11种中药提取物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞生成一氧化氮的影响

目的研究11味中药提取物对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7产生一氧化氮(NO)的抑制作用。方法使用MTT法测试样品对RAW264.7的细胞毒作用,Griess法测定样品对LPS刺激RAW264.7细胞产生NO的含量,N-单甲基-L-精氨酸单乙酸酯(L-NMMA)为阳性对照。结果 11味中药甲醇提取物均具有一定的抑制RAW264.7细胞生成NO的作用,其中秦艽、五加皮、独活、雷公藤、仙鹤草提取物的抑制作用最强(IC50在4.3±0.6~14.8±2.6μg·m L-1),且选择指数较高(SI>27)。结论本研究系统评价了11味常用中药提取物对LPS诱导RAW 264.7细胞产生NO的影响,研究结果进一步证实这些中药的抗炎活性。     

双氢青蒿素保护刀豆蛋白A诱导的小鼠肝损伤及机制探讨

目的研究双氢青蒿素(dihydroqinghaosu,DQHS)对刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导的小鼠免疫性肝损伤的保护作用及可能机制。方法小鼠尾静脉注射ConA建立肝损伤模型;改良赖式法和ELISA法分别测定DQHS预给药对该模型小鼠血浆转氨酶和TNF-α水平的影响;MTT法检测DQHS对ConA诱导体外小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;RT-PCR检测DQHS对LPS刺激的RAW264.7巨噬细胞IL-1β和TNF-αmRNA表达水平的影响。结果与模型组比较,DQHS 40μg.g-1给药组可降低ConA诱导的肝损伤小鼠血浆转氨酶水平,各DQHS组均可降低该小鼠血浆TNF-α水平;DQHS 40μmol.L-1和100μmol.L-1处理组能抑制ConA诱导的体外脾淋巴细胞增殖,减少LPS刺激的巨噬细胞炎症因子IL-1β和TNF-αmRNA的表达。结论DQHS对ConA诱导的小鼠免疫性肝损伤有保护作用,该作用可能通过抑制脾淋巴细胞增殖和巨噬细胞相关炎症细胞因子表达来实现。     

安儿宁颗粒的体外抗菌、抗炎和免疫增强活性研究

目的:评价安儿宁颗粒的体外抗菌、抗炎和免疫增强活性。方法:采用微量稀释法检测安儿宁颗粒(1.562 5～100 mg/mL)对10种临床常见致病菌的抑制作用并计算其最低抑菌浓度(MIC);以RAW 264.7细胞(单核巨噬细胞)为对象,采用脂多糖(LPS)诱导建立细胞炎症模型,以MTT法考察安儿宁颗粒(0.312 5～20 mg/mL)对细胞增殖及其释放一氧化氮(NO)的影响;以BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞为对象,以MTT法考察安儿宁颗粒(0.312 5～20 mg/mL)对细胞增殖的影响。结果:安儿宁颗粒对表皮葡萄球菌和肺炎链球菌的MIC均为6.25 mg/mL,对变形杆菌、肺炎克雷伯菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希菌(标准菌株)的MIC均为12.5mg/mL,对铜绿假单胞菌、粪肠球菌、蜡样芽孢杆菌的MIC均为25 mg/mL,对大肠埃希菌(临床分离菌株)、伤寒沙门菌的MIC均为50 mg/mL。与LPS模型组比较,安儿宁颗粒在0.312 5～1.25 mg/mL的剂量下能显著降低LPS诱导的RAW 264.7细胞中NO的释放(P<0.05);与空白对照组比较,安儿宁颗粒在试验剂量下对RAW 264.7细胞和小鼠脾脏淋巴细胞增殖无干扰或有促增殖趋势,其在0.625、0.312 5 mg/mL剂量下能显著促进淋巴细胞增殖(P<0.05)。结论:安儿宁颗粒在体外对临床常见的革兰氏阳性和革兰氏阴性致病菌均有一定的抑制作用,并具有抗炎和免疫增强作用。     

12味止血中药对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞产生一氧化碳的抑制作用

目的研究12味止血中药对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞产生一氧化氮(NO)的抑制作用,并探讨其止血机制.方法以1μg·mL-1 LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW 264.7,22h后以Griess法测定NO的终产物亚硝酸盐的含量,观察LPS对NO生成的影响.结果12味止血药均可抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7中NO的生成.三七、地榆、仙鹤草、槐花、艾叶、蒲黄、侧柏叶及白茅根的抑制作用显著(P＜0.05).结论本实验为12味止血中药对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞产生NO的抑制作用提供了一定的理论依据.     

豆豉姜活性成分9,9’-O-二-(E)-阿魏酰基-内消旋-5,5’-二甲氧基开环异落叶松树脂酚(LCA)抗炎作用研究

目的对傣药豆豉姜活性成分LCA在动物及细胞水平上的抗炎作用进行评价。方法采用耳肿胀和棉球肉芽肿模型进行LCA抗炎的体内药效学评价。采用脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7),通过检测其一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌量以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达水平,以评价LCA的体外抗炎活性。结果在小鼠耳肿胀的实验中,LCA组的耳肿胀度明显低于模型组,且高浓度组对小鼠耳肿胀的抑制率高于阳性药组;在大鼠棉球肉芽肿实验中,LCA高剂量组显著减轻了棉球肉芽肿的湿重与干重。此外,LCA显著减少LPS诱导的RAW264.7细胞中NO、TNF-α的分泌,降低iNOS、COX-2蛋白的表达。结论LCA具有显著的体内外抗炎作用,值得进一步深入研究。     

12味止血中药对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞产生一氧化氮的抑制作用

目的:研究12味止血中药对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞产生一氧化氮(NO)的抑制作用,并探讨其止血机制。方法:以1μg.mL-1LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7,22h后以Griess法测定NO的终产物亚硝酸盐的含量,观察LPS对NO生成的影响。结果:12味止血药均可抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7中NO的生成。三七、地榆、仙鹤草、槐花、艾叶、蒲黄、侧柏叶及白茅根的抑制作用显著(P<0.05)。结论:本实验为12味止血中药对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞产生NO的抑制作用提供了一定的理论依据。     

青蒿乙素对脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制及机制

目的 探讨青蒿乙素的抗炎活性及其作用机制.方法 采用细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7建立炎症反应模型,经青蒿乙素处理后,采用Griess试剂检测NO的含量;采用酶联免疫法(ELISA)检测促炎症因子的水平;采用Western Blot检测炎症相关蛋白及激酶的表达水平.结果 青蒿乙素能明显抑制RA...     

蟛蜞菊内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞环氧化酶2、NO及TNF-α的影响

目的:研究蟛蜞菊内酯对脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞环氧化酶2(COX-2)、NO及TNF-α的作用。方法:ELISA方法检测0.2、2、20μmol/L不同浓度蟛蜞菊内酯对终浓度为10μg/mL LPS诱导RAW264.7细胞产生TNF-α、NO及前列腺素E2(PGE2)的影响,Western blot方法检测蟛蜞菊内酯对LPS诱导COX-2酶蛋白表达的影响。结果:LPS能够明显诱导小鼠RAW264.7细胞产生的COX-2酶蛋白,蟛蜞菊内酯低中高3个浓度均能抑制LPS诱导产生的COX-2酶蛋白表达。PGE2可以被LPS诱导增加,与空白组比有显著差异。蟛蜞菊内酯低中高3个浓度均能抑制LPS诱导产生的PGE2、NO和TNF-α,呈现剂量依赖性。结论:蟛蜞菊内酯抗炎的作用机制可能为抑制COX-2的蛋白表达,进而抑制PGE2的生成,也可能与抑制NO和TNF-α生成有关。     

4-烷氧甲酰基苯并噁唑酮类化合物的合成及其体外抗炎活性研究

目的设计并合成4-烷氧甲酰基苯并噁唑酮类化合物,并对其进行体外抗炎活性研究。方法以3-羟基-2-氨基苯甲酸为起始原料,经过酯化、成环和取代反应合成目标化合物,并对其进行结构确证。采用LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型,通过Griess法测定细胞培养液中NO的释放量,ELISA法测定细胞培养液中IL-6和IL-1β的量以评价化合物的体外抗炎活性。结果共合成了10个目标化合物,均通过ESI-MS、~1H-NMR及~(13)C-NMR对其结构进行确证。体外抗炎活性测定结果表明,化合物3d在25μmol/L时对IL-1β的抑制率达63.96%,对IL-6的抑制率达60.99%,与阳性对照药塞来昔布活性相当。结论 4-烷氧甲酰基苯并噁唑酮类化合物可通过抑制NO、IL-6和IL-1β炎症因子的释放而发挥抗炎活性。     

蛇六谷葡苷露聚糖对小鼠巨噬RAW264.7细胞免疫调节作用及机制研究

目的探讨蛇六谷葡苷露聚糖(KGM)对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用及机制。方法采用MTT法检测KGM对小鼠巨噬RAW264.7细胞存活率的影响,观察巨噬细胞形态的变化;采用吞噬中性红和流式细胞仪测FITC-dextran的方法检测KGM处理后小鼠巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性;采用Griess法测定NO,ELISA法检测细胞培养液中IL-6,IL-1β和TNF-α等细胞因子的含量;采用qRT-PCR法检测小鼠巨噬细胞RAW264.7相关基因iNOS,IL-6,TNF-α,IL-1β,TLR4,My D88,TRAF-6,TRAM和NF-κB等的表达。结果 KGM在50～400 mg·L~(-1)对小鼠巨噬细胞RAW264.7没有细胞毒性。KGM处理24 h后,RAW264.7细胞体积增大,胞内颗粒小泡增多,呈不规则多边形,部分细胞伸出伪足,表现为典型的激活态;中性红吞噬实验和流式测定FITC-dextran实验结果表明,KGM 50～200 mg·L~(-1)能显著提升小鼠巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性,与对照组相比,KGM 100 mg·L~(-1)分别使细胞吞噬活性提高101.4%和404.3%。Griess法检测表明,KGM能显著增加小鼠巨噬细胞RAW264.7合成和释放NO,其中KGM100 mg·L~(-1)处理组细胞NO含量与LPS 5 mg·L~(-1)作用相当,与对照组相比,NO含量提高318.1%。ELISA检测表明,KGM 50～200 mg·L~(-1)能诱导RAW264.7细胞分泌IL-6,TNF-α和IL-1β等细胞因子,与对照组相比,KGM 100 mg·L~(-1)明显使细胞因子分泌量分别增加415.5%,158.6%和458.0%(P<0.01)。qRT-PCR的结果显示,与对照组相比,KGM组IL-6,i NOS,TNF-α,IL-1β,TLR4,My D88,TRAF-6和NF-κB的mRNA表达水平升高(P<0.05),表明KGM可以激活小鼠巨噬细胞RAW264.7中的核转录因子NF-κB和TLR4。结论 KGM对小鼠巨噬RAW264.7细胞具有免疫调节活性,能够显著提升小鼠细胞RAW264.7的吞噬能力,促进分泌与释放NO和TNF-α等相关细胞因子,推测可能是通过激活TLR4/My D88/NF-κB信号通路发挥免疫调节作用。