苯甲醛左氧氟沙星席夫碱诱导人肝癌细胞凋亡作用

目的研究苯甲醛左氧氟沙星席夫碱化合物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用。方法用不同浓度的(S)-1,8-(2-甲基亚乙氧基)-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-3-[S-苄基硫基-4-(对硝基苯甲叉基氨基)-1,2,4-均三唑-3-基]-喹啉(1-H)-4-酮(M18)与SMMC-7721细胞、人乳腺癌细胞MB-231、人结肠癌细胞HCT-116、人肝癌细胞HEPG-2和小鼠骨髓间充质干细胞体外培养。MTT法检测M18对各种细胞的生长抑制作用;Hoechst 33258荧光染色法、TUNEL法检测细胞凋亡变化;高内涵活细胞成像系统测定细胞线粒体膜电位(△ψm)变化;Western blot方法测定caspase-3、p53蛋白表达量的改变,以及细胞色素C在线粒体内外的分布。结果 M18在4~32μmol·L-1的浓度范围内能明显抑制SMMC-7721细胞、MB-231细胞、HCT-116细胞、HEPG-2细胞增殖,呈浓度、时间依赖关系,作用于细胞24 h的IC50值分别为8.65、9.37、12.74和9.40μmol·L-1;左氧氟沙星盐酸盐作用于SMMC-7721细胞24 h的IC50值为735.10μmol·L-1,M18作用于骨髓间充质干细胞24 h的IC50值为38.96μmol·L-1;不同浓度M18作用人肝癌SMMC-7721细胞24h,细胞凋亡率高于对照组(P<0.05)。M18作用于SMMC-7721细胞后,细胞线粒体膜电位降低,与对照组相比差异有统计学意义;M18明显增加SMMC-7721细胞的p53和caspase-3蛋白表达量,其中caspase-3活性裂解片段增加明显;M18作用使细胞线粒体内细胞色素C明显减少,胞质内细胞色素C明显增加。结论苯甲醛左氧氟沙星席夫碱能够诱导人肝癌细胞凋亡,作用与线粒体凋亡通路有关。     

白藜芦醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的观察白藜芦醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法用MTT法检测白藜芦醇对SMMC-7721细胞增殖影响的量效与时效关系;应用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;比色法测定caspase-3酶活性。结果白藜芦醇（50、100、200μmol·L^-1）处理SMMC-7721细胞48h,呈浓度依赖性抑制SMMC-7721细胞增殖且诱导其凋亡;100μmol·L^-1白藜芦醇处理细胞24、48或72h显著抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡,且呈时间依赖性。白藜芦醇（50、100、200μmol·L^-1）处理SMMC-7721细胞48h,呈浓度依赖性增加SMMC-7721细胞caspase-3活性。结论白藜芦醇可抑制人肝癌细胞株洲C-7721的增殖,诱导细胞凋亡,其机制与增强细胞内caspase-3活性有关。     

全反式维甲酸联合索拉菲尼对人SMMC-7721肝癌细胞株的作用

目的观察全反式维甲酸联合索拉菲尼对SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响。方法选用ATRA(10-5mol/L)及不同浓度的索拉菲尼(6μmol/L、9μmol/L、12μmol/L),并选用10-5mol/L的ATRA分别联合索拉菲尼(6μmol/L、9μmol/L、12μmol/L)作用于SMMC-7721肝癌细胞24h、48h、72h;期间药物对SMMC-7721肝癌细胞生长的抑制阻滞作用通过MTT比色法进行观测,同时细胞生长过程中利用倒置显微镜观察形态变化,其后药物作用48h时SMMC-7721细胞的周期分布和凋亡的情况利用流式细胞术分析。结果不同浓度的索拉菲尼单药、全反式维甲酸单药及联合用药均对SMMC-7721肝癌细胞的生长明显抑制并改变细胞的形态,促进肝癌细胞的凋亡比例增加。其凋亡作用有随剂量-时间改变的依赖性。两药联合应用相比单用全反式维甲酸或索拉菲尼其细胞凋亡作用更为显著。12μmol/L索拉菲尼、9μmol/L索拉菲尼分别与ATRA联合作用于细胞48h及72h相比较,其抑制作用无明显差异。两药联合作用时可见细胞周期阻滞在S期的肝癌细胞较单药应用时显著增多(P<0.01),凋亡率增加。结论 ATRA、索拉菲尼均有阻滞肝癌SMMC-7721细胞增殖及促凋亡的作用,联合索拉菲尼作用增强并具协同作用。     

对甲氧基肉桂醛左氧氟沙星酰腙诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用

目的探讨喹诺酮酰腙类化合物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用。方法用不同浓度的对甲氧基肉桂醛左氧氟酰腙(FQ-10)与SMMC-7721细胞体外培养。MTT法检测FQ-10对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用;Hoechst33258/PI双染荧光染色法、TUNEL法及琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡变化;高内涵活细胞成像系统测定细胞线粒体膜电位(△ψm)变化;Western blot方法测定caspase-9、caspase-8、caspase-3、p53、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 FQ-10在0.625～10.00μmol.L-1的浓度范围能抑制细胞增殖,呈时间、浓度依赖性;作用于细胞24 h的IC50值是4.40μmol.L-1;各组FQ-10作用24 h后,细胞凋亡率高于对照组(P<0.05);琼脂糖凝胶电泳可见凋亡细胞典型的梯状DNA条带,并伴有线粒体膜电位降低。荧光染色观察细胞形态学变化,显示凋亡细胞染色质凝集,细胞核碎裂成碎片等典型细胞凋亡特征性变化,晚期凋亡细胞可见特异性PI染色。与对照组比较,FQ-10作用后p53、Bax、caspase-9、caspase-3蛋白表达量增加,其中caspase-9、caspase-3活性裂解片段明显增加,caspase-8无变化,而Bcl-2蛋白表达水平下降。结论对甲氧基肉桂醛左氧氟酰腙能够激活线粒体凋亡通路,诱导人肝癌细胞凋亡。     

补骨脂二氢黄酮甲醚诱导HepaRG细胞损伤机制探讨

目的利用HepaRG细胞,探讨补骨脂二氢黄酮甲醚毒性剂量及其毒性作用机制。方法 MTT法确定毒性及剂量。以浓度为6.25、12.5、25μmol·L~(-1)的补骨脂二氢黄酮甲醚作用于细胞24 h后,首先利用Hoechst 33342/PI及LDH的方法检测细胞死亡,并检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3活性。通过检测线粒体膜电位、ATP含量、线粒体膜通道开放孔开放性及细胞色素C的含量,观察其对线粒体损伤的影响。结果补骨脂二氢黄酮甲醚给药24 h后,凋亡蛋白Bax/Bcl-2比例、caspase-3活性随药物浓度增大而增加,在6.25~25μmol·L~(-1)时,其凋亡率呈现明显的剂量依赖性,但在25μmol·L~(-1)时细胞以坏死为主。作用24 h后线粒体损伤相关指标明显加剧。结论补骨脂二氢黄酮甲醚作用于HepaRG细胞后通过损伤线粒体诱导细胞凋亡和坏死。     

L-肌肽对鱼藤素诱导SH-SY5Y细胞神经毒性的保护作用

目的研究L-肌肽是否能通过抗氧化活性降低鱼藤素导致的神经毒性。方法 SH-SY5Y细胞在L-肌肽(1、10、20、40、60、80、100 mmol·L~(-1))中培养24 h,CCK-8法测定细胞存活率。30 mmol·L~(-1) L-肌肽、20μmol·L~(-1)鱼藤素、20μmol·L~(-1)鱼藤素与30 mmol·L~(-1) L-肌肽作用于SH-SY5Y细胞24 h,AO/EB法检测细胞形态和凋亡情况。8μmol·L~(-1)鱼藤素、8μmol·L~(-1)鱼藤素与3 mmol·L~(-1) L-肌肽、8μmol·L~(-1)鱼藤素与30 mmol·L~(-1) L-肌肽、20μmol·L~(-1)鱼藤素、20μmol·L~(-1)鱼藤素与3 mmol·L~(-1) L-肌肽、20μmol·L~(-1)鱼藤素与30 mmol·L~(-1) L-肌肽、50μmol·L~(-1)鱼藤素、50μmol·L~(-1)鱼藤素与3 mmol·L~(-1) L-肌肽、50μmol·L~(-1)鱼藤素与30 mmol·L~(-1) L-肌肽作用于SH-SY5Y细胞24 h,CCK-8法检测细胞的增殖情况;双染流式细胞术检测细胞凋亡率;DCFH-DA流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平。结果 20μmol·L~(-1)鱼藤素与30 mmol·L~(-1) L-肌肽共作用于细胞后,细胞抑制率降低9.07%,早期凋亡的细胞数减少,早期凋亡率降低9.35%,总凋亡率降低10.7%,ROS水平低于20μmol·L~(-1)鱼藤素组,结果差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 L-肌肽能有效降低鱼藤素诱导SH-SY5Y细胞的神经毒性,保护细胞,其机制可能与降低氧化应激水平相关。     

鱼藤素对SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞凋亡的诱导作用

目的研究鱼藤素对SH-SY5Y细胞凋亡的诱导作用。方法鱼藤素(0、0.625、1.25、2.5、5、10、20μmol·L~(-1))处理SH-SY5Y细胞24、48、72 h后,CCK-8法测定细胞存活率。鱼藤素(0、8、20、50μmol·L~(-1))处理SH-SY5Y细胞24 h,光镜下及AO/EB双染分别观察细胞形态和凋亡形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA荧光探针法检测细胞活性氧水平,分光光度法检测caspase-3活化程度。结果鱼藤素对SH-SY5Y细胞存活率呈时间和浓度依赖性抑制作用,作用24、48、72 h的IC50值分别为(26.07±2.18)、(18.33±0.94)、(12.5±1.49)μmol·L~(-1)。鱼藤素处理24 h后,细胞凋亡率、细胞活性氧水平明显上升(P<0.05),caspase-3活化程度升高,且三者均有浓度-效应特征。结论鱼藤素可抑制SH-SY5Y细胞存活,诱导细胞凋亡,其机制可能与升高活性氧水平和活化caspase-3相关。     

毛酸浆活性成分PPB诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的研究毛酸浆活性成分PPB对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法用MTT法考察1,2,4,8,16和32μmol·L~(-1)PPB分别作用于HepG2细胞6,12,24,36及48 h的生长抑制作用,并用MTT法考察1,2,4,8,16,32μmol·L~(-1)PPB分别作用于人外周血单个核细胞24和48 h的生长抑制作用。7μmol·L~(-1)PPB作用于HepG2细胞3,6,12及24 h后,采用Hoechst 33342,Mitotracker Deep Red,Rhodamine 123荧光染色结合高内涵细胞分析技术检测细胞数、线粒体质量、线粒体膜电位的变化。采用Western印迹法检测胱天蛋白酶3和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白水平的变化。结果PPB对HepG2细胞增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性,且24 h IC50为(6.78±1.96)μmol·L~(-1),48 h IC50为(5.50±1.64)μmol·L~(-1)。PPB对人外周血单个核细胞无显著的细胞毒性,其24 h IC50为(252.34±126.24)μmol·L~(-1),48 h IC50为(92.93±35.93)μmol·L~(-1)。高内涵细胞分析结果显示,与对照组相比,PPB处理后,细胞数显著下降(P<0.05),线粒体质量显著增加(P<0.05),线粒体膜电位显著降低(P<0.05)且呈时间依赖性。Western印迹结果显示,胱天蛋白酶3蛋白表达水平降低,PARP表达水平降低,活化形式的PARP表达水平升高。结论 PPB可通过诱导人肝癌HepG2细胞凋亡而抑制其增殖,且PPB对人正常细胞无显著的细胞毒性。     

麦冬皂苷D′对大鼠心肌细胞H9c2的细胞毒性

目的研究麦冬皂苷D′对大鼠心肌细胞H9c2的细胞毒性作用,初步探讨其作用机制,为寻找其临床安全使用剂量提供依据。方法麦冬皂苷D′0.1,1,5,10,20,25和50μmol?L~(-1)作用于H9c2细胞24 h。MTS法检测细胞存活率及其IC_(50);荧光显微镜观察细胞形态变化;高内涵免疫荧光筛选检测细胞核数目变化;流式细胞仪检测其活性氧生成、线粒体膜电位和细胞凋亡率。结果麦冬皂苷D′0.1,1,5,10,20,25和50μmol?L~(-1)作用于H9c2细胞24 h后,细胞存活率分别为108.9%,106.3%,91.9%,61.0%,24.8%,24.7%和24.2%,IC_(50)为9.9μmol·L~(-1);荧光显微镜检测显示细胞皱缩;高内涵免疫荧光检测显示细胞核数目减少(P<0.05)。流式细胞术检测显示,麦冬皂苷D′0.1,1,5和10μmol·L~(-1)显著升高活性氧生成量(P<0.05),降低线粒体膜电位(P<0.05),升高细胞凋亡率(P<0.05)。结论麦冬皂苷D′对H9c2心肌细胞有明显的细胞毒性作用,该作用可能与其激活细胞凋亡通路有关。     

去甲肾上腺素对EGFR-TKI耐药性以及Cx32蛋白表达的影响

目的在Afatinib敏感型人非小细胞肺癌HCC827细胞和Afatinib耐药型人非小细胞肺癌HCC827R细胞上探索去甲肾上腺素(NE)对Afatinib耐药性形成的影响,以及在耐药性形成过程中Cx32表达变化的影响。方法用Afatinib按梯度浓度0,0.0001,0.0005,0.001,0.01,0.1,1和10μmol·L~(-1)处理HCC827细胞,用Afatinib按梯度浓度0,0.001,0.1,1,10和20μmol·L~(-1)处理HCC827R细胞,48 h后,予以NE(50μmol·L~(-1))处理24 h,CCK-8法检测细胞存活率,计算Afatinib对细胞的半数抑制浓度(IC_(50));提取HCC827和HCC827R细胞蛋白,并以50μmol·L~(-1)NE按不同时间点(0,1,2,6,12和24 h)分别处理HCC827细胞后提取蛋白,用Western印迹法检测Cx32蛋白表达。结果Afatinib抑制HCC827和HCC827R细胞生长的IC50分别为0.0034和1.326μmol·L~(-1),HCC827R细胞耐药指数为390;NE处理后,HCC827细胞的IC50为0.0066μmol·L~(-1),显著高于未用NE处理(P<0.05),HCC827R细胞IC50为1.4632μmol·L~(-1),与未处理组无显著差异。与HCC827细胞相比,HCC827R细胞中Cx32蛋白的表达增加,50μmol·L~(-1)NE在12和24 h2个时间点上调HCC827细胞Cx32蛋白表达。结论 NE能降低人非小细胞肺癌对Afatinib的敏感性,但是不影响对Afatinib高度耐药的非小细胞肺癌细胞对Afatinib的敏感性;NE能增加人非小细胞肺癌细胞耐药性形成过程中Cx32的表达。