(22.97±0.50)%,(46.24±1.44)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。10,20,40,80,160μmol·L^-1田蓟苷的凋亡率分别为(6.80±0.62)%,(14.70±1.36)%,(24.76±4.37)%,(39.26±6.42)%,(62.31±1.79)%,与对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。低氧模型组HIF-1α表达量为4.30±0.26,VEGF表达量为6.02±0.53,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);10,20,40μmol·L^-1低氧实验组的VEGF表达量为4.73±0.20,2.31±0.09,1.47±0.16;HIF-1α的表达量分别为3.01±0.11,1.81±0.13,1.03±0.16,与低氧模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。低氧模型组p-AKT蛋白表达量为(106.47±2.08)%,HIF-1α表达量为(204.31±8.35)%,VEGF-A表达量为(212.30±4.80)%;10,20,40μmol·L^-1低氧实验组p-AKT蛋白表达量为(87.51±2.72)%,(75.18±1.67)%,(32.40±0.86)%;HIF-1α的表达量为(182.54±6.42)%,(90.95±2.76)%,(15.03±4.21)%;VEGF-A的表达量分别为(156.38±5.12)%,(79.62±2.84)%,(13.72±4.64)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论田蓟苷具有通过AKT/HIF-1α信号通路抑制体外A549增殖、诱导其凋亡的作用。     

咯利普兰在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的作用

目的 研究咯利普兰在体外骨髓间充质干细胞向成骨细胞诱导分化过程中的作用.方法 体外分离培养小鼠股骨骨髓间充质干细胞,随机分为咯利普兰10 μmol/L组(A组)和对照组(B组).骨髓间充质干细胞向成骨诱导分化后,检测碱性磷酸酶(ALP)活性;Western blot检测Runx2和骨钙素表达;茜素红染色观察钙结节形成情况.结果 与B组相比,A组ALP活性及Runx2、骨钙素表达均增加(P＜0.01或P＜0.05),钙结节形成更加明显.结论 咯利普兰能提高体外骨髓间充质干细胞向成骨细胞诱导分化的能力.     

低氧诱导因子-2α基因沉默对骨肉瘤细胞株MG-63生物学行为的影响

【摘要】 目的 探讨低氧诱导因子-2（HIF-2α）在骨肉瘤形成过程中的作用以及HIF-2α基因沉默对低氧状态下骨肉瘤MG-63细胞的影响。 方法 小干扰RNA（siRNA）沉默HIF-2α基因,获得MG-63/siHIF-2α（siHIF-2α）,阴性对照为MG-63/scramble(NC)细胞,分为siHIF-2α组和NC组,MTS试剂检测细胞活性,划痕迁移试验检测细胞迁移能力,Western Blot检测HIF-2α、VEGF、p-Erk1/2及Mcl-1的表达,集落形成试验和裸鼠皮下移植瘤试验证实HIF-2α基因沉默对肿瘤生长的影响。 结果 低氧诱导HIF-2α蛋白表达。低氧12h和24h,siHIF-2α组细胞活性均低于NC组（P=0.0211, 0.0017）,siHIF-2α组相对划痕宽度均大于NC组(P=0.0024, <0.0001)。 1000-5000细胞种植数的siHIF-2α组的集落形成率均小于NC组(P=0.0027, 0.0038, 0.0063, 0.0276, 0.0062)。HIF-2α基因沉默抑制HIF-2α、VEGF、p-Erk1/2和Mcl-1的表达。裸鼠皮下移植瘤siHIF-2α组肿瘤体积和重量均小于NC组(P=0.006, <0.0001)。 结论 HIF-2α对骨肉瘤的存活、迁移及生长有促进作用,HIF-2α基因沉默可作为骨肉瘤的临床治疗的新策略。      

柚皮苷对乳鼠成骨细胞增殖及c-fos、c-jun表达的影响

目的研究柚皮苷(naringin)对体外培养的小鼠成骨细胞增殖及c-fos和c-jun表达的影响。方法取第1代BALB/c小鼠颅盖骨成骨细胞,将柚皮苷以0.1、1、10μmol·L-1 3种浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,MTT法观察各组对成骨细胞的增殖作用并绘制细胞生长曲线,用PNPP法测定成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaliphos-phatase,ALP)活性,RT-PCR法检测成骨细胞c-fos和c-jun的转录水平。结果细胞生长曲线显示各组成骨细胞数量均随时间延长而增加,中、高浓度的柚皮苷能提高成骨细胞的ALP活性,促进c-fos mRNA表达(P<0.01),对成骨细胞c-jun mRNA表达增强作用不明显(P>0.05)。结论低浓度柚皮苷(0.1μmol·L-1)对骨更新作用不明显,而中、高浓度的柚皮苷(1、10μmol·L-1)能通过上调c-fos mRNA表达,促进成骨细胞的生成功能,增强骨更新。柚皮苷不是通过促进c-jun表达来促进成骨细胞增殖与分化的。     

HIF-1αVEGF Survivin蛋白在子宫内膜癌中的表达

目的 研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)及凋亡抑制因子(Survivin)在子宫内膜癌中的表达及其意义,并探讨与SurvivinHIF-1α及VEGF表达之间的关系.方法 应用免疫组织化学SP方法检测HIF-1α、VEGF、Survivin在40例子宫内膜癌、22例子宫内膜复杂性增生及18例子宫内膜单纯性增生组织中的表达情况.结果 HIF-1α、VEGF、Survivin在子宫内膜单纯性增生、子宫内膜复杂性增生及子宫内膜癌组织中阳性表达率依次增高,三组比较具有统计学意义(P＜0.05).子宫内膜癌组织中HIF-1α与VEGF蛋白表达呈显著正相关(r=0.469,P＜0.01);Survivin与VEGF蛋白的表达呈显著的正相关(r=0.452,P＜0.01);HIF-1α与Survivin的表达无显著相关性(r=0.209,P＞0.05).结论 子宫内膜癌组织中HIF-1α、VEGF、Survivin蛋白参与了子宫内膜癌的发生发展.子宫内膜癌组织的HIF-1α、Survivin蛋白表达与VEGF呈正相关,Survivin蛋白与HIF-1α的表达无相关性,提示HIF-1α与Survivin可能通过上调VEGF蛋白的表达,抑制肿瘤细胞的凋亡和促进肿瘤的血管生成而促进子宫内膜癌的发生及发展.     

基于cAMP-PKA信号通路的淫羊藿苷促进骨形成研究

目的研究淫羊藿苷是否通过c AMP-PKA信号通路来促进成骨细胞(osteoblast,OB)成熟矿化。方法以1×10?5 mol·L?1淫羊藿苷分别处理体外培养的大鼠颅骨OB细胞和人类乳腺癌细胞(MCF-7)不同时间后,免疫荧光染色法检测2种细胞内雌激素受体(ERα)的核转位情况。待P1代OB细胞铺满80%皿底后,采用1×10?5 mol·L?1的2’,3’-双脱氧腺苷(2’,3’-dideoxyadenosine,DDA)抑制胞内腺苷酸环化酶(adenylate cyclase,AC),同时以1×10?5 mol·L?1淫羊藿苷分别作用于正常组和信号阻断组不同时间后,ELISA检测细胞内c AMP的含量。以终浓度为1×10?6 mol·L?1蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)抑制剂KT5720处理细胞,同时以1×10?5 mol·L?1淫羊藿苷分别作用于信号阻断组和正常组,3 d和6 d后检测胞内碱性磷酸酶(ALP)活性;药物处理48 h后,Real-time PCR检测I型胶原(collagen I,COL I)、Runx-2、ALP m RNA的表达量;Western blot检测COL I、Runx-2蛋白表达量。结果淫羊藿苷作用于细胞4 h后,MCF-7胞内ERα发生明显的核转位,而OB细胞在所有时间点都未检测到明显核转位现象,结合本课题组前期的淫羊藿苷雌激素比较试验说明,淫羊藿苷促进成骨细胞成骨性分化并不主要依赖于其雌激素活性。淫羊藿苷促OB细胞后,胞内c AMP迅速升高,处理1 h后与对照组相比具有显著性差异。加入DDA阻断AC后,淫羊藿苷促胞内c AMP升高的作用消失。1×10?5 mol·L?1淫羊藿苷能够显著地促进胞内ALP的活性,成骨性分化相关的因子COL I、Runx-2和ALP的基因表达也相应增高,同时COL I和Runx-2蛋白表达量也显著增加。当采用KT5720抑制PKA的活性之后,ALP活性下降,成骨性分化的指标也随之降低。结论淫羊藿苷促进OB细胞成骨性分化并不主要依赖于其雌激素活性,而是通过迅速提高成骨细胞内c AMP的含量,激活胞内c AMP-PKA信号通路,进而促进成骨性相关因子的表达,来促进OB细胞成熟矿化。     

二苯乙烯苷对大鼠成骨细胞增殖及分化的影响

目的研究二苯乙烯苷（THSG）对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响。方法体外分离、培养SD大鼠成骨细胞,M1rr法检测成骨细胞增殖活性;碱性磷酸酶（ALP）活性试剂盒检测成骨细胞AIJP活性比;Elisa方法检测成骨细胞c-fos和c—ju．蛋白表达水平。结果0．03—10rag／mr的THSG干预成骨细胞24h成骨细胞活性较对照组明显增强（P〈0．05或〈0．01）;在二苯乙烯苷干预细胞后第3天时,二苯乙烯苷组成骨细胞ALP活性较对照组明显增加（P〈0．05或〈0．01）,成骨细胞c-fos和c-jun表达均较对照组明显增强（P〈0．05或〈0．01）。结论二苯乙烯苷能显著促进成骨细胞发育成熟。     

苔黑酚葡萄糖苷通过抑制糖皮质激素受体入核保护地塞米松诱导成骨细胞损伤作用北大核心CSCD

目的 考察苔黑酚葡萄糖苷对地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导成骨细胞损伤的保护作用,并探讨其调控机制。方法 从新生小鼠颅盖骨提取并培养原代成骨细胞(osteoblast,OB),用DEX(1μmol·L^(-1))诱导成骨细胞损伤为模型。采用CCK-8法测定不同浓度苔黑酚葡萄糖苷及有无DEX干预下对成骨细胞增殖的影响;采用试剂盒进行成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)染色和ALP活性测定;采用茜素红S染色观察骨矿化结节的形成;采用Annexin V-FITC法检测细胞凋亡情况;采用免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察细胞内糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)的入核情况;采用Western blot法检测GR在细胞核、细胞质和全细胞中的蛋白表达,以及细胞中成骨特征蛋白CollagenⅠ、Runx2、Osterix(Osx)和Dlx5的表达。结果 与对照组相比,DEX组成骨细胞增殖、分化和矿化均明显降低(P<0.05、0.01),细胞凋亡明显升高(P<0.01);与模型组相比,苔黑酚葡萄糖苷组成骨细胞增殖、分化和矿化均明显升高(P<0.01),细胞凋亡明显降低(P<0.05)。与对照组相比,DEX组成骨细胞中GR在核内的表达明显升高(P<0.01),而GR在全细胞和细胞质中的表达明显降低(P<0.01),同时成骨特征蛋白表达也明显降低(P<0.01);与模型组相比,苔黑酚葡萄糖苷组GR在成骨细胞核内的表达明显降低(P<0.01),而GR在全细胞和细胞质中的表达明显升高(P<0.01),成骨特征蛋白的表达均明显升高(P<0.01),且呈剂量依赖关系。结论 苔黑酚葡萄糖苷能够改善DEX诱导的成骨细胞增殖、分化和矿化的抑制作用,并减少其凋亡,其作用机制与苔黑酚葡萄糖苷抑制GR入核,从而调控成骨相关蛋白表达有关。     

新型低氧还原剂Q39通过阻断HIF-1α转运引起肝癌Bel-7402细胞凋亡

目的 评价Q39低氧条件下诱导肝癌细胞Bel-7402细胞凋亡的抗肿瘤活性及其机制。方法 MTT法测定Q39对人肝癌细胞Bel-7402增殖抑制作用。PI染色法检测Q39诱导人肝癌细胞凋亡作用。免疫荧光法检测HIF-1α蛋白的转运和表达。结果 Q39在常氧和低氧下均抑制肝癌Bel-7402细胞的生长。Q39在低氧条件下促进Bel-7402肿瘤细胞凋亡。Q39通过抑制ERK1/2的磷酸化,明显抑制HIF-1α的转运。结论 Q39在低氧条件下通过抑制ERK1/2信号通路引起Bel-7402肿瘤细胞凋亡。     

链霉素及H7对机械牵张离体心肌HIF-1α、VEGF的影响及机制探讨

目的研究链霉素及H7对机械牵张大鼠心肌组织低氧诱导分子-1α和血管内皮细胞生长因子表达的影响,并探讨二者在其中的作用机制。方法采用大鼠离体灌流心脏模型,膨胀左心室30min,RT-PCR法检测左室心肌细胞HIF-1α、VEGF mRNA的表达,免疫组化观察二者在心肌细胞中定位,Western blot检测HIF-1α蛋白的表达,利用链霉素作为牵张敏感离子通道(SACs)阻断剂研究SACs和PKC抑制剂H7在其中的可能作用。结果与不牵张组HIF-1α和VEGF mRNA无表达的比较,牵张可以明显增加HIF-1α和VEGF mRNA的表达(P<0·05或P<0·01);而链霉素、H7可以明显减少HIF-1α和VEGF mRNA的表达(P<0·05);但是二者不能完全抑制急性牵张刺激激活的HIF-1α和VEGF mRNA水平升高(P<0·05),HIF-1α和VEGF在胞质和胞核中均有表达,并检测到HIF-1α蛋白表达。结论链霉素、H7对膨胀左室致HIF-1α、VEGF表达有明显抑制作用,提示心室膨胀经SACs-PKC-激活胞内信号诱导HIF-1α、VEGF表达。同时链霉素并不能完全抑制HIF-1α、VEGF表达,提示膨胀心室致HIF-1α、VEGF表达进而引起心室肥厚尚有其他传导途径,仍需进一步研究。     

胰高血糖素样肽-1及其类似物EX-4促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖与成骨分化

目的:观察胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及其受体激动剂exendin-4(EX-4)对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨分化的影响。方法:取大鼠股骨和胫骨全骨髓,采用贴壁法分离BMSCs并传代至第三代,培养2d后分成4组:BMSC组、诱导成骨组(osteoblast induced medium,OIM组)和诱导加药组,诱导加药组细分为GLP-1(10-9~10-7 mol/L)或EX-4(10-9~10-7 mol/L)的不同浓度组,MTT法检测细胞增殖能力;测定碱性磷酸酶(ALP)活性;通过ALP染色及茜素红染色观察药物诱导BMSCs向成骨细胞分化、矿化的效果;采用RT-PCR方法检测ALP和Runx2成骨相关基因的表达情况。结果:与诱导对照组相比,GLP-1及EX-4各浓度处理组呈剂量依赖性显著促进细胞增殖(P<0.05);ALP染色与茜素红染色结果显示,对照组无显色或显色不明显,而GLP-1及EX-4组均有阳性显色。GLP-1及EX-4可以显著提高ALP活性,并提高Runx2、ALP的表达水平。结论:GLP-1及EX-4不仅能够直接促进BMSCs增殖,并促进其向成骨细胞分化,GLP-1及EX-4可能在骨重建中发挥重要的作用。     

白藜芦醇对LPS诱导的MC3T3-E1成骨细胞的骨保护作用

目的探讨白藜芦醇对脂多糖(LPS)诱导的MC3T3-E1成骨细胞的骨保护作用。方法采用CCK-8法检测白藜芦醇不同浓度下MC3T3-E1成骨细胞的细胞增殖活性,对硝基苯磷酸盐法检测白藜芦醇不同浓度下MC3T3-E1成骨细胞ALP活性。将MC3T3-E1成骨细胞分为空白组(基础培养基)、对照组(LPS 2μg/mL)和实验组(LPS 2μg/mL+白藜芦醇20μmol/L)。采用qRT-PCR检测三组成骨相关基因Runx2、ALP、骨钙素(OCN)和骨桥蛋白(OPN) mRNA表达,Western blot法检测三组细胞沉默调节蛋白1(SIRT1)蛋白表达。结果白藜芦醇20μmol/L是MC3T3-E1成骨细胞最适成骨浓度(P<0.05)。与空白组比较,实验组成骨相关基因Runx2、ALP、OCN和OPN mRNA表达水平和SIRT1蛋白表达水平均降低(P<0.05);与对照组相比,实验组成骨相关基因Runx2、ALP、OCN和OPN mRNA表达水平和SIRT1蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论白藜芦醇能够通过提高Runx2、ALP、OCN、OPN和SIRT1相关...     

缺氧诱导因子-1α、血管内皮因子与宫颈癌血管生成的关系

目的 探讨宫颈癌中缺氧诱导因子-1α(hypoxia include 1α,HIF-1α)的表达及其与血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)、微血管密度(microvessel density,MVD)的相关性,分析与宫颈癌等生物转移行为的关系.方法 采用免疫组化S-P法检测HIF-1α、VEGF的表达;用CD34单克隆抗体标记肿瘤微血管密度(MVD).结果 宫颈癌组织HIF-1α及VEGF与正常宫颈组织差异有显著性(P＜0.05);HIF-1α及VEGF表达呈一致性,呈正相关;HIF-1α或VEGF阳性肿瘤组织的MVD值显著高于阴性组织.结论 HIF-1α参与了诱导VEGF表达并促进肿瘤血管生成,提示检测HIF-1α和VEGF,对于早期诊断宫颈癌有重要意义.     

高糖环境中吡格列酮对MC3T3-E1成骨细胞的作用及其机制

目的观察高糖环境下吡格列酮对MC3T3-E1成骨细胞的作用并探讨其可能机制。方法高糖(22.5 mmol·L~(-1))环境培养MC3T3-E1细胞,分为对照组,吡格列酮2.5、5、10μmol·L~(-1)组,干预24、48 h。检测细胞增殖活性、凋亡率、骨钙素和碱性磷酸酶(ALP)分泌水平,以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、成骨因子runt相关基因2(Runx2)和骨形态蛋白2(BMP-2)mRNA的表达水平。并分析PPARγ、Runx2的表达与骨钙素、ALP、BMP-2的相关性。结果在相同干预时限,吡格列酮各组MC3T3-E1成骨细胞增殖活性、骨钙素和ALP的分泌水平、Runx2 mRNA和BMP-2 mRNA的表达均低于对照组,凋亡率和PPARγmRNA的表达高于对照组(P<0.05)。随吡格列酮浓度增加,细胞增殖活性、骨钙素和ALP的分泌、Runx2 mRNA和BMP-2 mRNA的表达均降低,而细胞凋亡率和PPARγmRNA的表达增高(P<0.05)。与干预24 h相比,干预48 h时相同浓度吡格列酮组细胞增殖活性,骨钙素和ALP的分泌水平,PPARγ、Runx2、BMP-2 mRNA的表达或无变化或略增加。结论高糖环境下吡格列酮对成骨细胞有损害作用,促进PPARγ表达、抑制Runx2的表达可能为其作用机制之一。