重组人内皮抑素治疗子宫内膜异位症鼠模型的实验研究

目的:探讨重组人内皮抑素(rh-endostatin)YH-16对子宫内膜异位症(EMS)病灶生长和血管生成的影响,为从抗血管途径治疗EMS提供依据。方法:将EMS患者在位子宫内膜种植于SCID小鼠皮下,建立EMS鼠模型。接种后第3周给予治疗,治疗组(n=10)腹腔注射YH-162mg/kg·d-1,对照组(n=10)腹腔注射等体积磷酸盐缓冲液(PBS),连用14天;每隔3天测量异位病灶体积1次;病灶组织采用免疫组化法测定病灶微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:治疗组病灶体积增长缓慢,并且用药后期病灶体积有缩小趋势;治疗组病灶重量及体积低于对照组(P<0·05)。光镜下可见治疗组腺体萎缩,结构不完整,间质伴有不同程度的坏死。治疗组MVD及VEGF表达显著低于对照组。结论:重组人内皮抑素对EMS异位病灶的生长和血管生成有明显抑制作用,其作用机制之一可能是降低了病灶部位VEGF的表达量,进而抑制病灶血管生成达到治疗EMS的目的。     

血管内皮生长因子基因与子宫内膜异位症

子宫内膜异位症(EMs)是一种病因未明,严重影响妇女生活的疾病。血管内皮生长因子(VEGF)可影响子宫内膜异位症的发生、发展,而VEGF基因中至少有30个单核苷酸具有多态性,目前学者们对-460 C/T、+405 G/C(也称为-634 G/C)、+936 C/T、-1154 G/A和-2578 A/C等的研究较多,这些位点可能通过影响VEGF的表达从而影响EMs。VEGF基因调控主要在转录及转录后水平,受药物、体内环境、体外环境等诸多因素的影响,其具体调控机制目前大多尚未明了。研究VEGF基因多态性及其调控途径以及对EMs的影响,将有助于学者们对EMs的发病机制作进一步了解,为探索治疗EMs的新方法提供思路。     

重组人内皮抑素治疗子宫内膜异位症鸡胚尿囊膜模型的实验研究

目的:探讨重组人内皮抑素(rh-endostatin)YH-16对子宫内膜异位症(EMs)血管生成的抑制作用,为抗血管途径治疗EMs提供依据。方法:将EMs患者在位子宫内膜组织接种于8天胚龄的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上,建立EMs CAM模型,分设接种组、接种治疗组(YH-16)和空白组。通过显微血管计数、原位铺片及组织学观察等方法检测接种的子宫内膜组织对CAM血管生成和重组人内皮抑素对异位内膜病灶生长行为的影响。结果:接种组CAM血管生成反应明显增强,血管数目显著高于空白组;接种治疗组血管数目显著低于接种组;接种治疗组病灶在光镜下可见明显的坏死,YH-16能明显抑制子宫内膜异位病灶形成。结论:EMs在位子宫内膜能明显促进CAM的血管生成,为子宫内膜在异位种植和存活机理的研究提供了一个理论依据;重组人内皮抑素能显著抑制异位病灶的血管形成,并抑制子宫内膜的生长,抗血管途径是治疗EMs的有效策略之一。     

血管内皮生长因子研究进展与子宫内膜异位症

异位子宫内膜在腹腔的生长需要新生血管提供血液,而血管内皮生长因子是目前发现的最为关键的血管形成刺激因子,可直接而特异的刺激血管内皮细胞,诱导其增殖、迁移、并增加血管内皮细胞通透性,诱导新生血管形成,本文就血管内皮生长因子的基础研究及在子宫内膜异位中的作用进行综述。     

血管生成素-2和内皮抑素在子宫内膜异位症发生发展中的作用

目的:探讨血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2)和内皮抑素(endostatin,ENS)在EMs发生、发展中的作用。方法:选择25例OEMs病人作为研究组,28例同期非内膜疾病妇女作为对照组。均留取子宫内膜,使用免疫组化染色方法检测Ang-2和ENS在研究组异位、在位子宫内膜及对照组正常子宫内膜中的表达。结果:Ang-2和ENS蛋白主要定位于子宫内膜腺上皮细胞的胞浆中。Ang-2在OEMs组在位子宫内膜组织中的阳性表达率为80.00%,显著高于异位内膜(52.00%)和对照组(21.48%)(P<0.05);异位内膜组阳性表达率为52.00%,显著高于对照组(21.48%)(P<0.05);OEMs组在位内膜和对照组子宫内膜中Ang-2在分泌期(90%、30.75%)和增生期(73.33%、13.33%)的表达均无显著性差异(P>0.05);ENS在OEMs异位内膜组织中的表达为84.00%,明显高于在位内膜(56.00%)和对照组(25.00%)(P<0.05);在位内膜(56.00%)明显高于对照组(25.00%)(P<0.05)。OEMs组在位内膜中ENS分泌期的表达为50.00%,与增生期(60.00%)比较无统计学差异(P>0.05);对照组中子宫内膜ENS在分泌期的表达为23.08%,与增生期(26.67%)比较无统计学差异(P>0.05)。结论:Ang-2和ENS在子宫内膜异位症发生发展中起到重要作用。     

血管内皮生长因子及其相关miRNA在子宫内膜异位症中的研究进展

<正>子宫内膜异位症（endometriosis）简称内异症,是子宫内膜腺体和间质种植于子宫腔及子宫肌层以外部位的一种疾病。内异症可导致盆腔痛、月经异常及不孕等,是妇科的常见病、多发病,有10～15%的育龄女性一生中会遭遇,近年来发病率有上升趋势,被称为“现代病”[1]。由于其临床表现复杂多变、复发率高且有恶变潜能,给女性的身心健康和临床诊治带来了极大的挑战。     

血管内皮生长因子与子宫内膜异位症研究进展

血管内皮生长因子(VEGF)能激活内皮细胞增殖种植,并增加血管通透性,是血管形成的关键因子.血管内皮生长因子与异位病灶活性有关,在子宫内膜异位症(EMs)发生发展中起重要作用.子宫内膜异位症患者子宫内膜及腹腔液中血管内皮生长因子的水平明显升高.目前运用抑制血管内皮生长因子及其受体的药物及基因治疗阻断异位病灶的血管形成有可能成为治疗子宫内膜异位症的重要手段之一.     

血管内皮生长因子与子宫内膜异位症研究进展

血管内皮生长因子(VEGF)能激活内皮细胞增殖种植,并增加血管通透性,是血管形成的关键因子。血管内皮生长因子与异位病灶活性有关,在子宫内膜异位症(EMs)发生发展中起重要作用。子宫内膜异位症患者子宫内膜及腹腔液中血管内皮生长因子的水平明显升高。目前运用抑制血管内皮生长因子及其受体的药物及基因治疗阻断异位病灶的血管形成有可能成为治疗子宫内膜异位症的重要手段之一。     

血管内皮生长因子、内皮抑素、血管抑素与子宫内膜癌

综述血管生成与子宫内膜癌的关系，以及血管生成调节因子中具有促进血管内皮细胞生长的血管内皮生长因子（VEGF）和抑制内皮细胞生长的内皮抑素（endostatin)、血管抑素（angiostatin)的结构与功能，三者的相互关系及其在子宫内膜癌的研究和应用前景。     

血管内皮生长因子在子宫内膜异位症中的研究进展

血管内皮生长因子(VEGF)在子宫内膜异位症(EMs)的发生发展中起重要作用.VEGF通过刺激内皮细胞增生,诱使细胞迁移和浸润,形成新生血管,并增加血管通透性.在EMs患者腹腔液和血液中VEGF水平明显升高.应用抑制VEGF生成的药物治疗EMs能取得良好的治疗效果.     

内皮抑素真核表达载体对移植性卵巢癌的抑制作用

目的探讨脂质体介导的内皮抑素真核表达载体对裸鼠移植性卵巢癌的抑制作用。方法利用已构建的内皮抑素真核表达载体pVAX1sEn,在脂质体介导下转染卵巢癌细胞系3AO细胞,RTPCR技术检测3AO细胞中内皮抑素mRNA的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测3AO细胞上清液中内皮抑素的水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测3AO细胞上清液中的内皮抑素对脐静脉内皮细胞系ECV204细胞的抑制作用。将荷卵巢癌移植瘤裸鼠分为3组,pVAX1sEn治疗组、pVAX1对照组和生理盐水对照组,分别观察3组卵巢癌的生长情况。结果RTPCR技术检测结果显示,在610bp处有一内皮抑素mRNA的特异性条带;ELISA法检测结果显示,pVAX1sEn转染3AO细胞后其上清液中内皮抑素水平为(201±8)ng/ml;MTT法检测结果显示,pVAX1sEn转染3AO细胞后其上清液中的内皮抑素可有效抑制ECV204细胞的生长,最高抑制率为42%。pVAX1sEn治疗组肿瘤体积为(0.85±0.18)cm3,显著小于生理盐水对照组的(1.90±0.28)cm3和pVAX1对照组的(1.78±0.32)cm3(P<0.05)。肿瘤组织HE染色显示,pVAX1sEn治疗组肿瘤细胞坏死明显,而生理盐水对照组及pVAX1对照组肿瘤细胞生长旺盛。结论脂质体介导的pVAX1sEn瘤内注射可有效抑制卵巢癌移植瘤的生长。     

GE7导入系统介导I型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因联合5-FU治疗卵巢癌的研究

目的 :观察HSV1 tk/GCV基因治疗系统与 5 FU序贯应用 ,对卵巢上皮癌SKOV3细胞的体内杀伤效应。方法 :建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型 ,免疫组化检测移植瘤组织中表皮生长因子受体 (EGFR)的表达 ;于瘤周分别注射GE7 β gal、GE7 HSV1 tk复合物 ,用X gal及RT PCR检测两种基因的表达 ;取 2 4只荷瘤裸鼠随机分成空白对照组、5 FU组、GE7 HSV1 tk/GCV组及GE7 HSV1 tk/GCV/5 FU组进行实验 ,观察肿瘤体积及重量的变化 ,计算各组抑瘤率。结果 :移植瘤中有较高的EGFR表达 ,β gal基因及HSV1 tk基因经瘤周注射导入移植瘤后均有不同程度的表达 ,5 FU组、GE7 HSV1 tk/GCV组及GE7 HSV1 tk/GCV/5 FU组抑瘤率分别为 14 .6 %、39.4 %和 6 0 .5 % (P <0 .0 5 )。结论 :HSV1 tk/GCV和 5 FU序贯治疗能有效地抑制肿瘤生长 ,并能有效地抑制单纯使用HSV1 tk/GCV系统治疗后的远期反跳作用 ,提高卵巢癌基因治疗的远期疗效。     

非病毒载体介导Ⅰ型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因治疗卵巢癌的体外研究

目的 探讨靶向非病毒载体GE7在卵巢癌细胞株CAOV3细胞中的转导效率,及其介导的I型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶(HSV1-tk)／更昔洛韦(GCV)基因治疗系统在卵巢癌治疗中的应用。方法 构建由表皮生长因子受体(EGFR)介导的非病毒载体GE7,分别与外源基因[即报告基因β-半乳糖苷酶(β—gal)和治疗基因HSV1-tk]构成载体复合物,体外转导CAOV3细胞,通过5-溴4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷(X—gal)染色、核酸分子印记杂交分析,观察非病毒载体GE7对外源基因β—gal及HSV1-tk基因的转导情况;将GCV加入转导HSV1-tk基因的CAOV3细胞,通过细胞生长抑制曲线、流式细胞仪分析等,观察其对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 β—gal基因的转导效率可达80％,呈瞬时表达;加入10mg／L的GCV时,转导HSV1-tk基因的CAOV3细胞的生长抑制率可达95％;流式细胞仪分析显示,CAOV3细胞S期比例上升,最高达90％,凋亡指数高达30。结论 GET载体系统能高效地将外源基因导入CAOV3细胞,GE7／HSV1-tk／GCV基因治疗系统在卵巢癌治疗中可能具有良好的应用前景。     

人子宫内膜异位症裸鼠模型组织形态学变化及血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶9基因表达的研究

目的　建立子宫内膜异位症 (内异症 )裸鼠模型 ,并对其相关生物学行为进行研究。方法　取人分泌晚期子宫内膜 ,剪碎 ,置入裸鼠盆、腹腔不同部位 ,内异症 (EM组 )和非内异症 (NEM组 )裸鼠各 2 4只 ;对照组 :3只裸鼠 ,同法将人大网膜组织置入裸鼠盆、腹腔不同部位。各组裸鼠分别于置入后第 5、15、30天随机脱颈椎处死 ,观察异位病灶生长情况 ,并留取异位病灶 ,在光镜及透射电镜下观察其形态学变化。RT PCR法检测在位内膜及异位病灶血管内皮生长因子 (VEGF)、基质金属蛋白酶 9(MMP 9)mRNA表达 ,免疫组化链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶连接法检测异位病灶雌、孕激素受体表达。结果　内膜置入 5d ,即见异位病灶牢固黏附 ,血液供应丰富。光镜下见腺体细胞及散在间质细胞 ,且随时间延长 ,异位病灶与裸鼠组织融合越明显。 15d时 ,电镜下可见异位病灶内炎性细胞增生、浸润最明显 ,30d时腺细胞中细胞器消失 ,但仍可见分泌颗粒 ,核染色质聚集 ,并有凋亡趋势。与在位内膜比较 ,异位病灶VEGF、MMP 9mRNA表达增强 (P <0 0 5 ) ,异位内膜置入第 15天时表达最强 (VEGF :EM组为 1 11± 0 13、NEM组为 1 10± 0 11;MMP 9:EM组为 1 0 0± 0 11、NEM组为 0 99± 0 0 8) ,第 30天时有所下降 (VEGF :EM组为 0 85± 0 1     

GE7导入系统介导抑癌基因NOEY2体内导入治疗人上皮性卵巢癌裸鼠网膜移植瘤的研究

目的 :研究GE7导入系统体内导入效率及介导抑癌基因NOEY2体内导入后对人上皮性卵巢癌裸鼠网膜移植瘤的治疗作用。方法 :将人上皮性卵巢癌细胞株Hey细胞种植于裸鼠皮下成瘤后半包埋缝于裸鼠脾区网膜建立网膜移植瘤模型。将GE7- β -gal四元复合体经腹腔注入荷瘤鼠体内用X -gal染色法检测基因导入效率 ,同法导入生理盐水、GE7-pcDNA3四元复合体及GE7-pcDNA3-NOEY2四元复合体 ,研究其抑制肿瘤生长的作用。结果 :人上皮性卵巢癌裸鼠网膜移植瘤的成瘤率达 10 0 % ,3周后瘤体达 3 68± 0 82g。GE7- β -gal四元复合体经腹腔注入荷瘤鼠体内 12h后 β -gal即有表达 ,4 8h后以瘤体、肝、脾表达率最高。GE7-pcDNA3-NOEY2四元复合体腹腔注射 3周后瘤体生长抑制率为 4 0 81% (P <0 0 5)。结论 :人上皮性卵巢癌裸鼠网膜移植瘤模型具有实用性。GE7导入系统体内导入基因效率高 ,具有相对肿瘤靶向性。GE7导入系统介导抑癌基因NOEY2体内导入后能有效抑制上皮性卵巢癌的生长。     

人乳头状瘤病毒16型E7基因重组腺相关病毒载体的构建及E7 mRNA和蛋白在真核细胞中的表达

目的构建含人乳头状瘤病毒16型E7(HPV16E7)基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体,并验证HPV16E7mRNA和蛋白在真核细胞中的表达。方法将含腺相关病毒(AAV)末端反向重复序列及HPV16E7基因的重组质粒pAAVMCSE7、含rep/cap基因的质粒pAAVRC及辅助质粒pAAVhelper共同转染胚胎肾细胞系HEK293细胞,回收、纯化病毒颗粒并鉴定,斑点杂交法测定病毒滴度,RTPCR技术、蛋白印迹法验证HPV16E7mRNA和蛋白在真核细胞中的表达。结果电镜鉴定结果显示真核细胞中有病毒颗粒存在,斑点杂交法测定病毒滴度为1×1011/ml。含HPV16E7基因的rAAV载体转染真核细胞后,在细胞内可检测到HPV16E7mRNA和蛋白的表达。结论本实验成功构建了含HPV16E7基因的rAAV载体,经验证HPV16E7mRNA和蛋白在真核细胞内有表达。     

Gene therapy of uterine leiomyomas: adenovirus-mediated expression of dominant negative estrogen receptor inhibits tumor growth in nude mice

BACKGROUND: Leiomyomas (fibroids) are common estrogen-dependent uterine tumors with no effective medicinal treatment; hysterectomy is the mainstay of management. STUDY DESIGN: This study was undertaken to investigate a potential therapy for leiomyoma; we used a mutated dominant-negative estrogen receptor gene delivered via an adenoviral vector (Ad-ER-DN). RESULTS: Ad-ER-DN transduction, in both human and rat leiomyoma cell lines, induced an increase in both caspase-3 levels and BAX/Bcl-2 ratio with evident apoptosis in the TdT-mediated dUTP nick-end labeling assay. In nude mice, rat leiomyoma cells ex vivo transduced with Ad-ER-DN supported significantly smaller tumors compared with Ad-LacZ-treated cells 5 weeks after implantation. In mice treated by direct intratumor injection into preexisting lesions, Ad-ER-DN caused immediate overall arrest of tumor growth. The Ad-ER-DN-treated tumors demonstrated severely inhibited cell proliferation (BrdU index) and a marked increase in the number of apoptotic cells (TdT-mediated dUTP nick-end labeling index). CONCLUSION: Dominant-negative estrogen receptor gene therapy may provide a nonsurgical treatment option for women with symptomatic uterine fibroids who want to preserve their uteri.     

VP22增强慢病毒介导的自杀基因治疗抑制人卵巢癌裸鼠腹腔种植瘤生长的研究

目的:探讨单纯疱疹病毒壳膜蛋白VP22的细胞间传递作用促进HSV-TK/GCV(单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦)系统对卵巢癌腹腔移植瘤的杀伤效应。方法:将慢病毒包装质粒、包膜质粒、转移载体质粒采用磷酸钙沉淀法共转染包装细胞293T,收集病毒上清,并建立人上皮性卵巢癌(3AO)细胞株腹腔移植瘤模型。单药组分为TK+生理盐水(NS)组、VP22-TK+NS组、NS+NS组,分别腹腔注射慢病毒TK、VP22-TK或NS1ml,继而腹腔注射NS;联合用药组分为TK+GCV组、VP22-TK+GCV组、NS+GCV组分别腹腔注射慢病毒TK、VP22-TK及NS,24h后腹腔注射GCV治疗。每组裸小鼠均为5只。观察各组裸鼠的生存时间及慢病毒的毒性作用。结果:平均生存时间TK+NS组、VP2-TK+NS组、NS+NS组、NS+GCV组、TK+GCV组、VP2-TK+GCV组分别为18.3±2.7d、18.4±1.9d,17.2±1.3d、18.7±1.9d、21±4d和46±22d,6组差异有显著性(χ2=24.81,P=0.002);并且VP2-TK+GCV组平均生存时间较TK+GCV组裸鼠明显延长(χ2=7.42,P=0.006)。结论:VP22介导的自杀基因产物的细胞间扩散作用可明显加强对体内肿瘤细胞的杀伤效应。     

Gene therapy of adenovirus mediated CD ::upp/5-FC directed by GSTP1 promoter in cisplatin-resistant ovarian cancer

PURPOSE: To evaluate the specific killing effect of the adenoviral vector in which CD ::upp genes were directed by the GSTP1 promoter on cisplatin-resistant ovarian cancer cells. EXPERIMENTAL DESIGN: Cisplatin-sensitive (A2780) and cisplatin-resistant (AD6) ovarian cancer cells were infected with recombinant adenoviral plasmid carrying the CD ::upp gene driven by the GSTP1 promoter and followed with 5-FC administration. RESULTS: In vitro, when MOI was 100 and 5-FC was 250 microg/ml, relative survival rate of the AD6 cells was only 3.63 +/- 1.01%, while under the same conditions, A2780 cells were 76.50 +/- 2.81%. Significant bystander effect was caused by the CD ::upp gene and 20% of gene-transferred AD6 cells caused death to 80.3% of the total cells. Furthermore, a significant anti-tumor effect of the Ad.GST-CD ::upp/5-FC was observed in nude mice bearing tumors of AD6 cells. CONCLUSIONS: These results indicated that adenovirus-mediated Ad.GST-CD ::upp/5-FC directed by GSTP1 promoter is an effective approach to overcome cisplatin-resistant ovarian cancer.     

Ad.Ela对SKOV3细胞的转染效率及体外杀伤作用

目的：研究腺病毒Ela质粒对HER-2/neu高表达卵巢癌细胞系SKOV3的转染效率和体外治疗作用。方法：脂质体介导腺病毒载体重组,腺病毒扩增、纯化、滴度测定,不同滴度病毒转染卵巢癌细胞的效率分析,以20：1的Ad.Ela抑制SKOV3细胞生长。结果：体外20：1 AdRSVlacZ感染SKOV3细胞1次,基因转染效率732%。此后增加病毒量,转染效率曲线接近平台。103*"SKOV3细胞分别以2×104 PFU的Ad.Ela+、Ad.Ela-和PBS感染1次,结果显示,Ad.Ela+治疗后卵巢癌细胞生长明显抑制,FACS检测转染后的SKOV3细胞,P185蛋白的表达明显下降。结论：Ad.Ela对HER-2/neu高表达细胞SKOV3的生长有显著抑制作用。