Meso—四（α，α，α，α—0—苯乙酰苯）卟啉特异的人源性单链抗体的筛选和鉴定

我们用小分子Ｍｅｓｏ－四αααα－０－苯乙酰苯卟啉诱导产生了单克隆抗体ｍＡｂ１Ｆ２１,并对ｍＡｂ１Ｆ２的抗体酶学性质进行了测定,得到了具有较高活性的加卤酶２。由于ｍＡｂ１Ｆ２是鼠源性抗体,对人体有免疫原性,如果把ｍＡｂ１Ｆ２应用于甲状腺疾病的治疗,就必须对它进行人源化。体外获得抗原特异的人源抗体的途径有三个：改造鼠源性抗体、从人源性噬菌体抗体库中筛选抗体、研制转基因动物。由于人源化的鼠源抗体仍存在免疫原性,因此不是理想的选择;转基因动物技术难度大,而且抗原特异的人抗体基因无法获得,所以也是不可行…     

四（4—三甲胺苯）卟啉诱导的抗体酶研究

卟啉衍生物是一类重要生命物质，对生物机体物质代谢活动有重要影响，卟啉类化合物与蛋白分子的作用为很多科学研究者所关注。卟淋类化全物为半抗原诱导产生具有酶活性的抗体是目前国际抗体酶研究领域的一个重要目标。但天然过氧化物酶都是从动植物特定的组织和器官提取的，步骤多操作时间长，易造成酶失活。抗体酶性质均一且稳定性高，因此我们针对过氧化物酶活性部位含有卟啉辅基的结构特征，应用自己合成的新型的具有辅基及底物结构特征的卟啉衍生物１，诱导产生了具有过氧化物酶活性的抗体酶，并对其基本性质进行了探讨。１材料和方法１…     

抗重组人肿瘤坏死因子－α单克隆抗体的研制及其初步应用

应用淋巴细胞杂交瘤技术获得１０株抗重组人肿瘤坏死因子－α（ｒＨｕＴＮＦ－α）ＭｃＡｂ。７株ＭｃＡｂ为ＩｇＧ１，２株为ＩｇＧ２ａ，１株为ＩｇＧ２ａ。１０株ＭｃＡｂ与淋巴毒素（ＬＴ或ｒＨｕＴＮＦ－β）、ｒＨｕＩＬ－６和载体菌菌体蛋白均无交叉反应。其中７株ＭｃＡｂ具有中和活性，７株ＭｃＡｂ能识到天然的ＴＮＦ－α。Ｇ１１和Ｅ６ＭｃＡｂ应用ＡＢＣ法免疫组化染色肝病患者组织细胞片得到明确的阳性结果。用２株识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了一步夹心ＥＬＩＳＡ法，检测ＴＮＦ－α的敏感性可达到１００ｐｇ／ｍｌ左右。     

抗α-苦瓜素单克隆抗体的制备与鉴定

用α-苦瓜素(α-MMC)免疫小鼠(BALB/c),分离免疫脾细胞,采用聚乙二醇(PEG)法将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选出分泌抗α-MMC素的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株;采用小鼠体内诱生法制备腹水,Mabselect亲和层析纯化McAb,所得McAb经亚类鉴定为IgG2b亚类,通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测,所得McAb与α-MMC特异反应,与相同来源的MAP30无交叉反应,为深入研究α-MMC的结构与功能提供了检测手段。     

抗人双特异性蛋白磷酸化酶Dusp23单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备高亲和力、高特异性的抗人双特异性磷酸化酶23（Dusp23）单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定,为Dusp23功能的研究奠定基础。方法以纯化的原核表达Dusp23为免疫原,免疫BALB／c小鼠。待免疫小鼠血清效价满足融合需要,取其脾细胞与Sp2／0细胞融合,经多次筛选及克隆化建立可稳定分泌抗Dusp23单克隆抗体的杂交瘤细胞株,将细胞株打入BALB／c小鼠腹腔制备腹水,用ProteinG亲合层析柱纯化所得腹水获得纯化抗体,ELISA及Western—blot检测抗体的效价和亲和力,并用亚型鉴定试纸条鉴定单克隆抗体的亚型。利用纯化后的两株单克隆抗体对临床收集的肝癌组织标本进行免疫组化分析。结果筛选到2株（N012和N013）可以稳定分泌人双特异性磷酸化酶23（Dusp23）单克隆抗体的细胞株,并对其进行纯化和鉴定,两株杂交瘤细胞培养上清效价分别为1：5120和1：2560,腹水效价分别为1：25600和1：12800,以肝癌细胞HepG2和重组Dusp23蛋白为抗原,利用纯化后的两株抗体Western-blot鉴定结果均在预期位置出现阳性条带。两株杂交瘤细胞分泌抗体的亚型鉴定N012和N013均为IgG1型,轻链均为K型。两株抗体分别与临床肝癌组织标本免疫组化结果均为阳性。结论成功制备两株能特异性识别Dusp23的单克隆抗体,为进一步研究Dusp23的生物学功能,揭示其与肿瘤发生发展之间的关系奠定了基础。     

人跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)特异性单克隆抗体的制备、鉴定及功能初探

目的：制备TM-TNF-α特异性单克隆抗体，并进行鉴定和初步功能分析。方法：用表位预测软件选定TM-TNF-α特异的20个氨基酸多肽，偶联载体蛋白，免疫BALB/c小鼠；用杂交瘤技术制备单克隆抗体。采用ELISA、流式细胞术和Western blot鉴定单抗的特异性，观察单抗对Jurkat细胞在AICD模型中凋亡率的影响。结果：成功制备了6株抗TM-TNF-α的单克隆抗体。ELISA结果显示6株单抗均特异性结合免疫原多肽，与S-TNF-α等细胞因子无交叉反应；流式细胞术显示6株单抗均能结合细胞膜表面TM-TNF-α分子，并可区分人源和鼠源TM-TNF-α；Western blot结果证实6株单抗只能识别26kD的人TM-TNF-α，而不识别17kD的S-TNF-α。在AICD模型中，单克隆抗体不影响Jurkat细胞凋亡率。结论：成功制备了6株TM-TNF-α特异性单克隆抗体，且单抗不干扰TNF-α与TNFR结合，为进一步研究TM-TNF-α在相关疾病中的作用提供又一研究手段。     

大鼠心肌缺血再灌时血小板5-HT_(2A)受体变化及腹蛇抗栓酶对心肌的保护作用

本文观察了大鼠心肌缺血再灌注后血小板５－ＨＴ２Ａ受体、血浆５－ＨＴ，心肌ＣＰＫ的变化，及蛇毒抗栓酶对其影响。结果显示心肌缺血再灌后，血小板５－ＨＴ２Ａ受体Ｂｍａｘ和Ｋｄ及心肌ＣＰＫ明显减少，血浆５－ＨＴ明显升高。ＳＶＡＴＥ能逆转血小板５－ＨＴ２Ａ受体Ｂｍａｘ、Ｋｄ以及心肌ＣＰＫ变化，但使血浆５－ＨＴ水平进一步升高。正常血小板在体外和２０μｍｏｌ／Ｌ５－ＨＴ温育后，５－ＨＴ２Ａ受体特异结合增加，在此基础上丙给同样剂量５－ＨＴ或与４０ｕｍｏｌ／Ｌ５－ＨＴ温育后５－ＨＴ２Ａ受体特异结合反而下降，ＳＶＡＴＥ同样能逆转受体特异结合的变化。据此，讨论了５－ＨＴ２Ａ受体变化与缺血再灌损伤关系及ＳＶＡＴＥ的保护机理。