灯盏花乙素对J774A.1巨噬细胞中ATP诱导的炎症小体活化和细胞焦亡的影响

目的以LPS致敏的小鼠巨噬细胞J774A.1作为炎症细胞模型,研究灯盏花乙素对ATP诱导的炎症小体活化和细胞焦亡的影响及其机制。方法利用碘化丙锭(PI)染色法检测LPS+ATP诱导的小鼠J774A.1巨噬细胞发生细胞焦亡的情况;免疫印迹法检测细胞裂解液和上清中IL-1β、caspase-1、HMGB1等蛋白的表达水平;基于微珠的免疫测定法(CBA)检测细胞上清中IL-1β的分泌水平。结果 ATP能够明显诱导LPS致敏的J774A.1巨噬细胞中caspase-1活化、成熟IL-1β(17 ku)和HMGB1释放至培养上清中,并诱导细胞焦亡;而灯盏花乙素预处理能够剂量依赖性地抑制ATP诱导的caspase-1活化以及成熟IL-1β、HMGB1的释放,并抑制细胞焦亡;同时,经腺苷酸环化酶抑制剂MDL12330A和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89处理,可以逆转灯盏花乙素对ATP诱导的细胞焦亡的抑制作用。结论灯盏花乙素通过调节PKA活性,抑制NLRP3炎症小体的活化与细胞焦亡,从而发挥抗炎作用。     

补骨脂异黄酮对炎症小体的调控作用及机制初探

目的基于小鼠骨髓巨噬细胞系,建立NLRP3、NLRC4及AIM2炎症小体活化模型,探索补骨脂异黄酮对炎症小体的调控作用及初步机制。方法采用LPS联合ATP、Nigericin、Salmonella和Poly(dA∶dT)等刺激因子,分别构建NLRP3、NLRC4和AIM2炎症小体活化模型;Caspase-Glo~® 1 Inflammasome Assay检测caspase-1活性;免疫印迹法检测细胞培养上清中mature IL-1βp17、caspase-1 p20的蛋白水平,以及细胞裂解液中pro-caspase-1、pro-IL-1β、ASC、NLRP3等蛋白表达。结果补骨脂异黄酮可抑制LPS联合ATP、Nigericin、Salmonella和Poly(dA∶dT)诱导的pro-caspase-1自我剪切,抑制caspase-1介导的IL-1β产生,表明补骨脂异黄酮可抑制NLRP3、NLRC4及AIM2炎症小体活性。此外,研究发现补骨脂异黄酮对NLRP3炎症小体活性的抑制作用具有不可逆性,且不依赖于NF-κB通路。结论补骨脂异黄酮可通过抑制pro-caspase-1自我剪切活化,从而抑制NLRP3、NLRC4、AIM2炎症小体的激活,进一步抑制其介导的免疫炎症反应,本研究也在一定程度上为补骨脂异黄酮相关制剂治疗免疫炎症疾病提供依据。     

NLRP3炎性小体与抗肿瘤免疫作用研究进展

越来越多的研究表明, NOD样受体蛋白3 (NOD-like receptor protein 3, NLRP3)炎性小体已成为炎症反应和保护性免疫的调节因子,其组装和激活与抗肿瘤免疫的效果密切相关。由于细胞类型和所受刺激的不同, NLRP3炎性小体的激活可诱导免疫细胞处于极化、过度活跃状态或发生焦亡,释放白细胞介素(interleukin, IL)-1β和IL-18,导致级联免疫或炎症反应,其在肿瘤免疫中的作用受到了广泛关注。本综述汇总了NLRP3炎性小体通过诱导肿瘤细胞焦亡、树突状细胞(dendritic cells, DCs)发生焦亡或过度活跃状态,以及诱导巨噬细胞发生焦亡和极化,增强CD8⁺T细胞介导的抗肿瘤免疫作用的机制。NLRP3炎性小体的激活在肿瘤细胞和免疫细胞中的不同抗肿瘤免疫作用为未来研究提供了新方向,并且可能影响下一代免疫治疗的发展。     

纤维状α-突触核蛋白聚集体激活NLRP3炎症小体的机制研究

目的 探索纤维状α-突触核蛋白（α-synuclein）聚集体激活NLRP3炎症小体诱导神经炎症的机制。方法 构建纤维状α-synuclein聚集体,采用纤维状α-synuclein聚集体刺激BV-2小胶质细胞,检测白介素（IL）-1β、IL-18、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等相关炎症因子和NLRP3、caspase-1、ASC等蛋白的表达和mRNA水平评价NLRP3炎症小体激活;采用乳酸脱氢酶释放（LDH）实验检测细胞焦亡的发生。机制研究部分,检测Toll样受体（TLR）2和TLR4的激活,并分别加入TLR2和TLR4抑制剂C29和TAK-242检测对纤维状α-synuclein聚集体诱导的NLRP3炎症小体激活的影响及核转录因子-κB(NF-κB)的入核情况。结果 Westernblot和硫黄素T染色实验结果显示,纤维状α-synuclein聚集体成功制备。纤维状α-synuclein聚集体刺激BV-2小胶质细胞24 h后可激活NLRP3炎症小体,表现为IL-1β释放增加,相关蛋白NLRP3、caspase-1表达升高,N LR P3、ASC和I L-1β的m R NA...     

细胞焦亡在糖尿病大血管并发症中作用的研究进展

细胞焦亡是一种炎症性细胞程序死亡模式。体内外研究表明,细胞焦亡主要通过激活炎性小体、活化天冬氨酸特异蛋白酶-1/4/5/11 (caspase-1/4/5/11)、切割gasdermin家族成员D (gasdermin D, GSDMD)、释放白细胞介素-18 (interleukin-18, IL-18)和IL-1β等炎性细胞因子参与糖尿病大血管并发症的发生发展。近几年,细胞焦亡通过炎症的级联反应导致的全身慢性炎症对糖尿病大血管并发症的影响受到人们的持续关注。本文对细胞焦亡在糖尿病大血管并发症中的研究和相关药物进行阐述,为临床治疗糖尿病大血管并发症提供新思路。     

NLRP3炎症小体在眼科疾病的研究进展

NOD样受体家族中的NLRP3蛋白小体是先天免疫系统的一个重要组成部分,其可被多种刺激激活,包括离子通量、线粒体功能障碍、活性氧的产生和溶酶体损伤,通过介导含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(caspase-1)激活及促炎细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)的分泌,从而导致各种类型的细胞焦亡。在眼科疾病中,很多发病机制及其激活方式目前尚未清楚,但通过对NLRP3炎症小体的研究探索,使年龄相关性黄斑变性、糖尿病视网膜病变、干眼症、青光眼等疾病的发病过程和机制更加清晰。现就NLRP3炎症小体的生物学特征及其激活和调控机制,及其对相关眼部疾病的关系和最新研究现状做一综述。     

奥拉帕尼通过PARP-1通路调控脂多糖诱导的A549细胞炎症反应

目的探讨奥拉帕尼对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞炎症损伤的保护作用。方法体外培养的肺泡上皮细胞(A549)同时加入LPS 10mg·L~(-1)+奥拉帕尼10和25μmol·L~(-1)孵育24 h。酶联免疫吸附试验(ELISA)测定白细胞介素6(IL-6),IL-8和IL~(-1)0释放;实时PCR技术检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL~(-1)β、IL-6、IL-8和细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA的表达水平;流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平;Western印迹法检测细胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)蛋白表达水平和NF-κB通路相关蛋白磷酸化水平。结果与LPS 10 mg·L~(-1)损伤组相比,奥拉帕尼10和25μmol·L~(-1)显著降低LPS诱导的A549细胞IL-6,IL-8的释放(P<0.01)和ROS水平(P<0.01),升高IL~(-1)0水平(P<0.01),抑制了LPS诱导的TNF-α,IL~(-1)β,IL-6,IL-8和ICAM-1 mRNA表达水平(P<0.01),抑制LPS诱导的PARP-1蛋白表达和NF-κB通路磷酸化激活(P<0.01)。结论奥拉帕尼可有效缓解LPS诱导的肺泡上皮细胞炎症损伤和氧化应激,其作用机制可能为奥拉帕尼通过下调PARP-1的表达,继而影响NF-κB通路的活化,最终抑制了相关炎症因子的表达和释放。     

瓜子金皂苷己抑制IL-1β的释放及其机制研究

目的研究瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PS-F)对LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症反应中炎性因子IL-1β释放的影响及其作用机制。方法实验分为空白组、LPS模型组、LPS+PS-F (0.10、1.00、10.00μmol·L~(-1))给药组。运用ELISA法检测培养液上清中IL-1β的分泌量;real-time PCR检测IL-1βmRNA的表达;Western blot检测IL-1β、NLRP3、caspase-1、ASC、caspase-11的蛋白表达量。结果 ELISA、real-time PCR和Western blot结果均表明,PS-F能有效抑制LPS诱导BV2小胶质细胞释放炎性因子IL-1β(P<0.01,P<0.05);Western blot结果表明,PS-F可以下调NLRP3、caspase-1、ASC、caspase-11的蛋白表达,其中ASC、caspase-11所得结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PS-F可以有效抑制LPS诱导BV2细胞炎症反应中炎性因子IL-1β的释放,且与下调NLRP3炎性小体、抑制caspase-11的激活有关。     

二苯乙烯化合物Vam3对ATP诱导的小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应的影响及机制研究

目的研究二苯乙烯化合物Vam3对外源性三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应的影响及机制。方法在预先以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的小鼠腹腔巨噬细胞培养液中加入ATP作为体外炎症模型。ELISA法检测细胞上清中IL-1β水平;酶活力法检测caspase 1酶活力;MTT法检测细胞增殖;DCFH-DA(2,7'-dichlorofluorescin diacetate)荧光探针法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+浓度。结果 Vam3对外源性ATP诱导的小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β分泌增加、caspase 1酶活力增强、细胞内ROS水平增加等炎症反应均显示出明显抑制作用,并可明显降低外源性ATP诱导的小鼠腹腔巨噬细胞毒性及Ca2+内流。结论 Vam3可能通过干预caspase1^IL-1β炎性通路抑制外源性ATP诱导的小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应。     

Triazolodiazepine在体外对小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞的抑制作用(英文)

Triazolodiazepine (Tri)体外对Con A和LPS诱导的小鼠脾细胞增殖以及巯基乙醇硫酸盐激活的腹腔巨噬细胞吞噬功能呈浓度依赖性抑制作用。Tri还明显抑制Con A诱导的脾细胞释放集落刺激因子和巨噬细胞释放白细胞介素-1,结果提示,Tri抑制小鼠脾细胞和巨唾细胞功能可能与其广泛而强大的抗炎作用有关。